原位RT-PCR测定雄性幼鼠肾上腺中Ⅰ、Ⅲ型17β羟甾脱氢酶的表达

目的　探讨生后 5d小鼠肾上腺X带细胞的功能及其与雄性性分化的关系。　方法　应用原位RT PCR技术分别测定 5d小鼠肾上腺中Ⅰ、Ⅲ两型 17βHSD的表达。 　结果　在肾上腺皮、髓质交界的X带细胞中有Ⅰ、Ⅲ两型 17βHSD的表达。　结论　未成年小鼠肾上腺X带细胞能合成雄激素 ,并与睾丸合成的雄激素共同促进雄性性分化。     

TGF—β1对肾间质成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响

通过观察ＴＧＦ－β１对肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅲ胶原ｍＲＮＡ表达的影响,探讨间质成纤维细胞在肾纤维化过程中的作用。方法应用大鼠肾间质成纤维细胞体外培养。以ＭＴＴ比色法和ＲＴ－ＰＣＲ法,观察ＴＧＦ－β１对肾间质成纤维细胞的增殖作用和对Ⅲ型 ｍＲＮＡ表达的影响。     

喉癌组织中5α—还原酶和17β—羟类固醇脱氢酶的活性

目的：了解性激素对喉癌的影响。方法：测定２０例喉癌和非喉癌组织的５α－还原酶（５αＲ）和１７β－羟类固醇脱氢酶（１７β－（ＯＨ）ＳＤＨ）的活性，此两酶分别涉及睾酮转化为二氢睾酮和雌二醇转化为雌酮。结果：５αＲ的活性在两种组织中没有差别。相反，１７β－（ＯＨ）ＳＤＨ活性在喉癌组织中明显降低，仅为非喉癌组织的５０％。结论：促进喉癌发展的可能是雌激素而非雄激素     

转化生长因子β及其受体在小鼠精子发生过程中的表达

目的观察转化生长因子β（TGFβs）及其受体（TGFβ-R）在小鼠睾丸中的表达,证实TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的定位和作用机理.方法免疫组织化学染色结合显微图像定量分析和免疫荧光双重染色.结果免疫组织化学显示：TGFβ1和TGFβ2主要表达于生精小管内Ⅵ-Ⅷ期圆形精子细胞以及长形精子细胞和变态精子细胞的胞质,位于睾丸间质中的Leydig细胞胞质呈弱表达;TGFβ3仅表达于Leydig细胞,各级生精细胞未见表达.晚期精母细胞（Ⅷ期）至第Ⅹ期长形精子细胞均表达TGFβ-RⅠ;TGFβ-RⅡ仅表达于第Ⅺ期后的变态精子细胞期;而TGFβ-RⅢ则主要表达于Ⅶ-Ⅷ期圆形精子细胞和变态精子细胞胞质.免疫荧光双重染色显示：TGFβ1和TGFβ2与TGFβ-RⅢ在生精上皮最早共表达于晚期圆形精子细胞顶体极.结论 TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的表达具有细胞和周期特异性,提示其在精子发生中具有重要意义.     

小鼠MBL-A基因的克隆和序列分析

目的：克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素-A(MBLA)基因的全长编码区cDNA。方法：利用RT-PCR方法，从Balb/c小鼠的肝细胞中，分离出MBL-A基因cDNA片段，克隆入pUC-T载体，测序并进行分析。结果：扩增得到的小鼠MBL-A基因cDNA全长720bp，编码240个氨基酸残基，包含了完整的富含半胱氨酸区、胶原区、颈区和糖识别域。分析表明，与Genbank中发表的序列具有99.9％的同源性。结论：获得小鼠MBL-A基因的克隆，为进一步研究MBL-A分子在体内的生物学功能奠定了一定基础。     

葡萄糖上调胰岛β细胞系NIT-1 11β-羟类固醇脱氢酶1型的表达

目的　探讨葡萄糖对胰岛β细胞系NIT-1上11β-羟类固醇脱氢酶1型（11β-HSD1）的表达及其功能的影响。方法　用细胞免疫化学染色、RT-PCR和Western blot法检测NIT-1细胞11β-HSD1mRNA及蛋白表达。分别用含10、15、20和25mmol/L葡萄糖的Ham's F12培养液培养NIT-1细胞72h,检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达水平,用葡萄糖刺激释放（GSIS）试验评价胰岛β细胞功能。结果 (1) 胰岛NIT-1细胞胞质里有棕黄色阳性染色颗粒,并有11β-HSD1mRNA和蛋白表达,(2) 15、20和25mmol/L葡萄糖组11β-HSD1表达增加(P＜0.05,P＜0.01),葡萄糖刺激胰岛素分泌减少(P＜0.05,P＜0.01)。结论 11β-HSD1在胰岛NIT-1细胞上有表达,糖皮质激素可能参与胰岛β细胞胰岛素分泌功能。     

APP17肽对糖尿病脑病小鼠海马IRS—1、IGF—1R表达的影响

目的 通过对胰岛素受体底物－1（IRS－1）、胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）在海马表达的观察,研究APP17肽对糖尿病脑病小鼠海马神经元IRS－1、IGF－1R的影响。方法 用链脲佐菌素（STZ）诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射APP17肽对糖尿病小鼠进行治疗,4周后取脑组织做IRS－1、IGF－1R免疫组织化学染色。结果 糖尿病小鼠海马内IRS－1、IGF－1R阳性反应神经元胞浆与突起深染,而正常小鼠及APP17肽保护的糖尿病小鼠海马阳性细胞数目小,染色淡。结论 糖尿病小鼠海马IRS－1、IGF－1R广泛表达;APP17肽能影响糖尿病脑病小鼠脑内IRS－1,IGF－1R的表达,使之接近正常。     

大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素及其受体cDNA的克隆和序列测定

目的 研究促甲状腺激素释放激素（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＴＲＨ）及其受体（ＴＲＨ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＲＨ－Ｒ）在大鼠丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用。方法 以大鼠丸组织总ＲＮＡ为模板,依据大鼠下丘脑中的前ＴＲＨ和垂体中的ＴＲＨ－Ｒ ｃＤＮＡ设计引物,进行反转录聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉ     

小鼠蛋白激酶CK2β亚基的克隆、表达及活性测定

通过反转录PCR从NIH 3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA；构建其表达质粒并经测序证明其编码小鼠蛋白激酶CK2β亚基，但与两种已报道的小鼠CK2β亚基cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异，与大鼠、猪、兔和人CK2β亚基cDNA的编码区相应碱基序列则一致。将其在表达菌BL21(DE3)中诱导表达，出现一26kDa分子量蛋白过度表达，表达蛋白占菌体总蛋白的31．7％，但大多数以不溶形式存在。Western blot鉴定表明：过度表达产物能与抗人CK2β亚基抗体发生特异性免疫反应。当CK2α和β亚基以1：1摩尔比混合时，构成性的CK2全酶显示出最大活性，直接表明CK2β亚基对CK2α有激活作用。这些结果有力地证明了克隆表达的重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2β亚基。     

HLA—Ⅲ类成份及其构成的补体单体型与寻常型银屑病 …

目的 研究ＨＬＡ－Ⅲ类成及其构成的补体单体型与导常型银屑病的相关性。方法 对５０例无血缘关系的寻常型银屑病（Ｐｓ）患者家庭及２４例家庭健康成员的ＥＤＴＡ血浆进行属于ＨＬＡ－Ⅲ的Ｂｆ、Ｃ４Ａ、Ｃ４Ｂ的遗传多态性及其构成的补体型检测。结果 通过家庭分析及对比发现：Ｐｓ的Ｂｆ基因频率与正常人无差异；Ｃ４ＡＱ０、Ｃ４ＢＱ０的基因频率病人远高于正常人；而Ｃ４Ｂ２则较常人为小。在补体型方面。患者与正常人均以Ｓ     

逆转录病毒介导的β－珠蛋白基因在小鼠骨髓单核细胞的表达

从小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ股骨分离得到骨髓单核细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ＢＭＭＣ），并在体外建立了ＢＭＭＣ细胞培养体系。将携带有人β－珠蛋白基因及其增强子的逆转录病毒载体（Ｎ２ＡβＥ３６）经ＤＮＡ磷酸钙共沉淀转染单向性包装细胞系（ψ－２）收集抗Ｇ４１８阳性ψ－２细胞克隆的病毒上清，感染体外培养的ＢＭＭＣ，同时加入白介素－３（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－３，ＩＬ－３）、白介素－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）、红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，Ｅｐｏ）等造血调节因子以促进造血细胞的增殖及提高基因转移的效率。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析证实在小鼠ＢＭＭＣ中具有β－珠蛋白基因的整合与表达。     

酪氨酸羟化酶在C型尼曼—匹克病小鼠小脑中的异常表达

目的 探讨C型尼曼－匹克病（NPC）小脑中酪氨酸羟化酶（TH）异常表达的时间、部位及其与临床表现的关系。方法 应用TH抗体,对不同周龄NPC小鼠和正常小鼠的脑组织切片进行免疫组织化学染色,部分相邻切片以抗维生素D依赖性结合蛋白抗体染色。结果 1－3周NPC小鼠小脑的浦肯野细胞（PC）未见明显减少,TH染色阴性。5周时PC开始减少,8－11周期间PC显著丢失,但小脑蚓小结和蚓垂有较多的PC存活。8周后,部分存活的PC及其树突树出现TH免疫反应。其轴突局部球形膨大,树突不规则,弯曲、断裂、局部膨大,树突树萎缩。结论 NPC1基因突变引起小脑PC严重丢失,存活的PC有形态改变和异常基因活动,提示其功能不正常,这可能是NPC运动障碍的病理基础。     

通过序列分析筛选单纯疱疹病毒Ⅰ型蛋白组中的PACS—1结合蛋白

目的：筛选单纯疱疹病毒Ⅰ型蛋白组中的PACS－1结合蛋白。方法根据筛选标准,利用ScanProsite和PSORT软件对蛋白质进行分析,并结合相关文献中的实验数据对分析结果进行校正。结果,该方法可有效地筛选出PACS－1结合蛋白。利用该方法,在单纯疱疹病毒Ⅰ型蛋白组中,共筛选出可能与PACS－1结合蛋白质33种。结论：建立了一种有效的筛选PACS－1结合蛋白的方法。筛选出的单纯疱疹病毒Ⅰ型的PACS－1结合蛋白。将为研究PACS－1结合蛋白在疱疹病毒发生及潜伏性感染中的作用提供指导。     

干扰素β1b对Th17细胞介导的复发-缓解型多发性硬化无效

目的 探讨干扰素β1b(IFN-β1b)在复发-缓解型多发性硬化(RRMS)中的疗效与外周血中Th17细胞的关系.方法 收集11例RRMS患者,给予6个月IFN-β-1b治疗.评估治疗前后扩展残疾状态评分(EDSS)及核磁共振(MRI)T2病灶数的变化.并通过流式细胞术检测治疗前患者外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞的数量.结果 11例RRMS患者根据EDSS评分的变化分为治疗有效组和无效组.两组之间EDSS评分及MRI T2病灶数在治疗前无统计学差异(P＞0.05),治疗后有效组EDSS评分和MRI T2病灶数较无效组明显减少(P＜0.05).治疗前PBMC中Th17细胞数量在无效组较有效组明显增加(P＜0.05).结论 IFN-β-1b治疗对Th17细胞介导的RRMS无明显疗效.     

转化生长因子βⅡ型受体与纤维连接蛋白在小鼠肾发育中的表达

目的 观察转化生长因子βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）及纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾发育中的时空性表达,探讨TGF-βRⅡ和Fn与肾发育的关系。 方法 采用免疫组织化学技术,结合免疫印迹法,检测不同胚龄及生后日龄小鼠肾组织TGF-βRⅡ和Fn的表达及其含量变化。 结果 TGF-βRⅡ在各期肾小体、肾小管及集合管内均有表达,并随肾的发育其表达量逐渐增加(P ﹤0.05);Fn在除逗号小体以外的各期肾小体、肾小管及集合管的基底膜处均有表达,随着肾的发育其表达量逐渐增加(P ﹤0.05)。 结论 TGF-β和Fn可能对小鼠肾发育以及成熟肾脏各结构的维持起重要作用。     

表达载体pRSET C重组rhTNF—β的表达及其纯化

将ｈＴＮＦ－β Ｎ端缺失２３个氨基酸的基因,克隆在表达载体ｐＲＳＥＴ Ｃ的６个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游,以重组质粒转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,经ＩＰＴＧ诱导,ｒｈＴＮＦ－β获得了高表达,表达量占细胞总蛋白的２６％,其表达产物大部分以可溶性形式形成。菌体裂解上清经０．４５μｍ的滤膜过滤后,用固定化金属配体亲和柱层析,纯度可达９５％左右;经肠激酶酶切后,具有ＴＮＦ－β的细胞毒活性,此活     

超抗原TSST—1之靶PCRVβHV4序列的特征分析

首先对人和小鼠的ＴＣＲＶβ的氨基酸序列进行多序列对准，就Ｖβ之ＨＶ４片段进行比较，分析与超抗原ＴＳＳＴ－１结合的四种Ｖβ之ＨＶ４序列内是否存在特定的氨基酸残基排列主型。     

适量饮用贵州某食用白酒对Ⅰ型糖尿病小鼠胰岛β细胞的影响

目的:探讨摄入贵州某食用白酒对Ⅰ型糖尿病小鼠胰岛β细胞可能的影响及相关机制。方法:正常雄性C57BL/6J小鼠通过灌胃饮酒及注射链脲佐菌素建立单纯饮酒、糖尿病、糖尿病饮酒模型,测空腹血糖,通过免疫组织化学、real-time PCR、图像分析及形态计量法观察胰岛β细胞分泌胰岛素及胰岛素mRNA表达的改变。结果:糖尿病组及糖尿病饮酒组小鼠空腹血糖升高,达到小鼠糖尿病成模标准。单纯饮酒组小鼠血糖、β细胞平均光密度、面数密度、胰岛素mRNA相对表达量无明显变化。糖尿病组及糖尿病饮酒组β细胞平均光密度值短暂升高,面数密度与胰岛素mRNA相对表达量逐渐降低。结论:在本实验设定的时程和剂量内,单纯饮用该白酒对胰岛β细胞无明显影响。适量饮用该白酒并未加重Ⅰ型糖尿病小鼠胰岛β细胞的损伤。     

小鼠γ—干扰素真核表达质粒的构建和鉴定

目的 克隆小鼠γ-干扰素(γ-IFN)基因，构建并鉴定小鼠γ-干扰素真核表达质粒。方法 从BALB／c小鼠脾脏提取总RNA，用RT—PCR方法扩增出小鼠γ-干扰素基因，分别用EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切扩增片段和pcDNA3.1(-)，定向克隆到真核表达质粒pcDNA3．1(-)，构建成真核表达质粒pcDNA3．1(-)γ-IFN，转化产物通过PCR扩增筛选，双酶切鉴定；阳性克隆进行序列分析。结果 RT—PCR产物电泳可见一约500bp大小目的片段，PCR和双酶切电泳结果均证实已插入约500bp的γ-IFN基因片段；阳性克隆测序结果表明克隆的小鼠γ-干扰素基因完全正确。结论 成功构建了小鼠γ-干扰素真核表达质粒，为进一步气道内实施哮喘小鼠基因治疗打下了坚实基础。