一株海洋芽孢杆菌的鉴定及抗菌活性研究

目的:对一株编号为ZJ8112的分离自东海海域海泥样品的细菌进行鉴定和抗菌活性研究.方法:采用传统的分类学方法观察菌株ZJ8112的形态、耐盐度,结合16S rDNA 序列分析在GenBank上进行比对以确立其进化地位.利用稻瘟霉菌(Pyricularia oryzae)P-2b、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、白念珠菌(Candida albicans)和黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)作为抗菌活性指示菌,检验ZJ8112的抗菌活性.结果:枯草芽孢杆菌ZJ8112革兰染色阳性,芽孢中生.其最佳生长盐度为10%,属于中等嗜盐菌.通过16S rDNA序列分析发现其与Bacillus subtilis F121112在进化位置上最为接近.该菌株的16S rDNA序列已经提交GenBank,接受号为EU100745.综合ZJ8112菌株的培养特性和形态特征,可认为ZJ8112是一株海洋芽孢杆菌.抗菌活性研究的结果表明其具有很强的抗稻瘟霉菌和抗大肠埃希菌活性.结论:ZJ8112为中等嗜盐的海洋细菌,其最适盐度为10%.生物学活性研究的结果表明,其发酵液具有很强的抗稻瘟霉活性和抗大肠埃希菌活性,具有潜在的抗生素研究的价值.     

一株具有抗稻瘟霉活性的海洋细菌32-11-2-2的筛选和分离鉴定

目的:从中国东海微生物样品中分离筛选活性细菌菌株,并对活性菌株32-11-2-2进行鉴定.方法:采用无限稀释和平板划线法分离微生物样品,利用稻瘟霉模型进行活性筛选;并对其中的活性菌株32-11-2-2的形态、培养特征以及生理生化特征进行研究,使用16S rDNA序列分析的方法对菌株32-11-2-2进行了分类鉴定.结果:分离得到421株细菌,包括活性菌株54株,其中活性菌株32-11-2-2是一株弱嗜盐菌,具有陆地芽孢杆菌的形态特点,能产生胞外淀粉酶、过氧化氢酶,液化明胶、石蕊牛奶反应阳性,16S rDNA序列分析该菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)同源性达到98%以上.结论:活性菌株32-11-2-2是一株适应了海洋环境的枯草芽孢杆菌.     

嗜盐隐杆藻胞外多糖抗肿瘤活性研究

目的探讨嗜盐隐杆藻胞外多糖(exopo lysaccharide of Aphanothece ha lophy tica,EPAH)的抗肿瘤活性。方法以S180肉瘤为肿瘤模型,检测EPAH对肿瘤生长的抑制活性;M TT法检测EPAH对S180肉瘤细胞、Sm cc7721肝癌细胞和H eL a细胞的体外抑制活性;以对荷瘤小鼠免疫器官、血液淋巴细胞数量及淋巴细胞增殖影响、NK细胞杀伤活性和巨噬细胞产生NO及其他细胞因子的影响评价EPAH对小鼠免疫功能的作用。结果EPAH对S180肉瘤生长有显著的抑制作用,其中预防给药和与肿瘤接种同时给药组最大抑瘤率分别达66.79%和47.93%。100μg/mL EPAH对Sm cc7721细胞、H eL a细胞以及S180细胞生长的抑制率达60%以上。EPAH显著提高荷瘤小鼠脾脏和胸腺质量以及血液淋巴细胞数量,促进淋巴细胞增殖反应,增加NK细胞杀伤活性,刺激巨噬细胞产生NO,分泌白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结论EPAH有显著的抗肿瘤活性,并能直接作用于肿瘤细胞,抑制肿瘤生长。EPAH可能是通过增加荷瘤小鼠免疫器官的质量和免疫细胞的数量、促进淋巴细胞分裂,提高NK细胞杀伤活性和巨噬细胞产生NO以及其他细胞因子实现其抗肿瘤活性。     

两株蜚蠊肠道内生放线菌抗真菌活性初步研究和分类鉴定

目的检测蜚蠊肠道内生放线菌WA2-4和WA2-5的抗真菌活性,并对菌株进行初步分类学鉴定。方法采用牛津杯法测定菌株WA2-4和WA2-5发酵液对白色念珠菌和红色毛癣菌等真菌生长的影响,扫描电子显微镜观察菌株发酵液对受试真菌形态的影响,利用16S rDNA测序、Blast比对和构建系统发育树等方法,结合菌株形态学特征对菌株WA2-4和WA2-5进行初步分类学鉴定。结果菌株WA2-4和WA2-5发酵液对白色念珠菌和红色毛癣菌的生长均有抑制作用;扫描电子显微镜结果显示菌株WA2-4和WA2-5发酵液破坏了白色念珠菌的细胞膜结构,使红色毛癣菌的菌丝断裂成碎片;初步分类学鉴定结果显示,菌株WA2-4和WA2-5分别为链霉菌属和戈登氏菌属,与其各自亲缘菌株的16S rDNA序列同源相似性分别为93.5%和92.3%,均低于98.2%,因此推断该两株菌株很有可能是新菌种。结论蜚蠊肠道WA2-4和WA2-5放线菌具有抗真菌活性。     

100株嗜麦芽假单胞菌的分离鉴定及药敏分析

用细胞常规鉴定法对１００株嗜麦芽假单胞菌进行分离鉴定及药敏分析，发现嗜麦芽假单胞菌引起的上呼吸道感染呈上升趋势，其耐药率在不断上升，值得注意     

一株海洋放线菌次级代谢产物的抗肿瘤活性研究

目的 对一株南海深海海洋沉积物来源放线菌SCSIO 11594分离出的5个天然次级代谢产物进行初步的抗肿瘤活性研究.方法 将5个天然次级代谢产物命名为化合物1~5,通过CCK8细胞毒性试验检测化合物作用于5株肿瘤细胞及1株正常肝脏细胞HL-7702后的效果,通过Graphad prism软件测定其IC50,并与经典抗肿瘤药物顺铂对比.结果 顺铂作用于5株肿瘤细胞的IC50值范围3.75~5.32μmol/L,化合物2作用于5株肿瘤细胞的IC50值范围0.24~0.74μmol/L,对肿瘤细胞的抑制作用是顺铂的10~20倍;化合物4作用于5株肿瘤细胞的IC50值范围0.28~6.93μmol/L,对肿瘤细胞的抑制作用是顺铂的1~10倍;化合物2和4作用于正常肝脏细胞HL-7702的IC50值分别为3.67μmol/L和12.47μmol/L,与作用于肿瘤细胞的IC50值相比,提示具有较好的抗肿瘤选择性.结论 放线菌SCSIO 11594分离出的次级代谢产物2和4具有较好的抗肿瘤活性和选择性,具有潜在的开发前景.     

分离鉴定一株具有免疫活性的海南红树林真菌

目的初探菌株PH0038发酵液的免疫增强活性,同时对菌株进行鉴定。方法以人外周血单个核细胞增殖为指标,利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测菌株的免疫活性。从菌株的菌落特征、形态特征r、DNAITS序列及其系统发育分析对菌株PH0038进行鉴定。结果 PH0038的发酵液冻干成粉后,进行人外周血单个核细胞增殖实验,有较强的免疫增强活性,通过各种指标鉴定菌株PH0038为Penicillium sp.LF41。结论菌株PH0038的发酵液可能对人体免疫系统有免疫增强效果。     

披针新月蕨细胞毒活性成分研究

目的 研究民族药披针新月蕨Abacopter is penangiana化学成分并评价其细胞毒活性。方法 以硅胶柱、凝胶柱色谱分离,制备HPLC纯化,采用MS,1、2 D-NMR等波谱方法进行结构鉴定,MTT法测试各化合物的细胞毒活性。结果 从披针新月蕨中分离鉴定了6个化合物,分别为4(S),5,7-三羟基-4′-甲氧基-6,8-二甲基-2(R)-黄烷-5,7-O-β-D-二葡萄糖苷［4(S),5,7-trihydroxy-4′-methoxy-6,8-dimethyl-2(R)-flavan-5,7-O-β-D-diglucopyranoside, eruberin B, 1］; 5,7-二羟基-4(S),4′-二甲氧基-6,8-二甲基-2(R)-黄烷-5,7-O-β-D-二葡萄糖苷［5,7-dihydroxy-4(S),4′-dimethoxy-6,8-dimethyl-2 (R)-flavan-5,7-O-β-D-diglucopyranoside,eruberin C, 2］;5,7-二羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-8-甲基-2″,4(S)-氧-2(R)-黄烷-5-O-β-D-葡萄糖苷［5,7-dihydroxy-4′-methoxy-6-hydroxymethyl-8-methyl-2″,4(S)-oxido-2(R)-flavan-5-O-β-D-glucopyranoside,3］;5,7-二羟基-4′-甲氧基-6,8-二甲基-2″,4(S)-氧-2(R)-黄烷-5-β-D-葡萄糖苷［5,7-dihydroxy-4′-methoxy-6,8-dimethyl-2″,4(S)-oxido-2(R)-flavan-5-O-β-D-glucopy ranoside,eruberin A,4］;高圣草素［5,7,4′-trihydroxy-3′-methoxyflavanone, homoeriodictyol,5］;对-甲氧基桂皮醛(p-methoxycinnamaldehyde,6)。化合物3、4对L929及HeLa细胞的IC50值分别约为13.05、24.75 μg/mL,25.11、18.32 μg/mL。结论 化合物3为新的天然产物,化合物2、5、6首次从新月蕨属植物中分得,化合物3、4对L929和HeLa具有显著抑制活性。     

IL-24增强细胞因子诱导的杀伤细胞对HepG2的细胞毒活性

目的 寻求增强CIK细胞毒活性的有效方法,以满足临床过继免疫治疗的需要.方法 从健康人外周血中提取出单个核细胞,第1天加入IFN-γ,第2天加入IL-1、CD3mAb、IL-2诱导CIK细胞;另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24.细胞计数法测定细胞的增殖,MTT法测定细胞杀伤活性,比较两者有无差别.透射电镜下观察CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤和肿瘤细胞的改变.结果 未加IL-24培养组增殖率高于加IL-24培养组,两者比较有明显差异(P＜0.05).加IL-24培养组细胞各个效靶比杀伤活性均达到90%以上,明显高于其它各组.透射电镜下可见加IL-24培养组凋亡和坏死的肿瘤细胞比未加IL-24培养组明显增多.结论 CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强它的杀伤活性.     

含氟2,5-二酮哌嗪衍生物的设计、合成及细胞毒活性

以N,N-二乙酰基-2,5-二酮哌嗪、烯丙基溴、邻氟苯甲醛和其他芳香醛为原料,合成得到21个新型的含氟2,5-二酮哌嗪衍生物(2a~2u),其结构经1H NMR、13C NMR和HRMS确证。采用CCK8法初步测试了目标化合物对10株肿瘤细胞(K562,U937,MOLT-4,HL60,He La,DU145,MCF-7,A549,SGC-7901和H1975)的体外抑制活性。结果表明:目标化合物2a,2d,2e,2f,2g,2h,2k和2t均显示了良好的广谱的细胞毒活性,其中化合物2t对U937、He La和DU145细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.2、0.5和0.7μmol/L,其作为潜在的抗肿瘤活性先导化合物值得进一步深入研究。     

一株具有免疫增强活性的海南红树林真菌WC1016的分类鉴定

目的:对从海南文昌清澜港红树林土壤样本中分离到的一株具有免疫增强活性的真菌菌株WC1016进行分类鉴定.方法:通过菌落特征、显微形态、ITS序列测定及其系统发育分析对菌株WC1016进行鉴定.结果:菌株WC1016在CA上形成典型紫色绒絮状菌落.显微观察其分生孢子梗具有拟青霉属的典型特征.ITS序列测定及系统发育分析表...     

植物内生真菌抗稻瘟病菌活性菌株的筛选

目的筛选具有抗稻瘟病菌活性的植物内生真菌菌株。方法以稻瘟病（Magnaporthe grisea）菌株GUY11为靶标菌,对分离自南方红豆杉的56株内生真菌菌株进行抗稻瘟病菌活性筛选。结果共有16株菌株发酵液对GUY11孢子萌发的ID50在10以上,且对其附着胞形成的ID50在50以上,占总菌株数的28.6%;活性菌株主要分布在拟青霉属（Paecilomyces sp.）和木霉属（Trichoderma sp.）,分别是9株和2株;不同内生真菌的发酵液对孢子萌发和附着胞形成的抑制作用是不同的。结论红豆杉内生真菌对稻瘟病菌具有较高的抑制活性。     

海洋芽孢杆菌次生代谢产物的分离、鉴定及生物学活性的初步研究

目的:开发药用海洋微生物资源,从微生物代谢产物中获取活性物质.方法:利用硅胶柱、凝胶柱、高效液相等色谱技术对抗菌模型筛选到的活性菌株F81612发酵液的乙酸乙酯浸膏进行分离,通过1HNMR、13CNMR和MS对化合物进行结构鉴定,利用纸片法和四甲基偶氮唑盐比色法对单体化合物进行生物学活性评价.结果和结论:分离鉴定了11个化合物,它们分别为:macrolactin A(1),3-羟基乙酰基吲哚(2),3-吲哚乙醇(3),环(色-脯)二肽(4),环(异亮-色)二肽(5),环(亮-脯)二肽(6),环(亮-缬)二肽(7),环(异亮-脯)二肽(8),环(苯丙-缬)二肽(9),N-苯乙基乙酰胺(10).对羟基苯甲醛(11).化合物1为主要活性成分,对稻瘟霉、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC值分别为3.6、0.45和6.3ìg/ml,对肿瘤细胞株HeLa及HepG2的IC50值分别为2.0和1.8ìg/ml.     

Characterization of cytotoxic compound from marine sediment derived actinomycete Streptomyces avidinii strain SU4

Objective

To investigate the cytotoxic activity of actinomycete isolated from marine sediment.

Methods

In the present study the DNA was isolated and the ITS region of 16s rRNA was amplified by polymerase chain reaction, using two universal bacterial primers, 1492R (5′-GGTTACCTTGTTAC GACTT-3′) and Eubac27F (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTC AG-3′). The amplified products were purified using TIANgel mini purification kit, ligated to MD18-T simple vector (TaKaRa), and transformed into competent cells of Escherichia coli DH5α. 16S rRNA gene fragment was sequenced using forward primer M13F (-47) and reverse primer M13R (-48). Blast search sequence similarity was found against the existing non-redundant nucleotide sequence database thus, identified as Streptomyces sp SU, Streptomyces rubralavandulae strain SU1, Streptomyces cacaoi strain SU2, Streptomyces cavourensis strain SU3, Streptomyces avidinii strain SU4, Streptomyces globisporus strain SU5, Streptomyces variabilis strain SU6, Streptomyces coelicolor strain SU 7. Among the eight identified isolates, one actinomycete Streptomyces avidinii strain SU4 was selected for further study.

Results

Crude extract of the actinomycete isolate exhibited IC₅₀ in 64.5 µg against Hep-2 cell line, 250 µg in VERO cell line. This value is very close to the criteria of cytotoxicity activity for the crude extracts, as established by the American National Cancer Institute (NCI) is in IC₅₀ < 30 µg/mL. The GC MS analysis showed that the active principle might be 1,2-benzenedicarboxylic acid, bis(2-methylpropyl) ester (12.17%), isooctyl phthalate (15.29%) with the retention time 15.642 and 21.612, respectively.

Conclusions

This study clearly proves that the marine sediment derived actinomycetes with bioactive metabolites can be expected to provide high quality biological material for high throughout biochemical and anticancer screening programs. These results help us to conclude that the potential of using metabolic engineering and post genomic approaches to isolate more bioactive compounds and make their possible commercial application is not far off.     

抗菌多肽葛佬素的原核表达纯化及活性鉴定

目的　原核表达抗菌肽葛佬素,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法　应用pET原核表达系统进行目的 蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用鲎试剂法,对表达产物的生物活性进行初步鉴定。结果　体外表 达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,鲎试剂检测结果表明,该表达产物对LPS有明显的 中和活性。结论　在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素。     

海洋生命活性物质和海洋药物的研究与开发

海洋是生物资源的巨大宝库,地球上约80%的物种栖息在海洋中.由于特殊的生存环境,海洋生物可合成与陆地生物结构不同的、活性不一的代谢产物,为新药的研究与开发提供了大量的先导化合物.在过去的几十年间,全球范围内已从海洋动、植物及微生物中分离得到15 000多个化合物,其中头孢霉素、芋螺毒素、阿糖胞苷和阿糖腺苷等4个药物均是以海洋来源先导化合物为基础开发成功的.