MTEC 1分泌的趋化因子引起特定亚群胸腺细胞的定向迁移

分析胸腺髓质上皮样细胞系ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对胸腺细胞亚群的趋化作用。方法以抗体加补体杀伤结合免疫磁珠及ｐａｎｎｉｎｇ法，将小鼠胸腺细胞分离纯化，获得ＣＤ４＋ＣＤ８＋（ＤＰ），ＣＤ４－ＣＤ８－（ＤＮ），ＣＤ４＋ＣＤ８－（ＣＤ４ＳＰ）及ＣＤ４－ＣＤ８＋（ＣＤ８ＳＰ）四亚群细胞，用Ｂｏｙｄｅｎ小室分析ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对四群胸腺细胞的趋化作用。结果ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对ＤＰ及ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞有趋化活性（ＣＩ＝６．６±１．０及６．１±１．８）；对ＣＤ８ＳＰ细胞有中度趋化活性（ＣＩ＝３．２±１．０）；对ＤＮ趋化活性微弱（ＣＩ＝１．３±０．６）。化学趋化因子ＭＣＰ┐１纯品对ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞显示强趋化活性（ＣＩ＝５．６），对ＤＮ胸腺细胞则无可测出趋化活性。结论ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对ＤＰ，ＣＤ４ＳＰ及ＣＤ８ＳＰ胸腺细胞有显著趋化作用，对ＤＮ胸腺细胞几乎无趋化作用。提示此类化学趋化因子有趋使胸腺发育中后期阶段的细胞向胸腺髓质区迁移和定位的作用。     

抗氧化剂PDTC抑制氧化的低密度脂蛋白诱导的人肾小球系膜细胞NF_(-k)B活化

目的 研究氧化的低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＨＭＣ）核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活化的影响，以及抗氧化剂毗咯二硫氨基甲酸酯（Ｐ ＤＴＣ）对ＮＦ－ＫＢ活化的抑制作用，探讨ＯＸ－ＬＤＬ介导肾损害的基因调控机制及抗氧化剂ＰＤＴＣ防治脂质肾损害的可能性。方法 将Ｏｘ－ＬＤＬ或ＰＤＴＣ与ＨＭＣ共培养后，提取细胞核蛋白进行凝胶迁移率变动分析（ＥＭＳＡ）检测ＮＦ－ＫＢ的活化，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内ＩＫＢα蛋白含量的变化，反映ＩＫＢα的降解及免疫组化染色检测细胞内的Ｐ６５向核转位。结果 正常对照组未见ＮＦ－ＫＢ活化，当用不同浓度（１０、２５、５０及１００ｍｇ／Ｌ）的Ｏｘ－ＬＤＬ，刺激肾小球系膜细胞 ｌｈ后，均可引起细胞 ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解。与对只组相卜较差异显著（ｐ＜０．０５），以５０ｍｇ／Ｌ 的ＯＸ－ＬＤＬ刺激ＨＭＣ１ｈ，ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解最明显。ＮＦ－ＫＢ活化的同时，伴有Ｐ６５由胞浆向胞核的转位。１００μｍｏｌ／Ｌ ＰＤＴＣ，能明显抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化、ＩＫＢα降解（ｐ＜０．０１）及 Ｐ６５的核转位。结论Ｏｘ－ＬＤＬ。能诱导ＨＭＣ的ＩＫＢαａ降解、Ｐ６５的核转位，最终使Ｎ     

急性丙型肝炎患者免疫状况的研究

用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及ＬＤＨ释法，对１６例急性输血后丙型肝炎（抗－ＨＣＶ、ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性）患者，分别进行外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的Ｔ细胞亚群计数、Ｔ４／Ｔ８比值、Ｔａｃ受体的检测及血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）ＮＫ细胞活性的测定。并与正常人组比较，经ｔ检验发现，急性丙型肝炎患者的Ｔ４亚群所占百分比、Ｔ４／Ｔ８比值及ＰＢＭＣＴａｃ受体表达均明显低于正常人组（Ｐ＜０．０５），而ＮＫ细胞活性、血清ｓＩＬ－２Ｒ明显高于正常人组（Ｐ＜０．０５）。患者的这些免疫状态改变，可能对其发病机理的研究有一定意义。     

人胃癌细胞产生免疫抑制因子作用研究

检测了３株分化不同的人胃癌细胞ＭＫＮ－４５、ＭＫＮ－２８，ＳＧＣ－７９０１在体外培养过程中产生免疫抑制因子的体外免疫抑制作用，分化差的ＭＫＮ－４５及源于转移性ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞株体外培养过程中免疫抑制因子对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＩＬ－２水平及其ＩＬ－２Ｒ表达抑制作用较强，且显著高于高分化ＭＫＮ－２８细胞株产生免疫抑制因子的作用；而正常ＲＰ－ＭＩ １６４０细胞培养液无免疫抑制作     

细胞培养中支原体污染的去除

在运用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产品中，支原体污染仍是一个颇为棘手的问题。１１株人的细胞ＳＰＣ－Ａ１、Ｋ５６２、ＨＵＴ－１０２、ＢＴ－３２５、６Ｔ－ＣＥＭ、ＮＫＭ－４５、ＣＮＥ、ＨＬ－６０、ＱＧＹ－７７０１、ＱＺＧ、人羊膜细胞；３株小鼠细胞Ｐ３８８－１、ＹＡＣ－１、Ｐ８１５；１株绒猴细胞Ｂ９５－８；和一株杂交瘤ＱＫＴ３等，已污染了支原体的细胞经ＭＣ－２１０ １μｇ／ｍｌ处理７天，支原体污染     

食管癌患者五项细胞免疫学指标的测定及其意义

对３５例食管癌（ＥＣ）患者和３０例正常人（ＮＣ）的外周血自然杀伤（ＮＫ）细胞活性、Ｔ细胞亚群、血浆可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）以及外周血诱生γ干扰素（ＩＦＮ－γ）的水平进行了检测。结果显示，ＥＣ患者ＮＫ细胞活性明显降低（Ｐ＜０．０１）；ＣＤ８＋细胞增多（Ｐ＜０．０６），ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞比值降低（Ｐ＜０．０５）；ｓＩＬ－２Ｒ明显增高（Ｐ＜０．０１）；外周血诱生ＩＦＮ－γ降低（Ｐ＜０．０５）；血浆ＴＮＦ－α升高。表明，上述指标对判断、分析ＥＣ患者细胞免疫功能状况及病变程度有较大的意义。     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

细胞毒颗粒相关蛋白TIA-1在鼻NK/T细胞淋巴瘤及淋巴增生组织中的表达

目的 观察２７例鼻ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤之瘤细胞表达细胞毒颗粒相关蛋白ＴＩＡ－１的情况及其与该肿瘤的免疫表型,基因型及ＥＢ病毒感染的关系。方法 采用ＳＰ法免疫组织化学染色,选用的抗体有：ＴＬＡ－１,ＣＤ５６,ＣＤ３ε,ＣＤ４５ＲＯ,ＣＤ８和ＣＤ２０等;聚合酶链反应,作ＴＣＲγ链及免疫球蛋白ＪＨ链基因重排,ＥＢＥＲ１／２原位杂交及与ＴＬＡ－１和ＣＤ８等的双标记染色,还与１０例鼻咽淋巴增生病例进行了比较。     

再生障碍性贫血患者细胞因子水平观察

为进一步探讨细胞免疫对ＡＡ发病的影响，阐明细胞因子在ＡＡ患者中变化的基础与临床意义，采用酶联免疫试剂盒ＥＬＩＳＡ法对３８例ＡＡ患者及２０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－６，ＴＮＦα，ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定，同时采用改良ＡＰＡＡＰ法观察外周血Ｔ细胞亚群及ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，结果ＡＡ患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６，ＴＮＦαＩＦＮα及     

扩张型心肌病可溶性IL－2R、NK活性和T细胞亚群的检测

应用单克隆与多克隆双抗体夹心法检测２０例扩张型心肌病（ＤＣＭ）及２０例正常人（ＮＣ）的血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ），同时测定了外周血自然杀伤细胞（ＮＫ）活性和Ｔ淋巴细胞亚群，结果发现ＤＣＭ患者ｓＩＬ－２Ｒ明显高于ＮＣ组（Ｐ＜０．００１），而ＮＫ活性明显低于ＮＣ组（Ｐ＜０．００１），ＤＣＭ患者Ｔ细胞亚群与ＮＣ组比较，ＣＤ８降低（Ｐ＜０．０１），而ＣＤ４／ＣＤ８比值升高（Ｐ＜０．０５）。提示细胞免疫功能紊乱参与ＤＣＭ的病理过程。     

大鼠前包氏复合体区神经元的免疫细胞化学特性

用免疫细胞化学ＡＢＣ法研究了成年大鼠前包氏复合体（ｐｒｅ Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒｃｏｍ ｐｌｅｘ）区Ｌ ＥＮＫ、ＮＰＹ、ＳＰ和５ ＨＴ 等免疫阳性神经元的分布及其形态学特征。结果表明,四种免疫阳性神经元在前包氏复合体区均有分布,其中Ｌ ＥＮＫ 样免疫反应阳性细胞呈梭形、三角或多角形,胞体直径为２０～４５ μｍ ; ＮＰＹ 阳性细胞多呈梭形,直径为１５～４２ μｍ ; ＳＰ 阳性细胞多呈梭形或三角形,胞体直径为１２～２５ μｍ ,以上三种免疫阳性细胞数量多,呈密集分布。５ ＨＴ 阳性细胞呈三角形或梭形,胞体直径为１５～３８μｍ ,数量少,呈散在分布。上述结果为进一步研究该区的神经化学特性及其神经元对呼吸等功能的调控机理提供了形态学资料     

Coexistence of varying combinations of neuropeptides with 5-hydroxytryptamine in neurons of the raphe pallidus et obscurus projecting to the spinal cord

The coexistence of varying combinations of substance P (SP), somatostatin (SOM), thyrotropin-releasing hormone (TRH) and met-enkephalin-Arg-Gly-Leu (ENK) with 5-hydroxytryptamine (5-HT) as semiquantitatively revealed by immunocytochemistry in neuronal perikarya of the raphe pallidus et obscurus in the guinea-pig was analyzed. SOM coexisted most frequently with 5-HT, followed by SP, ENK and TRH. Many 5-HT neurons were immunoreactive to 2 or more peptides such as SP/SOM, SOM/ENK, SP/ENK, SOM/TRH, SP/TRH or SOM/SP/ENK. Most of these neurons were shown to project to the spinal cord by retrograde HRP labeling combined with immunocytochemistry. After hemisection of the cervical spinal cord at the C5 level, ENK and 5-HT immunoreactive nerve terminals in the ipsilateral intermediolateral nucleus of the thoracic spinal cord were decreased in number. The results indicate that neurons in the raphe pallidus et obscurus projecting to the spinal cord can be classified into subpopulations according to which peptides coexist with 5-HT, and may have different functions.     

人胚胎下丘脑与腺垂体SP、SRIF、L-ENK和M-ENK阳性细胞的发育与分布的研究

本文用免疫组化方法观察了P物质(SP)、生长抑素(SRIF)、亮啡肽(L—ENK)、甲啡肽(M—ENK)在16～40周胎儿下丘脑及腺垂体内的发育与分布。结果表明在16周胎儿下丘脑已出现SP、SRIF、L—ENK、M—ENK阳性神经元。第三脑室室管膜上皮亦呈阳性染色。下丘脑的变化以16～24周最为明显,阳性细胞主要分布于室周核、室旁核、视上核及腹内侧核。腺垂体在16周只有少量L—ENK和M—ENK阳性细胞,而SP与SRIF阳性细胞则在第17周出现,17～24周变化最为明显。本文对这几种神经肽在发育中的变化及功能进行了讨论。     

人胎阑尾IAPP-、SS-及5-HT免疫反应性细胞的免疫组织化学研究

为了探讨胰岛淀粉样多肽，在胎阑尾中的个体发及其与其他生物活性物质的关系，用免疫组织ＰＡＰ法，对３６例１２－３８周人胎阑尾中ＩＡＰＰ免疫反应性细胞，生称抑素ＩＲ细胞５－羟色胺－ＩＲ细胞进行定位研究。结果表明，肥１２周，阑尾上皮中已可见到ＳＳ－ＩＲ细胞，而ＩＡＰＰ－及５－ＨＴ－ＩＲ细胞于１４周才见到。在整个胎期，阑尾中的ＩＡＰＰ－及ＳＳ－ＩＲ细胞始络分散存在，数量较少，而５－ＨＴ－ＩＲ细胞数量随胎龄增     

文昌鱼脑泡内GnRH和5-HT神经的自调节及相互调节的形态学依据

本文用邻片免疫组织化学双标记方法，对文昌鱼脑泡中ＧｎＲＨ 和５ ＨＴ 神经自调节及相互调节的形态学基础进行了研究。结果发现，ＧｎＲＨ 阳性神经元含有ＧｎＲＨ 受体和５ ＨＴ 受体；５ ＨＴ 阳性神经元含有５ ＨＴ 受体和ＧｎＲＨ 受体。提示，文昌鱼脑泡中ＧｎＲＨ 和５ ＨＴ 神经元存在类似哺乳动物下丘脑的自调节和相互调节机制。     

人胎小肠内胰岛淀粉样多肽及5-羟色胺免疫反应细胞的个体发生

目的 探讨胰岛淀粉样多肽免疫反应(IAPP-IR)细胞和5-羟色胺(5-HT)免疫反应细胞(EC细胞)在人胎小肠中的个体发生及IAPP与5-HT的关系。方法 免疫组织化学技术。结果 胎期小肠内IAPP-IR细胞仅见于十二指肠。16周开始，在十二指肠绒毛上皮细胞间可见单个散在的IAPP-IR细胞；22～27周，其细胞数量则逐渐增多，主要分布于肠腺中。EC细胞可见于胎期小肠各段，并随着胎龄增长，其细胞密度大小依次为十二指肠、空肠、回肠。11周，在小肠3段绒毛上皮和尚未分化完全的肠腺细胞间已可见该种细胞；17～21周，数量达最多，主要分布于绒毛根部和肠腺的上皮细胞问；22周后，EC细胞呈渐少趋势。免疫组织化学邻片单染比较，未见IAPP和5-HT在同一细胞内有共存现象。结论 IAPP、5-HT在人胎小肠的内分泌细胞中已有表达。IAPP-IR细胞及EC细胞随着胎儿的发育而发生不同变化。     

人胎儿结肠及直肠内胰岛淀粉样多肽及5-羟色胺免疫反应细胞的研究

目的 探讨胰岛淀粉样多肽(IAPP)在人胎结肠、直肠中的个体发生及其与其他生物活性物质的关系。方法 用免疫组织化学SABC法，对31例9～27周人胎结肠及直肠中IAPP免疫反应(IR)细胞和5-羟色胺(5-HT)-IR细胞进行定位研究。结果 人胎9周结肠内已可见较多的5-HT-IR细胞，而IAPP-IR细胞于18周出现，直肠内5-HT-IR细胞和IAPP-IR细胞均于11周出现。随胎龄增长，5-HT-IR细胞由少至多，20周达到高峰，21周后逐渐减少；而IAPP-IR细胞在整个胎期始终分散存在，数量较少。经邻片比较观察发现，IAPP-IR细胞与部分5-HT-IR细胞定位一致。免疫组织化学双染法显示有的细胞内IAPP与5-HT共存。结论 胎儿期结肠及直肠的内分泌细胞已开始合成IAPP，并在部分细胞内IAPP和5-HT有共存。     

脑啡肽样神经元在人胎儿中脑的分布与发育研究

应用免疫组织化学方法研究了１６～４０周人胎儿中脑甲啡肽（Ｍ－ＥＮＫ）样和亮啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）样神经元的发育与分布。结果发现：于１６周时在中脑已出现两者阳性神经元，开始仅在中央灰质和黑质出现散在分布的浅染神经元，随着发育阳性神经元增加，染色加深；２０周后在动眼神经核、滑车神经核及网状核等部位出现阳性神经元，各区域中阳性大多极神经元出现较晚。ＥＮＫ在人胎儿中脑发育主要集中于１６～３２周，且Ｍ－ＥＮＫ强于Ｌ－ＥＮＫ。根据上述结果本文对ＥＮＫ在人胎儿发育中的可能功能进行了讨论。     

Immunohistochemical Localization of Substance P And Cholecystokinin in the Dorsal Root Ganglia and Spinal Cord of the Bottlenose Dolphin (Tursiops truncatus)

The presence of substance P (SP) and cholecystokinin (CCK) immunoreactive neurons was examined in the bottlenose dolphin dorsal root ganglia (DRGs) and spinal cord by immunohistochemical techniques. SP‐positive and CCK‐immunoreactive neurons were respectively ～50% and 1% of the total number of ganglion cells examined and especially belonged to small and medium‐sized cell populations. Using double labeling techniques we observed that SP‐ and CCK‐immunoreactivity coexisted in a very low number of primary afferent neurons (2.7%). Few SP‐immunoreactive (IR) neurons (2.7%) were also CCK‐positive. On the contrary, 65% of CCK‐immunoreactive neurons contained SP. Interestingly, we observed CCK‐immunoreactive satellite glial cells located around large cell class somata. Virtually no SP‐IR and CCK‐positive neurons were surrounded by peripheral CCK‐immunoreactive satellite glial cells. The SP‐IR and CCK‐positive nerve fibers were particularly conspicuous in the superficial layers of the spinal cord. The present study indicates that SP and CCK only partially overlap in the thoracic, lumbar, and caudal DRGs of the bottlenose dolphin, suggesting that the majority of SP‐IR ganglion neurons are lacking in CCK‐immunoreactivity. The role of SP‐containing DRG neurons is discussed also in relation to the huge vascular spinal retia mirabilia typical of cetaceans. Anat Rec, 293:477–484, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

人胎儿胸腺精氨酸-加压素、血管活性肠肽和5-羟色胺免疫反应细胞

目的：通过观察神经肽及生物胺在胸腺中的分布，探讨胸腺神经内分泌的性质和神经肽及生物胺在胸腺中的生物学意义。方法：应用胎儿胸腺冰冻切片，采用ＰＡＰ免疫组织化学法，行ＡＶＰ、ＶＩＰ和５－ＨＴ免疫组织化学染色。结果：在胸腺的实质和小叶间隔中均可见到ＡＶＰ、ＶＩＰ和５－ＨＴ免疫反应细胞。ＡＶＰ免疫反应细胞主要分布于被膜下皮质内，ＶＩＰ和５－ＨＴ免疫反应细胞主要分布于被膜下皮质区和皮髓质交界区。５－ＨＴ免疫反应细胞的数量为最多。结论：胎儿胸腺中存在着弥散神经内分泌细胞。它们可以产生ＡＶＰ、ＶＩＰ和５－ＨＴ，通过内分泌和旁分泌等方式，调节胸腺的生理功能。