Survivin启动子调控的PUMA基因表达载体对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨构建带有肿瘤特异性Survivin启动子的PUMA基因表达载体pUC57-Survivin-PUMA对乳腺癌MCF-7细胞的肿瘤特异性促凋亡作用。方法:化学合成PUMA基因片段克隆至pUC57质粒,构建重组质粒pUC57-PUMA;克隆Survivin启动子序列,取代pUC57-PUMA质粒原有的CMV启动子,构建重组质粒pUC57-Survivin-PUMA,测序鉴定。实验设置pUC57-PUMA组、pUC57-Survivin-PUMA组、阴性对照组(pUC57group)和空白对照组(blank group)。将以上各组分别转染人乳腺癌MCF-7细胞及人正常乳腺Hs 578Bst细胞。转染后48h,western blot技术检测各组细胞中PUMA蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:重组质粒经测序鉴定证实符合设计要求,构建成功;MCF-7细胞中pUC57-PUMA组和pUC57-Survivin-PUMA组的PUMA蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.05),而人正常乳腺Hs 578Bst细胞中只有pUC57-PUMA组的PUMA蛋白表达较其他3组显著增高(P<0.05)。MCF-7细胞中pUC57-PUMA组和pUC57-Survivin-PUMA组的细胞凋亡率分别为29.02%和29.31%,均较对照组显著增高(P<0.05),而人正常乳腺Hs 578Bst细胞中仅pUC57-PUMA组的细胞凋亡率较其他3组显著增高(P<0.05)。结论:Survivin启动子调控的PUMA表达载体能显著增高乳腺癌MCF-7细胞中PUMA的表达,进而促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡,而对正常乳腺Hs 578Bst细胞的凋亡不产生影响。     

基于Notch通路探讨高糖诱导下乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨高糖对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其机制,为寻找有效生物靶标、实现乳腺癌的精准治疗提供一定理论基础。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,分为正常对照(Ctrl)组、高糖(HG)组、Notch通路抑制剂FLI06+HG组和FLI06组,采用CKK-8法、平板细胞克隆形成实验检测细胞增殖情况,PI法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测Notch通路相关基因Notch1、Jagged1、Hes1mRNA表达情况,蛋白免疫印迹(WB)技术检测细胞中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,高糖组MCF-7细胞增殖速度显著增高,平板克隆形成率显著增加,G0/G1期细胞比例显著减少,早期、晚期凋亡率均显著减少,Notch、Jagged1、Hes1mRNA及蛋白表达水平均显著上调,差异均有统计学意义(P0. 05);与高糖组比较,高糖+FLI06组MCF-7细胞增殖速度显著降低,平板克隆形成率显著减少,G0/G1期细胞比例显著增加,早期、晚期凋亡率均显著增高,Notch、Jagged1、Hes1mRNA及蛋白表达水平均显著下调,差异均有统计学意义(P0. 05)。结论高糖可提高人乳腺癌细胞的生长能力,降低其凋亡,可能通过激活Notch信号通路实现。     

miR-150基于PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞生物学特性的研究

目的探讨miR-150在乳腺癌组织中的表达,明确miR-150通过PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-150在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达,将miR-150 inhibitors和阴性对照转染至人乳腺癌细胞系MCF-7,以空脂质体作为对照,RT-PCR检测转染结果,转染后培养48 h,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,蛋白免疫印迹法检测Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达。结果乳腺癌组织中miR-150的表达量显著高于癌旁组织(P0. 01);空白对照组和阴性对照组中miR-150的表达差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组中miR-150的表达明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组增殖率差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞增殖率明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量均明显高于对照组(P0. 01); PI3K、p-AKT蛋白表达在空白对照组和阴性对照组间比较差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组PI3K、pAKT蛋白表达显著低于对照组(P0. 01)。AKT蛋白在3组间比较差异无统计学意义(P0. 05)。在乳腺癌细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002,作用48 h,细胞增殖和凋亡结果与miR-150-SiRNA组一致。结论 miR-150在乳腺癌中高表达,干扰miR-150的表达能够显著抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,并通过上调Cleaved caspase来促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

RNA干扰NGAL基因表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响机制研究

目的分析RNA干扰中性粒细胞相关载脂蛋白(NGAL)基因的表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法利用蛋白质印迹(Western Blot)方法检测乳腺癌组织及人乳腺癌MCF-7、T47D和MDA-MB-231细胞株中NGAL的蛋白表达;小干扰RNA(siRNA)-NC及NGAL-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,检测转染48 h后各组细胞中NGAL的蛋白表达情况;利用细胞计数试剂盒(CCK8)方法检测细胞的增殖情况;利用流式细胞仪检测细胞的凋亡;利用Western Blot方法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、磷脂酰肌醇-3(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)及磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达情况。结果乳腺癌组织中NGAL的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.05),NGAL于乳腺癌MCF-7细胞中的蛋白表达最高,选择其作为后续研究;siRNA-NC组NGAL、Cleaved Caspase-3、PI3K及p-AKT蛋白表达和细胞存活率及凋亡率与相应的对照组比较差异无统计学意义(P0.05),而NGAL-siRNA组NGAL、PI3K和p-AKT蛋白表达及细胞存活率均显著低于相应的对照组(P0.05),NGAL-siRNA组的细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著高于相应的对照组(P0.05)。结论 NGAL基因在乳腺癌组织及细胞中高表达,抑制NGAL基因的表达会显著降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

Parkin蛋白抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解和增殖迁移

目的 评估Parkin蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞有氧糖酵解和生长增殖的影响。方法 首先采用Western blot检测Parkin蛋白在人乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达。随后构建高表达Parkin的乳腺癌MDA-MB-231细胞株为实验组,以转染空载体的MDA-MB-231细胞为对照组,分别采用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测两组细胞葡萄糖摄取量,乳酸和ATP生成量,并通过Western blot检测糖酵解相关蛋白GLUT1、PKM2和LDHA表达水平;运用细胞增殖实验、平板克隆及细胞划痕实验评估细胞的增殖和迁移能力;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的表达水平。结果 与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞Parkin蛋白表达水平显著下降（P<0.01）。高表达Parkin可使乳腺癌MDA-MB-231细胞的葡萄糖摄取和乳酸生成下降,ATP水平上升（P<0.05）,其增殖和迁移能力下降（P<0.01）;与对照组相比,Parkin组细胞糖酵解相关蛋...     

miR-26b调控MCF-7细胞MCL-1蛋白的表达并诱导凋亡

目的探讨microRNA-26b(miR-26b)的作用靶点及其对MCF-7细胞的抑制作用。方法通过荧光定量PCR方法及Western blot方法检测正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDAMB-435的miR-26b及MCL-1的表达水平。MTT法检测miR-26b转染对MCF-7细胞活力的影响,Annexin V/PI染色法检测miR-26b转染对MCF-7细胞凋亡的影响。通过生物信息学分析预测miR-26b的靶基因,并将miR-26b转染入MCF-7细胞,检测miR-26b对MCL-1表达水平的影响。结果相比于MCF-10A细胞,乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-435的miR-26b表达水平均显著下降,同时MCL-1表达水平均显著上升,提示miR-26在乳腺癌中其肿瘤抑制作用可能调节细胞MCL-1的表达。进一步研究发现MCL-1基因的3'-UTR区存在miR-26b的假定结合位点,且在乳腺癌细胞中转染miR-26b后,MCL-1的表达下降。转染miR-26b可抑制MCF-7细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论 miR-26b下调MCF-7细胞MCL-1蛋白的表达并诱导其发生凋亡。     

肝星状细胞中Notch1的表达及其意义

目的研究Notch通路中Notch1在大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的表达及其意义。方法细胞免疫组化检测细胞内Notch1的表达并采用MTT、real-time PCR及Western blot等多种技术检测HSC-T6细胞在Notch1沉默后增殖、凋亡和细胞外基质的变化;并利用细胞免疫荧光染色检测α-SMA的表达。结果 Notch1蛋白表达于HSC-T6细胞的胞质并随着HSC活化而增加。与正常组相比,TGF-β1组的细胞表现出Notch通路的激活,即Notch1及其下游分子Hes1的mRNA和蛋白表达量均表达上调;随着Notch1的沉默,MTT结果提示Notch1沉默组的细胞增殖率明显下降,但Western blot结果提示凋亡相关蛋白Caspase3表达量却未改变;同时细胞免疫荧光结果显示α-SMA表达下调且伴有Ⅰ型胶原及Notch下游分子Hes1表达下调,而E-cadherin表达量则明显上调。结论沉默Notch1可抑制TGF-β诱导的肝星状细胞活化,提示Notch1可促进肝纤维化进程。     

Notch1基因沉默对滋养细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch1基因沉默后对滋养细胞增殖与凋亡生物学功能的影响。方法:构建Notch1蛋白基因干扰质粒,体外培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞进行转染。应用实时荧光PCR计数检测转染后Notch1 mRNA相对表达水平,CCK-8检测细胞转染后活性情况,Western blotting检测Bcl-2凋亡蛋白家族表达情况。结果:同未转染组相比,空白质粒转染组与基因沉默组mRNA相对表达水平分别为0.97±0.03、0.31±0.10,基因沉默组mRNA表达与其它两组差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1基因沉默组同空白质粒转染组相比细胞活性明显下降(P<0.05),同时Notch1基因沉默组抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白质粒转染组明显降低(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P<0.05)。结论:Notch1基因可通过调节Bcl-2凋亡蛋白家族参与滋养细胞增殖与凋亡过程,是胎盘形成发展过程中的正向调节因子。     

TPX2基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测乳腺癌组织及癌旁组织中TPX2基因的表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA1和TPX2-siRNA2转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blot检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA转染细胞48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达。结果 TPX2在乳腺癌组织的蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.01);TPX2-siRNA1组和TPX2-siRNA2组细胞中TPX2蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),TPX2-siRNA2组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;siRNA-NC组的细胞存活率、细胞凋亡率及Cleaved caspase3、p-p38蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),TPX2-siRNA组细胞存活率及p-p38蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),p38蛋白表达在三个组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TPX2基因在乳腺癌组织中高表达,抑制TPX2的表达可降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与p38MAPK信号通路有关。     

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-363通过靶向于MCL-1增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性

目的探究microRNA-363(miR-363)是否能增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性及机制。方法利用生物信息学、定量PCR及Western blot法,验证miR-363能否在体外调节乳腺癌细胞系MDA-MB-231 MCL-1的表达水平;MTT法检测miR-363联合顺铂对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤活性;构建MCL-1真核表达载体,MTT法检测MCL-1表达载体转染对miR-363联合顺铂治疗乳腺癌疗效的影响。结果乳腺癌细胞系MDA-MB-231的miR-363表达水平显著低于正常乳腺细胞系MCF-10A,差异有统计学意义(P0.05)。miR-363转染后,乳腺癌细胞系MDA-MB-231 MCL-1的mRNA表达水平及蛋白表达水平相比于NCO转染组均下降,差异有统计学意义(P0.05)。MTT结果表明,miR-363联合顺铂组对MDA-MB-231细胞的杀伤活性显著高于miR-363组和顺铂组,差异有统计学意义(P0.05)。miR-363联合顺铂在MCL-1表达载体转染后对MDA-MB-231细胞的杀伤活性显著低于未转染MCL-1表达载体的miR-363联合顺铂组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-363通过靶向与MCL-1增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性。     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

上调HCCR-2基因表达对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的利用细胞转基因技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有HCCR-2真核表达质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及Western blot鉴定;Western blot检测阳性细胞克隆Bcl-2、Bax蛋白表达改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果成功建立高表达HCCR-2的阳性MCF-7细胞克隆(M-23),并证实其Bcl-2蛋白表达与细胞增殖活性均显著增高,而Bax蛋白表达与细胞凋亡显著降低。结论上调MCF-7细胞HCCR-2基因后,细胞增殖活性增加,细胞凋亡降低,其作用机制与Bcl-2表达增加而Bax表达降低。     

PTEN抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖及其机制的探讨

目的:观察PTEN对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖和迁移的影响,进一步探讨其可能机制.方法:选用人乳腺癌细胞MDA-MB-231并体外培养,质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MDA-MB-231/PTEN作为实验组,空载体细胞株MDA-MB-231/pcDNA3.1作为阴性对照组,以未转染细胞为正常对照组,RT-PCR检测各组细胞PTEN的表达水平,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖能力,Transwell小室迁移实验检测各组MDA-MB-231细胞的迁移能力.结果:PTEN在MDA-MB-231/PTEN细胞中表达稳定,且其表达量明显高于阴性对照组和正常对照组,而阴性对照组和正常对照组PTEN表达量差异无统计学意义.转染PTEN基因可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力.结论:PTEN与乳腺癌的增殖和迁移有关,对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力起到抑制作用.     

miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,用miR-125b模拟物和miR-125b抑制物转染乳腺癌MCF-7细胞,检测miR-125b表达,乳腺癌MCF-7细胞活力、凋亡情况、细胞周期及Cyclin A1、Cyclin D1、Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果 miR-125b模拟物和miR-125b抑制物转染乳腺癌MCF-7细胞1、2、3、4 d后,乳腺癌MCF-7细胞活性均显著降低(均P0. 05)。miR-125b模拟物组乳腺癌MCF-7细胞凋亡率均显著低于miR-125b抑制物组(均P0. 05); miR-125b抑制物组细胞周期G1期显著长于miR-125b模拟物组(P0. 05)。两组Cyclin A1、Cyclin D1、Bax及Bcl-2表达水平比较,差异均有统计学意义(均P0. 05)。结论 miR-125b抑制剂可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

沉默葡萄糖调节蛋白94对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的机制

目的探讨沉默葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的作用机制,旨在对GRP94在乳腺癌发生发展中的作用及机制提供数据参考。方法将人乳腺癌细胞株MCF7细胞随机分为空白对照组、空白转染组和实验组,其中空白转染组和实验组分别转染siRNA和siRNA-GRP94,采用CCK8实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测GRP94 mRNA表达,Western blot检测GRP94、c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达。结果实验组GRP94 mRNA和蛋白表达量分别为(0.106±0.031)和(0.211±0.068),明显低于空白对照组的(0.984±0.122)和(0.943±0.117)及空白转染组的(0.980±0.120)和(0.946±0.121),差异有统计学意义(P0.05)。实验组培养24 h、48 h MCF7细胞增殖A值分别为(0.426±0.120)和(0.547±0.114),明显低于空白对照组的(0.864±0.121)和(1.064±0.117)及空白转染组的(0.870±0.119)和(1.060±0.110),差异有统计学意义(P0.05)。实验组MCF7细胞凋亡率为(8.92±1.01)%,明显高于空白对照组的(3.16±0.64)%和空白转染组的(3.20±0.59)%,差异有统计学意义(P0.05)。实验组MCF7细胞c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白相对表达量分别为(0.813±0.104)、(0.214±0.067)和(0.511±0.121),明显低于空白对照组和空白转染组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 GRP94可抑制乳腺癌MCF7细胞增殖、诱导凋亡,可能与其下调c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达有关。     

psiRNA—hHDEK的构建及其对CasKi细胞生物学特性影响的研究

目的观察DEK基因沉默对宫颈癌CaSki细胞增殖、细胞周期及凋亡、衰老的影响,为探索防治人类宫颈癌的新方法提供依据。方法根据siRNA设计原则和Genebank中DEK核苷酸序列,利用软件设计出针对DEK位点的特异性小干扰RNA,克隆至siRNA真核表达载体psiRNA-hHlneo中,应用脂质体介导重组质粒转染宫颈癌CaSki细胞株,用RT-PCR和Western blot检测转染后DEKmRNA和蛋白表达,转染后48hMTr法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期改变、SA-β-半乳糖苷酶细胞化学染色鉴定细胞衰老。结果转染质粒psiRNA—hHDEK组DEKm RNA及蛋白的表达明显减少（0．28±0．02）,DEK基因沉默后CaSki细胞增殖能力下降,细胞周期阻抑,细胞凋亡率增加,衰老细胞增多。结论成功构建表达DEK siRNA的真核表达质粒psiRNA-hHDEK,并能够有效沉默CaSki细胞中DEK基因表达。DEK基因沉默后能够诱导CaSki细胞凋亡和细胞衰老。DEK基因在宫颈癌发生和演变中发挥重要作用,其既是衰老抑制基因,又是凋亡抑制基因。     

稳定转染抑癌基因PTEN对乳腺癌细胞BT549生长增殖的影响

目的 研究稳定转染抑癌基因PTEN对人乳腺癌细胞BT549生长增殖的影响.方法 以脂质体转染法体外转染pcDNA3-PTEN质粒至乳腺癌细胞BT549,G418筛选阳性克隆细胞并扩增培养,鉴定转染成功后检测细胞生长曲线.结果 (1)稳定转染PTEN的PTEN-BT549细胞有PTEN蛋白表达,而转染空载质粒pcDNA3的pcDNA3-BT549细胞和未转染质粒的BT549细胞没有PTEN蛋白表达.(2)稳定表达PTEN的PTEN-BT549细胞增殖能力较BT549、pcDNA3-BT549细胞明显降低(P＜0.05).结论 抑癌基因PTEN能明显抑制人乳腺癌细胞BT549生长增殖.     

洛伐他汀对转染乳腺癌细胞增殖功能的影响

目的探讨胆固醇合成抑制洛伐他汀(Lovastatin，LOV)对人乳腺癌易感基因1(Breast cancer1，BRCA1)转染的密西根癌症基金会-7乳腺癌细胞(Michigan Cancer Foundation-7 breast cancer cell，MCF-7)增殖功能的影响。方法应用基因转染技术获得BRCA1高表达的MCF-7乳腺癌细胞(MCF-7^BRCA1)，经8μmol／L LOV处理未转染组(MCF-7)与转染组(MCF-7^BRCA1)细胞1～3d后，通过生长曲线、二甲基偶氮唑蓝(MTT)染色和透射电镜等方法．观察LOV对MCF-7及MCF-7^BRCA1乳腺癌细胞增殖功能的影响。结果LOV处理乳腺癌细胞均能抑制未转染组和转染组细胞的增殖，以MCF-7^BRCA1细胞的变化更为显著。透射电镜结果显示，LOV能明显诱导MCF-7^BRCA1转染组细胞向正常细胞的分化。结论乳腺癌细胞BRCA1基因的高表达可增强LOV对细胞的增殖抑制作用．