固定化细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

采用聚乙烯醇、卡拉胶和聚丙烯酰胺为混合载体固定化埃希菌AEM0812细胞.以8.0％聚乙烯醇、1.0％卡拉胶和10％聚丙烯酰胺作为载体,菌体浓度为30％,在pH 7.0、含4.0％氯化钾的饱和硼酸溶液(成型剂)中处理36h,得相对酶活力为98.17％且较稳定的颗粒型固定化细胞,用来催化转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷,在54℃、pH 6.5和缓冲液离子浓度120 mmol/L的最适条件下,阿糖尿苷的转化率为68％.固定化细胞连续5次反应的平均转化率约54.3％.     

胸苷酸合成酶抑制剂的研究进展

胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是DNA合成的关键酶,当胸苷酸合成酶受到抑制时会导致细胞因缺乏dTMP而使DNA合成受阻,进而导致细胞死亡.因此,多年来胸苷酸合成酶作为抗肿瘤药物研究的理想靶点,一直受到药物研发人员的广泛关注.近年来,已有多种胸苷酸合成酶抑制剂作为有效的抗肿瘤化合物被报道....     

酶法合成2’—脱氧—5—氟尿苷

本文采用大肠杆菌核苷磷酸化酶，以5-氟尿嘧啶（FU）、2’-脱氧尿苷（dU)和磷酸盐为底物酶法合成2’-脱氧-5-氟尿苷，实验结果表明，含10mmol/L dU、30mmol/L FU、10-30mmol/L磷酸盐的混合物加入5%培养24h的大肠杆菌湿菌体于pH7.0反应3h，底物dU的转化率可达45.9%。     

抗肿瘤药物2''''-脱氧-5-氟尿苷合成研究

目的合成抗肿瘤药物2'-脱氧-5-氟尿苷.方法以5-氟尿嘧啶核苷为原料,经丙酰澳酰化溴代得2'溴代-3',5'-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,然后氢化得产物2'-脱氧-3',5'-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,最后经皂化合成2'-脱氧-5-氟尿苷.结果以5-氟尿嘧啶核苷为起始原料经3步反应合成了2'-脱氧-5-氟尿苷.结论本合成方法工艺简便,原料易得,条件温和,总收率为72.0%,适于工业制备.     

埃希菌全细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16S rDNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.).该菌株的最适生长温度与产酶温度均为37℃,最适产酶pH为7.5～8.0,通气培养最佳产酶的发酵时间为8～9 h.利用该菌全细胞建立了以阿糖尿苷为底物酶促合成阿糖腺苷的反应体系,成功得到阿糖腺苷.优化反应条件,并进行了100 L放大试验,结果阿糖尿苷转化率为78.17%,反应液中阿糖腺苷浓度为9.38 g/L.     

2''''-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺改进

目的:改进2'-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺。方法:参照文献方法,以氟尿嘧啶为起始原料,经硅醚化、缩合、溴化、氢化和皂化等工艺合成2'-脱氧-5-氟尿苷,并对其关键步骤进行了改进。结果:该合成工艺对2'-脱氧-5-氟尿苷有较高的收率,总收率为34.31%。结论:工艺更趋于合理,操作条件更为简单,三废易于处理,适合于工业化生产。     

抗肿瘤药物2′-脱氧-5-氟尿苷合成研究

目的:合成抗肿瘤药物2′-脱氧-5-氟尿苷。方法:以5-氟尿嘧啶核苷为原料,经丙酰溴酰化溴代得2′-溴代-3,′5′-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,然后氢化得产物2′-脱氧-3,′5′-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,最后经皂化合成2′-脱氧-5-氟尿苷。结果:以5-氟尿嘧啶核苷为起始原料经3步反应合成了2′-脱氧-5-氟尿苷。结论:本合成方法工艺简便,原料易得,条件温和,总收率为72.0%,适于工业制备。     

2＇-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺改进

目的：改进2＇-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺。方法：参照文献方法,以氟尿嘧啶为起始原料,经硅醚化、缩合、溴化、氢化和皂化等工艺合成2＇-脱氧-5-氟尿苷,并对其关键步骤进行了改进。结果：该合成工艺对2＇-脱氧-5-氟尿苷有较高的收率,总收率为34.31%。结论：工艺更趋于合理,操作条件更为简单,三废易于处理,适合于工业化生产。     

2′-溴代-2′-脱氧-3′,5′-O-二丙酰基-β-D-核糖胸苷合成工艺的研究

目的　改进2′-溴代2′-脱氧-3′,5′-O-二丙酰基-β-D-核糖胸苷的合成工艺。方法　以胸腺嘧啶和四乙酰核糖为原料,经过硅烷化保护、缩合、皂化、卤化反应合成。结果　与其他文献方法比较,该法具有操作简单、收率高、成本低等特点。结论　适用于工业化生产。     

胸苷酸合成酶抑制剂的研究进展

胸苷酸合成酶（Thymidylate synthase,TS）系由相同亚基构成的同源二聚体胞浆酶,它参与体内脱氧核糖核酸（DNA）生物合成所需的胸腺嘧啶核苷酸的起始合成过程,是该过程的限速酶。细胞在没有外源性的胸腺嘧啶供应时,这一限速反应是体内胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP）的唯一来源以及其后DNA合成的唯一途径。由于肿瘤细胞内的DNA合成水平明显高于正常细胞,因此肿瘤细胞在没有外源性的胸腺嘧啶的情况下,抑制TS活性将引起胞内胸腺嘧啶的缺失,从而使胞内的DNA合成不能正常进行,随之产生缺陷的DNA合成、裂解以及细胞凋亡。因此,TS已成为化疗药物一个非常重要的理想作用靶点。     

使用荧光原位杂交技术分析三氟胸苷抗性的 L5178Y 突变细胞集落

使用荧光原位杂交技术分析三氟胸苷抗性的Ｌ５１７８Ｙ突变细胞集落张立实本间正充１松岗厚子１林真１祖父尼俊雄１（华西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室，成都６１００４１；１日本国立卫生研究所变异遗传部，东京テ１５８）使用染色体特异性ＤＮＡ探针的荧...     

缺氧诱导因子2α和胸苷磷酸化酶在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨肾透明细胞癌中胸苷酸磷酸化酶(TP)和缺氧诱导因子2α(HIF-2α)的表达水平与临床病理指标及预后的关系。方法采用免疫组化技术检测43例肾透明细胞癌组织中TP和HIF-2α的表达。结果 TP和HIF-2α主要表达在肾透明细胞癌肿瘤细胞胞核中。TP在43例肿瘤组织均有表达,TP的表达和肾透明细胞癌的a分期、远处转移和微血管密度有关(P0.05),而与淋巴结转移无关(P0.05)。HIF-2α阳性表达21例,阳性表达率为48.84%。HIF-2α的阳性表达与肾透明细胞癌的远处转移有关(P0.05),而与分期、淋巴结转移和微血管密度无关(P0.05)。TP和HIF-2α表达呈正相关(r=0.837,P0.001)。结论检测TP的表达对肾透明细胞癌患者的预后有指导意义。HIF-2α和TP共同参与了肾透明细胞癌的侵袭和转移。     

固定化微生物细胞合成辅酶A的初步研究

使用合成高分子材料聚乙烯醇,成功地固定了产氨短杆菌。对固定化细胞合成辅酶 A 的活性、稳定性和反应条件进行了研究。     

5-氟胞苷和5''-脱氧-5-氟胞苷的合成

5-氟胞嘧啶经苯甲酰化保护后分别与供糖体四乙酰核糖和5-脱氧三乙酰核糖缩合,再经氨解,以45.7%和42.6%的收率分别制得5-氟胞苷和5'-脱氧-5-氟胞苷.     

5-氟胞苷和5＇-脱氧-5-氟胞苷的合成

5-氟胞嘧啶经苯甲酰化保护后分别与供糖体四乙酰核糖和5-脱氧三乙酰核糖缩合,再经氨解,以45.7%和42.6%的收率分别制得5-氟胞苷和5＇-脱氧-5-氟胞苷。     

胸苷酸合成酶多态性与非小细胞肺癌易感性及淋巴结转移的关联性研究

目的探讨胸苷酸合成酶（TS）5’非编码区（UTR）串联重复序列﹑G/C单核苷酸多态性（SNP）和3’UTR6bp缺失或插入多态性与中国北方人群非小细胞肺癌（NSCLC）的发生及淋巴结转移的相关性。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）技术,查看多态性基因型于177例NSCLC患者（NSCLC组）和381例健康体检者（对照组）中分布的情况外。结果 TS5’UTR和3’UTR的各基因型、等位基因型、单体型均不单独影响NSCLC的易感性。TS5’UTR和3’UTR多态性联合作用分析：同时携带3C/3C及6bp＋/6bp＋基因型的个体患NSCLC的危险性显著低于携带其他基因型组合的个体（P〈0.05）。另外,采用EH软件分析TS5’UTR和3’UTR基因多态性单体型频率显示,6bp＋/2R单体型在NSCLC组出现频率显著低于对照组（P〈0.05）,与6bp-/3G单体型相比6bp＋/2R单体型对NSCLC发病起保护作用。未发现TS多态性与NSCLC淋巴结转移存在相关性。结论 TS5’UTR重复序列多态性﹑SNP和3’UTR缺失多态性联合分析可作为预测NSCLC易感性的标志,而TS5’UTR及3’UTR多态性与中国北方人群肺非小细胞癌淋巴结转移无关。     

固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A的研究

目的利用固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A。方法使用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶为复合载体包埋产氨短杆菌细胞,正交试验确定凝胶配方;正交试验确定合成辅酶A的前体配方;同时考察不同pH、不同表面活性剂对固定化细胞合成辅酶A的影响。结果最佳的凝胶配方为:卡拉胶1.0%,魔芋胶0.4%,刺槐豆胶0.4%;最佳前体配方为:泛酸钙0.3%,半胱氨酸0.3%,ATP 2%;最适pH值为7.0;最适表面活性剂为苯扎溴铵,添加量为0.05%。固定化细胞重复使用8次后,合成辅酶A的活性仍保持在50%以上。结论用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶作为复合载体制备的固定化产氨短杆菌细胞,合成辅酶A的能力较高,稳定性较好,具有应用价值。     

用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖

目的探索用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖的最优条件。方法以海藻酸钠为载体把氧化葡萄糖酸菌固定化,考察固定化细胞在不同转化条件时对底物的转化率。结果通过条件优化,确定固定化细胞转化时间为24 h,底物质量浓度为10 g.L-1,采用的海藻酸钠质量浓度为40g.L-1,菌体包埋量为每g凝胶包埋3.1 g菌体,最适pH为7.0,最适温度为28℃,摇床转速要求高于100r.min-1;用60mmol.L-1的MnCl2替代原转化液中20mmol.L-1的MgSO4;固定化细胞与原游离细胞工艺相比,24h内底物转化率由原来的47%上升到93%,连续转化10次后,转化率仍为38%。结论用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖,转化率提高46%并能连续转化约10次。     

合成红景天苷对H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的：研究合成红景天苷对过氧化氢所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：体外培养H9c2细胞,分为正常对照组、模型组、提取红景天苷（10-4 mol·L-1）组和合成红景天苷（10-6、10-5、10-4mol·L-1）组,药物孵育24 h后,加入过氧化氢终浓度400μmol·L-1损伤4h,检测各组细胞活力和培养液上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、SOD活性显著降低,LDH、CK活性和MDA含量显著升高（P〈0.01）。与模型组相比,红景天苷预处理组能明显提高细胞活力和SOD活性（P〈0.05）,明显降低LDH、CK活性及MDA含量（P〈0.05）,并与浓度呈正相关。结论：红景天苷对过氧化氢造成的心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,且合成红景天苷效果优于提取红景天苷。