实验大鼠泰泽菌检测方法的比较研究

应用酶消化及机械分离法分离出生10～15d的大鼠海马神经元，从形态学及电生理学方面鉴定细胞活性。结果表明，该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元。用0．5μmol／L的TTx阻断Na^ 通道后，分别记录到典型的全细胞电压依赖性钾离子通道电流以及延迟整流钾通道电流。证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究，对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。     

胃动素对大鼠下丘脑PVN神经元细胞电压依赖性钾电流的影响

目的:研究胃动素对大鼠下丘脑PVN神经元细胞电压依赖性钾电流的影响。方法:采用急性分离新生Wistar大鼠下丘脑细胞和全细胞膜片钳技术的方法,观察胃动素对大鼠下丘脑PVN神经元细胞电压依赖性钾电流的影响。结果:胃动素可抑制大鼠下丘脑PVN神经元电压依赖性钾电流,使电流由(5.406±0.86)nA降至(3.621±0.78)nA,差异有统计学意义(P0.05)。步进电刺激下丘脑神经元,随着刺激电压强度的增强,钾外向电流增加,使电压-电流曲线(Ⅰ~Ⅴ曲线)右移,但不改变Ⅰ~Ⅴ曲线的形态。结论:胃动素可通过抑制大鼠下丘脑PVN神经元细胞电压依赖性钾电流,发挥其增强胃肠运动的作用。     

大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录

目的 探讨记录全细胞的大电导钙激活钾通道的技术方法。方法 首先酶解急性分离大鼠海马神经元；利用全细胞膜片钳技术记录大电导钙激活钾电流。结果 可记录到一系列快速的外向钾离子电流。结论 所记录到的外向钾离子电流中，快速出现并很快减小的呈尖峰样的瞬变外向电流主要由大电导的钙激活钾电流组成。     

镧对大鼠海马神经元瞬时外向和延迟整流钾通道的调控作用(英文)

目的研究细胞内外La3+对急性分离大鼠海马神经元IA、IK电流的影响。方法运用全细胞膜片钳技术记录细胞内外施加La3+后IA、IK的变化。结果细胞外100μmol/L La3+使IA稳态激活曲线和稳态失活曲线半数电压向去极化方向移动,IA失活恢复时间延长,IA激活动力学抑制。细胞内100μmol/L La3+使IK稳态激活曲线左移,并减弱了细胞外La3+引起的IA稳态失活曲线右移程度。结论细胞内外La3+可能与IA、IK通道蛋白某些位点结合而发挥对通道蛋白的调控作用,细胞外La3+对IA通道蛋白的多个状态都有影响,并且细胞外La3+对IA稳态失活的部分作用可能通过第二信使实现。     

急性冠状动脉综合征患者淋巴细胞电压依赖性钾通道的变化

[郭丽芬,张存泰,吴杰等.中华心血管病杂志,2007,35(9):818～821]用全细胞膜片钳技术和Western印迹法,探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道(Kv)电流及Kv1.3蛋白表达的变化。收集12例ACS患者和10例健康志愿者外周血淋巴细胞,采用膜片钳全细胞电流记录方法,记录淋巴细胞膜Kv的电流密度。用Western印迹法检测外周血淋巴细胞Kv1.3蛋白的表达。发现ACS患者淋巴细胞Kv的电流密度为(269±94)pA/pF,明显高于正常人[(191±64)pA/pF,P<0.01]。ACS组淋巴细胞膜电容为(2.3±0.7)pF,对照组为(2.2±0.5)pF,两组间差…     

缺氧对小鼠背根神经节细胞ⅠK电流的影响

目的：探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法：应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录ⅠK电流。结果：当小细胞缺氧时,钾通道在3min之内即可发生变化,表现为绝大多数（86％,6／7）细胞的ⅠK减弱,1个细胞（14％,1／7）的ⅠK电流增强;缺氧1min时以减弱,3min时产生最大抑制。当测试电位从＋10mV至＋70mV时,急性缺氧显著性降低ⅠK,ⅠK电流密度降低最大幅度从（304．4&#177;122．9）降为（253．9&#177;106．4）pA&#183;pF^-1,但ⅠK稳态激活曲线无明显变化。结论：急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞ⅠK电流,而ⅠK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

缺氧对小鼠背根神经节细胞IK电流的影响

目的:探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法:应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录IK电流。结果:当小细胞缺氧时,钾通道在3 min之内即可发生变化,表现为绝大多数(86%,6/7)细胞的IK减弱,1个细胞(14%,1/7)的IK电流增强;缺氧1 min时IK减弱,3 min时产生最大抑制。当测试电位从 10 mV至 70 mV时,急性缺氧显著性降低IK,IK电流密度降低最大幅度从(304.4±122.9)降为(253.9±106.4)pA.pF-1,但IK稳态激活曲线无明显变化。结论:急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞IK电流,而IK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

枸杞多糖对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的:探讨枸杞多糖对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用。方法:用急性酶解法获得大鼠的单个心肌细胞,用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流。结果:①枸杞多糖能使I-V曲线明显上移。②枸杞多糖对ICa-L呈浓度依赖性的抑制作用。③50 mg/L枸杞多糖能使ICa-L稳态激活曲线右移、还能增加失活后恢复的τ值;但对失活曲线无影响,不改变ICa-L失活特性。结论:枸杞多糖对ICa-L有阻断作用,主要作用于钙通道激活和恢复过程。     

P2受体介导对大鼠三叉神经节神经元电压门控性钙离子通道的作用

目的应用全细胞膜片钳研究P2受体介导对大鼠的三叉神经节(TG)神经元上电压门控性钙离子通道(VGCC)的作用。方法急性分离大鼠TG神经元细胞,通过全细胞膜片钳记录电压门控性钙离子通道电流,分别灌流腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)及P2X、P2Y受体的激动剂,观察其对VGCC电流的作用。结果 ATP对大鼠TG神经元细胞的VGCC电流有可逆的抑制作用(P<0.05),P2X受体激动剂αβ-meATP能够显著抑制TG神经元的VGCC电流(P<0.05),而P2Y受体激动剂2-MeSADP对VGCC电流无明显作用。结论 P2受体介导对大鼠的TG神经元上VGCC电流有抑制作用。     

多巴胺增强培养新生大鼠DRG神经元ATP激活电流

目的 :探讨多巴胺对ATP激活电流的调制作用。方法 :实验在培养的新生大鼠脊髓背根神经节细胞上进行 ,应用全细胞膜片钳技术记录出ATP和多巴胺激活的电流。结果 :在被检的DRG细胞中 ,有 6 2 % (39/ 6 3)的神经元对ATP和多巴胺都敏感。在预加 10 -8,10 -7,10 -6和 10 -5mol/L多巴胺后 ,ATP的激活电流分别增加到 139.7% ,141.5 % ,149.9% ,149.1% ;呈剂量依赖性。用D1的拮抗剂SCH - 2 3390能取消此增强作用 ;在电极中灌注H - 7(PKC ,PKA抑制剂 )也能取消此增强作用。结论 :多巴胺对ATP激活电流的增强作用是多巴胺作用于D1受体 ,通过胞内第二信使 ,使P2X受体通道复合体胞内磷酸化所致。     

Effect of etomidate on voltage-dependent potassium currents in rat isolated hippocampal pyramidal neurons

Background Previous studies demonstrated general anesthetics affect potassium ion channels, which may be one of the mechanisms of general anesthesia. Because the effect of etomidate on potassium channels in rat hippocampus which is involved in memory function has not been studied, we investigated the effects of etomidate on both delayed rectifier potassium current （IK（DR）） and transient outward potassium current （I_K（A）） in acutely dissociated rat hippocampal pyramidal neurons.Methods Single rat hippocampal pyramidal neurons from male Wistar rats of 7-10 days were acutely dissociated by enzymatic digestion and mechanical dispersion according to the methods of Kay and Wong with slight modification. Voltage-clamp recordings were performed in the whole-cell patch clamp configuration. Currents were recorded with a List EPC-10 amplifier and data were stored in a computer using Pulse 8.5. Student＇s paired two-tail t test was used for data analysis. Results At the concentration of 100 μmol/L, etomidate significantly inhibited IK（DR） by 49.2% at ＋40 mV when depolarized from -110 mV （P 〈0.01, n=8）, while did not affect IK（A） （/1=8, P 〉0.05）. The IC50value of etomidate for blocking IK（DR）was calculated as 5.4 μmol/L, with a Hill slope of 2.45. At the presence of 10 μmol/L etomidate, the V1/2 of activation curve was shifted from （17.3±1.5） mV to （10.7±9.9） mV （n=8, P 〈0.05）, the V1/2 of inactivation curve was shifted from （-18.3±2.2） mV to （-45.3±9.4） mV （n=8, P 〈0.05）. Etomidate 10 μmol/L shifted both the activation curve and inactivation curve of IK（DR））to negative potential, but mainly affected the inactivation kinetics.Conclusions Etomidate potently inhibited IK（DR） but not IK（A） in rat hippocampal pyramidal neurons. IK（DR） was inhibited by etomidate in a concentration-dependent manner, while IK（A） remained unaffected.     

2型糖尿病患者25羟维生素D与胰岛素抵抗的相关性研究

目的探讨2型糖尿病患者25羟维生素D(25-OH-D_3)与胰岛素抵抗的相关性。方法选取我科室2017年1月～2018年1月收治的60例2型糖尿病患者为观察组,选取血糖正常的60例健康体检者为对照组。测定以上受试者的血糖、25-OH-D_3以及胰岛素功能[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛细胞功能(HOMA-β)]。结果观察组糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FBG)、HOMA-IR均显著高于对照组,25-OH-D_3、HOMA-β均显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示,观察组患者的25-OH-D_3与FBG、HbA1c、HOMA-IR呈负相关(P0.05),与HOMA-β呈正相关(P0.05)。结论 2型糖尿病患者的25-OH-D3水平下降,这种下降可能影响患者的胰岛素功能,可建议患者补充维生素D。     

哇巴因诱发大鼠心律失常作用靶点的研究

目的　观察哇巴因对大鼠心室肌细胞动作电位时程、钾通道的作用 ,探讨哇巴因诱发心律失常的作用机制 ,为寻找新的抗心律失常药物提供依据。方法　应用全细胞膜片钳技术记录哇巴因对大鼠心肌细胞动作电位时程 (APD)、内向整流钾电流 (Ik1 )、瞬时外向钾电流 (Ito)的作用。结果　①哇巴因 5μmol/L使大鼠心室肌细胞动作电位时程从给药前的 86 .3ms± 2 5 .2ms(APD90 ) ,缩短至 58.9ms± 2 0 .8ms(n =5 ,P <0 .0 1 ,给药 1 0min) ;②哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞内向整流钾电流 ,使Ik1 从 - 1 868pA± 1 88pA增加到 - 2 393pA± 367pA(刺激电压 - 1 2 0mV ,n=1 0 ,P <0 .0 1 ) ;③哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流 ,使Ito从 1 2 73pA± 31 8pA增加到 1 70 7pA± 486pA(刺激电压 +60mV ,n =5 ,P <0 .0 1 )。结论　哇巴因诱发室性心律失常可能与它缩短心室肌细胞动作电位时程有关 ,而Ito的增加使二期平台期缩短 ,Ik1 的增加使三期复极加快 ,均参与了动作电位时程缩短的过程。同时增加Ik1 将影响静息膜电位 ,可能使膜反应性增强     

急性分离的大鼠海马及皮层神经元快速失活钾电流特性的比较

目的 探讨海马及皮层神经元细胞膜上快速失活钾通道的特性。方法 急性分离大鼠海马及皮层神经元;利用whole-cell膜片钳技术记录IA电流。结果 海马神经元上的IA通道电流幅度较皮层神经元大、潜伏期短。结论 海马神经元与皮层神经元上的IA电流特征存在差别。     

甲基汞对豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的影响

目的：观察甲基汞对豚鼠耳蜗外毛细胞侧膜K+电流的影响,探讨甲基汞耳毒性的离子机制。 方法：采用全细胞膜片钳技术分别观察汞污染度为1/1000 LD₅₀ 、1/100 LD ₅₀、1/10 LD₅₀对外毛细胞Ca²⁺敏感外向I_K（Ca）电流的影响。 结果：汞中毒后I_K（Ca）幅值分别为（1.48±0.28）、（1.36±0.16） 和（1.22±0.13）nA,与正常对照组相比分别下降了8%、16%和25%（P<0.05）。 结论：甲基汞以浓度依赖方式抑制Ca2+敏感的外向K+电流,使I_K(Ca)幅值降低,最后导致听觉机能下降。这可能是甲基汞中毒的耳毒性机制之一。     

BmKNJX10对大鼠背根神经节神经元外向钾电流的影响

目的:作者运用柱层析和高效液相色谱的方法,从东亚钳蝎毒素中分离纯化获得一个长链组分BmKNJX10, 质谱报告结果显示其相对分子质量为7214。本文研究其对神经元钾电流的影响。　方法:采用全细胞膜片钳技 术,观察了BmKNJX10对大鼠背根神经节(DRG)神经元外向钾电流(IK)的作用。　结果:BmKNJX10以浓度依赖 的方式对IK有明显的促进作用。在刺激电压为+20mV时,10mg/L、30mg/L、50mg/L和70mg/LBmKNJX10对 IK的增大率分别为(17.1±3.9)%(n=4)、(25.1±6.2)%(n=4)、(45.3±2.8)%(n=5)和(70.2±11.1)%(n= 3)。　结论:BmKNJX10具有开放钾通道的功能,可能属于一个新的钾通道毒素多肽。     

脂代谢紊乱对2型糖尿病患者早期胰岛素分泌和胰岛素抵抗的影响

目的:了解脂代谢紊乱对2型糖尿病患者早期胰岛素分泌功能和胰岛素抵抗的影响.方法:93例未接受调脂治疗和抗高血糖治疗的新发2型糖尿病患者根据血脂水平分为正常血脂组(B组)、单纯甘油三酯升高组(C组)和混合血脂升高组(D组),20例非糖尿病正常血脂体检者为健康对照组(A组),根据口服葡萄糖耐量试验计算和分析早期胰岛素分泌指数△I30△G30和胰岛素抵抗指数HOMA-IR.结果:与健康对照组比较,2型糖尿病各亚组的△I30△G30值(P=0.00001,＜0.05和＜0.01)和HOMA-IR值(所有P＜0.05)均明显降低;在2型糖尿病患者中,脂代谢紊乱各组(C和D组)的△I30/△G30值比正常血脂组(B组)明显降低,但是混合血脂升高组(D组)与单纯甘油三酯升高组(C组)之间差异无统计学意义(P=0.2509);在2型糖尿病患者中,与正常血脂组比较,混合血脂升高组(D组)的HOMA-IR值明显升高(P=0.0027),单纯甘油三酯升高组(C组)则无显著性差异(P=0.1841).结论:2型糖尿病患者同时存在早期胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗,甘油三酯升高主要降低早期胰岛素分泌功能,而胆固醇异常主要加重胰岛素抵抗.     

强化胰岛素治疗对脓毒症患儿胰岛素抵抗、胰岛素分泌及血清炎症因子的影响

目的 探讨强化胰岛素治疗对脓毒症患儿胰岛素抵抗、胰岛素分泌及血清炎症因子的影响.方法 选择2017年10月至2019年12月在我科住院治疗的脓毒症患儿70例,随机分为强化组35例与普通组35例.两组患儿均予积极抗感染治疗、液体复苏、营养支持和处理原发病等基础治疗.强化组患儿予微泵胰岛素持续泵入治疗,维持血糖为4.4～6...     

链霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞钙敏感外向钾电流的影响

目的研究链霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜K+电流的影响,以进一步揭示氨基甙类抗生素耳毒性的离子机制。方法全细胞膜片钳制技术。结果记录到Ca2+敏感的外向K+电流［Ik(Ca)］;分别观察了0.1,1,10,100,1000μmol/L链霉素对Ca2+敏感的外向K+电流的影响。在指令电位+80mV时,链霉素的抑制率分别为0,(6.72±4.42)%,(15.54±5.43)%,(18.02±5.32)%,(30.86±11.21)%。结论链霉素以浓度依赖方式抑制Ca2+敏感的外向K+电流,这可能是其急性耳毒性机制之一。     

葡萄糖浓度波动对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的初探葡萄糖浓度波动对大鼠胰岛素瘤INS-1细胞胰岛素分泌功能影响机制。方法将INS-1细胞随机分为正常糖组（5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养）、持续高糖组（16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养）、波动组（用16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养2 h,再换5.5 mmol/L培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmol/L的培养液中）、N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）＋正常糖组、NAC＋持续高糖组、NAC＋波动组,后3组的培养基中均预先负载终浓度为1.0 mmol/L的NAC,余干预措施相同,均干预72 h。荧光素酶方法检测细胞内三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）含量,放射免疫分析法测定胰岛素分泌水平。结果 INS-1细胞ATP含量及胰岛素分泌水平在持续高糖组及波动组均较正常糖组显著下降,且波动组下降更明显,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。NAC＋波动组及NAC＋持续高糖组细胞ATP含量及胰岛素分泌水平分别较波动组及持续高糖组显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论持续性高糖及波动性高糖损伤INS-1细胞的胰岛素分泌可能与减少细胞ATP含量有关,且波动性高糖较前者更严重,氧化应激可能是波动性高糖及持续性高糖导致INS-1细胞ATP减少的机制。