雌激素对血管平滑肌细胞凋亡及c-myc基因表达的影响

目的探讨17β雌二醇(E2)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其可能机制.方法应用流式细胞仪检测低、高浓度17βE2(10、100 nmol/L)对传代的VSMC凋亡率的影响,并通过细胞免疫组化方法观察对凋亡相关基因c-myc表达的影响.结果17β E2作用下VSMC凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),伴随着VSMC凋亡率的增加,c-myc蛋白的表达亦增强,且表现明显的浓度依赖性.结论17β E2具有诱导VSMC凋亡的作用,其部分机制可能是通过上调促凋亡基因c-myc的表达有关.     

氟化钠对血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的 研究氟对血管平滑肌细胞增殖活力的影响。方法 对大鼠胸主动脉平滑肌细胞采用组织块培养法。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性和生化方法检测细胞内蛋白和丙二醛(MDA)含量。结果 加氟培养胸主动脉平滑肌细胞48、72h时间段在1．0～15．0mgF^-/L组随着投氟量的增加，细胞增殖活性有所降低，且在25．0mgF^-/L组各时间段细胞增殖活性降低最为明显。在同一时间段：MDA含量随着投氟浓度的增加而增加，72h时间段的MDA含量较24h时间段的相同氟作用浓度下MDA明显下降。结论 随着氟作用时间的延长和浓度的增加对血管平滑肌细胞增殖活性降低显，且氧化应激在高氟情况下对细胞毒性中有重要作用。     

大蒜素对兔血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨大蒜素(Allicin)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法组织贴块法体外原代培养兔主动脉VSMCs,由Hcy诱导建立细胞增殖模型,将细胞随机分为6组,对照组、Hcy刺激组(Hcy 1 mmol/L)、Allicin大剂量组(Allicin10μg/ml+Hcy 1 mmol/L)、Allicin中剂量组(Allicin 5μg/ml+Hcy 1 mmol/L)、Allicin小剂量组(Allicin 2.5μg/ml+Hcy1 mmol/L)、叶酸组(叶酸5 mmol/L+Hcy 1 mmol/L)。通过MTT比色法检测细胞的增殖活度,免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及RTPCR技术观察对c-myc mRNA表达的影响。结果与对照组相比,Hcy刺激组的增殖活度、PCNA及c-myc mRNA的表达均显著升高(P<0.01);与Hcy刺激组比较,Allicin大、中、小剂量组细胞增殖活度减低,PCNA及c-myc mRNA的表达均下降(P<0.01),并呈现剂量依赖性,且Allicin大、中剂量组的抑制作用优于叶酸组(P<0.01或...     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及JNK磷酸化的影响

目的以往的研究发现，三七总皂甙（TPN）具有抑制和促进血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的双重作用，但至今对其作用机制十分不明。本研究旨在观察TPN对大鼠VSMC增殖的影响及经由何种信号通路介导。方法体外培养的大鼠VSMC给予TPN不同浓度作用一定时间或某一特定浓度不同作用时间，采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和蛋白印迹（Western blot）法观察了VSMC增殖的变化及c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化的变化。结果TPN能快速的激活JNK1／2，并呈时间和浓度依赖性。     

曲尼司特对血管平滑肌细胞增殖及C-myc基因表达的影响

为探讨曲尼司特防治冠状动脉成形术后再狭窄及动脉粥样硬化的作用机制，以培养的大鼠血管平滑肌细胞为模型，应用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验及反转录-多聚酶链反应技术。观察致分裂原对血管平滑肌细胞增殖及C-myc基因表达的影响；并检测曲尼司特对致分裂原诱导的增殖及C-myc基因表达的抑制效应。结果显示，曲尼司特可明显抑制血小板源生长因子和血管紧张素Ⅱ诱导的DNA合成和C-myc基因表达。以上提示，曲尼司特能明显抑制血管平滑肌细胞增殖，其作用机制可能与抑制C-myc基因表达有关。     

雌激素对PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨17β-雌二醇（E2）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及细胞周期的影响。方法分离培养VSMC,血小板源生长因子（PDGF）诱导其增殖,应用MTT法及流式细胞仪检测不同浓度E2（10和100 nmol/L）对传代VSMC增殖活性及细胞周期的影响。结果E2（10和100 nmol/L）作用下VSMC增殖活性下降,且与浓度有关;对VSMC细胞周期的分布影响主要表现为处于G0/G1期细胞数增多,G2/S期的细胞数减少（P<0.01）。结论E2具有抑制VSMC增殖的作用,其部分机制可能是通过阻滞VSMC G0/G1期向S的转化有关。     

西拉普利对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 为探讨西拉普利预防再狭窄及动脉粥样硬化的可能性,研究了西拉普利对血小板源生长因子（PDGF）诱导的血管平滑细胞（VSMC）增殖的影响。方法 以培养的大鼠VSMG为模型、应用^H－TdR掺入试验观察VSMC增殖情况。结果 PDGF能明显促进VSMC DNA合成,大剂量西拉普利能抑制PDGF诱导的细胞DNA合成,小剂量西拉普利增加细胞DNA合成。结论 大剂量西拉普利能明显抑制VSMC增殖、对防治再狭窄及动脉粥样硬化可能有效。     

三七总皂甙对人高脂血清诱发的胎儿血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

为观察三七总皂甙对高脂血清刺激的人胎儿血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。利用体外细胞培养技术,用人高脂血清造成血管平滑肌细胞增殖的模型并通过MTT测定、细胞计数及透射电镜下的细胞超微结构的观察等方法,观察了三七总皂甙对人胎儿血管平滑肌细胞的保护作用。结果发现,人高脂血清可明显刺激人胎儿血管平滑肌细胞的增殖并引起其表型的改变。而三七总皂甙可呈浓度依赖性地抑制血管平滑肌细胞的增殖并可显著抑制高脂血清对血管平滑肌细胞的促增殖作用。此结果提示,三七总皂甙的抗动脉粥样硬化作用可能部分是通过抑制血管平滑肌细胞异常增殖来实现的。     

西拉普利对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的为探讨西拉普利预防再狭窄及动脉粥样硬化的可能性,研究了西拉普利对血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑细胞(VSMC)增殖的影响。方法以培养的大鼠VSMG为模型、应用3H-TdR掺入试验观察VSMC增殖情况。结果PDGF能明显促进VSMCDNA合成,大剂量西拉普利能抑制PDGF诱导的细胞DNA合成,小剂量西拉普利增加细胞DNA合成。结论大剂量西拉普利能明显抑制VSMC增殖、对防治再狭窄及动脉粥样硬化可能有效。     

瓜蒌皮提取物对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的 研究瓜蒌皮提取物对血小板源生长因子BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响并探讨其可能机制.方法 组织块贴块法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,3H-TdR掺入观察瓜蒌皮提取物(10、20和30mg/L)对血小板源生长因子BB(20 μg/L)所致血管平滑肌细胞DNA合成的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;real time RT-PCR检测血管平滑肌细胞中c-fos、c-myc mRNA表达.结果 血小板源生长因子BB可明显升高细胞每分钟脉冲数(P＜0.01),并增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例(P＜0.01),并上调c-fos、c-myc mRNA表达(P＜0.01).瓜蒌皮提取物各浓度组均明显抑制血小板源生长因子BB诱导的每分钟脉冲数升高(P＜0.01),降低S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例,明显下调血小板源生长因子BB所致的c-fos、c-myc mRNA高表达(P＜0.01).结论 瓜蒌皮提取物通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期进入S期而抑制血小板源生长因子BB所致的增殖,其作用机制可能与降低细胞内c-fos、c-myc mRNA高表达有关.     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及表达c-myc基因的影响

为观察川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖的影响,在建立凝血酶诱导的体外培养的兔主动脉血管平滑肌细胞增殖模型后,应用免疫细胞化学方法观察川芎嗪对血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的影响;并用流式细胞术观察了血管平滑肌细胞增殖周期的变化。结果发现,川芎嗪能够显著抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达增加,使血管平滑肌处于ＧＩ期的细胞数显著增多,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期的细胞数显著减少。结果提示,川芎嗪对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其机制与抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达有关。     

三七总皂甙对人高脂血清诱发的胎儿血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

为观察三七总皂甙对高脂血清刺激的人胎儿血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。利用体外细胞培养技术 ,用人高脂血清造成血管平滑肌细胞增殖的模型并通过MTT测定、细胞计数及透射电镜下的细胞超微结构的观察等方法 ,观察了三七总皂甙对人胎儿血管平滑肌细胞的保护作用。结果发现 ,人高脂血清可明显刺激人胎儿血管平滑肌细胞的增殖并引起其表型的改变。而三七总皂甙可呈浓度依赖性地抑制血管平滑肌细胞的增殖并可显著抑制高脂血清对血管平滑肌细胞的促增殖作用。此结果提示 ,三七总皂甙的抗动脉粥样硬化作用可能部分是通过抑制血管平滑肌细胞异常增殖来实现的。     

血小板源生长因子BB对人血管平滑肌细胞钙调素的影响

为研究血小板源生长因子BB对培养的人血管平滑肌细胞钙调素的影响，采用培养的人血管平滑肌细胞，应用磷酸二酯酶法观察不同浓度的血小板源生长因子BB对钙调素含量变化的影响及其时间效应。结果发现，平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后，细胞内钙调素含量逐渐增加，在9h时出现一个短暂的高峰，随后细胞内钙调素含量逐渐下降。血小板源生长因子BB可促进钙调素含量的增加，并呈现出明显的浓度依赖关系，30μg/L血小板源生长因子BB作用最为显著。结果提示，血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞钙调素含量的增加，并存在着一定的量效依赖关系及时间反应性。     

花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨花刺参粘多糖抗动脉粥样硬化、预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的可能机制。方法组织块贴片法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑盐、流式细胞细胞周期分析;流式细胞术、TUNEL法观察细胞凋亡。结果血小板源生长因子BB刺激后可促进血管平滑肌细胞增殖,抑制其凋亡;花刺参粘多糖则呈浓度依赖性地逆转此作用,光密度值由0.406±0.003减少到0.187±0.017(P<0.01),G0/G1期细胞比例由77.4%±5.7%增加到88.1%±5.3%(P<0.05),细胞凋亡率由8.6%±2.3%增加到22.6%±2.3%(P<0.05),凋亡细胞比例由2.7%±0.4%增加到10.1%±0.9%(P<0.01)。结论花刺参粘多糖可抑制血小板源生长因子BB诱导的血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡,这可能对延缓动脉粥样硬化的发生发展、防止经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的发生起到一定作用。     

苯扎贝特对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和小凹蛋白1表达的影响

目的 观察苯扎贝特对血小板源生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及小凹蛋白1表达的影响并探讨其机制.方法 体外植块贴壁法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,噻唑兰比色法检测各组细胞增殖情况,Western Blotting法观察各组小凹蛋白1的表达情况.结果 不同浓度的苯扎贝特对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均有一定的抑制作用,随浓度增加,其抑制作用增强(P<0.01).血小板源生长因子干预组小凹蛋白1的表达较对照组明显降低(P<0.01),而用不同浓度的苯扎贝特干预后小凹蛋白1的表达明显升高(P<0.01),且随着苯扎贝特浓度增加,小凹蛋白1的表述明显增加.结论 苯扎贝特抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的同时可以上调小凹蛋白1的表述.     

钙激动剂介导血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

为探讨钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在雷尼丁刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用,以培养的大鼠血管平滑肌细胞为模型,用雷尼丁刺激其内贮Ca^2 释放入胞浆,环孢素A阻断钙调神经磷酸酶信号通路,维拉帕米阻断钙通道,检测血管平滑肌细胞钙调神经磷酸酶、丝裂素活化蛋白激酶和蛋白激酶C活性,用^3H-亮氨酸及^3H－胸腺嘧啶掺入量作为反应细胞增殖的指标。结果显示,雷尼丁刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著（P＜0．01）;环孢素A及维拉帕米能明显抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白核酸合成速率增高,与雷尼丁刺激组相比差异显著（P＜0．01）。同时发现雷尼丁刺激组钙神经磷酸酶、蛋白激酶C活性与对照组平滑肌细胞相比差异显著（P＜0．05或0．01）。环孢素A和维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞钙调神经磷酸酶活性增高,维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白激酶C活性的增高。提示钙调神经磷酸酶信号通路在雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖中起重要作用,但钙调神经磷酸酶信号通路不是雷尼丁介导平滑肌细胞增殖的唯一信号通路,以丝裂素活化蛋白激酶为核心的信号通路亦参与了雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖。     

辛伐他汀对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子表达的影响。方法体外培养大鼠原代血管平滑肌细胞,体内建立大鼠动脉粥样硬化血管损伤模型,分为正常对照组、动脉粥样硬化损伤组、低剂量和高剂量辛伐他汀组。4周后处死动物,酶法测定血脂水平,检测胸主动脉和左颈总动脉内膜/(内膜 中膜)比值,免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应法检测血管内皮生长因子的表达。结果辛伐他汀对血管平滑肌细胞的增殖和迁移无双向调节作用。小剂量辛伐他汀对血管平滑肌细胞的增殖和迁移无促进作用,大剂量辛伐他汀抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移,且随着时间延长和浓度增加其抑制作用增强,这种作用不依赖辛伐他汀的调脂性。辛伐他汀能减少血管平滑肌细胞血管内皮生长因子的表达,且高浓度的辛伐他汀显著减少血管内皮生长因子的表达。结论辛伐他汀可能通过减少血管平滑肌细胞血管内皮生长因子的表达来抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移。     

门脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞增生与c-myc基因表达的相关性研究

目的:研究门脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞增生与c-myc mRNA表达的关系。方法:应用RT-PCR和免疫组化法对28例门脉高压症患者的脾静脉、12例正常血管分别进行c-myc mRNA和增殖细胞核抗原(PCNA)的检测。结果:门脉高压症患者脾静脉PCNA蛋白表达阳性指数为(29.8±4.2)％;c-myc mRNA在PCNA蛋白表达阳性组和阴性组分别为(7.61±1.04％)和(3.82±0.92)％,正常对照组血管中PCNA蛋白无表达、c-myc mRNA表达为(1.04±0.21)％,两者同时与对照组比较,统计学上有显著性差异(P<0.01)。结论:c-myc基因是门脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞增殖的起动基因,门脉血流动力学紊乱激活脾静脉壁平滑肌细胞中原癌基因,促使血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型改变,导致脾静脉血管重塑,使血管对缩血管物质反应降低。     

血小板源生长因子诱导核受体Nur77调节血管平滑肌细胞增殖

目的 研究血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞中核受体Nur77表达机制及其与血管平滑肌细胞增殖的关系,探讨阿托伐他汀对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和核受体Nur77表达的关系.方法 分离培养鼠血管平滑肌细胞,分别与PD98059、阿托伐他汀、核受体Nur77siRNA孵育后应用血小板源生长因子刺激,检测核受体Nur77、细胞外调节蛋白激酶表达;检测增殖细胞核抗原表达.结果 血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞中核受体Nur77通过ERK-MAPK信号途径表达.阿托伐他汀减少血小板源生长因子诱导的核受体Nur77表达,抑制血管平滑肌细胞增殖.在核受体Nur77沉默后的血管平滑肌细胞中,血小板源生长因子诱导的细胞增殖减少.结论 血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖受核受体Nur77调控,阿托伐他汀降低核受体Nur77表达,减少血管平滑肌细胞增殖,这可能是他汀类药物抗细胞增殖的新的途径.核受体Nur77可能是减少再狭窄的新的治疗靶点.