固定化细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

采用聚乙烯醇、卡拉胶和聚丙烯酰胺为混合载体固定化埃希菌AEM0812细胞.以8.0％聚乙烯醇、1.0％卡拉胶和10％聚丙烯酰胺作为载体,菌体浓度为30％,在pH 7.0、含4.0％氯化钾的饱和硼酸溶液(成型剂)中处理36h,得相对酶活力为98.17％且较稳定的颗粒型固定化细胞,用来催化转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷,在54℃、pH 6.5和缓冲液离子浓度120 mmol/L的最适条件下,阿糖尿苷的转化率为68％.固定化细胞连续5次反应的平均转化率约54.3％.     

化学酶法合成抗病毒药物2'''',3''''-双脱氧腺苷

2’,3’-双脱氧腺苷(ddA)具有良好的抗病毒作用。以胸苷为起始原料,经由酰化、环化、开环、催化加氢生成2’,3’-双脱氧胸苷(ddT),然后ddT和腺嘌呤在胡萝卜软腐欧文氏杆菌的作用下转化成胸腺嘧啶和ddA。结果显示在最佳酶反应条件如下:反应温度55℃,磷酸盐缓冲液pH值8.0,磷酸盐缓冲液浓度50 mmol/L,底物20 mmol/L,菌体量10%时,48 h转化率达54.2%。     

用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖

目的探索用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖的最优条件。方法以海藻酸钠为载体把氧化葡萄糖酸菌固定化,考察固定化细胞在不同转化条件时对底物的转化率。结果通过条件优化,确定固定化细胞转化时间为24 h,底物质量浓度为10 g.L-1,采用的海藻酸钠质量浓度为40g.L-1,菌体包埋量为每g凝胶包埋3.1 g菌体,最适pH为7.0,最适温度为28℃,摇床转速要求高于100r.min-1;用60mmol.L-1的MnCl2替代原转化液中20mmol.L-1的MgSO4;固定化细胞与原游离细胞工艺相比,24h内底物转化率由原来的47%上升到93%,连续转化10次后,转化率仍为38%。结论用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖,转化率提高46%并能连续转化约10次。     

固定化黑曲霉细胞与固定化葡萄糖异构酶生产高含量低聚果糖

目的 :研究固定化黑曲霉细胞与葡萄糖异构酶协同反应生产高含量低聚果糖的优化条件。方法 :以磷酸化的PVA 海藻酸钙为载体包埋黑曲霉细胞 ,与固定化的葡萄糖异构酶协同反应 ,以蔗糖为原料转化生产低聚果糖。结果 :7.5 %PVA ,1.0 %海藻酸钠包埋 10 %黑曲霉细胞 ,在 pH 6 .7的饱和硼酸 0 .75 %BaCl2 中成型 ,于 0 .7mol/LNaH2 PO4 中强化 1h。与固定化的葡萄糖异构酶一同在 5 0℃ ,pH 7.0条件下与 40 %蔗糖溶液反应 3.5h。重复反应 5批 ,平均转化率为 5 7%。结论 :用优化条件制得的固定化细胞与葡萄糖异构酶协同转化生产低聚果糖 ,重复利用性好 ,且转化率高于单独使用黑曲霉     

固定化细胞批式反应生产杆菌肽的研究

本实验在发酵工艺中，应用了细胞固定化技术生产杆菌肽，比较了五种细胞固定化方法，结果表明用聚丙烯酰胺凝胶包埋细胞的方法生产杆菌肽效果较好。采用固定化细胞批式反应生产杆菌肽，批反应时间28小时，固定化细胞连续使用6批，平均批反应生物效价132u/ml，单批最高生物效价为263u/ml。     

利用κ-卡拉胶-魔芋多糖复配胶固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ-卡拉胶-魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷(AR)生产三磷酸腺苷(ATP).采用HPLC法分析固定化细胞反应过程核苷(酸)的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化.固定化细胞反应1 h,ATP转化率接近100%.底物溶液灭菌和添加NAD+后,该固定化酵母细胞可反复使用12次,ATP的转化率稳定维持在95%以上.     

固定化大肠杆菌和悬浮大肠杆菌的代谢和氧供给的关系

已经证明,完整细胞的固定化在发酵系统中能提高产物合成量,促进产品的回收.例如Galazzo和Bailey报道固定化啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在包埋床反应器中生长时,乙醇产量比悬浮细胞高45%,葡萄糖吸收是悬浮细胞的2倍,但固定化细胞的比生长率低.Zhang等报道在包埋床反应器中,大肠肝菌在藻酸钙包被的玻璃珠内生长时,经诱导后,每个细胞合成的β-半乳糖苷酶是悬浮细胞的1.6倍(需氧生长时)和4.9倍(微氧生长时).以甘油为碳源时,固定化细胞的细胞产量是悬浮细胞的一半,甘油消耗加倍,乙酸、丙酮酸和乳酸的产量增加.     

固定化β-葡萄糖苷酶制备人参皂苷F_1的研究

本文探讨了β-葡萄糖苷酶的固定化方法,及利用固定化β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rg1为人参皂苷F1的转化工艺。确定交联-包埋法为最佳固定化方法,应用正交实验得出最佳制备条件为:交联时间3h,戊二醛浓度0.1%,海藻酸钠浓度1%,CaCl2浓度2%。固定化酶与游离酶在热稳定性和pH值稳定性方面显示出不同的性质,其中固定化β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH值为5.5。固定化β-葡萄糖苷酶在15℃环境中保存30d后,酶活回收率为68.82%。固定化β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rg1为人参皂苷F1的转化条件为:固定化酶承载量为3.76U/g固定化酶载体,底物浓度为0.2mg/mL,转化温度为40℃,转化周期为2d,转化次数为4次,平均转化率为80.49%。     

细胞质胸苷激酶在普外科恶性肿瘤中的研究进展

细胞质胸苷激酶(TK1)是嘧啶合成补救途径的关键酶,催化脱氧胸苷合成脱氧1-磷酸胸苷酸,从而参与DNA合成。TK1是一种细胞周期依赖性标志物,其在细胞周期的G1期和S期交界处开始升高,G2期最高。正常成人体内TK1含量极微,而恶性肿瘤患者由于病变细胞缺失调亡调控,DNA合成剧增,导致TK1水平的异常升高。目前TK1已被广泛用于恶性增殖疾病的诊断、疗效监测和预后判断。该文就TK1在普外科恶性肿瘤中的研究做一简要综述。     

两相体系中固定化细胞生物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇

建立了在有机/水两相体系中固定化酵母细胞牛物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的方法.考察了有机溶剂、缓冲液pH、底物浓度、温度、转化时间、辅助底物对转化率和对映体过量值(ee)的影响.结果显示,采用辛烷-缓冲液两相体系,缓冲液pH 8,初始底物浓度5.55 mmol/L,30℃转化36 h,转化率和产物的ee值分别为93.2%和96.3%.添加与底物等当量的葡萄糖或蔗糖作为辅助底物,固定化细胞可以反复使用6次,转化率维持在50%以上.     

固定化谷氨酸脱羧酶转化γ-氨基丁酸的研究

目的用固定化谷氨酸脱羧酶转化制备γ-氨基丁酸(GABA)。方法以海藻酸钠与明胶为协同作用载体包埋固定化酶,考察影响固定化酶活性的因素,获得固定化酶的优化条件,并将酶应用于制备GABA。结果海藻酸钠、明胶、氯化钙和戊二醛浓度分别为2.5%,1.0%,3.0%和0.3%,硬化时间4 h,固定化酶的相对活性最高,酶活回收率达到65.3%。以谷氨酸为底物,固定化谷氨酸脱羧酶为催化剂,采用填充床反应器连续制备GABA,连续反应60 h,酶相对活性仍保持在初始值的76.9%,谷氨酸转化率为98.7%。结论该固定化谷氨酸脱羧酶可应用于生物转化法连续制备GABA。     

固定化青霉素笔酥化酶在DMSO—水介质中催化合成头孢氨苄

与传统的化学方法相比较,酶法合成头孢菌素工艺具有明显优点,通过酶的固定化与非水相酶催化技术相结合为提高产率找到了简捷的途径。实验以7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸（7-amino-3-deactoxy-cephalosporanic,7-ADCA）为母核,苯甘氨酸甲酯盐酸盐（D-phenylglycine methly ester chlorohydrate,PGME)为酰基供体,在二甲亚砜（DMSO）-水共溶剂体系中,采用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶（penicillin acylase EC3.5.1.11,PA）催化合成头孢氨苄（Cephalexin）。发现DMSO浓度、反应温度、pH、底物浓度等对转化率均有影响。在25℃,pH6.5。40%DMSO-水体系中,7-MDCA、PGME浓度分别为85mmol/L,128mmol/L时,7-ADCA转化率达90%,在15次反复合成Cephalexin期间,转化率保持90%以上。     

埃希菌全细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16S rDNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.).该菌株的最适生长温度与产酶温度均为37℃,最适产酶pH为7.5～8.0,通气培养最佳产酶的发酵时间为8～9 h.利用该菌全细胞建立了以阿糖尿苷为底物酶促合成阿糖腺苷的反应体系,成功得到阿糖腺苷.优化反应条件,并进行了100 L放大试验,结果阿糖尿苷转化率为78.17%,反应液中阿糖腺苷浓度为9.38 g/L.     

利用κ—卡拉胶—魔芋多糖复配交固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷（ＡＲ）生产三磷酸腺苷（ＡＴＰ）。采用ＨＰＬＣ法分析固定化细胞反应过程核苷（酸）的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化。固定化细胞反应１ｈ,ＡＴＰ转化率接受１００％。底物溶液灭菌和添加ＮＡＤ＾＋后,该固定化酵母细胞可反复使用１２次,ＡＴＰ的转化率稳定维持在９５％以上。     

酶法制备头孢克洛的工艺优化

通过使用合成用固定化青霉素酰化酶对7-ACCA 转化制备头孢克洛的实验研究；在对酶促反应的关键参数：底物质 量浓度、反应温度、反应pH 进行优化后，得出在底物质量浓度175.81g/L、转化温度13.9℃、转化pH6.43 的条件下，合成用固 定化青霉素酰化酶转化7-ACCA 制备头孢克洛效果最佳，转化率可达98% 左右，收率保证在95% 以上，通过HPLC 图谱将头 孢克洛精品与头孢克洛标准品的数据进行了对比，同时对固定化酶的稳定性也进行了检测。     

卡培他滨的药理特性及临床应用进展

卡培他滨 (capecitabine)是一种极具潜力的选择性肿瘤内激活的口服氟尿嘧啶氨基甲酸酯类抗肿瘤药物 ,它通过肝脏和肿瘤内的 3种酶转化为氟尿嘧啶 (FU)。本品口服后完整地通过胃肠壁 ,首先经肝脏羧酸酯酶催化代谢为 5’ 脱氧 5 氟胞苷 (5’ deoxy 5 fluorocytidine,5’ DFCR) ,然后经肝脏和肿瘤细胞中的胞苷脱氨酶催化转化为 5’ 脱氧 氟尿嘧啶 (5’ deoxy 5 fluorouridine,5’ DFUR) ,最后经胸苷磷酸化酶 (thymidinephosphorylase,TP)催化转化为氟尿嘧啶 (FU)而发挥细胞毒作用。卡培他滨临床用于晚期转移性乳腺癌 ,结、直肠癌以及其他实体瘤的治疗 ,具有良好的抗肿瘤作用和极少的不良反应。本文主要对卡培他滨的药理作用特性、药动学和临床应用进展等作一综述。     

腺苷脱氨酶的临床意义

<正> 腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷代谢中的重要酶类,不可逆地催化腺苷或脱氧腺苷成为次黄嘌呤核苷或脱氧次黄嘌呤核苷为核酸代谢所必需。此酶广泛分布于人体各种组织及细胞中,以淋巴细胞中含量最高。近年来,ADA测定的临床应用更加广泛,现就其在结核性脑膜炎(简称结脑)、结核性胸(腹)膜炎、肝病、流行性出血热     

用麦迪霉素产生菌变株的固定化细胞研究螺旋霉素的丙酸化

用海藻酸钙包埋麦迪霉素产生菌的一株无活性变株var.T100,经培养后得到固定化var.T100细胞,成功地使螺旋霉素转化为C_4~″-O-单丙酰螺旋霉素,转化率可达30％以上,且连续发酵批次可达6次。发酵周期比游离菌丝缩短一半。 固定化var.T100细胞适宜转化条件:菌丝浓度为0.05％的固定化细胞经36小时培养增殖,在pH5左右的培养基中转化;固化细胞浓度为60ml/100ml培养基:螺旋霉素浓度为200γ/ml :最适温度为28℃,但在28℃～37℃的范围内影响不大。     

固定化嗜热脂肪芽孢杆菌生产1,6-二磷酸果糖的研究

采用卡拉胶包埋嗜热脂肪芽孢杆菌，制成块状固定化细胞，对固定化细胞包埋方法及其用于生产1，6－二磷酸果糖（FDP）的工艺条件作了探索，在固定化细胞包埋前，包埋后及用于生产FDP 10批次后采用活化培养工艺，均可提高固定化细胞生产FDP的能力，转化培养液中的FDP产量达到40－65mg/ml，固定化细胞用于生产FDP的批次可达到20次左右。     

固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A的研究

目的利用固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A。方法使用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶为复合载体包埋产氨短杆菌细胞,正交试验确定凝胶配方;正交试验确定合成辅酶A的前体配方;同时考察不同pH、不同表面活性剂对固定化细胞合成辅酶A的影响。结果最佳的凝胶配方为:卡拉胶1.0%,魔芋胶0.4%,刺槐豆胶0.4%;最佳前体配方为:泛酸钙0.3%,半胱氨酸0.3%,ATP 2%;最适pH值为7.0;最适表面活性剂为苯扎溴铵,添加量为0.05%。固定化细胞重复使用8次后,合成辅酶A的活性仍保持在50%以上。结论用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶作为复合载体制备的固定化产氨短杆菌细胞,合成辅酶A的能力较高,稳定性较好,具有应用价值。