IL-17和RANKL在胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜的表达及~(99)Tc-TDP的干预作用

目的:探讨白细胞介素17(IL-17)和细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)在胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节滑膜病变发生发展中的作用及99锝-亚甲基二膦酸盐(99Tc-TDP)的干预作用.方法:通过完全弗氏佐剂乳化的鸡Ⅱ型胶原构建CIA大鼠模型.模型大鼠随机分为模型对照组和99Tc-TDP组,99Tc-TDP组予0.05 μg·(kg·d)-1 99Tc尾静脉注射,正常对照组与模型对照组予等量生理盐水尾静脉注射.关节炎指数(AI)评分评价关节炎程度,各组大鼠用ELISA法检测血清及关节液IL-17和RANKL浓度,显微镜观察滑膜病理变化,免疫组化法半定量检测滑膜IL-17和RANKL蛋白表达.结果:与正常对照组相比,模型对照组和99Tc-TDP组血清及关节液IL-17浓度、关节液RANKL浓度、滑膜病理积分、滑膜IL-17和RANKL蛋白表达均增加(P＜0.05),99Tc-TDP组上述指标较模型对照组均降低(P＜0.05),各组血清RANKL浓度无显著性差异(P＞0.05).结论:IL-17和RANKL参与了CIA大鼠关节滑膜病变的发生发展,99Tc-TDP可能通过抑制滑膜IL-17和RANKL的表达延缓关节滑膜病变的进展.     

健脾活血补肾汤对CIA大鼠血清IL-17及OPG／RANKL表达的影响

目的通过观察健脾活血补肾汤对关节炎（collageninduced arthritis,CIA）模型大鼠血清中炎性细胞因子白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）、骨保护蛋白（osteoprotegerin,OPG）及核因子KB受体活化因子配体（receptor activator for nuclearfactor—KBligand,RANKL）表达水平的影响,探索健脾活血补肾汤保护强直性脊柱炎关节骨质破坏潜在的分子药理机制。方法利用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原建立大鼠关节炎（CIA）模型,自造模成功后第3天起分别按健脾活血补肾汤高、中、低剂量给药组及生理盐水给予大鼠灌胃处理,每天1次,连续灌胃30d,处死大鼠,心脏采血取血清,用ELISA夹心法检测大鼠血清中IL～17、0PG及RANKL表达水平。结果健脾活血补肾汤高、中、低各剂量组CIA大鼠血清IL－17及RANKL水平均较模型组明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;而OPG水平较模型组显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论健脾活血补肾汤可能通过降低CIA模型大鼠血清中IL－17及RANKL表达水平,升高OPG表达水平,而起到延缓关节炎性损伤所致的骨质破坏的作用。     

RANKL/OPG系统与大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎发病的关系及99锝-亚甲基二膦酸盐的干预作用

探讨核因子κB受体活化因子配体/骨保护素（RANKL/OPG）系统与大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎（CIA）发病的关系及⁹⁹锝-亚甲基二膦酸盐（⁹⁹Tc-MDP,商品名：云克）的干预作用。除正常对照组（n=8）外,其余大鼠建立CIA模型,随机分为模型组、甲氨蝶呤（MTX）组和云克组。采用关节炎指数（AI）评分评价关节炎程度;ELISA法检测关节液RANKL、OPG水平;观察膝关节病理变化;免疫组化法检测膝关节滑膜RANKL、OPG表达。结果表明,与正常对照组相比,模型组及干预组AI评分、关节液RANKL和OPG浓度、膝关节滑膜RANKL和OPG表达均显著增加（P<0.01）,干预组上述指标均明显低于模型组（P<0.01）,云克组明显低于MTX组（P<0.01）。结果表明,RANKL/OPG系统参与了大鼠CIA关节破坏的发生发展;云克可能通过抑制CIA大鼠的RANKL、OPG表达、降低RANKL/OPG比值起延缓关节破坏的作用,其起效时间明显早于甲氨蝶呤。     

UC-MSC移植对CIA大鼠炎症因子表达水平的调控作用

目的观察脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymalstemcells,UC—MSC）移植对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠血清白介素-1（IL-1）、IL-10、IL-17、IL-18表达水平的影响,以探讨UC—MSC移植对CIA大鼠炎症因子的调控作用。方法90只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、UC—MSC治疗组,每组各30只：采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型;治疗前后采州关节炎指数（AI）评分对大鼠关节炎症进行评估;以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠治疗前后血清IL-1、IL—10、IL-17、IL—18水平变化。结果模型组血清IL-1、IL-17、IL—18水平均明显高于同期空向对照组,而IL—10水平则低于同期空白对照组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）：UC—MSC治疗组治疗后第1、3周时IL-1、IL-17、IL—18水平低于同期模型组,IL—10水平高于同期模型组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;至第5周上述指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论CIA大鼠存在免疫功能紊乱,其促炎症因子水平显著增高,抑炎症网子降低;UC—MSC能下调CIA大鼠促炎症因子水平,而上渊炎症抑制因子,减轻机体免疫性炎症反应,促进疾病缓解．     

重组血管活性肠肽基因质粒治疗大鼠胶原性关节炎的研究

目的：观察重组血管活性肠肽（pcDNA3．1＋／VIP）质粒治疗胶原诱导的大鼠关节炎（CIA）对血清TNF—α、IL～2、IL-4表达的影响和病理变化，探讨VIP基因治疗类风湿性关节炎的效果及可能机制。方法：以Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎作为CIA模型，重组血管活性肠肽质粒关节腔内注射治疗CIA，以双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC—ELISA）检测血清TNF—α、IL-2和IL-4的表达，观察病理变化和整体疗效。结果：①病理切片显示CIA模型组炎性细胞浸润明显，并存在骨和软骨破坏，VIP治疗组可显著减轻关节炎性病理改变；②细胞因子测定显示：与正常组相比，各对照组血清TNF—α、IL-2水平显著升高（P〈0．05），IL-4水平减低（P〈0．05）；与各对照组相比，各重组VIP质粒治疗组血清TNF—α和IL-2表达水平均明显降低（P〈0．05），IL-4表达则升高（P〈0．05）。结论：血管活性肠肽基因质粒关节腔内注射治疗大鼠CIA具有显著的疗效，有望成为RA的有效治疗手段。     

高脂饲料对胶原诱导关节炎大鼠关节的影响

目的通过比较不同饮食对胶原诱导关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠关节的影响,明确高脂饲料对关节炎的作用。方法选用Wistar大鼠建立关节炎模型,给予普通和高脂饲料,观察不同饮食条件下大鼠关节炎指数积分、滑膜HE染色以及检测血清中血脂和炎症因子的浓度。结果与普通饲料CIA大鼠组比较,高脂饲料的CIA大鼠关节炎指数积分增加且持续加重,病理切片的滑膜增生层次、血管翳形成和炎性细胞浸润均明显增高,高脂饲料CIA组血清中TC、LDL-C水平明显升高（P〈0.01）,而HDL-C则明显降低（P〈0.05）,前炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-17的浓度也明显升高（P〈0.05）。结论高脂饲料可能通过增强滑膜增生和促进炎症因子来促进CIA关节炎的进展。     

基于NF-κB/NLRP3信号轴探讨大血藤对CIA大鼠的治疗作用及机制

目的 考察大血藤对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的症状改善作用和机制.方法 建立大鼠CIA模型,持续观察大鼠体质量、关节肿胀度、关节炎指数,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平;Western blot法检测大鼠关节滑膜RANKL、p-IκB-α、NF-κB/p65、p-NF-κB/p65...     

药用爬山虎对CIA大鼠血清IL-17和关节滑膜细胞NF-κB表达的影响

目的:探讨药用爬山虎对牛II型胶原诱导性关节炎大鼠(CIA)关节滑膜细胞核周因子-κB(NF-κB)表达及血清IL-17水平的影响。方法:将40只6周龄雌性wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、雷公藤多苷对照组和爬山虎治疗组各10只。除空白对照组外,其余各组建立CIA模型,造模第7天开始予爬山虎汤剂和雷公藤水溶液灌胃治疗,连续用药4周,空白对照组和模型对照组灌服等量生理盐水,于末次给药2h后采集血清,处死大鼠,摘取双后肢膝关节分离滑膜,采用ELISA检测血清IL-17的表达,Western-blot检测关节滑膜NF-κB/P65的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清IL-17表达增加,爬山虎和雷公藤能够明显降低IL-17的表达(P0.05);模型对照组大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65蛋白水平明显高于空白对照组(P0.05),爬山虎与雷公藤多苷治疗组均能降低CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65的表达,两组无显著性差异(P0.05)。结论:药用爬山虎能够降低CIA模型大鼠血清IL-17的表达,下调关节滑膜细胞NF-κB的蛋白水平。     

核因子-κB寡脱氧核苷酸策略对胶原诱导关节炎大鼠细胞因子调节研究

目的: 探讨核因子-κB(NF-KB)寡脱氧核苷酸(ODN)局部应用对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及机制。方法: 建立Ⅱ型CIA大鼠模型,用NF-κB圈套ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设空白对照组、CIA模型组和实验组。42 d后观察各组关节炎指数、病理指标,采用酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠血清和关节液中白细胞介素(IL)-17、IL-12和转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果: 与空白对照组比较,CIA模型组大鼠血清和关节液中IL-17和IL-12水平均明显升高,而TGF-β水平显著降低(P<0.01),而实验组经NF-κB圈套ODN注射后,与CIA模型组比较,血清和关节液中IL-17和IL-12水平均明显降低,而TGF-β水平显著升高(P<0.01)。结论: NF-κB圈套ODN明显抑制CIA大鼠外周血和关节液中IL-17、IL-12的产生,促进TGF-β水平的增加,对CIA有较好的治疗作用。     

加味芍甘附子汤对CIA大鼠血清IL-6、IL-10含量的影响

目的观察加味芍甘附子汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠血清IL-6、IL-10含量的影响,并借以探讨本方治疗RA的作用机理。方法SD雄性大鼠50只随机分为空白组（A组）、模型组（B组）、甲氨喋呤组（C组）、旭痹颗粒组（D组）、加味芍甘附子汤组（E组）。除A组外,其余4组分别给予每只大鼠尾根部皮内注射CⅡ乳剂0．1mL,10天后加强注射0．1mL,诱导成关节炎模型。从造模后第20天起开始给予相应药液灌胃,A、B组：清洁水,1次／日;C组：甲氨喋呤水溶液,1次／周;D组：旭痹药液,1次／日;E组：加味芍甘附子汤药液（1．5g/mL）,1次／日。连续用药35天。用酶联免疫法测定其血清中IL-6、IL—10的含量。结果加味芍甘附子汤能明显降低CIA大鼠血清中IL-6的含量,与旭痹颗粒组及甲氨蝶呤组相比均有显著性差异（P〈0．01）;在提高CIA大鼠血清中IL—10的含量方面与甲氨蝶呤相似无明显差异（P〉0．05）;在改善大鼠全身及关节局部症状方面,治疗组及药物对照组均优于模型组,其中以加味芍甘附子汤组最为明显。结论加味芍甘附子汤能明显改善CIA大鼠的全身和关节局部症状,其作用机理可能与抑制血清IL-6、IL—10等炎症介质的产生有关。     

雌激素对胶原诱导关节炎动物模型发病过程的作用

目的    研究雌激素对胶原诱导关节炎（CIA）发病过程的影响以及对肽基精酰胺脱亚胺基酶4（PADI4）和TXNDC5表达的影响。方法    雄性Lewis大鼠29只随机分成4组：正常对照组（H组,n=6）、CIA模型组（C组,n=8）、雌激素干预组（T组,n=8）和雌激素组（E组,n=7）。皮下注射牛Ⅱ型胶原（CⅡ）建立CIA模型,其间进行雌激素干预。ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNFα）、白介素-1β(IL-1β)和血管内皮生长因子（VEGF）的含量;免疫组织化学法、Western-blot法和real-time PCR法检测滑膜中PADI4和TXNDC5的表达。结果    与C组相比,T组的关节炎发病时间约延缓6d（P=0.045）,炎症程度和发病率无显著差异;TNFα和IL-1β的含量无明显改变,VEGF含量明显升高（P=0.023）;T组滑膜组织异常增殖并伴毛细血管增生,PADI4主要表达于滑膜衬里及侵润的炎性细胞,TXNDC5主要分布于滑膜衬里及毛细血管的内皮细胞。雌激素明显刺激CIA滑膜中TXNDC5的表达（P＜0.05）,但对PADI4的表达无显著影响。结论    雌激素虽然能延缓关节炎的发病时间,但可能通过上调TXNDC5的表达,刺激类风湿关节炎（RA）滑膜毛细血管增生。     

uPAR反义RNA质粒对胶原型大鼠滑膜细胞外基质影响的初步研究

目的：初步探讨uPAR反义RNA表达质粒对CIA大鼠滑膜细胞外基质的影响。方法：50只雌性大鼠,其中10只为正常对照组,不做任何处理,其余40只建立Ⅱ型胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎模型,分为4组,每组10只,为造模对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组、重组质粒治疗组,后3组踝关节分别注射生理盐水、空质粒及uPAR反义RNA表达质粒,观察大鼠一般情况、关节炎指数,病理变化及免疫组织化学法检测踝关节滑膜uPAR、MMP-3的表达。结果：随着CIA免疫时间的延长,造模对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组关节炎指数评分逐渐增加迅速,而重组质粒治疗组关节炎指数评分增加缓慢;与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜,滑膜轻度增厚,滑膜新生血管开始增多,大量炎性细胞浸润、增生,免疫组织化学显示：模型对照组、生理盐水组及空质粒组之间无统计学意义（P〉0．05）,模型对照组、生理盐水组、空质粒组与重组质粒治疗组之间差异有统计学意义（P〈0．01）,MMP-3的表达正常大鼠与模型对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,模型对照组与重组质粒治疗组之间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：uPAR反义RNA表达质粒能抑制细胞外基质的降解,为类风湿性关节炎的治疗提供理论依据。     

Th17细胞及相关细胞因子在类风湿关节炎中醮检测及临床意义

目的 探讨IL-6、IL-17在类风湿关节炎（RA）患者外周血及关节液中的表达及临床意义.方法 RA患者51例为RA外周血组,其中15例为RA关节液组,30例健康者作为对照组,IL-6及IL-17采用ELISA方法检测.结果 RA外周血组及关节液组具有较高的IL-6、IL-17检测值（P ＜ 0.05）.ESR、RF、CRP与RA外周血及关节液中IL-6呈显著正相关,RA患者关节液中IL-17与RA各观察指标呈正相关（P ＜ 0.05）.结论 RA患者的IL-6、IL-17在其外周血及关节液中的过度表达提示其在RA的发病过程中可能发挥着重要的作用.     

羌活地黄汤对胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞IL-17及RANKL表达的影响

目的:观察羌活地黄汤含药血清对胶原性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡的影响,探讨羌活地黄汤抑制滑膜增生的机制。方法:分别予新西兰大白兔灌胃羌活地黄汤、独活寄生汤,制备药物血清。选择10只雌性SD大鼠,6只建立牛Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型,分离培养成纤维样滑膜细胞,分为模型组、羌活地黄汤组和独活寄生汤组;另4只作为正常组(用等量生理盐水)。正常组、模型组细胞均加入5%DMEM血清的培养液;羌活地黄汤组和独活寄生汤组,分别加入含10%相应含药血清的DMEM培养液。采用MTT法检测滑膜细胞增殖,ELISA法检测IL-17、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达浓度。结果:羌活地黄汤含药血清可抑制滑膜细胞的增殖,与模型组相比差异有统计学意义(P0.05);同时羌活地黄汤还可抑制IL-17、RANKL的表达(P0.05)。结论:羌活地黄汤治疗类风湿关节炎的作用机制可能与抑制成纤维样滑膜细胞的增殖及降低IL-17、RANKL的表达有关。     

亚砷酸对佐剂性关节炎大鼠治疗作用的实验研究

目的:探讨亚砷酸对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用。方法:40只成功造模大鼠随机分成4组:正常对照组(NC组)、模型组(M组)、低剂量亚砷酸组(LSA,1.5mg.kg-1.d-1)、高剂量亚砷酸组(HSA,3.0mg.kg-1.d-1)。免疫组化、原位杂交方法检测各组RANKL蛋白及其mRNA的表达;HE染色观察各组滑膜组织形态变化。结果:与NC组比较,M组RANKL蛋白及其mRNA大量表达(P<0.01);与M组比较,LSA组及HSA组RANKL蛋白及其mRNA表达降低(P<0.01),且HSA组更明显。结论:亚砷酸对类风湿性关节炎有一定的治疗作用;其作用机制可能为下调RANKL蛋白及其mRNA的表达。     

青蒿琥酯对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的：观察青蒿琥酯对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的动物模型-胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠滑膜细胞的影响,探讨其对RA的作用机制。方法：雄性Wistar大鼠皮内注射Ⅱ型胶原,建立CIA大鼠模型,然后取其滑膜组织用胶原酶消化法进行原代培养。取3~5代的传代细胞,进行后续实验。流式细胞仪检测青蒿琥酯和甲氨喋呤对滑膜细胞凋亡率的影响,电镜观察青蒿琥酯作用下滑膜细胞的形态。结果：青蒿琥酯高、中浓度可导致滑膜细胞的凋亡率增加（P〈0.05）,电镜下可以观察到青蒿琥酯引起滑膜细胞凋亡。结论：青蒿琥酯对实验性RA的作用与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

胶原诱导关节炎大鼠CD44和Fas／FasL的表达

目的了解胶原诱导关节炎（CIA）大鼠血清及滑膜CD44、Fas／FasL的变化及其在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用。方法选取雌性Wistar大鼠40只,随机分为对照组8只,CIA组32只。对照组不做任何处理,CIA组建立CIA模型,30d后测定关节炎指数（AI）,用ELISA法检测血清CD44、Fas和FasL水平,RT—PCR检测滑膜CD44水平,免疫组化法检测滑膜Fas、FasL水平。结果CIA组大鼠血清CD44和Fas、FasL水平均高于对照组,差异有显著性（t=11．917～195．960,P〈0．01）;滑膜CD44、Fas的表达亦明显高于对照组,而滑膜FasL的表达低于对照组,差异有显著性（t=6．916～20．264,P〈0．01）。CIA组大鼠血清CD44、Fas／FasL水平与AI呈正相关（r=0．603、0．485,P〈0．05）,血清CD44水平与Fas／FasL水平呈正相关（r=0．533,P〈0．05）。结论CD44可能通过上调Fas的表达、下调FasL的表达,使得Fas和FasL结合减少,从而引起细胞凋亡减少,导致滑膜增生,参与RA的发病过程。     

针刺对佐剂性关节炎大鼠滑膜肥大细胞脱颗粒和类胰蛋白酶表达的影响

目的：观察针刺对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织病理改变、滑膜肥大细胞脱颗粒及类胰蛋白酶表达的影响,探讨肥大细胞功能与针刺治疗大鼠佐剂性关节炎的关系。方法：46只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（n=16）、模型组（n=15）和针刺组（n=15）。除正常对照组外,其余大鼠通过足垫部注射0.1mL弗氏完全佐剂建立佐剂性关节炎模型。针刺组隔天针刺双侧足三里、悬钟、肾俞穴,每次15min,共8次。治疗期间,正常对照组和模型组除不予针刺外,其余处理均同针刺组。设造模当天为实验第0天,之后每3天对大鼠的体质量和足跖体积进行测量并记录。治疗结束后,取所有大鼠右后踝关节滑膜组织,HE染色后根据滑膜病理5级评分法评价滑膜组织病理改变,甲苯胺蓝染色法观察滑膜肥大细胞数量及其脱颗粒情况,免疫组织化学法检测类胰蛋白酶在滑膜组织中的表达情况。结果：与模型组比较,针刺组大鼠治疗后体质量明显增加（P〈0.05）,足跖体积明显减小（P〈0.01）。HE染色显示,针刺可显著减轻佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中的炎细胞浸润、滑膜细胞增生和滑膜纤维组织增生等病理表现（P〈0.05）;甲苯胺蓝染色显示,与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜肥大细胞数量和脱颗粒率均明显增加（P〈0.01）,而针刺组大鼠滑膜肥大细胞数量和脱颗粒率的上升得到有效抑制,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;免疫组织化学检测显示,针刺可显著抑制佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中上调的类胰蛋白酶表达（P〈0.01）。相关分析显示,滑膜肥大细胞数量及脱颗粒率均与滑膜组织病理改变总评分呈明显的正相关（P〈0.01）。结论：针刺具有治疗大鼠早期佐剂性关节炎和调节滑膜肥大细胞功能的作用,由于两者间存在明显的正相关性,因此针刺可能通过抑制滑膜肥大细胞功能,对佐剂性关节炎大鼠起治疗作用。     

四妙丸对高脂饮食胶原诱导关节炎大鼠血脂及关节的影响简

目的 比较四妙丸和甲氨蝶呤对高脂饲料胶原诱导关节炎（CIA）大鼠的影响,明确四妙丸对关节炎和血脂的影响.方法 选用Wistar大鼠建立高脂饲料的关节炎模型,观察四妙丸和甲氨蝶呤两种治疗4周后大鼠关节炎指数积分、滑膜HE染色以及检测血清中血脂和炎症因子的浓度.结果 CIA大鼠经甲氨蝶呤和四妙丸治疗后关节炎指数积分均明显下降,病理切片的滑膜增生层次和炎症细胞浸润均明显改善.与甲氨蝶呤组比较,四妙丸组血清中总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低（P＜0.01）,而高密度脂蛋白胆固醇则明显升高（P＜0.01）;前炎症因子肿瘤坏死因子-α浓度下降（P＜0.05）,而白介素-17浓度则明显升高（P＜0.05）.结论 四妙丸可能兼具有抑制免疫和降低血脂的作用来阻止CIA的进展.