UVB对HaCaT细胞凋亡的影响

①目的　探讨紫外线B(UVB)对HaCaT细胞凋亡的影响及其作用机制。②方法　取培养的HaCaT细胞 ,用 30mJ/cm2 的UVB照射后继续培养 18h ,以流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位和细胞内游离Ca2 +水平 ,用透射电镜观察细胞的超微结构。③结果　UVB照射增加了HaCaT细胞的凋亡率 (t =5 .2 36 ,P <0 .0 1) ,降低了线粒体膜电位 (t=6 .897,P <0 .0 1) ,升高了细胞内游离Ca2 + 水平 (t =6 .0 4 6 ,P <0 .0 1)。细胞的超微结构因UVB照射而遭到严重破坏 ,胞浆内的细胞器大量减少 ,线粒体严重空泡化 ,髓样小体形成 ,核内染色质成块并边聚。④结论　线粒体膜电位的下降和胞内游离Ca2 + 的升高可能参与了UVB诱发HaCaT细胞凋亡的过程     

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

目的 从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chfamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制.方法 实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68 mmol&#183;L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69 mmol&#183;L-1 PCF组、UVA+2.84 mmol&#183;L-1 PCF组、UVA+1.42 mmol&#183;L-1 PCF组.以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38 MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性.结果 PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69 mmol&#183;L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化.结论 PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38 MAPK通路和caspase-3活性有关.     

扇贝多肽对紫外线损伤Hela细胞的保护作用

①目的探讨扇贝多肽(PCF)对紫外线损伤Hela细胞的影响.②方法培养24 h的Hela细胞,制备细胞悬液(5×108/L),分别置24孔板,每孔1 mL.随机分为对照组,紫外线损伤模型组,5 g/L PCF组,10 g/L PCF组,20 g/L PCF组和10 g/L维生素C组.每组3个复孔,分别在RPMI-1640、PCF、维生素C孵育10 min后,分别置紫外线下照射,照射强度为UVA 3 650 μJ/cm2、UVB 7.15×10-5 J/cm2.用流式细胞仪测定各组细胞的死亡率、凋亡率及细胞内Ca2+含量.用生物化学方法测定上清液中MDA含量和抗氧化酶的活性.③结果PCF可以降低紫外线损伤Hela细胞的死亡率和凋亡率,并且提高细胞内Ca2+含量和琥珀酸脱氧酶的活性.PCF还可降低MDA的含量,提高抗氧化酶GSH-px、SOD和CAT的活性.④结论 PCF可能通过提高抗氧化酶的活性而发挥对紫外线损伤Hela细胞的保护作用.     

扇贝多肽经Smac-XIAP通路抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的作用

目的 探讨扇贝多肽(PCF)经半胱天冬酶激活物(Smac)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)通路对抑制中波紫外线(UVB)诱导HaCaT细胞凋亡的分子机制.方法 实验分为如下6组:正常对照组(A组)、UVB模型组(B组)、UVB+1.42 mmol/L PCF组(C组)、UVB+2.84 mmol/L PCF组(D组)、UVB+5.68 mmol/L PCF组(E组)和UVB+5.68 mmol/L维生素C阳性对照组(F组),分别进行相应处理.分别采用琼脂糖凝胶电泳和Hochst 33258染色法测定各组细胞凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)检测胞浆内Smac的水平,RT-PCR检测XIAP mRNA表达.结果 B组与A组比较,细胞凋亡率显著降低(F=165.096,q=36.535,P<0.01),胞浆Smac明显增加(F=174.311,q=33.106,P<0.01),XIAP mRNA表达显著减少(F=97.141,q=26.147,P<0.01);预先加入药物各组(C、D、E、F组)与B组相比,细胞凋亡率降低(q=11.369～28.592,P<0.01);C、D、E组与B组相比较,胞浆Smac含量明显降低(q=9.191～26.180,P<0.01),XIAP表达增加(q=8.073～17.618,P<0.01).且随着PCF浓度的增加,细胞凋亡率降低(q=7.259～9.965,P<0.01),胞浆Smac含量降低(q=6.926～10.063,P<0.01),XIAP表达增加(q=3.706～5.839,P<0.05).结论 PCF在1.42 ～5.68 mmol/L浓度范围内可呈剂量依赖性地抑制Smac从线粒体释放到胞浆,上调XIAP mRNA 的表达,抑制caspase-3的活化,从而抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡.     

扇贝多肽对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤的作用

目的了解扇贝多肽对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期HaCaT细胞,随机分为正常对照组（细胞正常培养）、模型组（200μmol/L的H2O2作用12h）、扇贝多肽不同浓度组（低、中、高浓度,分别用1.42、2.84、5.68mmol/L的扇贝多肽预处理2h后,再给予200μmol/L的H2O2作用12h）,应用Hochest33258染色方法检测各组细胞凋亡率,CCK8检测细胞存活率,以二氢荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）为荧光探针、流式细胞术检测细胞内的活性氧（ROS）含量,蛋白印迹法检测生长阻滞和DNA损伤诱导修复基因45a（Gadd45a蛋白）的表达。结果与正常对照组比较,模型组的细胞凋亡率明显升高（F=439.80,q=38.24,P〈0.01）,细胞存活率下降（F=191.40,q=214.10,P〈0.01）,细胞内ROS含量增加（F=121.10,q=31.02,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达升高（F=66.59,q=14.57,P〈0.01）;与模型组比较,扇贝多肽各浓度组细胞凋亡率明显降低（q=9.60～25.82,P〈0.01）,细胞存活率升高（q=13.47～54.86,P〈0.01）,细胞内ROS减少（q=4.20～12.14,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达降低（q=4.04～15.55,P〈0.01）;扇贝多肽各浓度组间比较,随扇贝多肽浓度升高,细胞凋亡率下降,细胞存活率升高,细胞内ROS含量降低,Gadd45a的表达降低,差异有显著性（q=3.96～23.36,P〈0.05）。结论 1.42～5.68mmol/L扇贝多肽能够清除细胞内的ROS,抑制Gadd45a蛋白的表达,从而保护H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤。     

硫酸锌对UVB致HaCaT细胞损伤的拮抗作用

目的：探讨中波紫外线（UVB）造成HaCaT细胞损伤的机制及硫酸锌能否拮抗UVB对细胞的损害作用,为开发预防UVB损伤的药物提供理论依据。方法：将HaCaT细胞随机分为对照组、UVB组、加锌（Zn）组和Zn+UVB组。对照组不施加任何处理因素;UVB组细胞进行UVB照射;Zn组只加入终浓度为50 μmol·L^-1的硫酸锌;Zn+UVB组,加入硫酸锌24　h后,进行UVB照射。UVB照射时间为6 min,照射后24　h,收集各组细胞,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,TBA显色法检测细胞内丙二醛（MDA）水平,单细胞凝胶电泳技术检测各组细胞DNA的损伤情况。结果：与对照组比较,UVB组和Zn+UVB组HaCaT细胞存活率显著降低（P<0.05）,MDA水平显著升高（P<0.05）;与UVB组比较,Zn+UVB组细胞存活率显著升高（P<0.05）,MDA水平显著降低（P<0.05）。单细胞凝胶电泳检测结果显示,UVB组和Zn+UVB组HaCaT细胞均出现彗星样拖尾现象。与对照组比较,UVB组和Zn+UVB组细胞尾部DNA尾距、Olive尾距显著增大（P<0.05）;与UVB组比较,Zn+UVB组尾距、Olive尾
距显著减小,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：UVB　能够导致HaCaT细胞存活率下降和MDA水平提高以及DNA损伤,而硫酸锌能够拮抗UVB对HaCaT细胞的损伤作用。
      

红景天苷对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及对MAPK/ERK1/2信号通路的调控作用

目的:研究红景天苷对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并研究其对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK1/2)信号通路的调控作用。方法:培养人肺癌A549细胞制备浓度为3×10~7 mL~(-1)的细胞悬液,取200μL皮下注射于裸鼠右前肢腋窝皮下。待注射部位出现肿瘤结节时,为建模成功。挑出肿瘤结节大小均为5 mm左右裸鼠共40只,随机分为5组:阴性对照组、阳性对照组、红景天苷高剂量组、红景天苷中剂量组和红景天苷低剂量组,每组8只。阳性对照组裸鼠腹腔注射3 mg·kg~(-1)顺铂,每3天注射1次;红景天苷高剂量组、中剂量组、低剂量组裸鼠分别腹腔注射红景天苷50 mg·kg~(-1)、25 mg·kg~(-1)、12.5 mg·kg~(-1),每天1次;阴性对照组裸鼠注射等体积的生理盐水,每天1次。连续给药2周。取肿瘤组织称取质量,计算瘤体生长抑制率;通过苏木精伊红(HE)染色观察瘤体组织病理变化;通过末端标记法观察肿瘤细胞凋亡情况并计算凋亡指数;通过RT-qPCR检测肿瘤细胞中ERK1/2、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-Myc、Bcl-2和Bcl-2相关蛋白X(Bax)mRNA相对表达量;通过蛋白免疫印迹检测肿瘤细胞中ERK1/2、cyclinD1、c-Myc、Bcl-2和Bax蛋白表达水平及p-ERK1/2水平。结果:各组瘤质量比较显示:阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05);其中组间两两比较显示:阴性对照组红景天苷低剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷高剂量组。各组抑瘤率比较显示:阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05);组间两两比较显示:红景天苷高剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷低剂量组阴性对照组。HE染色结果比较显示:阴性对照组肿瘤组织可见明显异型细胞,细胞核分裂象多,细胞密度大且排列无序,阳性对照组和红景天苷各剂量组表现出核分裂象减少,细胞死亡,其中红景天苷高剂量组与其他组比较,细胞核分裂象最少,细胞密度最低、坏死最严重。各组细胞凋亡数和凋亡指数比较显示:阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),其中组间两两比较显示:红景天苷高剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷低剂量组阴性对照组。RT-qPCR和蛋白免疫印迹结果比较显示,各组ERK1/2 mRNA和蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P0.05);cyclinD1、c-Myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平及p-ERK1/2水平结果显示,阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),其中组间两两比较显示:阴性对照组红景天苷低剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷高剂量组。Bax mRNA和蛋白表达水平结果显示,阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),两两比较:红景天苷高剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷低剂量组阴性对照组。结论:红景天苷可抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长,破坏肿瘤细胞结构,促进肿瘤细胞凋亡,推测其机制可能与抑制MAPK/ERK1/2信号通路,上调Bax mRNA和蛋白表达水平,下调cyclinD1、c-Myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平,降低p-ERK1/2水平有关。     

紫外线对HaCaT细胞损伤作用的研究

目的 探讨中波紫外线(UVB)对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的损伤影响,建造UVB损伤人表皮细胞的模型,以方便进行实验室光损伤研究.方法 取培养的HaCaT细胞,用10、30、50、70、90 mJ/cm 的UVB照射后继续培养24 h,在光学显微镜下观察细胞的形态学改变,以MTT法检测细胞的增殖活性,以ELISE法测定细胞上清液中TNF-α的水平,以流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 随UVB照射剂量的增加,在光镜下可见HaCaT细胞不同程度的损伤,其增殖活性降低,P＜0.01;细胞上清液中TNF-α的水平增加,P＜0.01;凋亡率增加,P＜0.01.结论 UVB可损伤HaCaT细胞,降低增殖活性,增加细胞上清液中TNF-α的水平,诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性.在实验中,可根据需要调节不同的UVB照射剂量,建造所需的细胞损伤模型.     

针刺对慢性高眼压后兔模型视网膜细胞凋亡及ERK1和MAPK9的影响

目的:探讨针刺治疗对慢性高眼压后兔模型视网膜神经节细胞的保护作用及可能的作用机制。方法:选择新西兰兔,采用随机数字表法设为正常组、模型组、针刺组,其中模型组与针刺组以复方卡波姆诱导建立慢性高眼压后兔模型。造模2周后,针刺组给予毫针合谷(LI 4)、睛明(BL 1)、球后(Ex-HN 07)穴治疗,隔天1次,每周3次,共治疗4周;正常组和模型组不予处理。干预结束后,取各组兔眼球内视网膜组织,采用流式细胞仪测视网膜细胞凋亡情况,并以免疫组化法检测神经生长因子(NGF)信号通路下游通路的细胞外调节蛋白激酶-1(ERK1)、丝裂原活化蛋白激酶-9(MAPK9)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组左上象限晚期凋亡细胞占总细胞的百分比明显增高(P0.05);与模型组比较,针刺组晚期凋亡细胞占总细胞的百分比明显降低(P0.05)。与正常组比较,模型组与针刺组ERK1积分光密度水平均明显下降(P0.01);模型组MAPK9积分光密度水平有所上升,而针刺组明显下降(P0.05)。结论:针刺作用于慢性高眼压后兔模型,可在一定程度上降低视网膜细胞的凋亡率,且对MAPK下游信号分子MAPK9的表达有减弱作用。     

脑缺血/再灌注损伤细胞凋亡中JNK信号通路及抑制剂SP600125的作用

c-jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是细胞内作用蛋白网络的重要一环,参与胞外信号从细胞表面转导到细胞内部的过程,可被多种因素激活,在细胞的增殖与分化、形态维持、骨架构建和细胞凋亡等生物反应过程中发挥重要作用。脑缺血/再灌注损伤导致的细胞凋亡与丝裂原活化蛋白激酶家族有密切的关系,其中JNK信号通路是脑缺血/再灌注损伤中神经元凋亡进程的主要机制之一。大量实验提示,JNK信号转导通路及其抑制剂SP600125在脑缺血/再灌注损伤诱导的细胞凋亡中起重要的调控作用,应用JNK阻断剂可起到神经保护作用,通过对这些信号转导通路的组成及调节机制的研究,有望为临床上脑缺血疾病的治疗提供新的分子治疗靶点。     

P53蛋白、EGFR和P物质在扇贝多肽保护的中波紫外线辐射无毛小鼠皮肤中的表达

①目的　研究局部应用扇贝多肽 (PCF)对中波紫外线 (UVB)长期辐射无毛小鼠皮肤组织P5 3蛋白、表皮生长因子受体 (EGFR)和P物质 (SP)表达的抑制作用。②方法　随机将昆明种无毛小鼠分为对照组 (Ⅰ组 )、UVB模型组 (Ⅱ组 )、UVB +5 0 g/LPCF组 (Ⅲ组 )、UVB +2 0 0g/LPCF组 (Ⅳ组 )和UVB +1 0 0 g/LVitC组 (Ⅴ组 )。Ⅰ组小鼠背部皮肤涂双蒸水 (每只 1mL/d) ,共 30d。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组小鼠背部皮肤分别涂双蒸水、5 0 g/LPCF、2 0 0 g/LPCF和 1 0 0g/LVitC ,每只 1mL/d ,并经UVB辐射 (每天 1次 ,每次剂量为 5 .1 5× 1 0 -2 J·cm-2 ) 30d(总辐射剂量为 1 5 .4 5J·cm-2 )。免疫组化分析法检测无毛小鼠背部皮肤P5 3蛋白、EGFR及SP的表达。③结果　连续UVB辐射可致无毛小鼠皮肤突变型P5 3蛋白、EGFR及SP呈过度表达 ,Ⅱ组与Ⅰ组相比较 ,差异有显著意义 (F =5 4 .2 3～ 6 7.35 ,q =1 1 .2～ 1 9.3,P <0 .0 1 ) ;Ⅲ～Ⅴ组与Ⅱ组比较 ,突变型P5 3蛋白、EGFR及SP表达差异亦有统计学意义 (q =8.9～ 1 0 .5 ,P <0 .0 5 ) ;Ⅳ组与Ⅲ组相比较 ,突变型P5 3蛋白、EGFR及SP的表达均明显减弱 ,差异有统计学意义 (q =1 2 .5～ 1 4 .6 ,P <0 .0 5 )。 ④结论　PCF能够抑制UVB所致P5 3蛋白、EGFR和SP的过表达 ,从而可保     

扇贝多肽对大鼠脑缺血后缺血半影区Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

①目的　探讨扇贝多肽 (PCF)对大鼠脑缺血半影区内Bcl 2和Bax蛋白表达的影响。②方法　应用线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉缺血再灌注 (MCAO)模型 ,MCAO模型大鼠随机分为PCF治疗组、蒸馏水组和模型组。假手术组手术过程同MCAO模型组 ,但不闭塞大脑中动脉。免疫组织化学法测定脑组织缺血半影区Bcl 2和Bax蛋白的表达。③结果　模型组及蒸馏水组大鼠脑缺血半影区Bcl 2蛋白表达与假手术组相比差异有显著性 (F =6 83.78,q =2 1 .1 3、2 4 .74 ,P <0 .0 1 ) ;PCF组脑缺血半影区Bcl 2蛋白则呈过表达 ,与模型组及蒸馏水组相比有显著性差异 (q =38.0 8、4 1 .6 9,P <0 .0 1 )。模型组及蒸馏水组大鼠脑缺血半影区Bax蛋白表达与假手术组相比差异有极显著性 (F =5 90 .4 38,q =4 9.5 7、5 1 .98,P <0 .0 1 ) ;PCF治疗组脑缺血半影区Bax蛋白的表达则受到抑制 ,与模型组及蒸馏水组相比有显著性差异 (q =2 3.80、2 6 .2 3,P <0 .0 1 )。 ④结论　PCF能防止大鼠脑缺血后缺血半影区内神经元的凋亡     

IP_6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸（IP6）对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系（F=342.15,q=2.98～28.53,P〈0.05）;与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达（F=110.21,q=5.88～16.92,P〈0.05）,上调Bax的表达（F=26.00,q=2.97～8.19,P〈0.05）。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。     

IP6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系(F=342.15,q=2.98～28.53,P<0.05);与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达(F=110.21,q=5.88～16.92,P<0.05),上调Bax的表达(F=26.00,q=2.97～8.19,P<0.05)。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。