雌激素对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的研究雌激素对缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞(As)损伤和凋亡的影响。方法原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,并建立缺氧、缺糖诱导的细胞损伤模型;用不同终浓度的雌激素(1~100nmol/L)预处理星形胶质细胞,以吉姆萨染色观察细胞形态学变化,以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原实验检测细胞活力,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,以流式细胞术检测凋亡细胞。结果缺氧、缺糖处理后可引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,细胞凋亡率增高。雌激素预处理后,与缺氧、缺糖损伤组相比,细胞活力增高、LDH漏出率降低,同时细胞凋亡率也降低(p<0.05),最大效应剂量为20nmol/L。结论雌激素能够减轻缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞损伤、降低其凋亡率,并呈一定的剂量依赖关系。     

雌激素对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的 研究雌激素对缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞(As)损伤和凋亡的影响.方法 原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,并建立缺氧、缺糖诱导的细胞损伤模型;用不同终浓度的雌激素(1～100nmnol/L)预处理星形胶质细胞,以吉姆萨染色观察细胞形态学变化,以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原实验检测细胞活力,以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,以流式细胞术检测凋亡细胞.结果 缺氧、缺糖处理后可引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,细胞凋亡率增高.雌激素预处理后,与缺氧、缺糖损伤组相比,细胞活力增高、LDH漏出率降低,同时细胞凋亡率也降低(p＜0.05),最大效应剂量为20nmol/L.结论 雌激素能够减轻缺氧、缺糖诱导的鼠脑星形胶质细胞损伤、降低其凋亡率,并呈一定的剂量依赖关系.     

亚低温对缺氧缺糖星形胶质细胞活力的影响

目的 探讨亚低温对缺氧星形胶质细胞的保护作用.方法 原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,设亚低温组(34℃)和常温组(37℃),同时于缺氧缺糖条件下培养,在相应时间点观察细胞形态,并用台盼兰排染法检测细胞存活率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力.结果 亚低温组各项指标均优于常温组(P＜0.01).结论 亚低温对缺氧/缺糖星形胶质细胞具有保护作用.     

缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

OBJECTIVE: To investigate the effect of hypoxia on the viability of rat brain astrocytes in vitro and determine the optimal duration of hypoxic treatment for studying the biological behavior of the in vitro cultured cells in response to hypoxia. METHODS: Rat astrocytes were cultured and identified by glial fibrillary acidic protein (GFAP) immunofluorescent staining. After incubation with 5%; CO(2)+95%; N(2) for different time to induce hypoxia, the cells were harvested and observed microscopically for morphological changes and counting of the dead cells. The culture media of the cells were also collected and pO(2), concentrations of glucose and lactate as well as lactate dehydrogenase (LDH) activity were analyzed. RESULTS: As the hypoxia prolonged, the astrocytes appeared swollen and floating in the medium with some becoming necrotic. Compared with the cells in the control group, the changes in the number of necrotic cells, concentrations of glucose and lactate, and LDH activity in the cells of the hypoxic group were significantly different after 10 h of hypoxia (P<0.05). However, the flat and polygonal morphology of the astrocytes almost remained unchanged after 8 h of hypoxia in spite of significant changes in the concentrations of glucose and lactate and LDH activity. CONCLUSION: Hypoxia induced injury and necrosis of rat brain astrocytes in vitro, and 8 h of hypoxia can be the optimal time point for studying the biological behaviors of the cells in response to hypoxia.     

缺氧条件下谷氨酸对鼠脑星形胶质细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察谷氨酸在缺氧条件下对星形胶质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法原代培养SD大鼠星形胶质细胞,传代后分为4组:①对照组;②谷氨酸组(1μmol/L);③缺氧组;④缺氧+谷氨酸组。缺氧条件为:(94%N2,5%CO2和1%O2),每组包括6个时相点:0、2、4、6、8、12h(以缺氧后开始计时),②和④组加入1μmol/L的谷氨酸。在不同时间点提取细胞总RNA,用Real time FQ-PCR法检测VEGF mRNA表达变化;ELISA法检测培养上清液VEGF蛋白表达变化。结果对照组和谷氨酸组(1μmol/L)各实验时相点星形胶质细胞VEGF mRNA和蛋白表达无明显变化。而缺氧组和缺氧+谷氨酸组VEGF mRNA和蛋白表达却随实验时相逐步增高,分别在6和8h达最高,之后渐下降。缺氧+谷氨酸组VEGF mRNA和蛋白表达上调较单纯缺氧组更为显著。结论谷氨酸(1μmol/L)可在缺氧条件下增强星形胶质细胞VEGF mRNA和蛋白表达上调,这可能与缺氧状态下星形胶质细胞表面谷氨酸受体的表达变化有关。     

缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

目的 研究缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞活性及损伤的影响,确定星形胶质细胞体外培养的最佳缺氧时间点以对其进行深入研究。方法 体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定。通以5%CO₂+95%N₂混合气体造成缺氧,分别观察缺氧不同时间段星形胶质细胞光镜下的形态变化,死亡细胞数目,培养上清液的氧分压、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 星形胶质细胞在缺氧条件下,随着时间延长,细胞逐渐出现肿胀、漂浮和坏死。与对照组相比,缺氧10h组死亡细胞数、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化均有明显差异(P<0.05),且与缺氧时间呈正相关,其中缺氧组细胞培养上清液中葡萄糖浓度比对照组明显降低,而乳酸盐浓度和LDH活性则明显升高,而缺氧8h组虽然葡萄糖和乳酸盐的浓度及LDH活性的变化明显,但星形胶质细胞保存着多突触的形态。结论 缺氧可致体外培养的鼠脑星形胶质细胞损伤甚至死亡,缺氧8h可作为以体外培养的鼠脑星形胶质细胞为研究对象的缺氧生物学研究的最佳时间点。     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

目的分析星形胶质细胞(Ast)与腺苷对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用,揭示腺苷对神经系统的保护机制。方法体外培养SD大鼠大脑皮层Ast和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后给予神经元缺氧/复氧处理,收集复氧18 h后的Ast条件培养液(ACM)和腺苷预处理的Ast条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+腺苷(ACM+含100μmol·L-1腺苷的DMEM液)以15的浓度培养缺氧损伤神经元;光镜观察神经元形态学变化,二甲氧唑黄比色法测定细胞活性。结果 ACMa组、ACM+腺苷组及ACM组的神经元缺氧损伤后的细胞形态较模型组得到明显改善,细胞活性较模型组也得到显著提高。不同条件培养液对缺氧/复氧后神经元活性的作用:ACMa>ACM+腺苷>ACM。结论 Ast条件培养液对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护、修复作用,腺苷可通过Ast间接地保护和修复受损神经元。     

异氟醚对缺氧复氧损伤星形胶质细胞的影响

目的 研究异氟醚对缺氧复氧造成的星形胶质细胞损伤的影响.方法 培养新生鼠脑皮质星形胶质细胞,缺氧8 h后复氧8 h,然后用异氟醚(0.28、1.4、2.8 mmo/L)处理细胞,用MTT法检测细胞活性和免疫组化方法研究胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化.结果 ①1.4 mmol/L异氟醚处理的细胞活性比缺氧复氧组高,有显著性差异(P＜0.05);②免疫组化结果显示异氟醚处理组GFAP表达量明显高于缺氧复氧组,组间比较差异有显著性(P＜0.05).结论 适当浓度的异氟醚对缺氧复氧造成的星形胶质细胞损伤有一定的缓解作用.     

水通道蛋白4在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中的作用

目的 探讨水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在缺氧缺糖培养后水肿星形胶质细胞中的表达变化与作用.方法 星形胶质细胞分为正常组和缺氧缺糖组,缺氧缺糖组细胞经过5 h缺氧缺糖后恢复正常条件培养至0.5、2、8、24 h和48 h 5个时间点时,用光镜观察细胞形态变化,RT-PCR及免疫荧光法测定AQP4的mRNA及蛋白的表达变化.结果 ①在缺氧缺糖后0.5 h,细胞肿胀逐渐形成并继续加重,2 h肿胀达到高峰,至8 h和24 h时肿胀逐渐消退,48 h细胞基本恢复正常形态.②RT-PCR和免疫荧光检测:在缺氧缺糖后0.5 h,AQP4 mRNA和蛋白的表达均较正常组明显下降(P<0.05),2 h回升,8 h明显超过正常水平,达最高值(P<0.05),24 h有所下降,但仍明显高于正常水平(P<0.05),至48 h时mRNA和蛋白的表达均基本恢复正常水平.结论 缺氧缺糖后星形胶质细胞水肿形成及消退期AQP4的不同表达变化可能都是细胞的一种自身保护机制,从而尽量维持细胞的正常形态和功能.     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对移植颗粒脂肪成活的影响

目的探讨表皮生长因子(EGF)和肝细胞生长因子(HGF)对移植颗粒脂肪的血运重建及脂肪成活的影响,为提高移植颗粒脂肪的成活率提供理论和实验依据。方法在颗粒脂肪移植的动物模型中,分别应用EGF、HGF、EGF+HGF。微刻度试管测量各组脂肪的存活体积,HE染色后观察移植体组织细胞形态学改变,免疫组化法检测各组移植组织的微血管密度值。结果同一时间段,各实验组组织中微血管密度值明显高于对照组。术后14d起,各实验组组织中脂肪存活体积明显高于对照组。结论 EGF和HGF均能促进移植颗粒脂肪的血管生成,并显著提高移植颗粒脂肪的成活率。HGF和EGF具有协同作用。     

肝细胞生长因子在纤维肉瘤细胞血行转移中的作用

目的：评价肝细胞生长因子（HGF）在纤维肉瘤细胞血行转移中的作用。方法：利用体 外肿瘤细胞血管内游走及血管外游走模型，定量地评价纤维肉瘤细胞(HT1080)的血行转移情 况。结果：HT1080能穿过基底膜和血管内皮细胞游走至血管内，并可通过内皮细胞间缝隙游 走至血管外基质；HT1080经HGF预处理后，血管内和血管外游走数量均明显高于对照组(P<0.01)。结论：HGF能够增强纤维肉瘤细胞的运动侵袭能力、加速血行转移。     

脑神经胶质瘤病人脑脊液TSGF及HGF对新生血管生成相关因子的影响

目的:探讨恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)及肝细胞生长因子(HGF)对脑神经胶质瘤进展的影响及与新生血管生成相关因子的关系.方法:选择87例胶质细胞瘤病人,WHO胶质细胞瘤分级(Ⅰ级29例,Ⅱ级26例,Ⅲ级21例,Ⅳ级11例,检测各级病人脑脊液TSGF及HGF、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮生长因子(EGF)及促血管生成素1(Ang-1).结果:Ⅱ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01).Ⅱ级病人VEGF较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及Ang-1均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01),bFGF及Ang-1均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01).TSGF与VEGF、bFGF及Ang-1均呈正相关关系(P<0.05～P<0.01),HGF与VEGF亦呈正相关关系(P<0.01).结论:脑脊液内TSGF及HGF水平升高是导致神经胶质瘤分级进展的重要因素,其过程与新生血管生成相关因子水平升高密切相关.     

肝细胞生长因子（HGF）在胎儿各脏器的分布

本实验应用免疫组织化学法，研究人肝细胞生长因子在６－７个月胎儿各脏器的分布情况，结果显示了ＨＧＦ大量分布于胎儿的肝脏，其中以较小的、核深染的肝细胞为主。在肾脏，ＨＧＦ呈中等量分布。在胃、十十指肠、胰腺、肾上腺等ＨＧＦ只有少量的分布。     

Effect of FK506 on Expression of Hepatocyte Growth Factor in Murine Spinal Cord Following Peripheral Nerve Injury

This study is to investigate the effect of FK506 on expression of hepatocyte growth factor （HGF） in rats＇ spinal cord following peripheral nerve injury and to elucidate the mechanisms for neuroprotective property of FK506. Fifty male rats were randomly divided into normal group, injury group and treatment group. Models of peripheral nerve injury were established by bilateral transection of sciatic nerve 0.5 cm distal to piriform muscle. Then the treatment group received subcutaneous injection of FK506 （1 mg/kg） at the back of neck, while the injury group was given 0.9% saline. The L4-6 spinal cords were harvested at various time points after the surgery. Western blotting and immunofluorescent staining were used to detect the level and position of HGF in spinal cord. Immunofluorescent staining showed that HGF-positive neurons were located in anterior horn, intermediate zone and posterior horn of gray matter in normal spinal cord. Western blotting revealed that there was no significant difference in the expressions of HGF between the injury group and the normal group, while the expression of HGF was significantly higher in the treatment group than in the injury group 7 and 14 days after surgery. It is suggested that peripheral nerve injury does not result in up-regulation of the expression of HGF in spinal cord, while FK506 may induce high expression of endogenous HGF after injury thereby protecting neurons and promoting axonal outgrowth.     

肝细胞生长因子对高糖及结缔组织生长因子培养的肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对高糖及结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾小管上皮细胞（HKC）纤维化的影响.方法：体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子（rhHGF）,以RT-PCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原（COL4A1）、纤连蛋白（FN）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等的基因表达.结果：高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组（P＜0.01）.高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低（P＜0.01）,其中高糖＋rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变（P＞0.05）.结论：HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.     

肝细胞生长因子与糖尿病肾病关系的探讨

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)与糖尿病肾病发生和发展的关系.方法 SD大鼠用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,在出现糖尿病后的第24周,采血测定血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)及HGF水平.处死前留取24h尿液测定尿总蛋白.采血后用0.9%生理盐水灌洗肾脏后,剪碎并置于2.5%戊二醛固定液中固定后,在电镜下观察肾脏病变.结果 与正常对照组相比较,糖尿病组血糖和HbA1c水平显著升高,糖尿病肾病组血尿素氮、血糖、HbA1c及24h尿蛋白水平均明显升高,血清HGF水平下降(P＜0.05).糖尿病肾病组HGF与血尿素氮呈负相关,与HbA1c正相关(P＜0.05).结论 HGF与糖尿病肾病的发生、发展有关.     

肝细胞生长因子对兔心肌梗死后心肌细胞凋亡及心脏功能的影响

目的　观察外源性肝细胞生长因子对心肌梗死后心肌细胞凋亡及心功能的影响。方法　 3 6只新西兰兔随机分为 3组 :假手术组、对照组和干预组。结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型。干预组静脉注射给予肝细胞生长因子 2mg·kg- 1 ·( 12h) - 1 ,48h后测心脏功能 ,取出心脏 ,梗死区 缺血区质量比为梗死范围。TUNEL法染色检测细胞凋亡 ,心肌凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的千分比为心肌细胞凋亡指数。免疫组化法检测抗凋亡蛋白bcl 2的表达。结果　①干预组心肌梗死范围显著小于对照组 (P <0 .0 1) ,左室功能得以改善 ;②干预组心肌细胞凋亡指数显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;③干预组梗死心肌周围bcl 2表达显著多于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且与细胞凋亡指数呈负相关 (r =-0 .691;P<0 .0 5 )。结论　外源性肝细胞生长因子能显著减少急性心肌梗死后的梗死范围、抑制心肌细胞凋亡及改善左室功能 ,其作用途径可能与促进抗凋亡蛋白bcl 2表达有关