KN-93对肥大心肌细胞β-肌球蛋白重链及心钠素表达的影响

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA和心钠素(ANF)mRNA表达的影响。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达。结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加。KN-93可抑制上述效应。结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达。     

缺血预处理改善心肌钙超载后胰岛素抵抗

目的步探讨缺血预处理对心肌细胞钙超载后胰岛素敏感性的影响。方法采用Langendorff灌流装置逆行主动脉插管灌注,胶原酶消化法分离获取成年大鼠心肌细胞。将心肌细胞分5个组:正常对照组,实验组1(ionomycin0.5μmol/L),实验组2(ionomycin0.5μmol/L+IP),实验组3(ionomycin1.0μmol/L),实验组4(ionomycin1.0μmol/L+IP),应用同位素示踪技术观察胰岛素刺激大鼠心肌细胞的葡萄糖摄取效应,评价心肌细胞的胰岛素敏感性。结果各组心肌细胞活性比率无明显降低(P0.05)。对照组心肌细胞静息[Ca2+]i为(117.80±22.41)nmol/L,实验1,2组心肌细胞经过(ionomycin0.5μmol/L)处理1h后,[Ca2+]i明显高于对照组,但两组间无统计学差异(260.49±33.06)nmol/L,(278.03±23.46)nmol/Lvs(117.80±22.41)nmol/L;实验3,4组心肌细胞经过(ionomycin1.0μmol/L)处理1h后,实验3,4组心肌细胞[Ca2+]i明显高于实验1,2组和对照组,但两组间无统计学差异(391.91±20.01)nmol/L,(379.91±23.92)nmol/Lvs(260.49±33.06)nmol/L,(278.03±23.46)nmol/Lvs(117.80±22.41)nmol/L,(P0.05)。胰岛素(20IU/L)能促进各组心肌细胞的葡萄糖摄取,分别为(56.86±6.89)μmol/105cells/10min,(31.10±7.62)μmol/105cells/10min,(40.12±6.90)μmol/105cells/10min,(22.26±5.92)μmol/105cells/10min,(32.33±6.06)μmol/105cells/10min。胰岛素刺激各实验组心肌细胞葡萄糖摄取较对照组心肌细胞葡萄糖摄取降低(P0.05),胰岛素刺激实验组2,4心肌细胞的葡萄糖摄取虽较对照组降低,但是与无缺血预处理相比葡萄糖摄取有所增加(P0.05)。结论缺血预处理对ionomycin导致的心肌细胞的钙超载没有影响,但是能改善钙超载心肌细胞的胰岛素抵抗。     

CaMKⅡ信号通路在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用

目的：探讨钙离子／钙调蛋白（Ca^2＋／CaM）依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信号通路在神经肽Y（NPY）诱导下心肌细胞肥大的作用。方法：原代培养SD乳鼠心肌细胞，将细胞分为5组，NPY组：培养液中加入终浓度为100nmol／L的NPY：KN-931组、KN-935组和KN-9310组除加入100nmol／L的NPY外，分别加入CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93，终浓度为1μmol／L、5μmol／L和10μmol／L；对照组：培养液中不加任何刺激药品。加药24h后采用 ^3H-亮氨酸（Leu）掺入法测定各组心肌细胞蛋白质合成速率，Western blotting测定对照组与NPY组心肌细胞的CaMKⅡδ蛋白表达。结果：经100nmol／L NPY刺激24h后，可明显增加心肌细胞^3H-Leu掺入量（p〈0．05），KN-93（1-10μmol／L）可以抑制NPY刺激的心肌细胞^3H-Leu掺入量的增加，并呈剂量依赖性（P均〈0．05）；100nmol／L NPY明显增加心肌细胞内CaMKⅡδ蛋白的表达（P〈（0．05）。结论：Ca^2＋／CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信号途径参与NPY诱导的大鼠心肌细胞肥大反应。     

The effects of KN-93 on β-MHC and ANF in cardiomyocytes hypertrophy.

目的 探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC) mRNA和心钠素(ANF) mRNA表达的影响.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10 μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达.结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加.KN-93可抑制上述效应.结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达.     

PPAR δ受体激动剂在肾小管上皮细胞发挥抗炎作用的体外研究

目的研究PPAR δ受体激动剂L165041在肾小管上皮细胞中是否能发挥抗炎作用并探讨其作用机制。方法体外培养小鼠近曲小管上皮细胞(mProx)分为4组:对照组、L165041对照组(10μmol L165041,PPARδ受体激动剂)、棕榈酸钠组(150μmol棕榈酸钠)或TNF-α组(10 nmol TNF-α)和L165041干预组(10μmol L165041预处理3 h后加入150μmol棕榈酸钠或10 nmol TNF-α),作用12 h。用RT-PCR方法检测各组MCP-1 mRNA水平。利用PPARδ干扰RNA(siRNA)转染mProx,以scramble为对照,在转染细胞中重复以上实验。结果与对照组相比,棕榈酸钠和TNF-α刺激使MCP-1 mRNA的表达增强(P<0.05),而L165041下调棕榈酸钠和TNF-α诱导的MCP-1 mRNA表达(P<0.05)。与scramble组相比,转染PPARδsiRNA的肾小管上皮细胞PPAR δ受体在蛋白和mRNA水平表达均明显下降(P<0.05)。在PPARδsiRNA转染细胞中,棕榈酸和TNF-α使MCP-1 mRNA的表达明显增强(P<0.05),L165041仍能显著抑制棕榈酸钠和TNF-α诱导的炎症反应(P<0.05)。另外,与scramble组相比,PPARδsiRNA转染细胞在棕榈酸钠的作用下,使MCP-1表达增强更显著(P<0.05)。结论 PPARδ受体激动剂L165041能抑制小鼠近曲小管上皮细胞的炎症反应,其抗炎作用不依赖于PPARδ受体,而PPARδ受体本身对维持细胞对饱和脂肪酸诱导的炎症反应发挥作用。     

胃饥饿素通过cAMP/PKA通路对胰高血糖素样肽1促胰岛素分泌功能的影响

目的 探讨胃饥饿素(ghrelin)能否通过调控环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)通路竞争性抑制胰高血糖素样肽1(GLP-1)的促胰岛素分泌效应.方法 取8～10周龄雄性SD大鼠5只,分离、纯化大鼠胰岛,经双硫腙(DTZ)和吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色鉴定后,每只大鼠挑选60个胰岛,将其随机分成6组并接受不同处理:S0组(8.3 mmol/L葡萄糖溶液)、S1组(8.3 mmol/L葡萄糖溶液+10 nmol/L GLP-1)、S2组(8.3 mmol/L葡萄糖溶液+10nmol/L GLP-1+ 10 nmol/L ghrelin)、S3组[8.3mmol/L葡萄糖溶液+10 nmol/L GLP-1+10 nmol/L ghrelin+1 μmol/L生长激素促泌素受体1α(GHSR-1α)拮抗剂生长激素释放肽6(D-Lys3-GHRP-6)]、S4组(8.3mmol/L葡萄糖溶液+ 10 nmol/L GLP-1+ 10 nmol/L ghrelin+5 μmol/L腺苷酸环化酶激动剂毛喉素)、S5组(8.3mmol/L葡萄糖溶液+10 nmol/L GLP-1 +10 nmol/L ghrelin+ 10 μmol/L PKA激动剂6-Phe-cAMP);所有试剂均于前一试剂处理10 min后依次加入后一试剂共同处理,每组胰岛的所有处理时间共3h.采用ELISA法检测各组胰岛培养液中胰岛素和cAMP的浓度.结果 S组胰岛细胞分泌胰岛素和释放cAMP的浓度均高于S0组(P均＜0.05),S2组均低于S1组(P均＜0.05).S3、S4和S5组胰岛细胞分泌胰岛素和释放cAM的浓度均高于S2组(P均＜0.05).结论 Ghrelin能够抑制GLP-1的促胰岛素分泌效应,其作用机制可能是通过cAMP/PKA通路竞争性抑制GLP-1的促分泌效应.     

蛋白激酶C不同亚型对丙泊酚血管舒张作用的影响

目的探讨丙泊酚的血管舒张作用与蛋白激酶C(PKC)不同亚型间的关系。方法将SD大鼠胸主动脉环随机分为内皮完整组(n=36)和去内皮组(n=36),每组各分6个亚组:①10 nmol/L Go6976+1×10-6mol/L去甲肾上腺素(NA)+丙泊酚处理组(n=6);②10μmol/L Rottlerin+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);③2μmol/L PKCε-Pseudo(假底物)+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);④2μmol/L PKCθ-Pseudo+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);⑤2μmol/L PKCζ-Pseudo+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);⑥1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(对照组,n=6)。PKCα抑制剂Go6976,PKCδ抑制剂Rottlerin,PKCζ、θ和ε假底物孵育血管环30 min后,加1×10-6mol/L NA收缩血管环达峰值,每15 min加递增浓度的丙泊酚(1×10-6、5×10-6、1×10-5、5×10-5、1×10-4mol/L),观察血管张力的变化。结果内...     

Cx43调控NLRP3炎性小体参与α1-AR激活诱导的心脏急性交感应激

目的 观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在苯肾上腺素(PE)过度激活心肌细胞α1-肾上腺素受体(α1-AR)诱导急性交感应激中的作用。方法 将H9C2大鼠心肌细胞随机分为对照组(control组)、PE单独处理组、Gap26(Cx43特异性抑制剂)干预组、Gap26单独处理组,其中PE单独处理组给予50μmol/L PE作用15 min, Gap26干预组先给予0.5μmol/L Gap26预处理30 min,再给予50μmol/L PE作用15 min。Western blot法及qRT-PCR法检测心肌细胞Cx43、NLRP3炎性小体、白介素-1β(IL-1β)、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-18(IL-18)蛋白及mRNA表达水平,免疫荧光法观察心肌细胞Cx43的表达和共定位,ELISA法检测心肌细胞炎症因子IL-1β、IL-18的表达。结果 与control组相比,PE单独处理组Cx43及NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白及mRNA水平均升高;与PE单独处理组比,Gap26干预后Cx43及NLRP3、Caspase-1、IL-18的蛋白及mRN...     

骨髓间充质干细胞对氧化应激损伤心肌细胞凋亡、自噬的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对氧化应激损伤心肌细胞凋亡、自噬的影响。方法 (1)以不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、300μmol/L、500μmol/L和700μmol/L)H₂O₂处理大鼠心肌细胞H9c2 6 h、9 h和12 h,采用CCK-8检测细胞活力，筛选H₂O₂的最佳作用浓度及作用时间以构建氧化应激损伤心肌细胞模型。(2)将大鼠心肌细胞H9c2分为对照组、H₂O₂组、BMSC+H₂O₂组。H₂O₂组和BMSC+H₂O₂组均采用500μmol/L H₂O₂诱导12 h建立氧化应激损伤心肌细胞模型，在此基础上，BMSC+H₂O₂组加入对数生长期大鼠BMSC进行共培养。对照组正常培养而不给予干...     

辣椒素通过上调MTSS1表达抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的实验研究

目的 探究辣椒素通过上调肿瘤转移抑制因子1(MTSS1)抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的机制。方法 实验1:10、25、50、100μmol/L辣椒素组分别加入终浓度为10、25、50、100μmol/L辣椒素,对照组不添加辣椒素,恒温箱中培养24 h;实验2:对照组正常培养,100μmol/L辣椒素组添加终浓度为100μmol/L辣椒素,100μmol/L辣椒素+对照siRNA组、100μmol/L辣椒素+MTSS1 siRNA组在100μmol/L辣椒素组的基础上分别添加终浓度为50 nmol/L对照siRNA、MTSS1 siRNA,转染4 h更换为终浓度100μmol/L辣椒素培养液。CCK8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中辣椒素受体(TRPV1)、MTSS1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白水平。结果 不同浓度辣椒素处理细胞发现,与对照组相比,25、50、100μmol/L辣椒素组细胞增殖抑制率升高,10、25、50、100μmol/L辣椒素组细胞中TRPV1、MTSS1...     

Maresin 1激活Nrf2信号通路减轻低氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨Maresin 1(MaR1)对低氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响和作用机制。方法 培养小鼠HL-1心肌细胞,采用低氧孵育6 h和复氧12 h来构建低氧/复氧细胞模型。小鼠HL-1心肌细胞分为常氧对照组(常氧培养18 h)、低氧/复氧组(低氧培养6 h,然后复氧处理12 h)、低氧/复氧+溶剂组(加入溶剂对照二甲基亚砜预处理30 min后,进行低氧/复氧处理)、低氧/复氧+MaR1组(加入50 nmol/L的MaR1预处理30 min后,进行低氧/复氧处理)和低氧/复氧+MaR1+ML385组(加入50 nmol/L的MaR1和5μmol/L的ML385预处理30 min后,进行低氧/复氧处理)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)方法检测细胞存活率。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)细胞毒性检测试剂盒检测细胞损伤。TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。活性氧(reactive oxygen species, ROS)试剂盒法检测ROS水平。丙二醛(malondialdehyde, MDA)试剂盒法检测MDA含量...     

氯化两面针碱促进骨髓瘤细胞凋亡的机制研究

目的 探究氯化两面针碱促进骨髓瘤细胞凋亡的机制。方法 将人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI 8226培养至对数生长期,采用CCK-8法检测细胞活性并测定半数抑制浓度(IC₅₀)。将MM细胞株RPMI8226随机分为空白组、硼替佐米(BTZ)组、氯化两面针碱(NCe)组和BTZ+NCe组。BTZ组加入500μL10 nmol/L BTZ溶液,参照IC₅₀在NCe组加入500μL 4.5μmol/L NCe,BTZ+NCe组加入250μL 10 nmol/L BTZ和250μL 4.5μmol/L NCe,继续培养24 h。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting检测各组细胞STK4、YAP1、Cl-caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果 与空白孔相比,其余各孔的细胞存活率均降低(P <0.05);与0μmol/L NCe孔比较,1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L NCe孔的细胞存活率均降低(P <0.05)。孵育24 h的IC_50<...     

一氧乙酰旋覆花内酯对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞的保护性作用

目的 探讨ABL在心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法 体外培养H9C2心肌细胞,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）构建心肌细胞肥大模型;模型组给予1μmol/L AngⅡ刺激24h、ABL处理组给予AngⅡ刺激,同时给予5μmol/L和10μmol/L ABL处理24h。采用心肌细胞肌动蛋白α-actinin染色评价心肌细胞大小,采用RT-PCR检测肥厚相关基因心房利钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、肌球蛋白重链β（β-MHC）的表达;蛋白印迹（Western blot）法检测信号通路蛋白的表达。结果 与模型组比较,5μmol/L和10μmol/L ABL处理组心肌细胞面积明显降低（P<0.05）;ANP、BNP、β-MHC肥厚相关基因表达降低（P<0.05）,且其抗心肌细胞肥大呈现剂量依赖性（P<0.05）。Western blot法检测结果显示ABL处理组AMPKa磷酸化水平增高（P<0.05）,而Akt、mTOR、GSK3β的磷酸化明显抑制（P<0.05）;AMPKa拮抗剂Compound C可阻断ABL的心肌保护作用。结论 ABL可通过激活AMPKa信号通路,调节Akt/Mtor/GSK3β对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大发挥保护性作用。     

甘草查尔酮A对H_2O_2所致心肌细胞损伤的保护作用研究

目的探讨甘草查尔酮A(LCA)对双氧水(H_2O_2)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为空白组、模型组(H_2O_2)、LCA低剂量组(10μmol/L)、LCA中剂量组(20μmol/L)、LCA高剂量组(40μmol/L)。经LCA给药4 h后,与100μM的H_2O_2共孵育24 h后检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH),脂质过氧化物丙二醛(MDA),活性氧自由基(ROS),Na+-K+-ATP酶,Ca~(2+)-ATP酶活性,同时检测过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ),核因子E2相关因子2(Nrf2),和血红素加氧酶-1(HO-1) mRNA的表达情况。结果 LCA对H_2O_2所致心肌细胞损伤模型有保护作用,可抑制脂质过氧化MDA,ROS的生成,抑制Na+-K+-ATP酶活性,升高Ca~(2+)-ATP酶活性,上调PPARγ,Nrf2和HO-1 mRNA表达(P 0. 05,P 0. 01)。结论甘草查尔酮A对H_2O_2所致心肌细胞损伤有显著保护作用,且其作用机制可能与激活PPARγ/Nrf2/HO-1通路,缓解线粒体氧化应激有关。     

血糖安的细胞毒理学实验研究

目的 探讨血糖安(XTA)对心肌细胞的毒性作用及其机制。方法 采用循环灌流的方法急性分离成年脉鼠心肌细胞，使其在血糖安浓度为1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1nmol/L作用后，分别检测30、60、120、180min4个时相心肌细胞保存液中LDH、CK含量，心肌细胞蛋白含量和Na —K ATP酶活性；检测心肌细胞凋亡率和细胞活力；电镜下观察死亡和凋亡细胞的形态学变化。结果 在血糖安100umol/L和1mmol/L两个组的各时相保存液中，LDH、CK以及心肌细胞中蛋白含量明显增加；心肌细胞中Na —K ATP酶活性和细胞活力明显降低，与对照组相比有显著性差异(P＜0．01)。结论 在血糖安浓度高于100umol/L且作用时间在30min以上时，豚鼠心肌细胞开始出现损害。     

褪黑素通过PPARγ-LXRα调控 THP-1巨噬细胞ABCA1表达

目的 研究褪黑素对巨噬细胞ABCA1受体表达的影响及作用机制。方法 使用THP-1细胞体外培养PMA诱导分化为巨噬细胞,给予不同浓度的褪黑素(0、50nmol/L、100nmol/L、500nmol/L和1μmol/L)干预细胞,RT-PCR和Western blot法分别检测巨噬细胞ABCA1和LXRα的mRNA和蛋白相对表达量的变化。分别应用LXRα抑制剂GSK2033、PPARγ抑制剂GW9662、非选择性MT1/MT2受体拮抗剂Luzindole、选择性MT2受体拮抗剂K185进一步验证褪黑素调控ABCA1表达的作用机制。结果 褪黑素显著上调THP-1来源巨噬细胞ABCA1和LXRα的mRNA和蛋白相对表达量,且呈剂量依赖性(P<0.05)。GW9662均可显著抑制褪黑素上调的ABCA1和LXRα蛋白表达水平(P=0.000),GSK2033可显著抑制褪黑素上调的ABCA1蛋白表达(P=0.000),但对LXRα蛋白表达水平无影响。而Luzindole和K185均未明显抑制褪黑素上调的ABCA1蛋白表达。结论 褪黑素显著上调巨噬细胞ABCA1的表达,PPARγ-LXRα通路参与了褪黑素对ABCA1表达的调节作用。     

曲美他嗪对缺氧/复氧心肌细胞焦亡的影响

目的探讨曲美他嗪(TMZ)对急性缺氧/复氧(H/R)心肌细胞焦亡的影响。方法选择大鼠胚胎H9C2心肌细胞为研究对象,将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组。H/R组、H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组细胞行缺氧12 h/复氧4 h处理模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤; H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组细胞在构建H/R模型前分别给予50、100、500μmol·L~(-1)TMZ共孵育1 h;正常对照组细胞常规培养;采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测各组心肌细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组心肌细胞培养基中LDH活性,采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法检测心肌细胞中Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和Nod样受体蛋白3(NLRP3) mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,H/R组心肌细胞活性降低,LDH活性显著升高,细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平升高(P <0. 05);与H/R组比较,H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组、H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组细胞活性显著增加,LDH活性显著下降,细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平降低(P <0. 05);与H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组和H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组比较,H/R+100μmol·L~(-1)TMZ组细胞活性增加,LDH活性下降,细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平降低(P <0. 05); H/R+50μmol·L~(-1)TMZ组细胞活性、LDH活性、细胞中Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达水平与H/R+500μmol·L~(-1)TMZ组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 TMZ能通过抑制细胞焦亡对H/R的心肌细胞起保护作用; TMZ处理心肌细胞的最适浓度为100μmol·L~(-1)。     

Caspase-3抑制剂所致氧化应激状态下肾小管上皮细胞差异表达基因的筛选及功能验证

目的：研究caspase-3抑制剂引起的氧化应激状态下肾小管上皮细胞基因表达特点，筛选潜在的候选基因，为揭示caspase-3调控活性氧（reactive oxygen species,ROS）损伤肾小管上皮细胞的机制奠定基础。方法：将人肾小管上皮细胞HK-2用H2O2(300μmol/L)处理6 h后，随机分为对照组和caspase-3抑制剂组（Ac-DEVD-CHO,15μmol/L），运用Illumina Hiseq 2500测序平台完成基因测序，筛选差异基因并进行相关富集分析，用定量PCR对筛选到的前10位差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）进行验证。将H2O2(300μmol/L)处理6 h后的HK-2细胞随机分为对照组、caspase-3抑制剂组（Ac-DEVDCHO,15μmol/L）、CTNNB1组[pcDNA3.1（+）-CTNNB1]、caspase-3抑制剂+CTNNB1组[Ac-DEVD-CHO,15μmol/L+pcDNA3.1（+）-CTNNB1]以及caspase-3抑制剂+CTNNB1 NC组[Ac-DEVD...     

紫杉醇预防心肌细胞线粒体缺血再灌注损伤的机制研究

目的 探讨紫杉醇能否预防心肌细胞线粒体缺血再灌注损伤,并对其机制进行初步探讨。方法 将离体大鼠心脏分为对照组、缺血组、缺血+0.1μmol/L紫杉醇组、缺血+0.3μmol/L紫杉醇组和缺血+1μmol/L紫杉醇组(n=15)。每组先给予15 min平衡后,对照组继续给予150 min常氧灌注;缺血组给予30 min缺血处理(Langendorff灌流,结扎左前降支30 min)+120 min常氧再灌注;缺血+0.1μmol/L(或0.3μmol/L、1μmol/L)紫杉醇组给予30 min缺血处理+120 min常氧再灌注,整个过程中均给予0.1μmol/L(或0.3μmol/L、1μmol/L)紫杉醇灌流。灌流结束后,左心室心肌进行冰冻切片。采用免疫组织化学方法观察微管;DCFH-DA试剂盒用来检测活性氧物种的数量,同时通过荧光光度计和分光光度计检测氧化酶活性。结果 10.1μmol/L紫杉醇灌流能明显降低微管断裂评分。20.1μmol/L,0.3μmol/L和1μmol/L紫杉醇减少氧自由基水平分别为33%、46%和51%(P<0.05)。30.3μmol/L和1μmol/L紫杉醇增加线粒体电子传递链复合体Ⅰ的活性,而0.1μmol/L,0.3μmol/L和1μmol/L紫杉醇均增加线粒体电子传递链复合物Ⅲ的活性。结论 紫杉醇能预防心肌细胞线粒体缺血再灌注损伤。减少氧自由基生成、增加线粒体电子传递链复合体Ⅰ、Ⅲ的活性或许是其作用机制之一。     

大黄素甲醚对新生大鼠皮质神经元营养作用的靶点研究

目的探讨大黄素甲醚(physcion,Phy)对新生大鼠皮质神经元营养作用的靶点。方法选用与神经营养作用相关的工具药酪氨酸激酶Trk受体抑制剂K252a、腺苷A2a受体抑制剂ZM241385及蛋白激酶C抑制剂G6976,实验设溶媒对照组、抑制剂组、Phy组、抑制剂+Phy组,四甲基偶氮唑蓝法分析各抑制剂对神经元存活的影响,倒置显微镜下观察神经元突起生长情况,Image-pro plus 6.0软件测量突起长度,分析各抑制剂能否拮抗Phy促进突起生长的作用,初步推断Phy对皮质神经元神经营养作用的靶点。结果溶媒(0.1%DMSO)对照组、K252a(100μmol/L)组、ZM241385(20 nmol/L)组和G6976(100μmol/L)组的神经元活性分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.01)。K252a(100μmol/L)+Phy组神经元平均突起长度与Phy组比较,差异有统计学意义(P<0.01);而ZM241385(20 nmol/L)+Phy组、G6976(100μmol/L)+Phy组与Phy组比较,神经元平均突起长度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Phy对新生大鼠神经元的神经营养作用可被酪氨酸激酶Trk受体抑制剂K252a阻断,而腺苷A2a受体抑制剂ZM241385和蛋白激酶C抑制剂G6976的阻断作用则不明显,提示Phy神经营养作用的靶点可能是Trk受体,即Phy通过激动Trk受体而发挥神经营养作用的。