临床分离多重耐药肠杆菌科细菌Ⅰ类整合子检测及耐药性研究

[摘要] 目的　检测临床分离多重耐药肠杆菌科细菌Ⅰ类整合子分布,分析I类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法　标准纸片扩散法(Kirby-Bauer test)检测耐药性,PCR方法扩增I类整合酶基因,经电泳后检测扩增产物。\结果　在分离出的408株细菌中,共有246株检出I类整合子,总体检出率为60.3%(246/408),其中大肠埃希菌检出率为62.4%(126/202),肺炎克雷伯菌检出率为56.8%(71/125),阴沟肠肝菌检出率为60.5%(49/81)。整合子阳性株对多种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性株,亚胺培南对所有菌株敏感。结论　I类整合子对细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用,应加强临床细菌基因水平的耐药监测,采取有效措施防止耐药性的传播。     

Ⅰ类整合子在革兰阴性菌中分布的初步探讨

目的 调查Ⅰ类整合子在革兰阴性菌中分布及其与细菌耐药性的关系.方法 用整合子特异引物采用聚合酶链反应（PCR）技术检测革兰阴性菌株中整合子基因.结果 49株临床分离的革兰阴性菌,Ⅰ类整合子阳性者有35株,占71%（35/49）,且35株菌均表现对β-内酰胺类、喹诺酮类等的多重耐药.结论 Ⅰ类整合子在革兰阴性菌中分布较广,并参与细菌耐药性的形成,常引起多重耐药.     

多重耐药革兰阴性杆菌I类整合子结构与功能分析

目的探索I类整合子在多重耐药的革兰阴性杆菌中的功能作用,并对其基因结构进行研究,为阐明革兰阴性杆菌的耐药机制和抑制耐药性的产生提供理论依据。方法选择温岭市妇幼保健院2009年7月～2011年10月的多重耐药革兰阴性杆菌80株,其中铜绿假单胞菌40株,鲍曼不动杆菌40株,使用K—β纸片法和双纸片协同实验对细菌的耐药性和超广谱β-内酰胺酶（ELSBs）的产生情况进行考察。对耐药且产ELSBs的细菌进行筛选．使用聚合酶链式反应（PCR）扩增实验、电泳法、整合酶Souhen杂交实验对耐药细菌体内的I类整合子存在情况、整合子基因结构、基因位置进行考察。结果药敏结果显示,40株铜绿假单胞菌中多重耐药且产ELSBs的菌株为27株,40株鲍曼不动杆菌中多重耐药且产ELSBs的菌株为28株。对多耐药且产ELSBs的菌株通过PCR扩增实验进行的I类整合子存在情况的考察结果显示,40株鲍曼不动杆菌和40株铜绿假单胞菌中I类整合子的阳性率分别为57．5％和55．O％。I类整合子的保守区和可变区PCR扩增与测序分析结果显示,保守区内含有qaeEal-F和sul1-B这两种特征性基因片段,可变区内以长度为0．15、1．00、2．00、2．30kb的基因片段出现频率最高．0．15kb含有保守区内基因结果,其它基因片段依次为aadA、aaeA4、catB8这3种基因盒。结论I类整合子与革兰氏阴性杆菌耐药性的产生有着密切的关系,qaeEal-F和sull一B为I类整合子基因保守区的特征性片段。两者同时出现则可确证该细菌体内含有I类整合子。I类整合子基因可变区内含有aadA、aaeA4、catB8三种出现频率最高的基因盒且长短为0．15kb的基因片段含有保守区的基因结构,这3种基因盒和保守区基因片段的存在是导致细菌间耐药性平行转移的重要因素。     

整合子系统在非发酵菌属细菌中分布特点

[目的]了解整合子系统在非发酵菌属细菌中的分布特点,继而探讨其与非发酵菌产生多重耐药之间的关系。[方法]选取2010年7月—2011年6月由大连医科大学附属第一医院住院及门诊患者各种标本中分离的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱霍尔德氏菌、木糖产碱杆菌木糖亚种,提取全基因组DNA,通过PCR方法检测其整合子的携带情况,并对扩增结果进行分析。[结果]在452株铜绿假单胞菌中,I类整合子阳性检出率为41.8%;在612株鲍曼不动杆菌中I类整合子阳性检出率为66.7%,II类整合子阳性检出率为2.3%;在61株嗜麦芽窄食单胞菌中I类整合子阳性检出率为13.1%;在36株洋葱霍尔德氏菌中,I类整合子阳性检出率为8.3%;21株木糖产碱杆菌木糖亚种中未检出整合子;在以上各菌株中均没有检测到III类整合子。整合子阳性菌株和整合子阴性菌株的抗菌药物敏感性试验结果对比发现,整合子阳性的菌株对多种抗生素耐药率均高于整合子阴性菌株。[结论]整合子系统在非发酵菌属的某些菌种中检出率很高,它的存在是非发酵菌产生多重耐药的一个重要因素。     

医学教育早期临床实践现状与趋势

目的:探讨2012年江苏盛泽医院感染患者中分离的革兰阴性杆菌的分布及耐药性,为治疗感染患者提供依据?方法:收集2012年609例住院患者感染革兰阴性杆菌的相关资料进行分析,细菌鉴定采用API系统,细菌药物敏感性测定采用纸片扩散法?WHONET5.6软件进行数据分析?结果:2012年共检出革兰阴性杆菌609株,排名在前5位的革兰阴性杆菌主要有:肺炎克雷伯菌(24.0%)?大肠埃希菌(21.7%)?铜绿假单胞菌(19.2%)?鲍曼不动杆菌(10.0%)和阴沟肠杆菌(6.4%);耐药性分析结果显示,肠杆菌科细菌中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产超产谱?茁-内酰胺酶(ESBLs)的检出率为51.4%?58.3%;产ESBLs菌株对常用抗菌药物耐药率高于非产ESBLs菌株;肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物高度敏感(95.8%~100.0%),其次敏感性相对较高的抗菌药物有阿米卡星(66.7%~98.6%)?米诺环素(83.3%~88.0%)?头孢哌酮/舒巴坦(83.3%~95.8%)?哌拉西林/他唑巴坦(83.3%~92.8%);非发酵菌属中铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为69.2%?52.5%,且对大多数抗菌药物敏感率< 50%?非发酵菌对抗菌药物的耐药率显著高于肠杆菌科细菌?结论:本院检出的革兰阴性杆菌耐药情况较为严重,进行细菌耐药性监测有助于了解病原菌耐药性的变迁;同时临床应合理使用抗菌药物,减缓新耐药株的产生?     

整合子在鲍曼不动杆菌中的分布与结构分析

目的 了解我院临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子携带情况,以及整合子与鲍曼不动杆菌的耐药相关性分析.方法 用VITEK2 Compact全自动微生物分析系统及纸片扩散法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用22种抗生素的敏感性.PCR扩增整合酶基因检测鲍曼不动杆菌携带整合子情况,同时对整合子可变区进行扩增及测序以其了解整合子耐药基因盒携带耐药基因的情况.结果 鲍曼不动杆菌呈多重耐药性.鲍曼不动杆菌对CPZ/SB耐药率为1.2%,对替加环素(15.4%)、左旋氧氟沙星(34.4%)、亚胺培南(54.3%)、比阿培南(49.4%)、阿米卡星(59%),对其他抗生素均在71%以上.104株中有73株菌株含Ⅰ类整合子(阳性率为70.2%),未有Ⅱ、Ⅲ类整合子扩增阳性菌株,且Ⅰ类整合子阳性株的耐药性均高于阴性株.Ⅰ类整合子基因盒序列分析表明我院鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子携带aacA4、catB8和aadA1 3种耐药基因.结论 我院分离的鲍曼不动杆菌主要携带Ⅰ类整合子,且与多重耐药性密切相关.     

新生儿产超广谱β-内酰胺酶细菌感染的检测与耐药分析

目的:了解我院新生儿科感染性疾病革兰阴性杆菌中产超广谱β-内酰胺酶的情况及其耐药性。方法:对458株临床分离株根据美国国家临床实验室标准(NCCLS)在1999年推荐的ESBLs纸片扩散法初筛和表型确认试验进行检测,纸片扩散法进行常规药敏试验,标准菌株进行质控,按照NCCLS标准判断结果。结果:分离出458株革兰阴性杆菌,其中大肠埃希菌145株,肺炎克雷伯菌43株,阴沟肠杆菌9株,其他261株。ESBLs阳性菌株48株,总检出率10.48%。ESBLs阳性菌株分别为大肠埃希菌23株,检出率15.86%(23/145);肺炎克雷伯菌13株,检出率30.23%(13/43);阴沟场杆菌2株,检出率22.22%(2/9)。产ESBLs细菌对14种抗菌药物的药敏结果显示,细菌对喹诺酮类和氨基糖甙类部分耐药。抑制剂复合抗生素中,以头孢哌酮+舒巴坦的效果最好,其他药物的耐药率均较高。第四代头孢菌素也存在一定的耐药性。所有产ESBLs菌对亚胺培南均敏感。结论:新生儿科ESBLs发生率较高,耐药率高且多重耐药,需加强ESBLs检测,指导临床合理使用抗生素。     

2012年江苏盛泽医院检出主要革兰阴性杆菌的分布及耐药性监测的回顾分析

[摘要] 目的：探讨2012年江苏盛泽医院感染患者中分离的革兰阴性杆菌的分布及耐药性,为治疗感染患者提供依据。方法：收集2012年609例住院患者感染革兰阴性杆菌的相关资料进行分析,细菌鉴定采用API系统,细菌药物敏感性测定采用纸片扩散法。WHONET5.6软件进行数据分析。结果：2012年共检出革兰阴性杆菌609株,排名在前五位的革兰阴性杆菌主要有：肺炎克雷伯菌（24.0%）、大肠埃希菌（21.7%）、铜绿假单胞菌（19.2%）、鲍曼不动杆菌（10.0%）和阴沟肠杆菌（6.4%）;耐药性分析结果显示,肠杆菌科细菌中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs的检出率为51.4%、58.3%;产ESBLs菌株对常用抗菌药物耐药率高于非产ESBLs菌株;肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物高度敏感（95.8%-100.0%）,其次敏感性相对较高的抗菌药物有阿米卡星（66.7%-98.6%）、米诺环素（83.3%-88.0%）、头孢哌酮/舒巴坦（83.3%-95.8%）、哌拉西林/他唑巴坦（83.3%-92.8%）;非发酵菌属中铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为69.2%、52.5%,且对大多数抗菌药物敏感率<50%。非发酵菌对抗菌药物的耐药率显著高于肠杆菌科细菌。结论：我院检出的革兰阴性杆菌耐药情况较为严重,进行细菌耐药性监测有助于了解病原菌耐药性的变迁;同时临床应合理使用抗菌药物,减缓新耐药株的产生。     

深圳市某医院革兰阴性杆菌抗生素敏感性监测

目的分析本地区某医院2013-2016年革兰阴性杆菌的分布及其对抗生素的耐药性,指导临床合理应用抗生素。方法收集2013-2016年本院临床革兰阴杆菌4 091株,采用VITEK-Compact2对临床分离菌株鉴定与药敏试验(MIC法)),按CLSI 2012年标准判断结果,WHONET 5.6软件统计分析。结果临床分离革兰阴性杆菌4 091株,标本来源主要是呼吸道分泌物、尿液和伤口拭子;其中肠杆菌科细菌比率较高(占62.04%),铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌分别占19.09%和11.05%。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌产ESBLs依次为52.5%、46.7%和20.2%;肠杆菌对哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南耐药率低(3%),且明显低于头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南和头孢曲松,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率高(分别为20.8%和62.7%)。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌出现少量泛耐药菌株,碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌和碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星敏感率高。结论革兰阴性杆菌耐药性增加对临床感染治疗构成严重威胁,多重耐药菌和耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌增多,应加强本地区耐药性监测和控制措施,按照药敏结果合理使用抗生素。     

鲍曼不动杆菌耐药性与Ⅰ类整合子关系研究

目的:了解本院鲍曼不动杆菌中I类整合子的分布与基因盒结构,并探讨整合子与鲍曼不动杆菌耐药的关系?方法:收集鲍曼不动杆菌临床株,用纸片扩散法(K-B法)测定77株鲍曼不动杆菌对18种抗生素的敏感性,采用PCR法检测鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合酶基因(intI 1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,并测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒?结果:鲍曼不动杆菌耐药现象十分严重?77株菌株中有49株含Ⅰ类整合子,阳性率63.64%,其中有45株(91.84%)整合酶阳性株扩增出可变区,共检测出4种耐药基因盒组合形式:aacA4(0.8 kb)?dfrXII-orfF-aadA2(1.8 kb)? aacA4-catB8-aadA1(2.3 kb)?aacC1-orfX-orfX-orfX’-aadA1a(3.0 kb)?整合子阳性菌株与整合子阴性菌株对多种抗生素耐药性存在差异?结论:Ⅰ类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性密切相关,在多重耐药鲍曼不动杆菌耐药机制中起重要作用?     

Ⅰ类整合子与耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药机制探讨

目的：探讨Ⅰ类整合子在耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药中的作用。方法：收集天津市4所大型医院共67株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌,进行Ⅰ类整合子筛选及药敏试验。结果：67株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中有46株检出Ⅰ类整合子（68．7％）;Ⅰ类整合子阳性IRPA和Ⅰ类整合子阴性ⅠRPA的多种药物耐药率无统计学差异。结论：Ⅰ类整合子可能不是导致耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药的主要原因。     

食品中大肠埃希菌耐药性与整合子的关系研究

目的研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果50株大肠埃希菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

多重耐药鲍曼不动杆菌整合子和ISCR1结构及基因分型研究

目的 探讨临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌整合子I和ISCR1的结构,并进行基因分型.方法 分离临床80株多重耐药鲍曼不动杆菌,PCR检测整合酶I、整合子I、ISCR1以及ISCR1携带的耐药基因,ERIC-PCR进行基因分型.结果 多重耐药鲍曼不动杆菌80株整合酶阳性,50株整合子I阳性,37株ISCR1携带的耐药基因阳性,ERIC-PCR分为22个类型.结论 整合子I和ISCR1在鲍曼不动杆菌介导多重耐药方面有重要作用,ERIC-PCR是研究临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌基因分型的有效方法之一.     

铜绿假单胞菌整合子及其基因盒与耐药性的相关性研究

目的 调查致呼吸系统感染的铜绿假单胞菌中整合子的存在情况,研究整合子中基因盒与耐药表型的关系.方法 测定97株铜绿假单胞菌对抗菌药物的敏感性;应用简并引物PCR方法扩增整合子5'保守区的Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,对阳性产物用限制性内切酶Hinf Ⅰ作限制片段长度多态性(RFLP)分析,并进行整合子分类;对整合酶阳性标...     

Multi-drug resistance and characteristic of integrons in Shigella spp. isolated from China

Objective To investigate the characteristic of integrons and the relationship between integrons and antimicrobial resistance in Shigella spp. Methods Ninety Shigella strains (83 S. flexneri and 7 S. sonnei) were isolated from the stools of patients in China. Susceptibility to 8 antimicrobials was tested for all isolated strains. PCR, RFLP and sequencing analysis of integrons were applied to all of them. Results High prevalence of multi‐drug resistance (95.6%) was identified. Of the isolates 79 (87.8%) carri...     

整合子的定位、产超广谱β-内酰胺酶与阴沟肠杆菌耐药性的相关性研究

目的 研究阴沟肠杆菌中整合子的定位（位置）及产ESBLs的情况,探讨整合子、产ESBLs与阴沟肠杆菌耐药的关系。方法 采用VITEK32系统鉴定细菌;运用K-B法做体外药敏试验; PCR检测质粒和染色体上的整合子;采用双纸片协同法检测ESBLs。结果 I类整合子的阳性率为67.14％。其中,仅在染色体DNA上、仅在质粒DNA上、同时在染色体DNA和质粒DNA上的阳性率分别为12.85%、14.29%、40％。未检测出Ⅱ类整合子。ESBLs的阳性率为58.57%。在产ESBLs的阴沟肠杆菌有80.49％携带Ι类整合子,其中,同时在染色体和质粒DNA上、仅在染色体DNA上和仅在质粒DNA上检测到I类整合子的比例分别为56.10％、14.63％和9.76％。头孢噻肟等在整合子阳性组和产ESBLs阳性组中的耐药率明显高于其阴性组,耐药率差别有统计学意义。结论 阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子阳性株和产ESBLs株更容易产生耐药,同时在质粒和染色体上携带Ⅰ类整合子的现象常见,Ι类整合子与ESBLs在阴沟肠杆菌产生耐药过程中起到一定的作用。     

Characterization of Class 1 Integron Gene Cassettes among Clinical Bacteria Isolated from One Large Hospital in Northern China

The class 1 integron and complex gene cassettes among different species of clinical isolates in northern China were characterized in this study. 383 clinical isolates were obtained from northern China, and class 1 integrons containing gene cassettes widely distributed among gram negative clinical isolates was observed. We find that the class 1 integron showed positive correlation with multidrug resistance phenotype of gram negative bacteria. In addition, we find that isolates belonged to one species harbored different types of gene cassette arrays, while same types of gene cassette arrays were observed in different species of isolates. The diversity of gene cassette arrays among the isolates indicated the complexity of multidrug resistance in clinical isolates in northern China.     

健康学生大肠埃希菌第1类整合子的鉴定及特征

目的：探讨健康学生肠道大肠埃希菌携带第1类整合子的分布及所含基因盒的特征。方法：常规方法分离大肠埃希菌;纸片扩散法对10种抗生素进行耐药性监测和分析;PCR鉴定第1类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析。结果：从97份标本中鉴定出大肠埃希菌76株,其中25株（32.8%）为多重耐药,耐药谱为复合磺胺-氨苄西林-四环素-红霉素-链霉素。25株中有14株(56.0%)鉴定出1类整合子,1 800 bp 10株, 750 bp 4株。PCR产物测序得知1 800 bp整合子携带aadA1-dfrA14-orf基因盒,传递对氨基糖苷类-磺胺类抗菌药物的耐药性;750 bp整合子携带dfrA14基因盒,传递对磺胺类抗菌药物的耐药性。结论: 不同种类的1类整合子存在于健康人大肠埃希菌中,携带耐药基因盒,决定多重耐药性。      

志贺菌属整合子的耐药贡献与稳定性研究

目的分析志贺菌属整合子对耐药性的贡献及其稳定性。方法对志贺菌属1类、2类整合子的耐药基因盒分别克隆、转化DH5α,观察阳性克隆菌对多种抗生素敏感性的变化。将整合子阳性克隆菌与多重耐药志贺菌进行质粒接合实验,并测定耐药性的改变。对10株耐药谱不同、携带整合子不同的志贺菌属细菌进行无抗生素压力下连续多次传代实验,检测其耐药性及整合子的变化。结果志贺菌属1类整合子耐药基因盒dfrA17-aadA5阳性克隆菌对链霉素和甲氧苄啶的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别提高了8倍和32倍;2类整合子耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1阳性克隆菌对链霉素和甲氧苄啶的MIC分别提高了64倍和32倍;整合子阳性克隆菌经质粒接合传递后对抗生素的MIC无改变。1株携带2类整合子的志贺菌属菌株经过多次传代培养后丢失整合子及其耐药性。结论志贺菌属整合子-耐药基因盒系统可引起特定抗生素的耐药性,对质粒接合传递耐药性无影响。志贺菌属的2类整合子可发生丢失。     

泛耐药鲍曼不动杆菌整合子Ⅰ和ISCR1结构及基因分型研究

目的研究从临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子Ⅰ和ISCR1的分布及结构情况,并对其进行基因分型。方法分离自临床的57株鲍曼不动杆菌,PCR检测整合酶Ⅰ、整合子Ⅰ、ISCR1以及ISCR1可变区,PCR产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分型并进行测序分析可变区携带的耐药基因盒,ERIC-PCR进行基因分型。结果 49株整合酶I阳性,其中47株整合子I扩增阳性,RFLP分为2型,测序结果为aacA4-catB8-aadA1和drf17-aadA5。3株ISCR1以及ISCR1可变区扩增均阳性,可变区经RFLP分为1型,测序结果为orf513-qnrA1-ampR-qacEdeltal,ISCR1阳性菌整合子I均阳性,经ERIC-PCR检测将57株鲍曼不动杆菌分为27个基因型。结论Ⅰ类整合子广泛存在于鲍曼不动杆菌中,ISCRI携带率较低,氨基糖苷类、甲氧苄啶类和β-内酰胺类耐药基因盒较常见,ERIC-PCR可用于临床鲍曼不动杆菌的分子流行病学研究。