反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用

目的初步评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能。方法使用反向点杂交法对1 004例疑似β-地中海贫血病例进行基因诊断。结果1 004例外周血样品中有283例β-地中海贫血。共发现11种突变,其中CD41-42(40．89％),IVS-2-654(22．68％),CD17(12．71％),TATAbox-28(14．43％),CD43 (3．78％)和CD26(1．72％),占突变的95％以上。结论反向点杂交法具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。     

儿童重型β-地中海贫血异基因造血干细胞移植后出血性膀胱炎的影响因素分析

目的 探讨儿童重型β-地中海贫血(重型地贫)异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)后出血性膀胱炎(HC)的影响因素.方法 对我院儿科造血干细胞移植中心2008年12月～2009年11月儿童重型地贫Allo-HSCT 33例病例,进行回顾性分析.结果 HC发病率为24.24%(8/33),其中Ⅰ度1例,Ⅱ度6例,Ⅲ度1例.HC的中位时间为22.9(6～35)d,持续的中位时间为11.9(3～27)d.年龄影响HC的发病率(P=0.042,P<0.05);年龄≥6岁的儿童发病率明显高于年龄<6岁儿童.结论 儿童重型地贫Allo-HSCT,年龄是HC的主要影响因素.     

造血干细胞移植治疗β－地中海贫血的护理

目的：总结β－地中海贫血在移植过程中的护理要点。方法对20例移植患儿实施有针对性的护理：尽量限制患儿活动范围;为患儿制定特殊饮食,严格消毒;在移植术恢复期,针对患儿免疫力极度低下的情况,做好口腔、肛周的消毒;密切监测生命体征变化及皮肤黏膜皮疹情况。结果20例移植患儿,其中19例在移植后14～22 d,可解除隔离,转出移植仓,进一步治疗。1例患儿出现排斥,移植失败。结论移植过程中,精心的护理和细心的观察是保证移植顺利的重要保障。     

用反向点杂交快速检测中国人β—地中海贫血基因突变

将一系列针对中国人18种β-地中海贫血(β-地贫)基因突变的ASO探銈固定在尼龙膜条上。用此膜条与用5′端生物素化引物扩增获得的β-珠蛋白基因片段杂交。再用酶标抗生物素蛋白及底物系统检出。用本法检测已知的18种中国人β-地贫突变样品,可准确识别这些突变的杂合子.纯合子和双重杂合子或正常DNA。应用此项技术经一二次杂交即可确定β-地贫基因型。这一技术不依赖同位素,操作简便,检测范围广。可望在我国β-地贫的大样本人群基因调查和临床普及产前诊断上起推动作用。     

反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用

目的应用反向点杂交法(RDB)对样本进行β-地中海贫血基因诊断,评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能。方法使用反向点杂交法对1294例疑似地中海贫血病例(材料包括外周血、羊水和脐带血)进行β-地贫基因诊断,并对其中10例进行测序;对其中890例与血液学试验指标进行比较。结果用RDB方法,1294例样品中有558例β地中海贫血。在558例基因诊断阳性病例中共发现了21种突变,涉及到14个突变位点。前6位的突变位点从高到低依次排列为CD41-42(41.2%)、IVS-2-654(25.6%)、TATAbox-28(13.8%)、CD17(7.2%)、CD26(2.0%),CD71-72(1.4%)。与RDB比较,将临界值定为MCV≤80fL或MCH≤26Pg,脆性≤60%,HbA2﹥3.8%,则敏感度分别为98.49%,89.17%,95.47%;特异性为68.97%,72.82%,77.08%。结论与血液学方法比较,RDB具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。     

反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用

目的 探讨反向点杂交(RDB)法检测在产检中筛查β地中海贫血的应用价值.方法 采用RDB法,检测54例临床似诊为β地中海贫血患者.结果 在54例样本中,检出β地贫基因携带者17人.结论 ROD法在检测β地贫中,具有高通量、特异性强、操作简便无需接触放射性等优点.     

脐血造血干细胞移植治疗重型β地中海贫血1例

脐血造血干细胞移植治疗重型β地中海贫血１例①黄绍良１方建培１周敦华１陈纯１吴祥元３朱为国４梁晓燕２李树浓２（中山医科大学１孙逸仙纪念医院儿科；广州，５１０１２０２病生教研室３附属第三医院内科４第一军医大学南方医院儿科）主题词β地中海贫血／治；造血干细...     

应用反向点杂交法检测α-地中海贫血点突变

目的建立一种临床上切实可行的非缺失型α-地中海贫血基因检测方法。方法中国人常见的非缺失α-地中海贫血为αCSα、αQSα、αWSα3种类型,针对此3个位点设计特异性带有生物素标记的引物进行PCR扩增,扩增产物与固定在膜条上的寡核苷酸探针进行杂交,并通过一系列显色反应分析结果。结果分别分析3种突变类型的正常及突变位点信号,明确检测样品在3个位点是否发生了突变,及是否为突变纯合子或杂合子,验证了该方法可诊断非缺失型!-地中海贫血点突变。结论该检测方法结果可靠,且简便易行,对实验室仪器设备要求不高,适合于在临床推广。     

造血干细胞移植治疗重型β地中海贫血

探讨造血干细胞移植治疗重型β地海贫血的可行性。方法对４例地中海贫血的患者了同胞骨髓或脐带血移植,这４例患儿基因变为纯合子,均确诊为重型β地贫。４例中２例人类白细胞相关抗原（ＨＬＡ）全相合,２例１个位点不全相合,１例血型不同。预处理方案为白消安１６ｍｇ／ｋｇ、环境磷酰胺２００ｍｇ／ｋｇ抗人胸腺细胞免疫球蛋白９０ｍｇ／ｋｇ,用环孢素Ａ和氨甲蝶呤预防移植植抗宿主病（ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ,Ｖ     

STR-PCR在异基因造血干细胞移植中植入效果监测的应用

目的：建立适用于重庆地区造血干细胞移植后监测的 PCR扩增荧光标记短串联重复序列（STR‐PCR）检测方法,为造血干细胞移植疗效评价提供可靠依据。方法收集术前供者、受者EDTA抗凝静脉血及受者术后不同时间EDTA抗凝静脉血,采用STR‐PCR技术对65例allo‐HSCT患者的15个STR位点和1个性别位点进行分析。结果65例异基因造血干细胞移植术的病例,术后检测患者S T R位点呈现受者源、供者源和供受者嵌合3种状态,有54例的移植后监测呈现供者源状态,8例移植后监测到嵌合体状态,3例移植后监测呈现受者源状态,且发现3种状态之间可相互转化,每种状态的最早检出时间和持续时间及转化时间存在差异,其中出现供者源状态的最早时间是术后第17天,持续最长时间为7多个月。而出现嵌合状态的最早时间为术后第16天,最晚在移植后5个月才监测到嵌合。在嵌合持续时间上,持续时间最短为2个月,持续时间最长者达7个月。结论 allo‐HSCT患者术后STR位点转化情况存在差异,要建立起适用于该地区的STR‐PCR方法需要正确留取供受者标本,同时应掌握好恰当的检测时机和适宜的STR位点。     

Changes in the T-cell receptor Vβ gene repertoire after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Background We distinguished graft-versus-host disease (GVHD) from graft-versus-leukemia (GVL) effects and to investigate the distribution of T-cell receptor (TCR) Vβ gene repertoire in individuals with leukemia before and after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT). Methods Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained from 10 normal individuals, 8 donors and 11 patients with leukemia before and after transplantation. Polymerase chain reaction (PCR) amplification of complementarity-determining region 3 (CDR3) of 24 TCR Vβ genes was used to examine serial samples of PBMC. The PCR products were further analyzed by genescan to evaluate clonality of T cells. Results The 24 TCR Vβ gene repertoire displayed highly diverse and polyclonal spectratypes in all normal individuals and 4 of 8 donors. Another 4 donors expressed part of the 24 TCR V~ subfamily and 1 donor had oligoclonality. The expressions of the 24 TCR V~ subfamilies were skewed and restricted in 11 leukemia patients before and after transplantation. Some absences of 24 TCR Vβ subfamily expression were quite similar between the recipients pro-transplantation and related donors. The number of subfamilies expressed increased over time post-transplantation, but the restricted expressions of the subfamily could last 6-30 months after transplantation. All patients with GVHD and some without GVHD exhibited T cell clonal expansion. The expansive T cell clone was distributed in Vβ 2-3, 16-17, 18-19, 21 and Vβ 23 in patients with GVHD and in Vβ 7, 9, 16 and 19 in patients without GVHD. One patient with syngeneic-HSCT (syn-HSCT) had Vβ 15 and 16 T cell expansion after transplantation. One patient displayed Vβ 18 T cell expansion after donor lymphocyte infusion (DLI). Conclusions Normal individuals express the entire 24 TCR Vβ gene repertoire and have polyclonal distribution. However, the TCR Vβ gene repertoire is only partially expressed in some donors. The TCR Vβ gene repertoire is restrictedly expressed in a skew fashion in patients with leukemia before and after transplantation. The number of TCR Vβ gene subfamilies increases over time posttransplantation. GVHD and GVL effects may induce the proliferation of T cell clones. Clinical GVL response may be distinguished from GVHD alloreactivity through the host MHC antigen.     

异基因造血干细胞移植后嵌合状态的追踪监测

目的:应用荧光标记短串联重复序列(STR)复合扩增技术,探讨多个STR基因座在异基因造血干细胞移植后嵌合体状态评估中的作用.方法:对31例移植后患者进行追踪检验,分别PCR复合扩增各病例组常染色体9个STR基因座和Amelogenin基因座,扩增产物经DNA自动分析仪分离后,GeneScan扫描,Genotyper分型.结果:7例患者血由第1次检验结果与供者STR分型一致变为混合型,4例死亡,3例复发;4例患者血由第1次检验结果与供者一致变为受者自身型,均死亡;1例患者血由混合型变为与供者STR分型一致,无复发;1例患者血两次检验均为混合型,已死亡;其余18例患者血均与供者血STR分型一致,其中16例目前预后较好,2例已死亡.结论:复合扩增STR基因座具有较高的个体识别力,检测灵敏、准确、快速,在对异基因造血干细胞移植患者的植入情况进行动态检测的研究中有用,对移植物植入或被排斥、疾病复发均有预警作用,同时必须结合临床症状,及时地进行STR检测,以便于早期实施临床干预治疗.     

异基因造血干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征临床疗效分析

回顾性分析异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的适应证、治疗时机、移植物的选择、移植预处理方案的选择和移植疗效。22例患者中21例获得造血重建,1例非血缘脐血移植(UCBT)未获得植入的成人患者,于非血缘脐血移植(UCBT)后38 d进行母亲HLA4/6相合的外周血联合骨髓造血干细胞移植解救治疗获得植入。22例中死亡3例,无1例复发。MDS患者何时进行Allo-HSCT需依据国际预后积分系统(IPSS)对患者分组,评分属于高危组的患者宜在疾病确诊后尽早进行移植,而低危组的患者可在其他药物治疗效果不佳的时候进行;不仅可选择血缘关系的骨髓移植(BMT)和外周血造血干细胞移植(PBSCT),也可进行非血缘人类白细胞共同抗原(HLA)不全相合的UCBT;移植预处理如采用减低强度的方案(RIC)并不影响移植效果。     

PCR结合反向斑点杂交在侵袭性肺曲霉病早期诊断中的价值

目的评价和比较血清半乳甘露聚糖(GM)浓度测定和PCR结合反向斑点杂交实验在侵袭性肺曲霉病(IPA)早期诊断中的临床价值。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中GM的浓度;PCR结合反向斑点杂交法检测各组小鼠血清、肺泡灌洗液、肺组织中的曲霉菌DNA。结果 ELISA法测定GM浓度中,实验组血清、BALF的GM实验敏感性、特异性与对照组间差异有统计学意义(P0.05);反向斑点杂交检测血清、肺泡灌洗液、肺组织中曲霉菌DNA含量,实验组阳性率明显高于对照组(P0.05)。用血清标本的反向斑点杂交实验与GM实验、组织病理阳性率进行比较,组织病理的阳性率最高,其次是反向斑点杂交。三种方法的差别均有统计学意义(P0.05)。结论 GM-ELI-SA检测是一项较灵敏、快速的诊断方法,反向斑点杂交实验在IPA早期诊断上的作用优于GM实验。     

异基因造血干细胞移植后侵袭性真菌病危险因素分析

目的 了解血液系统恶性疾病患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后侵袭性真菌病(IFD)的发病率、危险因素.方法 选择2007年1月至2013年11月于重庆医科大学附属第一医院HSCT中心接受allo-HSCT的患者82例,按照我国IFD诊断标准进行回顾性分析.结果 82例allo-HSCT术后患者,共诊断22例IFD,发生率为26.83％,其中确诊IFD者5例(22.73％),临床诊断者7例(31.82％),拟诊者10例(45.45％).3、6、12个月的累积发病率分别为11.10％、15.30％、22.60％.多因素分析中,移植前真菌感染史、HLA配型不合是IFD早期的危险因素;广谱抗菌药物使用、大剂量激素使用为IFD晚期的危险因素.结论 IFD是allo-HSCT术后严重并发症,其发生率和病死率均较高.HLA配型不合、移植前真菌感染史、持续中性粒细胞缺乏、大剂量激素使用、广谱抗菌药物使用、慢性移植物抗宿主病(GVHD)是IFD的危险因素.     

Immune-related late-onset hemorrhagic cystitis post allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Background The pathophysiology of late-onset hemorrhagic cystitis （LOHC） is currently not well understood. The aim of this study was to analyze the alloimmune aetiology in the pathogenesis of LOHC post allogeneic hematopoietic stem cell transplantation （HSCT）. Methods A retrospective study was performed on the medical records of 11 patients with immune-related LOHC post allogeneic HSCT. The clinical characteristics, therapy, and outcomes of these patients were analyzed. Results The median time of onset was 42 days after HSCT （range 16-150 days） and the median duration of HC was 43 days （range 29-47 days）. All patients presented with prolonged HC for more than 35 days. Nine patients with evidence of cytomegalovirus （CMV） reactivation did not respond to anti-viral therapy even with CMV clearance in the urine post-therapy. Eleven patients with refractory HC received a low dose of corticosteroids and all patients went into complete remission. Conclusion Our data suggest that alloimmune injury is involved in the pathogenesis of HC in at least some patients and that specific therapy might improve the clinical outcome of hemorrhagic cystitis.     

35例异基因造血干细胞移植患者死因分析

目的：分析异基因造血干细胞移植术后患者不同的死亡原因,对影响移植术后患者长期生存的不利因素进行探讨。方法采用经典改良白消安／环磷酰胺（Bu／Cy ）为基础的预处理方案,配合经动员的骨髓和（或）外周血造血干细胞输注,辅以预防感染、控制移植物抗宿主病（GVHD）等治疗,并观察造血干细胞移植治疗期间及随访过程中发生死亡的患者,进行死亡原因的回顾性分析。结果35例死亡患者中,11例疾病复发,15例严重感染（其中9例合并GV HD ,Ⅰ～Ⅱ度GV HD3例,Ⅲ～Ⅳ度GV HD者6例）,2例造血功能衰竭,2例颅内出血,1例肺水肿,1例猝死,1例严重肠道GV HD ,1例疾病进展,1例溶血危象。移植后100 d内移植相关病死率为5．7％,移植后100 d至1年内移植相关病死率为8．1％,3年病死率为16．2％,5年病死率为16．7％。结论感染、GV HD和疾病复发是造血干细胞移植术后患者的最常见死因。移植后1年内容易发生致命性的感染,且感染常常合并GVHD ,恶性血液病患者合并慢性移植物抗宿主病（cGVHD）复发率较低。     

非清髓异基因造血干细胞移植治疗低增生性MDS1例并文献复习

目的探讨非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效,观察其植入及并发症的发生情况。方法我院诊断为低增生性MDS患者1例,采用氟达拉滨+阿糖胞苷+环磷酰胺的非清髓预处理方案,环孢素A+甲氨蝶呤+骁悉预防移植物抗宿主病。结果 STR-PCR证实移植后30d及3个月骨髓植入为完全供者型,移植后3个月发生多发性脑梗塞,6个月出现面部皮疹及口腔溃疡,通过调整免疫抑制剂及输注间充质干细胞(5×107/次,2次)后症状明显好转。结论非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性MDS获得较好的疗效。     

定量PCR检测CMV在异基因造血干细胞移植中的临床意义

目的通过监测造血干细胞移植后患者的外周血CMV DNA含量,探讨对患者进行抗病毒治疗的有效性。方法采用实时定量PCR方法对接受异基因造血干细胞移植（Allogeneic HCT）患者进行外周血CMV DNA定期检测。可评价患者57例,其中男38例,女19例,年龄13-59岁（中位年龄31岁）;含急性白血病30例（ALL 11例、AML 19例）,慢粒（CML）11例,淋巴瘤（NHL）8例,骨髓增生异常综合征（MDS）5例,急性重症再障（SAA）3例。在移植后每周检测1次,CMV DNA拷贝数〉102为阳性,连续2次〉103或1次〉1×10^4时行抗病毒治疗。结果57例患者中有32例（56.1%）在病程中检测到CMV DNA阳性,拷贝数1.2×10^2-7.8×10^5,行抗病毒治疗26例,死亡11例,仅1例与CMV感染有关。结论CMV DNA的定期检测可以使患者在病毒血症时及时接受治疗,减少CMV疾病的发生,有利于改善患者的生存。