孕妇血中胎儿细胞在产前诊断中的初步应用──胎儿SRY基因的鉴定

以Ｎｙｃｏｄｅｎｚ和Ｐｒｅｃｏｌｌ作为分离介质，对２３名孕龄为６～４１周，年龄为２１～２８岁的孕妇外周血中胎儿细胞进行了密度梯度离心富集。其中１５名怀男胎孕妇外周血富集前后各类细胞ＳＲＹ基因的ＰＣＲ扩增检查表明，大部分孕妇外周血多核细胞及低密度单个核细胞扩增结果为阳性，与胎儿实际性别符合率分别为８０．０％和９３．３％．这一结果提示：（１）ＰＣＲ分析母血中胎儿细胞单拷贝基因应采用低密度细胞多核细胞，且以前者为优；（２）密度梯度离心法已在一定程度上从母血中富集胎儿细胞，且所获得的细胞已基本上满足了ＰＣＲ扩增单拷贝基因所需的模板量；（３）富集实验证实母血中胎儿细胞大致由多核细胞及低密度单个核细胞两部分组成，而未经富集的孕妇血单个核细胞及高密度细胞中仅有少数几例呈ＳＲＹ阳性，符合率分别为１３．３％和６．７％；提示从未富集的孕妇外周血中按常规方法难以扩增出含量极微的胎儿单拷贝基因。在对３名怀女胎的孕妇外周血富集前后各类细胞共３２份标本进行ＳＲＹ基因的检测时，出现３例假阳性结果，其原因不明，不能排除外源男性ＤＮＡ的污染或前次妊娠的残留胎儿细胞的干扰所致。     

孕妇外周血胎儿细胞的富集技术及其在产前诊断中的应用

羊膜穿刺和绒毛吸取是目前常用的产前诊断技术，但其操作具有创伤性，可导致宫内感染、羊膜破裂、流产、胎儿畸形或死亡等［１］。建立非创伤性产前诊断方法，降低产前诊断的风险，是产前诊断工作的一项重大课题。自５０年代从孕妇外周血中发现胎儿细胞后，学者们开始关注...     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞用于产前诊断的研究进展

本文概述孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离与检测用于产前诊断的研究状况,描述母体外周血中的胎儿细胞的特点,胎儿有核红细胞的富集和分离方法,并对各方法的优点、缺点、病理性妊娠的意义、临床应用、存在的问题及研究进展作一综述。     

孕妇外周血胎儿细胞的分离及其在产前诊断中的应用

遗传性疾病由于其难治性 ,使得其产前诊断显得尤为重要。当前产前诊断的方法主要有两种 :侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。侵入性产前诊断主要包括 :羊膜腔穿刺、绒膜绒毛吸取 (funicolocentesis)等 ,由于侵入性产前诊断可能导致流产及感染等并发症 ,其应用受到限制 ;而非侵入性产前诊断除各种物理学诊断外 ,近年来PCR等技术的发展越来越多的受到人们的关注。现将近期的有关进展复习如下。一、孕妇外周血中的胎儿细胞类型1.滋养层细胞滋养层细胞是最早被发现存在于母体外周血循环中的胎儿细胞 ,且最早出现在母体中 ,存在时间长 (从孕 4…     

孕妇外周血中的胎儿DNA行产前诊断的研究进展

非侵入性产前诊断一直是遗传工作者和产科工作者的目标,分离孕妇外周血中的胎儿细胞作产前诊断使这一设想成为现实.但目前这一技术费时长、操作复杂,富集的胎儿细胞数量少、纯度不高,很难广泛应用于临床.近年来开展的从孕妇外周血中直接提取胎儿DNA作产前诊断受到人们日益重视,为无创性产前诊断提供了一条新的有效研究途径.     

从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行产前诊断的进展

非损伤性产前诊断是当前产前诊断研究的方向。目前常规使用的绒毛细胞产前诊断、羊水细胞产前诊断、经孕妇腹壁穿刺取胎儿脐带血以及用胎儿镜取胎儿皮肤做产前诊断等,对立内胎儿来讲都是一种损伤性产前诊断,有伤及胎儿或干扰胎儿健康发育的可能性。经孕妇外周血分离胎儿细胞进行产前诊断的研究,使非损伤性产前诊断成为可能。下面就近年来的研究进展做一综述。一、母血中存在有胎儿细胞早在1893年Schmorl在死于子痫的孕妇的肺循环中发现滋养叶细胞,1969年Walknowska等在怀男胎的孕妇血循环中发现了具有X和Y染色体的中期分裂相,提出了…     

利用孕妇外周血中的胎儿物质产前诊断唐氏综合征

唐氏综合征又称先天愚型 ,是先天性智力低下的最常见的遗传因素。早在 186 6年英国医生LangdonDown首次对此病例作过临床描述 ,故称Down综合征。据资料统计 ,目前 ,唐氏征新生儿的发病率为 1‰～ 2‰[1] ,给社会和家庭带来了极大的防治责任。由于缺乏有效的治疗措施 ,预防及控制患儿的出生是医学界的重大研究课题之一。近几十年来 ,借助先进的细胞遗传学和分子生物学检测技术 ,我们的产前筛查工作取得了一定的进展。目前 ,先天愚型的产前筛查工作主要是通过检测孕妇血液生化指标如AFP、hCG、uE3,羊水细胞及脐血细胞的染色体核型分析及超…     

孕妇外周血中的胎儿有核红细胞在非损伤性产前诊断中的研究进展

20世纪70年代以来，研究人员开始探索分离孕妇外周血中胎儿细胞的方法来进行非损伤性产前诊断。本文对用于非损伤性产前诊断的最佳候选细胞-胎儿有核红细胞的特点、分离方法、培养、临床应用等方面的研究进展作一综述。     

对孕妇外周血中胎儿细胞进行基因检测的三种方法比较

目的　建立用孕妇外周血中胎儿细胞进行基因分析的技术。方法　采用引物延伸预扩增(primed extension preamplification,PEP)法加 PCR、多重引物原位合成技术 (primed in situ labeling,PRINS)和巢式聚合酶链反应 (nested PCR)检测孕妇外周血中单个胎儿细胞的性别决定区 Y基因 (sex- de-termination region Y gene,SRY)基因片段。结果　 PEP加 PCR方法检测 SRY基因的敏感性为 97.39%(14 9/ 15 3) ,特异性为 99.17% (119/ 12 0 )。PRINS技术检测 SRY基因的敏感性为 97.5 6 % (40 / 4 1) ,特异性为10 0 % (35 / 35 )。巢式 PCR检测 SRY基因的敏感性为 80 .0 0 % (2 4 / 30 ) ,特异性为 87.5 0 % (14 / 16 )。结论　PEP加 PCR技术和 PRINS技术是对孕妇外周血中单个胎儿细胞进行基因诊断的可靠技术 ,其敏感性高、特异性强 ,有望成为利用孕妇外周血中单个胎儿细胞进行非创伤产前诊断的常规方法。     

SRY基因检测在性分化异常诊断中的应用

目的 研究SRY基因在性分化和发育中的作用。方法 细胞遗传学核型分析技术以及PCR技术检测外周血SRY基因。结果 在12例性分化异常患者中，有7例核型为46,XY，SRY（ ），其中1例是睾丸女性化综合征。说明性腺病理有睾丸与外周血SRY相符，另有5例核型为46，XX，其中1例餐周血SRY（ ），显示性反转综合征；1例为Tumer嵌合型综合征，核型为46，XX/45，X，SRY（-），但睾酮升高（12.7nmol/L)。正常成年女性睾酮参考值（0.7-2.8nmol/L)。3例外周血SRY基因。除SRY基因外，可能存在多个参与性别决定和分化的基因。性分化异常表现出高度遗传异质性。     

SRY基因在性发育异常诊断中的应用

目的为SRY在临床分子诊断中的应用提供参考,并对性发育异常机制进行探讨。方法通过对32例性发育异常患者和男性不育症患者进行SRY基因的检查分析,应用聚合酶链式反应（PCR）对性发育异常患者和男性不育症患者进行SRY检测。结果检出成功率为93.75%（30/32）,异常率为28.13%（9/32）,其中女性SRY扩增阳性率为9.38%（3/32）,男性SRY扩增阴性率为18.75%（6/32）。结论SRY基因是性别分化的关键基因,SRY基因的缺失或突变是造成性发育异常的主要原因,研究也表明人类的性别决定和分化还有其他相关基因的参与。对性发育异常患者进行SRY基因检测,有利于了解该类患者的遗传学病因,为其诊断和治疗提供科学依据。     

引物原位标记技术检测SRY基因

目的 建立一种能更有效检测单拷贝基因的引物原位标记技术(primed in situ labeling,PRINS).方法 在传统PRINS技术基础上,引入TsqStatrt抗体、Y染色体上的性别决定区基因(SIBX determining region Y,SRY)4条引物和TSATM Biotin System来检测SRY基因,并以对SRY基因的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)为对照.结果 在PRINS结果中,通过对50个中期分裂相的分析,在Yp11.3的位置上都枪测到特异信号且清晰可辨别,此结果与FISH结果一致且标记信号强度相当.结论 这项改进后的PRINS技术可快速针对单拷贝基因和小DNA片段进行检测.因此,相对于昂贵且费时的FISH技术,是另一种有效的选择.     

孕妇外周血胎儿细胞应用于非侵入性产前诊断研究进展

孕妇外周血胎儿细胞可以通过非侵入性方法获得，其内含有胎儿的遗传物质，可用于产前诊断。通过胎儿细胞筛查胎儿染色体异常和基因异常，可达到优生的目的。目前，胎儿细胞应用于产前诊断时还存在一定的问题。本文从胎儿细胞种类、分离时间、细胞源性、分离方法、筛选富集、DNA分析等方面对胎儿细胞应用于产前诊断存在的问题及研究进展进行综述。     

孕妇血浆中胎儿DNA的检测

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是遗传病非损伤性产前诊断的主要思路与探索途径。尽管在孕妇外周血中服地细胞的富集,鉴定,和遗传病的非损伤性产前诊断等方面取得了一些重要的进展,但是利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传病非损伤性产前诊断的主要障碍依然是胎儿细胞的富集效率不高,而过高的的母体背景影响检测胎儿特异等位基因。最近发现在孕妇的血浆中存在胎儿DNA,这一发现为非损伤性产前基因诊断开辟了新途径。我们结合煮沸法与硅法,建立了一种有效的,简便的,经济的从血浆中提取DNA的方法,通过调整PCR系统组成,增加循环次数,成功地从母体血浆中扩增出胎儿特异的SRY基因,同时采取严格的防污染措施,避免了假阳性或假阴性结果。我们的结果表明,应用我们建立的血浆DNA提取方法与调整的PCR系统,在孕早期可以准确地确定胎儿的性别,这对于性连锁疾病的非损伤性产前诊断具有重要意义。我们的工作为我国非损伤性产前诊断研究的开展与深入打下基础。     

多聚酶链反应检测XX男性和真两性畸形中SRY基因

采用多重聚合酶链反应技术（ＭＰＣＲ）对５例４６，ＸＸ男性和２例４６，ＸＸ真两性畸形患者进行ＳＲＹ基因筛查。结果显示，４例典型的４６，ＸＸ男性均具有ＳＲＹ基因，但无Ｙｑ重复ＤＮＡ序列，表明其性别反转与ＳＲＹ或ＳＲＹ所在的ＤＮＡ片段密切相关。此外，在１例伴有尿道下裂的４６，ＸＸ男性和２例４６，ＸＸ畸形中，均未发现有可检测的ＳＲＹ序列存在，说明这些病例具有不同的发病机制，很可能与Ｘ或常染色体上的性别决…     

孕妇血浆中胎儿DNA的检测△

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是遗传病非损伤性产前诊断的主要思路与探索途径。尽管在孕妇外周血中胎儿细胞的富集，鉴定，和遗传病的非损伤性产前诊断等方面取得了一些重要的进展，但是利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传病非损伤性产前诊断的主要障碍依然是胎儿细胞的富集效率不高，而过高的的母体背景影响检测胎儿特异等位基因。最近发现在孕妇的血浆中存在胎儿DNA，这一发现为非损伤性产前基因诊断开辟了新途径。我们结合煮沸法与硅法，建立了一种有效的，简便的，经济的从血浆中提取DNA的方法，通过调整PCR系统组成，增加循环次数，成功地从母体血浆中扩增出胎儿特异的SRY基因，同时采取严格的防污染措施，避免了假阳性或假阴性结果。我们的结果表明，应用我们建立的血浆DNA提取方法与调整的PCR系统，在孕早期可以准确地确定胎儿的性别，这对于性连锁疾病的非损伤性产前诊断具有重要意义。我们的工作为我国非损伤性产前诊断研究的开展与深入打下基础。     

SRY基因与性别决定

ＳＲＹ基因与性别决定周荣家，程汉华，余其兴人类性别决定的核心是未分化的原始生殖嵴如何向睾丸分化的问题，即睾丸的决定。人类Ｙ染色体上决定睾丸分化的基因称睾丸决定因子基因（ｔｅｓｔｉｓ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＴＤＦ）。胚胎具有染色体上的ＴＤ...     

人类SRY基因的研究进展

人类ＳＲＹ基因的研究进展鄢波，张思仲早在１９８６年，Ｖｅｒｇｎａｕｄ和Ｐａｇｅ根据对性反转患者染色体的缺失分析，将染色体划分为７个区段，建立了Ｙ的缺失定位图，并认为睾丸决定因子基因定位于其中的Ａ区。此后Ｐａｌｍｅｒ等对３名ＸＸ男性的研究表图１ＳＲＹ基...     

SRY基因的研究进展

在早期的胚胎发育阶段,性别分化受到各种基因和非基因因素复杂的相互作用,其中最重要的是SRY基因。SRY基因突变会导致性发育障碍。从1990年Sinclair等发现SRY基因以来,对于SRY基因突变通过何种方式影响性别分化以及基因型与表型的关系进行了深入的研究和探讨。研究结果表明,正常情况下需要通过两种不同的核转运途径使足够剂量的SRY蛋白进入细胞核调控性腺分化过程。