胡桃醌对宫颈鳞癌Caski细胞增殖及凋亡作用的研究

目的探讨胡桃醌对宫颈鳞癌Caski细胞增殖及其促凋亡作用的影响,并对其促凋亡的机制进行初步探究。方法选取处于对数生长期的Caski细胞将其分为空白对照组和不同剂量(20、40、60、80和100 mol/L)胡桃醌组,共6组。采用MTT法观察胡桃醌对Caski细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50=42.4μmol/L),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;电镜观察40μmol/L胡桃醌对Caski细胞凋亡的形态学特征,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果 MTT试验显示,与对照组比较,除20μmol/L的胡桃醌外,其他各浓度组差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);电镜下可见凋亡细胞及凋亡小体,Western blot检测显示与正常对照组相比,40μmol/L胡桃醌Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显增加(P0.05)。结论胡桃醌可以抑制Caski的增殖,并诱导细胞凋亡。     

锰对HUVEC-304细胞生长及p53、p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响

目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系HUVEC-304细胞生长及p53、p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响。方法取指数生长期HUVEC-304细胞,以100、200、400、800μmol/L MnCl2,分别作用24、48、72 h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验检测细胞的存活力,筛选锰对细胞的毒性剂量。流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Western blot方法检测p53、p21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果100、200、400、800μmol/L MnCl2作用24、48、72 h均对HUVEC-304细胞有显著的抑制作用(P<0.05),且呈剂量-时间效应关系。流式细胞仪检测结果表明锰能诱导HUVEC-304细胞凋亡(P<0.01),Western blot结果显示,随锰浓度的增高,p53蛋白的表达下降(P<0.05);而p21WAF1/CIP1蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论锰可抑制HUVEC-304细胞的增殖,诱导其发生凋亡,p53蛋白的表达减少及p21WAF1/CIP1蛋白的表达增加是其发生凋亡的机制之一。     

镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响

目的研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用。方法体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用;吉姆萨染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术(FCM)检测凋亡率;FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。形态学观察显示早幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征。FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加。FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡。     

聚维酮碘稀释液对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的研究聚维酮碘稀释液对宫颈癌HeLa细胞生长的影响,为聚维酮碘稀释液在宫颈癌围术期的应用提供依据。方法用不同浓度的聚维酮碘稀释液处理对数生长期的HeLa细胞,同时设置生理盐水处理的细胞为对照组,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法观察聚维酮碘对宫颈癌细胞增殖作用的影响,采用Hoechst染色实验和流式细胞术检测聚维酮碘对宫颈癌细胞促凋亡作用,采用免疫印迹试验(WB)检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果 MTT实验结果显示,不同浓度的聚维酮碘对HeLa细胞均具有灭活作用,且呈浓度依赖性,0.001%、0.005%、0.01%、0.05%、0.1%、0.5%、1%和2%聚维酮碘溶液对HeLa细胞的抑制率分别为25.3%、30.8%、33.4%、60.3%、71.2%、85.3%、89.1%和91.2%。Hochest染色结果显示,聚维酮碘稀释液处理的HeLa细胞核染色质明显凝集、固缩,并有核碎裂出现凋亡小体,呈现致密浓染或碎块状致密浓染;流式细胞仪检测结果显示,随着聚维酮碘稀释液浓度增加,HeLa细胞凋亡率升高;WB试验结果显示,随着聚维酮碘稀释液浓度增加,凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3表达上调,剪切凋亡底物PARP水平相应增加。结论不同浓度聚维酮碘稀释液对宫颈癌HeLa细胞均具有抑制作用,可能机制是促进细胞凋亡。     

甘草提取物(Gc34)对MDA-MB-231乳腺癌细胞体外促凋亡作用研究

目的观察甘草提取物Gc34对MDA-MB-231细胞的体外促凋亡作用。方法 MTT法检测不同时间(24、48、72h),不同浓度(25、50、75、100μg/ml)Gc34对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;采用AO/EB染色、透射电镜实验判断凋亡;流式细胞仪检测其凋亡率。结果 MTT结果显示,随着Gc34作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降,Gc34对MDA-MB-231细胞体外增殖抑制呈明显的剂量-时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为65.38μg/ml;AO/EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡迹象,而阴性对照组中细胞形态完好;透射电镜结果显示,75μg/ml Gc34处理72h后细胞出现典型凋亡形态学改变;流式细胞仪分析结果显示,随Gc34剂量增加细胞凋亡率逐渐上升,呈明显的剂量依赖性。结论甘草提取物Gc34在体外能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡。     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

穿心莲内酯通过NF-κB途径抑制人宫颈癌细胞转移

目的 观察穿心莲内酯(Andrographolide,AD)对宫颈癌细胞迁移和侵袭的抑制情况,并探讨其分子机制.方法 体外培养宫颈癌细胞系HeLa细胞,经100 nmol/L佛波酯(phorbol-12myristate-13acetate,PMA)诱导24h后,加入不同浓度(0,1,5,10 μmol/L)的AD继续孵育24 h.噻唑蓝比色(MTT)法检测HeLa细胞的生长抑制情况;小室侵袭实验分析AD对PMA诱导HeLa细胞的迁移与侵袭情况.Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达以及核因子κB (Nuclear Factor kappa B,NF-κB) p65亚基的转位.结果 0～10 μmol/L AD对HeLa细胞的生长增殖无明显毒性作用.10 μmol/L AD也能使HeLa细胞迁移和侵袭率分别降低49％和52％.Westem blot结果显示AD能以剂量依赖性方式抑制PMA诱导的MMP-9表达,并能以剂量依赖性方式抑制NF-κB p65亚基核转位.结论 AD抑制NF-κB介导的MMP-9表达,从而影响宫颈癌细胞的迁移和侵袭.     

原花青素对宫颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响

目的 探讨原花青素对官颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响.方法 将按照不同终浓度原花青素(0,37.5μmol/L,75.0 μmol/L,150.0μmol/L,300.0μmo/L和600.0 μmol/L)处理宫颈癌HeLa细胞,分别纳入对照组(空白对照),37.5μmol/L PC组,75.0μmol/L PC组,150.0μmol/L PC组,300.0 μmol/L PC组和600.0 μmol/L PC组.继续培养24 h,收集细胞进行实验.采用RT-PCR检测Caspase-3 mRNA和Survivin mRNA表达变化.采取Western blot检测caspase-3和survivin蛋白表达的变化.采用比色法检测caspase-3相对活性.结果 随着原花青索浓度增加,Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平逐渐增加,而Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平逐渐减少;随着处理官颈癌HeLa细胞原花青素浓度升高,caspase-3相对活性逐渐增加,且差异有显著意义(P＜0.05),在原花青素为600.0/μmol/L 时,活性最大.结论 原花青素可剂量依赖性地增加Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平及caspase-3活性,并且可剂量依赖性减少Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平.     

硒甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞凋亡及Caspase蛋白表达影响的研究

目的研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase的影响,探讨其诱导细胞凋亡的作用。方法不同浓度的MSC(12.5、25、50、100、200μmol/L)RPMI-1640培养液作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h,MTT法检测MSC对细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测caspase3,8,9蛋白表达,SPSS16.0进行数据录入及统计学分析。结果 MSC对MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用,呈现时间-浓度依赖性(P0.01),其中200μmol/L浓度抑制作用最明显。24h及48h后,凋亡相关蛋白caspase9和caspase3的蛋白表达较空白对照组明显上调(P0.01),变化呈浓度依赖性;而caspase8蛋白表达无显著性变化(P0.05)。结论 MSC能抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,诱导其凋亡,呈现时间浓度依赖性;其发生可能与线粒体途径的细胞凋亡有关。     

4-HPR通过内质网应激途径诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探索芬维A胺（4-HPR）对宫颈癌细胞的抗肿瘤作用及其机制。方法应用MTT法检测4-HPR对宫颈癌细胞的生长抑制作用。Annexin V—FITC和碘化丙锭（PI）双染检测细胞凋亡。用对氧化敏感的荧光染料DCFH—DA检测细胞内活性氧。Western blot检测Bcl-2和CHOP蛋白表达。结果4-HPR以浓度依赖方式抑制宫颈癌HeLa细胞的生长,其IC50约为5μM。4-HPR以浓度依赖方式诱导HeLa细胞凋亡,同时伴随Bcl-2蛋白表达下调。4-HPR短暂处理能升高细胞内活性氧水平。4-HPR还激活内质网应激凋亡途径,表现以活性氧依赖方式升高CHOP蛋白表达。结论4-HPR对宫颈癌具有抗肿瘤作用,其机制为诱导产生细胞内活性氧和内质网应激通路的激活。     

内质网应激途径在天花粉蛋白诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激在天花粉蛋白诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中的作用,进一步分析天花粉蛋白诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,并用RT-PCR及实时荧光定量PCR分析天花粉蛋白对内质网应激标志分子GRP78和CALPAIN基因表达的影响。结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,对照组Hela细胞体外生长活跃,实验组分别经20、40、80μg/ml TCS处理24、48、72 h后,细胞生长均不同程度地受到抑制,呈时间-浓度依赖性。流式细胞直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰(sub-G1 peak),随着天花粉蛋白浓度的增加,内质网应激分子GRP78和CALPAIN的表达逐渐增强。结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,内质网应激作为细胞凋亡的重要途径参与了天花粉蛋白诱导的HeLa细胞凋亡。     

羟喜树碱对胃癌细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的 探讨羟喜树碱(HCPT)对胃癌细胞的致凋亡作用及其相关作用机制.方法 MTT细胞毒性试验检测HCPT对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制活性,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,荧光定量PCR和Western blot检测多梳基因-1(Bmi-1) mRNA和蛋白的变化.结果 HCPT对人胃癌SGC-7901细胞的药物半数抑制浓度(IC50)值为(4.87±0.35)μmol/L.0、5、10、20μmol/L的HCPT作用于人胃癌SGC-7901细胞48 h后,人胃癌SGC-7901细胞的凋亡率分别为(1.62±0.37)％、(21.45±4.54)％、(36.67±5.38)％和(54.26±7.14)％,Bmi-1 mRNA的2-△Ct值分别为0.614±0.022、0.445±0.018、0.376±0.012和0.215±0.010,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot检测显示HCPT可以剂量依赖性地下调Bmi-1蛋白的表达.结论 HCPT对人胃癌SGC-7901细胞具有显著的致凋亡作用,下调Bmi-1蛋白的表达可能是其主要的作用机制.     

喹乙醇致肾脏毒性的内质网应激相关凋亡途径研究

目的通过喹乙醇染毒人源肾小管上皮细胞(HK-2细胞)并检测活性氧(ROS)和凋亡相关蛋白的表达,探讨喹乙醇肾脏毒性产生过程及其可能的内质网应激相关凋亡机制。方法分别以不同浓度(1、2、3、4、5、6、7和8μmol/ml)喹乙醇染毒HK-2细胞24 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率以确定剂量-效应关系;Hoechst-33258荧光染色检测各组细胞凋亡形态,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞内活性氧含量;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关凋亡蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和凋亡促进因子CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达。结果根据MTT毒性实验结果 ,喹乙醇对HK-2细胞凋亡效应的适宜剂量确定为1、2、3和4μmol/ml。在喹乙醇不同剂量观察组中,喹乙醇染毒2μmol/ml以上剂量组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94和CHOP表达增加,喹乙醇各染毒剂量均可见活性氧水平增加(P<0.05);在喹乙醇不同染毒时间观察组中,喹乙醇染毒12和24 h组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94表达增加,喹乙醇染毒6、12和24 h组,活性氧水平、内质网凋亡相关蛋白CHOP表达增加(P<0.05)。结论喹乙醇可致肾小管上皮细胞发生细胞凋亡从而造成肾脏毒性,凋亡的发生可能与内质网应激相关凋亡途径相关。     

刺五加注射液诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡机理的研究

目的 探索刺五加注射液诱导宫颈癌细胞HeLa发生凋亡的效应和分子机理.方法 以不同浓度的刺五加注射液作用于体外培养的宫颈癌HeLa细胞24h,应用AO/EB双染的荧光显微镜观察法和Annexin V-FITC染色的流式细胞技术,检测不同浓度刺五加注射液诱导HeLa细胞凋亡的形态改变和凋亡率；应用免疫细胞化学方法,检测HeLa细胞凋亡蛋白酶caspase-3和caspase-8的表达水平.结果 刺五加可诱导HeLa细胞发生凋亡,并随着药物浓度升高细胞凋亡率增加；荧光显微镜观察发现,在刺五加的作用下,HeLa细胞数量明显减少,呈现特征性的凋亡形态；免疫细胞化学检测显示,HeLa细胞的caspase-3和caspase-8的表达水平随刺五加浓度的增加而升高,呈现剂量依赖性.结论 刺五加注射液诱导HeLa细胞凋亡的机理可能涉及了caspase依赖性的细胞凋亡信号途径.     

丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞中凋亡抑制蛋白XIAP的影响。方法：通过MTT实验、流式细胞术、细胞形态观察检测丹参酮ⅡA对细胞增殖和凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹的方法检测丹参酮ⅡA对细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、凋亡蛋白caspase-3以及PARP蛋白的影响。结果：MTT、细胞形态结果显示丹参酮ⅡA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用成时间和剂量依赖性,免疫印迹结果显示,0.5μg/mL丹参酮ⅡA作用肝癌细胞24 h后,caspase-3前体、凋亡抑制蛋白XIAP表达明显下调,活化的caspase-3、剪切形式的PARP含量显著增加。结论：丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP,活化caspase-3,促进PARP剪切诱导肝癌细胞凋亡。     

NaHS抑制宫颈癌细胞增殖的初步机制

目的:探讨NaHS对子宫颈癌细胞增殖的影响及其机制。方法:首先将子宫颈癌HeLa细胞分成对照组和不同剂量的NaHS处理组,并采用MTT法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡率。使用不同浓度的格列本脲预先处理HeLa细胞30 min,再用400μmol/L的NaHS处理24 h,探讨NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖的初步机制。结果:不同剂量的NaHS处理组能明显抑制HeLa细胞增殖而促进HeLa细胞凋亡;格列本脲预先处理可以部分阻断这种作用。结论:NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖可能与ATP敏感性钾通道有关。     

穿心莲内酯诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制

目的:明确穿心莲内酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,经穿心莲内酯处理后MTS法检测细胞的增殖情况,荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,蛋白印迹(Western blot)方法检测内质网应激相关蛋白CHOP、凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达变化.结果:穿心莲内酯可以剂量依赖地抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.05),引起细胞凋亡相关的形态学变化,诱导细胞凋亡(P＜0.05),引起CHOP蛋白的表达上调,活化Caspase-3和Caspase-9蛋白.结论:穿心莲内酯可以通过内质网应激途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡.     

丙泊酚下调ERK信号通路对乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响

目的研究丙泊酚对人乳腺癌细胞增殖转移能力的影响及潜在作用机制。方法 MTT检测不同时间(0、12、24、48、72 h)和不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)丙泊酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响;Transwell实验检测100μmol/L的丙泊酚对细胞迁移侵袭能力的影响;Western blot检测100μmol/L的丙泊酚分别作用0、12、24、48、72 h后细胞中MMP9、Cyclin D1、ERK蛋白表达变化。结果丙泊酚可呈时间-剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖;丙泊酚(100μmol/L)可显著抑制细胞迁移侵袭能力;丙泊酚可呈时间依赖性地抑制细胞中MMP9、Cyclin D1、p-ERK蛋白表达。结论丙泊酚能够抑制人乳腺癌细胞增殖转移能力,其机制可能与下调ERK信号有关。     

Fas及TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的表达

目的通过检测Fas蛋白及端粒结合蛋白TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡过程中的表达,探讨硒抗癌的机制。方法用含不同浓度亚硒酸钠(0.5、2.5、5.0、.8.0μmol/L)的培养液分别培养人胃癌细胞株SGC-7901细胞24、48、72、96h后,用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法和Western blot法检测TRF1、TRF2蛋白的表达。结果亚硒酸钠能提高Fas蛋白阳性表达细胞百分比(P<0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可以降低TRF1蛋白和提高TRF2蛋白的灰度值(P<0.05)。Western blot检测结果显示:亚硒酸钠可以提高TRF1和降低TRF2蛋白表达强度(P<0.05)。它们都具有剂量依赖性。结论亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制可能跟上调Fas蛋白和TRF1蛋白表达,下调了TRF2蛋白表达有关。     

Nimesulide诱导胰腺癌细胞凋亡机制的研究

目的：探讨选择性COX-2抑制剂Nimesulide对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能分子机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同浓度Nimesulide对PANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术（FACS）及DNA梯状电泳（DNA ladder）检测PANC-1细胞凋亡的改变;Western blotting法检测Nimesulide不同浓度作用下PANC-1细胞COX-2蛋白水平的改变,RT-PCR法检测COX-2 mRNA水平的变化。结果：MTT、流式细胞术及DNA ladder显示Nimesulide呈剂量依赖性地抑制PANC-1细胞的增殖,并诱导其凋亡;Western blotting和RT-PCR法显示随着药物浓度的增加,COX-2蛋白及mRNA表达降低。结论：Nimesulide可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡,从而抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长。