免疫胶体金法检测MPB64抗原在结核病实验室诊断中的价值

目的通过与传统的结核病实验室诊断方法（直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养、PCR）的比较,评价免疫胶体金法检测结核杆菌MPB64抗原在结核病快速诊断中的应用价值。方法收集158例确诊为结核病患者的临床标本,分别用直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养基培养、PCR、免疫胶体金法检测米氏7H9培养产物中的MPB64抗原检测结核分支杆菌,并对结果进行比较分析。结果涂片阳性率为10.76%,改良罗氏培养阳性率为20.89%,PCR检测阳性率为56.33%,免疫胶体金法检测阳性率为41.14%。结论免疫胶体金法检测米氏7H9液体培养产物中的MPB64抗原可以作为一种较为敏感、快速简便的检测结核分支杆菌感染的方法,有助于结核病临床快速诊断。     

结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64表达纯化

目的表达并纯化结核分枝杆菌重组蛋白pET32a-MPB64。方法将构建好的表达载体pET32a-MPB64测序后,转化到大肠杆菌BL21（DE3）内。经IPTG诱导,在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。结果质粒pET32a-MPB64经测序,结果与Geneback中的结核分枝杆菌标准菌株H37RV核苷酸序列基本一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以可溶性的形式表达,其分子质量约为24 kDa,蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%;该蛋白经MagExtractor-His-tag-磁珠纯化试剂盒纯化后浓度达2.49mg·mL^-1;Western-blot结果显示融合蛋白可与抗His-Tag标签的单克隆抗体结合。结论成功得到高纯度的重组目的蛋白pET32a-MPB64,为进一步制备其单克隆抗体奠定了基础。     

MPB64抗原检测对非结核分枝杆菌快速鉴别的意义

目的探讨结核分枝杆菌MPB64抗原在快速鉴别非结核分枝杆菌的诊断中的应用价值。方法对89例痰结核分枝杆菌培养阳性标本,进行培养液结核分枝杆菌MPB64抗原免疫胶体金法检测,并对结果进行比较分析。结果25例确诊非结核性标本,抗原检测均阴性;64例确诊结核性标本中,62例抗原检测阳性,阳性率为96.9%。用MPB64抗原胶体金法检测非结核分枝杆菌,敏感性为96.9%,特异性为100%,诊断一致率为97.8%。结论分枝杆菌MPB64抗原胶体金法可快速鉴别结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌,具有高度的特异性和敏感性,是早期诊断与鉴别诊断非结核分枝杆菌感染的一种有价值的检测方法。     

结核病实验室快速诊断新技术

我国由于结核病发病率较高，患病人数多，结核病快速诊断技术更显重要。结核病实验室快速诊断方法涉及细菌学，免疫学，物化和分子生物学领域一系列新技术。主要用于分支杆菌快速培养和鉴定，分支杆菌快速分型，结核病免疫学快速诊断和分支杆菌快速药敏试验。     

GeneXpert Mtb/RIF检测技术在临床耐药结核病诊断中的应用价值

目的 评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术在临床耐药结核病诊断中的应用效果。方法 收取240例结核病住院患者的晨痰样本分别进行痰涂片镜检、MGIT960液体培养及GeneXpert Mtb/RIF快速检测,对于MGIT960液体培养与GeneXpert同为阳性的样本进一步进行MGIT960药敏检测。以MGIT960液体法作为金标准,评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术的敏感性和特异性以及Kappa值。结果 224例有效样本中涂片镜检阳性检测率为26.8%,MGIT960液体培养阳性检出率为45.1%,GeneXpert检测阳性检出率为46.9%;以MGIT960液体培养作为金标准,涂片镜检法的敏感度为59.4%,特异度为75.0%,GeneXpert检测法敏感度为91.1%,特异度为92.4%;以MGIT960药敏检测为金标准,GeneXpert检测法与之相比两种方法的一致性为96.7%,敏感度为92.3%,特异度为98.5%。结论 GeneXpert Mtb/RIF检测技术是一个敏感、特异和快速有效方法,有利于结核病的早期诊断。     

检测结核抗体在结核病诊断中的临床应用价值

目的:研究结核抗体在结核病诊断中的临床应用价值。方法:选择结核病患者共432例,选取健康成人无结核病史者对照标本218例。采用胶体金法诊断试剂盒进行血清结核抗体检测,同时用痰涂片法进行抗酸染色对比分析。结果:432例检验者痰涂片后抗酸染色阳性为154例,阳性率为35.6%;血清结核抗体阳性为335例,阳性率为77.5%。胶体金法的阳性检出率明显高于痰涂片法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胶体金法满足了快速、敏感、特异、简便的试验要求,较痰涂片法有明显优势,值得临床推广应用。     

结核病实验室诊断技术新进展

结核病被认定为全球卫生紧急事件已有10余年.自20世纪80年代以来,该疾病有呈上升的趋势.如何快速诊断和治疗对防止结核病的传播意义重大.寻找一种特异、敏感、早期、快速、简便和预测预后的结核病细菌学检查方法是大家共同期盼的.结核分支杆菌(MTB)感染的实验室诊断主要包括细菌学检测、免疫学诊断、分子生物学诊断三方面的技术.现对结核病的三类诊断技术概况及诊断技术研究进展作一综述.     

结核病实验室诊断技术

结核病被列为我国重大传染病之一,早期发现和早期诊断结核病患者是减少传播机会、控制结核病疫情的关键环节。因此结核病实验室诊断技术,在控制和消灭结核病上起着决定性的作用。痰涂片镜检、痰结核菌培养法具有简便、快速、价廉等特点,是结核病早期诊断的金标准。但是对于涂阴、培阴、无痰及L型结核菌的肺结核病人则难以诊断。PPD试验、血清结核抗体检查对结核病的诊断有一定参考价值,但无法区分BCG接种、既往感染和正在感染,而且其灵敏性和特异性不理想。随着分子生物学技术的发展,基因诊断技术因具有较高的敏感性、特异性而日益显示其优越性。目前用于结核分枝杆菌诊断的方法有聚合酶链反应(PCR)、DNA探针技术、基因芯片技术。PCR技术具有快速、特异、灵敏和可无培养依赖性特征。DNA探针技术用于结核病的诊断,及进行菌种鉴定与分类。DNA序列测定不但为结核病的诊断和鉴别诊断提供准确病原学依据而且作为鉴定结核分枝杆菌耐药基因突变的重要手段。基因芯片法(GCT)具有高效率、微型化、自动化、成本低、防污染等特点。总之将这些诊断方法不断进行改进。在临床工作中将各种诊断技术有机的结合,综合分析,合理的为临床服务;从而做出正确的诊断,以使结核病能够得到及时发现、早期治疗,结核病疫情得以控制。     

聚合酶链反应在结核病诊断中的价值

目的：为早期诊断结核病寻找一种简便、快速、灵敏的实验室方法。方法：用PCR、结核菌培养、涂片法对临床可疑结核病患者进行检验。结果：在16份痰标本和其它标本中,PCR、结核菌培养、涂片的阳性检出率分别为56．9％、20．7％和7．7％。结论：PCR与其它两种方法比较,差异均非常显著,揭示PCR对结核病的确诊有重要辅助意义。     

结核病实验室诊断技术研究进展

结核病是一种常见的慢性传染性疾病,由结核分枝杆菌感染引起,其中,以肺结核最为常见。目前,结核病位列全球十大死因之一,是单一传染病中的头号杀手,在全球范围内造成严重的公共卫生问题。2017年,全球新发结核病约1 000万例,约157万人死于结核病。中国是结核病高负担国家之一,年发病人数仅次于印度,位居世界第2位。据估计,全球约有1/4的人口感染了结核分枝杆菌,面临进展为结核病的风险。结核病患者是结核病主要的传染源,因此,在早期对结核病患者做出准确的诊断并提供治疗,对于结核病的防治工作具有重大意义。本文从细菌学、免疫学和分子生物学三个方面对结核病实验室诊断技术的研究进展进行综述,介绍其基本原理及应用前景,旨在为结核病的临床诊断提供参考。     

检测结核抗体诊断结核病价值的研究

目的:研究结核抗体在活动性结核病诊断和监测病情变化的临床意义。方法:观察血清结核抗体在各类结核患者的敏感性和特异性,与脑脊液,胸腹水结核抗体的关系,与痰涂片及PPD皮试的一致性,以及与疾病转归的关系。结果:血清结核抗体诊断结核病的敏感性为82.6％,特异性为90.2％,脑脊液、胸腹水结核抗体阳性OD值>血清结核抗体阳性OD值对诊断结核性脑膜炎、结核性胸膜炎及腹膜炎具有定性定位价值,与痰涂片阳性和PPD皮试阳性的一致率分别为89.8％和75.2％,结核抗体水平与病情变化有一定相关性。结论:结核抗体可用来诊断活动性结核病及评估结核病的转归。     

结核病实验室诊断研究新进展

随着分析技术的不断进步以及对结核杆菌致病机制研究的深入,结核病的实验诊断在分子标志物、结核抗体、核酸检测、γ干扰素释放试验和诊断模型等方面取得了很大的进步,极大丰富了结核病实验室诊断手段。这些实验手段的应用,为结核病的诊断提供了较好的选择方案。尽管如此,这些新手段仍仅作为辅助手段,不能完全替代涂片与培养等传统手段。因此,仍然有必要继续开展相关研究,以推动结核病的实验室诊断水平。随着分析技术的不断进步和结核病分子机制的深入探讨,相信会有更好的标志物或诊断手段进入临床并得以应用。     

结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别价值探讨

目的探讨结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别的价值。方法采用结核分枝杆菌胶体金法诊断试剂和传统菌型鉴定实验方法,对131株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并进行比较。结果采用胶体金法快速鉴定试剂,23株非结核分枝杆菌临床分离株检测结果全部阴性,108株结核分枝杆菌临床分离株有107株阳性,该试剂快速鉴定结核分枝杆菌敏感度为99.1%,特异度为100%。胶体金法检出结核分枝杆菌所需时间平均为9.9 d,传统方法所需时间平均为28.2 d,二者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核分枝杆菌胶体金法快速诊断试剂盒鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌,方法简便、快速,是分枝杆菌菌型鉴别的有效方法。     

聚合酶链反应在结核病诊断中的临床价值探讨

目的：探讨聚合酶链反应对结核诊断的临床价值。方法：采用聚合酶链反应检测痰，纤维支气管镜抽吸物，胸水和血液标本中结核杆菌DNA。结果：聚合酶链反应检测法的敏感性为40．1％，特异性为92．9％，总的阳性预测值，阴性预测值和诊断效率分别为87．2％，60．78％和67％；不同标本敏感性有较大的差异。结论：聚合酶链反应不失为结核病快速诊断的方法，但其敏感性，特异性尚不能完全满足临床的需要，有待进一步完善。     

HIV/AIDS患者合并分枝杆菌感染的实验室诊断

[摘要] 目的 探讨Versa TREKTM快速培养与MPB64检测在HIV/AIDS患者合并分枝杆菌感染实验室诊断中的应用价值。方法 支气管肺泡灌洗液样本直接涂片染色找抗酸杆菌,并接种分枝杆菌专用培养基于Versa TREKTM细菌培养仪进行监测培养。系统报告阳性后取培养液涂片做抗酸染色,抗酸染色阳性时检测培养液中的结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64;并采用气相色谱法进行分枝杆菌菌种鉴定。结果 97例支气管肺泡灌洗液样本直接涂片染色仅检出5例抗酸杆菌;仪器培养得到30例分枝杆菌,其中21例MPB64阳性样本20例经菌种鉴定证实为结核分枝杆菌、1例为结核分枝杆菌与鸟－胞内分枝杆菌重叠感染;9例MPB64阴性样本均被证实为非结核分枝杆菌。结论 应用Versa TREKTM细菌培养仪进行分枝杆菌快速培养、检测培养液中MPB64以确认是否有结核分枝杆菌生长,可及时准确的对疑似合并分枝杆菌感染的HIV/AIDS患者做出实验室诊断,对临床诊疗具有很好的现实意义。