靶向声敏纳泡的制备及其声动力效应观察

目的 制备以动脉粥样硬化斑块A类清道夫受体（SR-A）为靶点的载二氢卟吩e6(Ce6)超声纳泡（NB），探讨其提高声敏剂的靶向性及声动力效应的能力。方法 以薄膜水化法制备载Ce6和SR-A靶向多肽PP1的纳泡（Ce6-PP1NB），检测其理化性质和细胞毒性。将小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7细胞）分别与Ce6、Ce6-PP1 NB共同孵育，采用激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内Ce6荧光强度以评估Ce6-PP1 NB的靶向性。将细胞按照不同处理方法分为：空白对照组（加入磷酸盐缓冲液）、低强度脉冲超声（LIPUS）组（加入磷酸盐缓冲液后予以超声辐照）、Ce6+LIPUS组（加入30μg/ml Ce6后予以超声辐照）和Ce6-PP1 NB+LIPUS组（加入30μg/ml Ce6-PP1 NB后予以超声辐照），超声辐照参数为：0.4 W/cm2、2 MHz，辐照时间1 min。采用活性氧荧光探针法检测细胞内活性氧生成情况，流式细胞术检测M1型、M2型巨噬细胞的比例，酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)浓度，评...     

声动力对胶质瘤细胞和胶质瘤干细胞治疗作用的对比研究

目的比较声动力对胶质瘤细胞和胶质瘤干细胞(GSCs)的治疗效果及影响机制。方法由U251胶质瘤细胞分离、培养GSCs;随机分为对照组、声敏剂组、超声辐照组及声动力治疗组;应用MTT法和TUNEL法分析和比较各组间胶质瘤细胞和GSCs的活力和凋亡情况;利用DCFH-DA染色、流式细胞术分析各组间细胞内活性氧(ROS)的产量;利用流式细胞术、Western blot分析三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)在胶质瘤和GSCs上的表达。结果对照组、声敏剂组及超声辐照组中胶质瘤细胞和GSCs之间在细胞活力和凋亡比较差异无统计学意义。声动力治疗组中,GSCs较胶质瘤细胞内ROS相对产量更高[(7.43±1.33)倍vs.(4.33±0.85)倍];细胞活力更低[(20.37±3.76)%vs.(43.37±4.66)%];凋亡率更高[(63.43±8.07)%vs.(38.85±10.24)%],差异均有统计学意义(均P0.01)。流式细胞术和Western blot结果表明,GSCs的ABCG2蛋白表达水平较胶质瘤细胞更高(P0.01)。结论与胶质瘤细胞相比,GSCs的声动力治疗效果更好,而在GSCs表面高度表达的ABCG2蛋白则是影响声动力对GSCs治疗效果的主要原因。     

载声敏剂的高分子超声造影剂体内抑瘤效应及其副反应考察

目的通过对比观察载声敏剂血卟啉(HP)的高分子聚合材料聚乳酸羟基乙酸共聚物(PL-GA)超声微泡造影剂(HP-PLGA)的光敏副反应,并观察超声联合该载药微泡对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的声动力治疗效果。方法将35只Balb/c小鼠分为5组,分别将不同浓度的HP-PLGA与单纯HP溶液经尾静脉注入各组小鼠体内,阳光辐照后比较观察不同组小鼠眼睛、背部皮肤、尾巴及肝脏产生的副反应。另建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分为A、B两大组进行处理,每组30只。A、B组又分为空白对照(C)组、单纯超声辐照(US)组、超声加空白微泡(US+MB)组、超声加单纯HP(US+HP)组和超声加载HPPLGA微泡(US+HP-PLGA)组,隔天处理一次,连续处理3次。A组荷瘤小鼠治疗后15d,比较各组荷瘤小鼠的质量抑瘤率;B组荷瘤小鼠治疗处理后继续喂养,观察各处理组小鼠的生存期。结果注射40mg/ml与20mg/ml单纯HP组小鼠背部皮肤出现明显的红斑焦痂,眼睛红肿,尾巴肿胀,肝脏出现损伤性病理改变,而其他各组无明显反应。与其他各处理组相比较,超声联合载声敏剂PLGA微泡组质量抑瘤率最大,平均生存天数最长,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论将声敏剂包裹进高分子造影剂内可以大大降低声敏剂的光敏毒性副反应,且该载声敏剂的高分子造影剂具有明显的体内抑瘤作用,为寻求一种安全、有效、靶向性高、毒副作用小的声动力抗肿瘤方法提供了新的思路和依据。     

超声辐照微泡促骨髓间充质干细胞归巢于大鼠肾组织实验研究

目的 观察超声辐照微泡对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)归巢于急性肾小管坏死模型肾组织的作用.方法 将制备成功的40只肾小管坏死模型大鼠随机分为5组(8只),即(1)单纯模型组(对照组);(2)0.5 W/cm2超声+微泡组(0.5 US+MB);(3)干细胞组(MSCs); (4) 0.5 W/cm2超声+微泡+干细胞组(0.5 US+ MB+MSCs);(5)1.0 W/cm2超声+微泡+干细胞组(1.0 US+ MB+ MSCs).7d后将各组大鼠处死,取材用于荧光显微镜观察MSCs在肾组织的分布情况,采用荧光定量PCR测定细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因表达水平.结果 采用荧光显微镜观察,DAPI标记的MSCs细胞核(细胞核带蓝色荧光),1.0 US+ MB+ MSCs组肾组织骨髓干细胞数量明显多于0.5 US+ MB+ MSCs组及MSCs组(P＜0.05).0.5 US+MB组、0.5 US+ MB+MSCs组及1.0 US+ MB+MSCs组ICAM-1的基因水平明显高于对照组及MSCs组(P＜0.05).结论 1.0 W/cm2超声辐照微泡促进肾组织细胞ICAM-1表达增加,从而促进MSCs归巢于急性肾小管坏死模型的肾组织.     

脂质体微泡对超声介导基因转染的增效作用研究

目的 探讨超声介导基因转染时,脂质体微泡(LM)对体内、外红色荧光蛋白基因(RFP)转染的增效作用及其安全性.方法将RFP和LM加入培养的Hela细胞后行超声辐照(US),对微泡浓度、超声强度、辐照时间进行优化研究,运用荧光显微镜、流式细胞术评估基因转染率,并对细胞损伤进行分析.在裸鼠移植瘤的体内实验中,将LM和RFP质粒(P)经尾静脉注入后予以超声辐照(P+LM+US),以单纯质粒注射(P)、P+US、P+LM作为对照,行冰冻切片,组织学检查,RFP表达检测.结果培养的Hela细胞经LM和超声辐照联合处理后,RFP基因转染率显著增加,差异有统计学意义(P＜0.01),在超声强度为1.0 W/cm2、微泡浓度为6%、辐照3 min的条件下最显著,且未发现显著的细胞损伤.P+LM+US组的裸鼠移植瘤内RFP表达显著高于P组、P+US组或P+LM组,差异均有统计学意义(P＜0.01),且未观察到明显的组织损伤.结论 LM对超声介导基因转染的体内、外转染效率有显著的增效作用,而无明显的细胞或组织损伤,为临床基因治疗提供一种新颖、高效、安全的非病毒基因转染方法.     

紫杉醇对Chlorin e6声动力抑制人肺腺癌SPCA-1细胞生长增敏作用

目的声动力治疗(sonodynamic therapy,SDT)是通过超声波激活肿瘤细胞内聚集的声敏剂产生活性氧自由基治疗肿瘤的一种新方法。本实验观测紫杉醇对二氢卟吩e6(chlorin e6,E6)为声敏剂声动力抑制人肺腺癌SPCA-1细胞生长作用,旨在探讨紫杉醇对E6声动力是否具增敏作用。方法 E6声动力单独及联合紫杉醇处理SPCA-1细胞,48 h后四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]显色分光光度法测细胞增殖。结果 (1)频率为1.0 MHz超声在强度1.0～2.0 W/cm~2范围作用60 s呈强度依赖性抑制SPCA-1细胞生长,E6(0.05～1.6 mg/mL)和紫杉醇(1×10~(-9)～1×10 mol/L)均浓度依赖性抑制SPCA-1细胞生长;(2)与超声(1.0 W/cm~2×60 s×1.0MHz)和E6(0.025 mg/mL)单独作用相比,超声联合E6对SPCA-1细胞生长抑制作用明显增强(P0.05);(3)与E6声动力(超声:1.0 W/cm~2× 60 s×1.0 MHz;E6:0.025 mg/mL)与紫杉醇(1×10~(-7)mol/L)相比,E6声动力联合紫杉醇对SPCA-1细胞生长抑制作用显著加强(P0.05)。结论紫杉醇对Chlorin e6声动力抑制人肺腺癌SPCA-1细胞生长具增敏作用。     

超声联合微泡诱导血管平滑肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨低频超声联合脂质微泡诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的可能机制.方法 以低频连续波超声(频率1 MHz、声强0.3 W/cm2)联合脂质微泡(1 μl/ml)辐照VSMCs 120 s.分别用流式细胞仪Annexin V/PI染色、免疫细胞化学技术、荧光探针Fura-4/Am负载后激光共聚焦法检测细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达和细胞内游离Ca2 浓度的变化情况.结果 与对照组和血小板衍生生长因子-BB刺激组(PDGF)比较,两组超声辐照联合微泡[(US MB)组和(PDGF US MB)组]的VSMCs凋亡率显著增加、Bax蛋白表达明显上调、而Bcl-2蛋白表达则显著减少(P<0.01);而且PDGF US MB组的细胞凋亡率明显高于US MB组,Bax蛋白表达上调和Bcl-2蛋白表达下调的程度较US MB组更为显著(P<0.01).各实验干预组VSMCs内Ca2 浓度均较对照组显著增高(P<0.01);PDGF US MB组和US MB组细胞内Ca2 浓度均明显低于PDGF组(P<0.01).结论 超声联合微泡诱导VSMCs凋亡的机制可能与细胞内游离Ca2 浓度增加、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达降低有关.     

2-甲氧基雌二醇对MUTZ-1细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响

目的探讨在2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)MUTZ-1细胞凋亡中活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的作用及其作用机制。方法MUTZ-1细胞与不同浓度2-ME共育,FCM分析荧光探针DCFH-DA标记后细胞内ROS和荧光探针JC-1标记后细胞Δψm的变化。加入抗氧化剂过氧化氢酶(CAT)后,MUTZ-1细胞内相应指标的变化。结果经1~4μmol/L 2-ME作用MUTZ-1细胞12 h,与对照组相比,细胞内ROS升高(F=102.56,P<0.05)和细胞Δψm下调(F=108.02,P<0.05),且MUTZ-1细胞Δψm下降与细胞内ROS升高成正相关(r=0.981,P=0.019)。CAT能够明显抑制2-ME诱导MUTZ-1细胞内ROS升高(F=68.26,P<0.01)和细胞Δψm下调(F=55.29,P<0.01)。结论2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡,可能与2-ME刺激细胞内ROS积聚过多、损伤线粒体结构的完整性以及降低细胞线粒体膜电位有关。     

超声靶向微泡破坏技术协同二氢卟吩e6介导声动力治疗小鼠肝癌移植瘤

目的探讨载二氢卟吩e6纳米脂质微泡介导的超声靶向微泡破坏技术及声动力治疗对肝癌移植瘤的协同抑制作用。方法制备Ce6-MB并检测其形态、粒径及包封率。将H22肝癌皮下移植瘤小鼠随机分为对照组、Empty-MB组、Ce6组、Ce6-MB组。治疗5次后计算抑瘤率,冰冻切片观察Ce6肿瘤聚集情况,HE、TUNEL染色观察细胞及组织凋亡情况,RT-qPCR及免疫组化法检测Bcl-2、Bax的基因及蛋白表达。结果 Ce6-MB为分散均匀纳米级球形微泡,包封率为40.85%±3.09%,Ce6-MB组比Ce6组肿瘤聚集更多Ce6。与对照组相比,Empty-MB、Ce6、Ce6-MB组均可抑制肿瘤生长,Bax mRNA和蛋白高表达,Bcl-2低表达,以上结果以Ce6-MB组为显著(P0.01)。结论成功制备载Ce6纳米脂质微泡,超声靶向微泡破坏技术协同Ce6介导的声动力疗法可有效治疗小鼠肝癌移植瘤。     

2-脱氧-D-葡萄糖逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制研究

目的探讨2-脱氧-D-葡萄糖在逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制。方法采用鼠胚胎干细胞(m ESCs)作为研究七氟醚对孕早期胚胎毒性的模型,随机分成4组:对照组(暴露于5%CO2及21%O2的环境中)、七氟醚组(4.1%七氟醚的密封塑料盒中处理6 h)、2-DG组(10 mmol/L 2-DG处理6 h)、2-DG+七氟醚组(4.1%七氟醚+10 mmol/L 2-DG处理6 h)。各组干预6 h后,通过从形态学观测细胞宏观改变,荧光测定细胞内活性氧自由基(ROS)水平,qRT-PCR检测干性基因的mRNA表达情况和免疫萤光染色直接观察干性基因的水平四个方面比较七氟醚组与对照组在ROS水平和自我更新能力方面的差异。结果与对照组相比,七氟醚组细胞呈现高ROS水平,干性基因及其表达也有显著降低(P0.05);对照组和2-DG组上述指标则无显著差异(P0.05);2-DG+七氟醚组较七氟醚组ROS水平低,干性基因及其表达显著升高(P0.05)。结论七氟醚通过诱导细胞内ROS产生从而导致了m ESCs的自我更新能力的下降。2-DG缓解其引起的高水平ROS从而逆转其对胚胎干细胞自我更新能力的抑制。     

山姜素靶向调控Nrf2抑制H9C2细胞氧化应激反应

目的 观察山姜素(alpinetin,ALP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠心肌细胞(H9C2)的作用，并探讨其机制。方法 采用不同因素干预H9C2细胞后，使用细胞毒性检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞活性；实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence PCR,RT-PCR)检测基因的表达；Western blot检测蛋白的表达；酶标仪及免疫荧光显微镜检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达；试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结果 细胞活性：LPS组细胞活性明显低于对照组(P <0.01)，加入山姜素后，可显著提高细胞活性(P <0.01),LPS组LDH活性明显高于对照组(P <0.01)；氧化应激分子及基因表达：与对照组相比，LPS组心肌细胞中ROS的...     

黄芪多糖抑制氧化应激致大鼠 软骨细胞损伤及凋亡的作用机制分析

目的 探究黄芪多糖(alp)抑制氧化应激致大鼠软骨细胞损伤及凋亡的作用机制。方法 选取SPF级雌性3周龄大鼠,分为活性氧自由基培养组(ROS组)、黄芪多糖组(ROS+alp组),另设空白对照组。ROS组取其软骨细胞,加入活性氧自由基培养; ROS+alp组在ROS组的基础上加入浓度为30 mg/L的黄芪多糖处理;空白对照组不作处理。使用CCK-8法测定不同浓度(0 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L)黄芪多糖对大鼠细胞生存率的影响;采用蛋白质印记法(Western Blot)检测大鼠软骨细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、基质金属酶蛋白3(MMP3)、MMP13、CLO2蛋白表达情况;采用Hoechst 33342染色法测定软骨细胞凋亡率。结果 alp 0mg/L时,细胞大量凋亡,生存率不到40%,随着alp的浓度的增加,大鼠软骨细胞存活率显著升高;与空白对照组相比,ROS组大鼠细胞Bcl-2、CLO2蛋白表达显著下降(P 0. 01),MMP3、MMP13、Bax蛋白表达显著上升(P 0. 01);与ROS组大鼠细胞相比,ROS+alp组大鼠细胞CLO2、Bcl-2蛋白表达显著上升(P 0. 01),MMP3、MMP13、Bax蛋白表达显著下降(P 0. 01)。Hoechst 33342染色结果显示,空白对照组软骨细胞核染色分布均匀,呈弥散均匀的低密度荧光,ROS组大鼠细胞荧光分布较为杂乱且荧光密度较高,ROS+alp组大鼠细胞分布也较为均匀,荧光密度也较低。结论在一定范围内黄芪多糖呈剂量依赖性显著降低大鼠软骨细胞内ROS水平,上调抑制凋亡因子,下调凋亡因子,减少大鼠软骨细胞的凋亡,达到缓解软骨细胞损伤的效果。     

纳米微泡介导GFP转染小鼠骨骼肌细胞的实验研究

目的 探讨两种纳米微泡(白蛋白外膜和磷脂外膜)增强基因转染小鼠骨骼肌的作用.方法 以正常C57B10小鼠胫前肌为研究对象,目的基因GFP与微泡混合注入小鼠胫前肌,一侧胫前肌经超声(1MHz脉冲波,脉冲重复频率为100 Hz,20％工作周期,空间峰值时间峰值声强为2 W/cm2,辐照作用时间30 s),另一侧胫前肌不经超声辐照.观察白蛋白纳米微泡及磷脂纳米微泡增强骨骼肌细胞GFP转染水平的作用.1周后处死小鼠,荧光显微镜观察发出绿色荧光者为GFP阳性肌纤维细胞,计数最大GFP阳性肌纤维细胞数,作为GFP基因转染效率指标.结果 ①白蛋白纳米微泡组和白蛋白纳米微泡+超声组最大GFP阳性肌纤维数显著高于阴性对照组(P＜0.05),显著低于阳性对照组(P＜0.05).②磷脂纳米微泡组与阴性对照组及阳性对照组比较,最大GFP阳性肌纤维数差异均无统计学意义(P＞0.05).磷脂纳米微泡+超声组最大GFP阳性肌纤维数较阴性对照组显著增高(P＜0.05);磷脂纳米微泡+超声组与阳性对照组最大GFP阳性肌纤维数差异无统计学意义(P＞0.05).结论 纳米微泡可增强基因转染骨骼肌细胞效率,白蛋白含氟化气体纳米微泡具有发展潜力.     

超声声学造影剂介导肝细胞生长因子基因转染的体外实验

目的 研究超声声学造影剂促进肝细胞生长因子(HGF)基因在大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)中的转染效果.方法 将HSC-T6接种在24孔板中,随机分为5组:①空白对照组(C);②单纯质粒组(P);③载基因超声声学造影剂组(M);④质粒+超声组(P+U);⑤载基因超声声学造影剂+超声组(M+U).荧光显微镜及流式细胞仪检测pIRES2-EGFP/HGF在细胞内的表达及转染效率;MTT法检测该方法 对HSC-T6生长活性的影响;Western Blotting检测HGF蛋白的表达.结果 M+U组的绿色荧光强度及转染率均高于其他各组,并对细胞活性无明显影响,且HGF蛋白的表达均高于其他各组(P＜0.05).结论 超声声学造影剂可提高基因在体外培养HSC-T6的转染效率,并对细胞活性无明显影响,为提高非病毒载体的转染效率提供一个新策略.     

共聚物P85联合超声微泡介导基因转染的体外实验研究

目的 探讨共聚物P85与黏附增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent protein,EGFP)质粒的微泡造影剂(microbubble,MB)结合后联合一定强度的超声(ultrasound,US)辐照,是否增强人肝癌细胞(HepG2)的质粒转染及表达.方法 以人肝癌细胞(HepG2)为研究对象,质粒DNA是可表达绿色荧光蛋白的pEGFP,添加微泡造影剂或共聚物P85后进行脉冲多普勒超声辐照(频率1 MHz,声强1 W/cm2,工作周期20%,时间20 s).24 h后台盼蓝染色评价细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞的基因转染率.结果 有超声辐照组的pEGFP转染率明显高于无超声辐照组(P＜0.01),有超声辐照组中pEGFP+30%MB+P85+US组转染效率(22.14±3.06)%优于单独使用微泡组(11.34±2.2)%或P85组(9.72±1.21)%(P＜0.01).结论 微泡造影剂与共聚物P85结合同时给予超声辐照可增强基因转染效率,在基因治疗上有待于进一步关注和研究.     

载单宁酸铁及二氢卟吩纳米粒用于光声成像及杀伤视网膜母细胞瘤Y79细胞

目的 制备载单宁酸铁(Fe^Ⅲ TA)及二氢卟吩(Ce6)纳米粒,观察其用于光声(PA)成像及杀伤视网膜母细胞瘤(RB)Y79细胞的价值。方法 制备Fe^Ⅲ TA/PLGA/Ce6纳米粒并检测其特性,观察其体内、体外PA成像能力及对人源性RB Y79细胞的杀伤能力。结果 成功制备的Fe^Ⅲ TA/PLGA/Ce6纳米粒基本特性良好,光热稳定性优异,用于实时PA成像效果较好。纳米粒浓度越高,经808 nm激光辐照后样品升温幅度越大。各种浓度纳米粒对人视网膜色素上皮细胞均无明显细胞毒性。于Y79细胞中加入纳米粒后,荧光强度随时间延长而增高;激光组(Y79细胞+激光辐照)、Fe^Ⅲ TA/PLGA/Ce6组(Y79细胞+纳米粒)、Fe^Ⅲ TA/PLGA/Ce6+激光组(Y79细胞+纳米粒+激光辐照)及空白对照组(Y79细胞)于Y79细胞内的活性氧产量百分比分别为28.01%、55.41%、42.74%及26.57%。Fe^Ⅲ TA/PLGA/Ce6纳米粒及激光辐照共同作用可使Y79细胞大量凋亡。结论 成功制备的Fe^Ⅲ TA/PLGA/Ce6纳米粒用于PA成像效果较好;用于光热治疗联合化学动力疗法可有效杀伤体外Y79细胞。     

超声联合维拉帕米逆转卵巢癌细胞阿霉素耐受性

目的　探讨超声协同维拉帕米逆转卵巢癌细胞阿霉素耐受性的可能性及其机理。方法　制备卵巢癌细胞阿霉素耐药株 SKOV3/ ADR,并将其分为对照组、超声辐照组 (US组 )、阿霉素组 (ADR组 )、 ADR US组、维拉帕米组 (Vp组 )和 Vp US组 6个组 ,测定耐药细胞株在不同条件下对抗癌药阿霉素的反应性 (计算癌细胞存活率 )及细胞内阿霉素的聚集量。结果　癌细胞对阿霉素的反应性与对照组相比 ,US组细胞存活率无明显降低 (P>0 .0 5 ) ;ADR US组、 Vp组和 Vp US组细胞存活率较 ADR组降低 (P<0 .0 1、 P<0 .0 1、 P<0 .0 1)。 Vp组与 ADR US组差异无显著性 (P>0 .0 5 )。细胞内阿霉素的聚集量 ,ADR US组、 Vp组和 Vp US组与 ADR组相比明显增加 (P<0 .0 5、 P<0 .0 1、 P<0 .0 1) ,Vp US组较 ADR US组和 Vp组增加 (P<0 .0 5、 P<0 .0 5 )。结论　超声可与耐药修饰剂维拉帕米协同作用 ,逆转卵巢癌细胞对阿霉素的耐受性 ,其作用是通过提高细胞内药物聚集量实现的     

乌司他丁对热打击肺泡巨噬细胞TREM-1表达和炎性分泌活性的影响

目的:探讨乌司他丁对热打击肺泡巨噬细胞TREM-1表达和炎性分泌活性的影响。方法:采集分离10例健康成年男性的肺泡巨噬细胞,分为对照组(Control组)、热打击组(HS组)、乌司他丁低剂量组(HS+LU组)和高剂量组(HS+HU组),每组10例,43℃、5%CO2条件下打击1h,复温培养6h,ELISA检测各组细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β和IL-6浓度,流式细胞仪检测细胞中活性氧簇(ROS)水平和细胞表面髓样细胞触发受体-1(TREM-1)表达。结果:HS组、HS+LU组和HS+HU组细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6浓度均高于Control组(P0.05),而HS+LU组和HS+HU组细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6浓度均低于HS组(P0.05),其中HS+HU组细胞培养上清中上述炎性递质浓度低于HS+LU组(P0.05)。HS组、HS+LU组和HS+HU组细胞中ROS水平均高于Control组(P0.01),而HS+LU组和HS+HU组细胞中ROS水平均低于HS组(P0.01),其中HS+HU组细胞中ROS水平低于HS+LU组(P0.01)。HS组和HS+LU组细胞表面TREM-1表达百分比高于Control组(P0.05),而HS+LU组和HS+HU组细胞表面TREM-1表达百分比均低于HS组(P0.05),其中HS+HU细胞表面TREM-1表达百分比低于HS+LU组(P0.01)。结论:热打击可诱导肺泡巨噬细胞TREM-1表达并促进炎性递质分泌,乌司他丁可缓解热打击肺巨噬细胞炎症反应的激活,其潜在机制与调控肺泡巨噬细胞TREM-1表达失衡有关,可能在重症中暑中发挥炎症反应调控作用。     

PCI-24781抑制上皮性卵巢癌SKOV-3细胞Wnt/β-catenin信号通路的研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis)PCI-24781对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用xCELLigence RTCA检测SKOV-3细胞的增殖与迁移,流式细胞仪DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)的生成情况,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测Ac-H3、Ac-H4、β-catenin、P53的表达。结果 PCI-24781对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞呈剂量-时间依赖性抑制细胞增殖,差异有统计学意义(P0.05),其48h的半数有效抑制水平(IC50)值为0.193 0μmol/L。PCI-24781对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞迁移影响不明显,各组Cell Index差异无统计学意义(P0.05)。PCI-24781可提高细胞内ROS水平(P0.05),且高水平组的PCI-24781提高细胞内ROS水平更明显增加。Western blot检测可见随PCI-24781水平升高,β-catenin表达水平减弱、Ac-H3、Ac-H4、P53表达水平增强。结论 PCI-24781可增加细胞内ROS水平,上调组蛋白乙酰化水平,促进抑癌基因P53表达,抑制经典Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制细胞增殖,产生抗肿瘤作用。     

超声辐照微泡介导脂质体小干扰RNA转染视网膜色素上皮细胞

目的 探讨超声靶向破坏超声微泡介导脂质体小干扰RNA(siRNA)转染视网膜色素上皮(RPE)细胞的价值. 方法将人及大鼠RPE细胞隔孔接种于24孔板中(2×10~5/孔、1×10~5/孔),分5组处理:siRNA+超声(US)、siRNA+微泡(MBs)+US、siRNA+脂质体(L)、siRNA+L+US、siRNA+L+MBs+US.12小时后,荧光显微镜观察并应用流式细胞仪测定阳性细胞比例. 结果在无脂质体的条件下,超声或超声联合微泡不能促进siRNA转染人及大鼠RPE细胞.siRNA+L+US组siRNA转染人RPE细胞效率最高.siRNA+L+US+MB组siRNA转染人及大鼠RPE细胞的效率显著低于siRNA+L+US组. 结论超声辐照可促进脂质体介导的siRNA转染人RPE细胞.