miR-150基于PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞生物学特性的研究

目的探讨miR-150在乳腺癌组织中的表达,明确miR-150通过PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-150在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达,将miR-150 inhibitors和阴性对照转染至人乳腺癌细胞系MCF-7,以空脂质体作为对照,RT-PCR检测转染结果,转染后培养48 h,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,蛋白免疫印迹法检测Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达。结果乳腺癌组织中miR-150的表达量显著高于癌旁组织(P0. 01);空白对照组和阴性对照组中miR-150的表达差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组中miR-150的表达明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组增殖率差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞增殖率明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量均明显高于对照组(P0. 01); PI3K、p-AKT蛋白表达在空白对照组和阴性对照组间比较差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组PI3K、pAKT蛋白表达显著低于对照组(P0. 01)。AKT蛋白在3组间比较差异无统计学意义(P0. 05)。在乳腺癌细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002,作用48 h,细胞增殖和凋亡结果与miR-150-SiRNA组一致。结论 miR-150在乳腺癌中高表达,干扰miR-150的表达能够显著抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,并通过上调Cleaved caspase来促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

下调ZEB2对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的分析下调E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用ZEB2 siRNA慢病毒和siRNA对照慢病毒感染乳腺癌细胞,应用real-time PCR和Western blot法测定ZEB2水平,应用CCK8法检测细胞增殖活性,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,应用Western blot检测细胞中糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、钙激活中性蛋白酶2(Calpain 2)及剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果对照组和siRNA对照组ZEB2 mRNA和蛋白水平,24、48、72及96 h的OD值比较差异均无统计学意义(均P0.05)。ZEB2 siRNA组ZEB2 mRNA和蛋白水平,24、48、72及96 h的OD值均显著低于对照组(均P0.05)。对照组和siRNA对照组乳腺癌细胞凋亡率,乳腺癌细胞中GRP78、CHOP、Calpain 2及Cleaved Caspase-3蛋白水平比较差异均无统计学意义(均P0.05),ZEB2 siRNA组乳腺癌细胞凋亡率,乳腺癌细胞中GRP78、CHOP、Calpain 2及Cleaved Caspase-3蛋白水平均显著高于对照组(均P0.05)。结论下调ZEB2可以通过内质网途径诱导乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞的增殖活性,为ZEB2治疗乳腺癌的临床应用提供了依据,为研究ZEB2在乳腺癌发生中的作用机制奠定了基础。     

小干扰RNA技术对沉默乳腺细胞中DEK基因的表达及乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA技术对沉默乳腺细胞中DEK基因的表达及乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响,为乳腺癌的分子诊断及靶向治疗奠定理论基础。方法以人类正常乳腺癌细胞系Hs578Bst作为对照,蛋白质印迹(Western bloting)检测MCF-7、T47D、MDA-MB-231、BT549乳腺癌细胞中DEK蛋白表达;MCF-7细胞分为空白组、阴性对照组、DEK转染组,转染48 h后,Western bloting检测DEK、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 DEK基因在MCF-7、T47D、MDA-MB-231、BT549细胞中的相对表达量均显著高于Hs578Bst,差异有统计学意义(均P0.01);RNA干扰可显著降低乳腺癌细胞DEK的蛋白相对表达量;阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Notch1、Hes1蛋白相对表达量与空白组差异无统计学意义(均P0.05),DEK转染组细胞存活率及Notch1、Hes1蛋白相对表达量显著低于空白组,细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著高于空白组,差异有统计学意义(均P0.01)。结论抑制乳腺癌细胞DEK基因表达可显著降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调Notch1信号通路有关。     

TPX2基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测乳腺癌组织及癌旁组织中TPX2基因的表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA1和TPX2-siRNA2转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blot检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA转染细胞48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达。结果 TPX2在乳腺癌组织的蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.01);TPX2-siRNA1组和TPX2-siRNA2组细胞中TPX2蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),TPX2-siRNA2组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;siRNA-NC组的细胞存活率、细胞凋亡率及Cleaved caspase3、p-p38蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),TPX2-siRNA组细胞存活率及p-p38蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),p38蛋白表达在三个组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TPX2基因在乳腺癌组织中高表达,抑制TPX2的表达可降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与p38MAPK信号通路有关。     

lncRNA PlncRNA-1对胃癌SGC-7901细胞生物学行为及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PlncRNA-1对胃癌SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PlncRNA-1在SGC-7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞中的表达水平,将体外培养的SGC-7901细胞分为未转染组(正常培养)、阴性组(转染阴性对照siRNA)和干扰组(转染PlncRNA-1-siRNA),qPCR检测SGC-7901细胞中PlncRNA-1表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测SGC-7901细胞增殖活力,流式细胞仪检测SGC-7901细胞周期和凋亡情况,免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化(p)-AKT、细胞周期素D1(CyclinD1)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达情况。结果与GES-1细胞比较,SGC-7901细胞中PlncRNA-1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P 0.05);与未转染组比较,干扰组细胞中PlncRNA-1表达水平、细胞增殖活力和细胞在S期、G2/M期所占百分比以及PI3K、p-AKT、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低,而细胞凋亡率和细胞在G0/G1期所占百分比明显升高,差异有统计学意义(P 0.05);但阴性组和未转染组之间各指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PlncRNA-1在胃癌SGC-7901细胞中表达升高,干扰其表达可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路的活化有关。     

BAG-1基因在Luminal型乳腺癌中的表达及其对他莫昔芬敏感性的影响

目的探讨Bcl-2结合抗凋亡基因(BAG-1)与Luminal型乳腺癌细胞株MCF-7对他莫昔芬(TMA)敏感性的关系以及可能的作用机制。方法 (1)采用免疫组织化学法检测Luminal型乳腺癌组织和癌旁组织中BAG-1的表达;(2)采用药物浓度梯度间歇诱导法体外建立MCF-7耐药细胞,采用MTT法测定TMA对MCF-7和MCF-7/TMAR细胞增殖活性的影响;(3)采用RNA干扰技术靶向沉默MCF-7/TAMR细胞BAG-1的表达;(4)采用RT-PCR法和Western blot法检测MCF-7细胞和MCF-7/TAMR细胞BAG-1、ER、p-AKT和p-ERK1/2 mRNA和蛋白的表达水平。结果 (1)乳腺癌组织中BAG-1的高表达率明显高于癌旁组织(P0. 05);(2)MCF-7/TAMR细胞中BAG-1、p-AKT和p-ERK1/2相对表达量明显高于MCF-7细胞(P0. 05);两组细胞ER表达情况差异无统计学意义(P0. 05); TMA对MCF-7/TAMR细胞增殖活性的抑制作用明显低于MCF-7细胞(P0. 05);(3)经siRNA BAG-1转染后,MCF-7/TAMR细胞增殖活性明显低于阴性对照组细胞(P0. 05); p-AKT和p-ERKmRNA和蛋白表达水平下调,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05)。结论下调BAG-1可降低AKT和ERK磷酸化水平,从而提高Luminal型乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。     

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

川芎嗪对乳腺癌MCF-7细胞AKT、Bcl-2蛋白活性表达的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响并探讨其可能的作用机制。方法:对乳腺癌MCF-7细胞分别施以0,0.5,1.0,2.0 mg/ml浓度TMP处理24、48、72 h,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,Western Blot法检测AKT、Bcl-2蛋白的表达情况。所有数据均采用SPSS18.0,P0.05差异具有显著性,P0.01差异极具显著性。结果:与对照组相比,TMP对MCF-7细胞的增殖有抑制作用,且呈现一定的浓度、时间相关性(P0.01)。同时TMP可下调Bcl-2及AKT蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:TMP可能是通过调节Bcl-2、AKT蛋白的表达达到抑制MCF-7细胞增殖及诱导凋亡的效果。     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

HMGB1对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率蛋白1(HMGB1)对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制。 方法 心肌细胞H9C2分为正常组、H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组。其中正常组细胞为正常培养的H9C2细胞,H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组细胞分别进行缺氧复氧处理,HMGB1 siRNA组、siRNA-NC组细胞在缺氧处理前48 h分别转染HMGB1小干扰RNA(HMGB1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control)。RT-PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。 结果 与正常组相比,H/R组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平显著升高(P<0.05),而SOD、p-STAT3水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NC组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、LDH、MDA及SOD水平、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平与H/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与H/R组相比,HMGB1 siRNA组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平明显降低,而SOD、p-STAT3水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 HMGB1表达下调可能通过降低缺氧复氧对心肌细胞的氧化损伤而抑制心肌细胞凋亡。     

NF-κBp65对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的 探讨核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达影响。 方法 将肺泡上皮细胞分为4组,依次为对照组、感染组、干扰组、阴性对照组(NC组),其中感染组、干扰组和NC组用肺炎链球菌处理细胞,干扰组和NC组分别为转染NF-κB p65小干扰RNA(siRNA NF-κB p65)和阴性对照序列(siRNA control)后的细胞,对照组不做处理。ELISA法检测细胞培养液上清中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-6(IL-6)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞中NF-κB p65水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。 结果 感染组和NC组NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显高于对照组,而IL-10水平明显低于对照组(P<0.01)。干扰组细胞中NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于感染组(P<0.01),而IL-10水平明显高于感染组(P<0.01)。 结论 NF-κB p65能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达,作用机制可能与Cleaved Caspase-3、Bax水平有关。     

PI3K/Akt信号通路在不同类型乳腺癌细胞系中的表达及机制

目的分析PI3K/Akt信号通路在不同类型乳腺癌细胞系中的表达及机制。方法通过MTT研究不同浓度的紫杉醇对不同类型的乳腺癌细胞系的不同抑制时间,采用蛋白印迹法检测PI3K/Akt的蛋白表达情况。结果在紫杉醇的作用下,随着剂量和时间的改变,灵敏度最高为MCF-7 (20190809),MDA-MB-453 (20190801)细胞的抑制效果最明显,抑制效果最差的为T47D (201900703)。Western Blot结果显示,MCF10A、MDA-MB-453的PI3K/Akt信号蛋白水平显著高于T47D和MCF-7,各蛋白的表达水平与β-actin比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论紫杉醇对不同类型的乳腺癌细胞具有良好的疗效,发挥作用的机制可能是通过介导PI3K/Akt信号通路中的PI3K和ILK蛋白。     

siRNA沉默Fas死亡结构域相关蛋白基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移行为的影响研究

目的探讨siRNA沉默Fas死亡结构域相关蛋白(DAXX)基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移行为的影响,为临床诊断提供参考依据。方法培养MCF-7细胞,观察组对细胞进行siRNA-DAXX转染,空白组不对细胞进行任何处理,对照组对细胞进行siRNA-NC转染,(1)使用RT-PCR和Western Blot法分别检测三组DAXX mRNA和蛋白表达水平,(2)使用MTT法检测三组细胞增殖能力,(3)使用Transwell小室实验检测三组细胞迁移能力。结果 (1)观察组DAXX表达水平与空白组及对照组对比差异有统计学意义(P<0. 05),siRNA能够显著抑制DAXX基因表达和蛋白合成,(2)Western blot显示DAXX基因被沉默后,观察组细胞增殖率仅为空白组或对照组的62. 93%,(3)RT-PCR显示DAXX基因被沉默后,观察组细胞增殖率仅为空白组或对照组的77. 24%;(4)Transwell小室实验结果显示,与空白组及对照组相比,观察组细胞穿过小室的几率显著降低,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 siRNA沉默DAXX基因表达后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力和迁移能力显著减低,DAXX是一种肿瘤促进基因。     

miR-26b调控MCF-7细胞MCL-1蛋白的表达并诱导凋亡

目的探讨microRNA-26b(miR-26b)的作用靶点及其对MCF-7细胞的抑制作用。方法通过荧光定量PCR方法及Western blot方法检测正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDAMB-435的miR-26b及MCL-1的表达水平。MTT法检测miR-26b转染对MCF-7细胞活力的影响,Annexin V/PI染色法检测miR-26b转染对MCF-7细胞凋亡的影响。通过生物信息学分析预测miR-26b的靶基因,并将miR-26b转染入MCF-7细胞,检测miR-26b对MCL-1表达水平的影响。结果相比于MCF-10A细胞,乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-435的miR-26b表达水平均显著下降,同时MCL-1表达水平均显著上升,提示miR-26在乳腺癌中其肿瘤抑制作用可能调节细胞MCL-1的表达。进一步研究发现MCL-1基因的3'-UTR区存在miR-26b的假定结合位点,且在乳腺癌细胞中转染miR-26b后,MCL-1的表达下降。转染miR-26b可抑制MCF-7细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论 miR-26b下调MCF-7细胞MCL-1蛋白的表达并诱导其发生凋亡。     

miR-221在急性心肌梗死大鼠中表达及其作用

目的探讨miR-221在急性心肌梗死(AMI)大鼠中的表达及其作用。方法在45只SD清洁级雄性大鼠中随机抽取35只通过冠状动脉左前降支结扎大鼠建立AMI模型,将其中建模成功的30只大鼠随机分为AMI组、对照组及抑制组,每组各10只;另抽取未建模的10只大鼠设立假手术组,采用冠状动脉左前降支穿线不结扎。其中对照组用携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒空载体miR-221阴性对照以4×10~7病毒数量进行心肌组织局部注射转染,抑制组用携带miR-221 inhibitor慢病毒以4×10~7病毒数量进行心肌组织局部注射转染,AMI组和假手术组每天给予等量生理盐水,隔日1次连续2周;记录大鼠心脏功能。采用原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌凋亡指数(AI),RT-PCR法检测miR-221表达,Western blot法检测Bax、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达。结果与假手术组大鼠miR-221表达量(0.18±0.02)比较,AMI组(1.16±0.12)和对照组(1.18±0.12)大鼠的miR-221表达量均升高(均P0.01),抑制组大鼠miR-221表达量(0.30±0.03)均低于AMI组和对照组大鼠的miR-221表达量(均P0.01);与假手术组大鼠Bax(0.13±0.01)、Bcl-2(0.53±0.05)、PI3K(0.45±0.04)和p-AKT(0.87±0.09)蛋白表达量比较,AMI组和对照组大鼠的Bax蛋白表达量均上调(均P0.01),Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达量均下调(均P0.01);抑制组大鼠较AMI组和对照组大鼠Bax表达量均下调(P0.01),Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达量均上调(P0.01)。结论 miR-221在AMI大鼠心肌组织中高表达,下调miR-221表达可通过激活PI3K/AKT信号通路调控下游蛋白Bax及Bcl-2的表达抑制AMI大鼠心肌细胞凋亡。     

PDCD4参与异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的研究程序性细胞死亡4 (PDCD4)在异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。方法宫颈癌细胞Si Ha经异甘草素处理以后,MTT检测细胞增殖,计算半数抑制浓度,Western blot和qRT-PCR检测细胞中PDCD4蛋白和mRNA水平。在Si Ha细胞中转染PDCD4过表达载体和阴性对照载体,用Western blot和qRT-PCR检测细胞中PDCD4表达变化。用半数抑制浓度的异甘草素处理过表达PDCD4的Si Ha细胞,MTT检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3 (Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果异甘草素抑制宫颈癌细胞增殖,其半数抑制浓度为40μmol/L。40μmol/L异甘草素处理宫颈癌细胞,细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平升高。转染PDCD4过表达载体的宫颈癌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平升高。过表达PDCD4或者异甘草素处理均可以降低宫颈癌细胞增殖和克隆能力,促进宫颈癌细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,并且异甘草素处理过表达PDCD4宫颈癌细胞对细胞增殖、克隆能力的抑制作用更强,细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高。结论 PDCD4参与异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡过程,PDCD4高表达能够协同异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡。     

miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及机制

目的探讨miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及具体机制。方法采用miR-155 NC和miR-155 inhibitor转染Hep2细胞,realtime-PCR法检测转染效果,细胞计数盒-8(CCK-8)法检测不同转染时间(12、24、36、48、60、72 h)细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot检测Hep2细胞中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、cyclin D1、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/叉形头转录因子(Foxo3a)信号通路相关蛋白表达量。结果 miR-155 inhibitor组中miR-155表达量(0.34±0.03)明显低于miR-155 NC组(1.25±0.10),且转染24、36、48、60、72 h后,miR-155 inhibitor组Hep2细胞活力明显低于miR-155 NC组;与miR-155 NC组比较,miR-155 inhibitor组Hep2细胞凋亡率明显提高,细胞周期阻滞于G1期,cyclin A1、cyclin D1、PI3K、p-AKT表达下调,Foxo3a表达上调,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论 miR-155表达下调可降低Hep2细胞活力、增加细胞凋亡率,其机制可能与miR-155调控PI3K/AKT/Foxo3a信号通路有关。     

左卡尼汀对过氧化氢诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的影响

目的研究左卡尼汀(L-Ca)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人脐静脉内皮(EA.hy926)细胞氧化应激损伤的影响,为探讨L-Ca的心血管保护作用提供理论和实验依据。方法采用750μmol/L H_2O_2作用12 h建立血管内皮细胞氧化应激损伤模型。实验共分为5组:对照组、模型组(H_2O_2组)及L-Ca低、中、高剂量(0.5、1、2 mmol/L)干预组。采用CCK-8法检测细胞活力,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况,运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡水平,qRT-PCR法分析Caspase-9、Caspase-3 mRNA转录水平;用Western blot法对Bcl-2、Bax及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平进行分析。采用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析和LSD-t检验。结果与对照组相比,模型组细胞活力较低,上清液LDH含量、细胞凋亡率较高,Caspase-9、Caspase-3 mRNA及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平较高,Bcl-2/Bax蛋白比值较低;与模型组相比,L-Ca低、中、高剂量组细胞活力均明显升高,上清液LDH含量、细胞凋亡率均显著降低,Caspase-9、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显下降,Bcl-2/Bax比值均升高,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平均降低,且均有剂量依赖关系,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 L-Ca能够减轻H_2O_2对血管内皮细胞损伤,提高细胞活力,减少细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-9和Caspase-3级联反应,上调Bcl-2/Bax蛋白比值有关。     

异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的探讨异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法分别以30、60和120μg/ml异丙酚处理Eca109细胞,采用平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测细胞的克隆形成能力、侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达情况。结果 30μg/ml异丙酚对Eca109细胞的克隆形成能力无显著影响,但60和120μg/ml异丙酚能够显著抑制Eca109细胞克隆形成能力;异丙酚能够呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的侵袭和迁移,且抑制MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论异丙酚能够抑制食管癌Eca109细胞的侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。