Resistin结合多肽对胰岛β细胞株RINm5F分泌功能的影响

目的 先前研究已显示resistin结合多肽(RBP)能拮抗resistin对脂肪细胞脂质代谢和内分泌功能的调节作用.本研究试图阐明RBP对胰岛β细胞株RINm5F分泌功能的影响.方法 以不同水平RBP(10-10,10-11,1012mol/L)与RINm5F共培养30min、60min、2h后取上清,ELISA法测其胰岛素,RT-PCR法检测细胞中葡萄糖转运子2(GLUT2)mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中GLUT2的蛋白水平,并采用FURA-3/AM钙荧光染色法检测胰岛素分泌的重要启动因素:细胞内钙水平.结果 RBP在10-12mol/L时干预2h,不影响胰岛β细胞株RINm5F的细胞活性.但能显著刺激胰岛素分泌,RBP为10-12mol/L时干预2h,细胞内钙明显增多.在Resistin刺激下,GLUT2 mRNA水平和蛋白水平均显著上调.结论 RBP能促进RINm5F细胞株胰岛素的分泌,其可能机制是RBP上调了GLUT2的表达,进而增加了细胞内钙的水平,最终导致胰岛素分泌增加.     

重组人白细胞介素-6对SW872脂肪细胞葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的影响及其机制

目的观察重组人白细胞介素-6(rhIL-6)对SW872脂肪细胞葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的影响,观察JAK2抑制剂AG490及PI3K抑制剂Wortmannin是否影响rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的抑制作用。方法体外培养SW872脂肪细胞,应用rhIL-6干预,采用3H-2-脱氧-D葡萄糖摄入法,测定葡萄糖转运率;流式细胞术检测细胞膜葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)水平。结果1.用1μg/L rhIL-6作用24 h,对基础状态及胰岛素刺激下,SW872脂肪细胞葡萄糖转运无影响;5、10、20、50μg/L rhIL-6作用24 h使基础状态及胰岛素刺激下SW872脂肪细胞葡萄糖转运率分别下降16%vs20%、28%vs36%、39%vs50%、47%vs57%。2.AG490预处理,使rhIL-6对SW872脂肪细胞在基础状态及胰岛素刺激下葡萄糖转运的抑制作用分别降低20%和33%;Wortmannin预处理,增加基础状态及胰岛素刺激下rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的抑制作用。3.用20μg/L rhIL-6作用24 h,细胞膜GLUT4蛋白水平降低。结论rhIL-6通过降低脂肪细胞膜GLUT4的蛋白水平而降低脂肪细胞葡萄糖的转运,从而诱导脂肪细胞胰岛素抵抗。     

原代大鼠星形胶质细胞对氧糖剥夺的增殖性应答反应

目的 建立良好的模拟缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞增殖的体外模型的方法.方法 采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法测定星形胶质细胞活力,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成,免疫组织化学染色法检测星形胶质细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达.比较原代大鼠星形胶质细胞在氧糖剥夺(OGD),10 mL·L-1氧气、无糖含血清培养基)培养不同时间(0h、3h、6h、9h)的增殖情况.结果 CCK-8检测结果显示随OGD培养时间延长,原代大鼠星形胶质细胞活力逐渐增强,6h达高峰,与相应时间点正常培养组比较差异有统计学意义;随后减弱,9h已接近正常培养组水平.OGD培养后,原代大鼠星形胶质细胞EdU和PCNA阳性细胞率逐渐增加,6h达最高水平,与相应时间点的正常培养组比较差异有统计学意义;而后下降,至9h与正常培养组比较差异无统计学意义.结论 OGD培养6h可成功模拟体内缺氧缺血后星形胶质细胞增殖改变,为进行缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞过度增殖的相关研究提供了稳定可靠的体外实验模型和理论依据.     

血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内GLUT3合成的影响

目的 探讨血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白3(glucose transporter 3，GLUT3)合成的影响。方法 在成功建立了缺氧缺血合并高，低血糖新生大鼠模型的基础上，应用免疫组化方法定量检测新生大鼠脑内海马和皮质部位GLUT3的合成。结果 正常情况下GLUT3随日龄增加而合成增加；缺氧缺血可引起GLUT3合成在短期内明显增加，但在HI后期降至较低的水平；HI前低血糖使GLUT3合成在HI后期更进一步降低；HI前重度高血糖则可引起各时段GLUT3合成明显增加，尤其在HI后期仍保持一定的水平。结论 在缺氧缺血前预先补充足量葡萄糖，有可能在一定程度上提高脑内应对缺氧缺血的侵袭、改善缺氧缺血程度的能力。     

血糖对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1基因表达影响的研究

目的 探讨血糖对缺氧缺血(HI)新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因表达的影响.方法 对7日龄SD新生大鼠通过调节25%葡萄糖的注射次数、时间或禁食12 h,分别建立单纯低血糖组、HI组、HI前低血糖组、HI后低血糖组、HI前轻度高血糖组、HI后轻度高血糖组、HI前重度高血糖组以及HI后重度高血糖组:另设正常组和假手术组.应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,分别在HI后2、24、48、72 h及7 d对各组新生大鼠脑内GLUT1基因进行测定.结果 正常组GLUT1基因表达量随日龄增加而增高.HJ可引起GLUT1基因表达量的短期上调,至HI后72 h及7 d则非常显著地低于正常组(P＜0.01).HI前低血糖组GLUT1基因在HI后各时段均低于曾经HI各组,其中HI后48 h及HI后7 d显著低于HI组(P均＜0.05).HI前重度高血糖可明显上调GLUT1基因表达量,在HI后多数时段的表达量均显著高于曾经HI各组(P＜0.05或0.01).HI前轻度高血糖对GLUT1基因表达的影响不如HI前重度高血糖组.在HI后无论轻或重度高血糖组以及HI后低血糖组,其GLUT1基因表达时相均与HI前低血糖组类似.结论 结合过去系列研究结果提示,HI前低血糖可使GLUT1基因表达和产物合成明显下调、脑病理改变加重;HI前重度高血糖则使GLUT1基因表达和产物合成明显上调、脑病理改变显著改善.提示在HI前预先补充足量葡萄糖,有可能在一定程度上提高脑内应对HI的侵袭、改善缺氧缺血程度的能力.     

NYGGF4基因过表达对脂肪细胞胰岛素敏感性及分泌功能的影响

目的：观察肥胖相关新基因NYGGF4过表达对脂肪细胞的胰岛素敏感性及分泌功能的影响。方法：体外培养稳定转染NYGGF4基因（NYGGF4-pcDNA3.1）的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体（pcDNA 3.1）的3T3-L1细胞为对照,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导细胞分化成熟,液闪仪测定3H标记的葡萄糖摄取率,Western blot检测葡萄糖转运体4（GLUT4）的表达及转位;采用ELISA双抗体夹心法检测培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素、抵抗素4种细胞因子的水平。结果：NYGGF4过表达显著降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取率（P<0.05）。NYGGF4过表达对总的GLUT4的表达量没有影响,但明显降低胰岛素刺激的GLUT4由细胞浆向细胞膜的转位（P<0.05）。过表达NYGGF4的脂肪细胞其培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素及抵抗素的分泌水平与对照组相比差异无显著性（P>0.05）。结论：NYGGF4基因过表达通过下调胰岛素刺激的GLUT4的转位而减少脂肪细胞的葡萄糖摄取率,提示脂肪细胞对胰岛素的敏感性降低,而对脂肪细胞的分泌功能无明显影响。［中国当代儿科杂志,2009,11（10）：846-849］     

再发性低血糖对幼鼠脑内GLUT1及GLUT3表达的影响

目的观察再发性低血糖后脑内葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)及葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)表达的变化,从而探讨无症状低血糖的发生机制。方法将80只15日龄野生型小鼠随机分为正常对照组及低血糖组,每组40只。低血糖组给予正规胰岛素腹腔注射3次,每次剂量为5U/kg,对照组注射等体积生理盐水。两组分别在最后1次注射后12、24、48及72 h处死小鼠取脑组织(每组每时间点10只),应用免疫组化方法观察小鼠脑内GLUT1及GLUT3表达的变化。结果低血糖后脑内微血管上GLUT1表达有增加趋势,皮质增加高于海马,72 h皮质GLUT1表达显著高于对照组;低血糖后48、72 h皮质及海马GLUT3表达均显著高于相应对照组。结论再发性低血糖后脑内GLUT1及GLUT3适应性增高,这种适应既能节省神经元的能量代谢,但也能削减神经元对低血糖的反应。     

血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1合成的影响

目的　探讨血糖水平对缺氧缺血 (HI)新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)合成的影响。方法　在成功建立HI并高、低血糖新生大鼠模型的基础上 ,应用免疫组织化学方法定量检测新生大鼠脑内海马和皮质部位GLUT1的合成情况。结果　正常情况下GLUT1随日龄增加而合成增加 ,HI可引起GLUT1合成在短期内明显增加 ,以HI前重症高血糖对GLUT1合成的影响较明显 ,其合成量在HI后 2、2 4、48h显著高于其他各组。结论　在HI前预先补充足量葡萄糖 ,可改善脑内葡萄糖供应。此与HI时增加的无氧酵解代谢方式相适应。     

脑缺氧缺血对葡萄糖转运蛋白1基因和葡萄糖转运蛋白3基因表达的影响

目的　从分子水平研究脑缺氧缺血 (HI)损伤后脑内能量衰竭的发病机制 ,为今后建立安全有效的新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)治疗方案提供理论和实践依据。方法　SD新生大鼠 1 0 0只 ,分为HI组及正常组 ,各组新生大鼠分别于HI后 2、2 4、48、72h及 7d在无菌操作下断头取脑 ,分取右侧脑组织、皮质及海马组织 ,应用RT PCR方法 ,探讨各组各时段新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白 1 (GLUT1 )和葡萄糖转运蛋白 3(GLUT3)基因表达情况 ,以研究脑HI对GLUT1基因和GLUT3基因表达影响。结果　正常情况下GLUT1和GLUT3基因均随日龄增加而表达增高 ,海马部位表达普遍高于皮质部位。HI可致GLUT基因表达明显增高 ,皮质部位表达普遍高于海马部位。HI后 2 4h达高峰 ,至HI后 7d则显著低于正常组。结论　GLUT基因表达上调对于维持脑组织能量供给、延迟由能量衰竭引起的级联反应有重要意义。     

高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的影响及安体舒通的干预作用

目的：旨在探讨高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达的影响及安体舒通（spironolactone,SP）对其表达的干预作用。方法：体外培养肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分成低糖组（5 mmol/L葡萄糖的DMEM）、高糖组(25 mmol/L葡萄糖的DMEM),SP组(25 mmol/L葡萄糖的DMEM+10-7mol/L安体舒通)。采用细胞免疫化学、RT-PCR、Western blot检测各组细胞TLR4蛋白和mRNA表达情况,同时取细胞培养上清液用ELISA法检测白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果：高糖组培养6 h TLR4 mRNA出现表达增高,24 h仍高于低糖组;SP组TLR4 mRNA明显低于同时期高糖组的表达,但仍高于低糖组。高糖组培养24 h TLR4蛋白较低糖组升高,48 h TLR4蛋白表达进一步升高;SP组TLR4蛋白表达明显低于同时期高糖组表达,但仍高于低糖组。高糖组IL-6、TNF-α较低糖组明显升高;而SP组IL-6、TNF-α高于低糖组,但明显低于高糖组。结论：高糖促使NRK-52E细胞的TLR4的表达上调,TNF-α、IL-6等炎性因子表达升高,TLR4参与了糖尿病肾病的微炎症反应;安体舒通可通过下调TLR4表达水平,减少相关炎症介质的生成,这可能是其在糖尿病肾病中具有肾脏保护作用的机制之一。［中国当代儿科杂志,2010,12（4）：280-283］     

重组人白细胞介素-6对脂肪细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶1B、白细胞介素-6及抵抗素基因表达的影响

目的观察重组人白细胞介素-6(rhIL-6)对SW872脂肪细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、抵抗素及IL-6基因表达的影响,探讨rhIL-6对脂肪细胞分泌功能的调节作用。方法体外培养,油酸诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,在培养液中加入不同水平rhIL-6(0、1、5、10、20、50μg/L)作用24 h,加入20μg/L rhIL-6后分别作用不同时间(0、4、8、12、24 h)。收集细胞提取总RNA,采用半定量反转录酶聚合酶链反应方法检测SW872脂肪细胞PTP1B、抵抗素、IL-6 mRNA水平。结果rhIL-6 1μg/L作用24 h,对SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达无影响;随着rhIL-6水平的增加,SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达水平逐渐增加,但以20μg/L rhIL-6的作用最强(F=233.9 P<0.01);20μg/L rhIL-6作用4 h即可促进SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达,随着作用时间的延长,其促进作用更加明显(F=247.8 P<0.01)。1μg/L rhIL-6作用24 h,对SW872脂肪细胞PTP1B mRNA的表达无影响;5μg/L rhIL-6即可促进SW872脂肪细胞PTP1B mRNA表达,50μg/L rhIL-6作用24 h,对PTP1B mRNA的表达促进作用更明显(F=515.58 P<0.01);20μg/L rhIL-6作用4 h对脂肪细胞PTP1B mRNA的表达无影响,作用8 h即可促进PTP1BmRNA的表达,随着作用时间的延长其作用更加明显(F=498.62 P<0.01)。不同水平、不同作用时间下,rhIL-6对SW872脂肪细胞抵抗素mRNA的表达无明显影响(F=9.6,10.5 Pa>0.05)。结论rhIL-6以剂量和时间相关的方式促进SW872脂肪细胞PTP1B及IL-6 mRNA表达,对抵抗素mRNA的表达无影响。     

高脂饮食大鼠血清抵抗素水平及下丘脑细胞因子信号转导抑制因子-3 基因表达的变化

目的观察高脂饮食大鼠血清抵抗素水平及下丘脑细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)基因表达变化及其关系,探讨高脂饮食引发肥胖的发生机制。方法雄性6周龄SD大鼠16只。体质量80～100 g。随机分为基础饮食组和高脂饮食组,每组8只。单笼饲养,自由饮食饮水,明暗周期12 h,环境温度21～23℃,每周称体质量、测体长和尾长1次。大鼠饲养9周后,以乌拉坦(0.4 g/kg)深度麻醉,取心脏全血离心,采用ELISA法检测其血清抵抗素水平,葡萄糖氧化酶法检测其血清葡萄糖水平。取其下丘脑组织100～120 mg,用Trizol一步法提取总mRNA,经电泳显示28、18、5 S清晰条带,测定A260/A280>1.8。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其SOCS-3 mRNA表达水平。PCR产物经18 g/L琼脂糖凝胶电泳后,利用凝胶图像分析系统测定电泳条带密度值,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参照,计算SOCS-3 mRNA相对水平,结果以SOCS-3条带占GAPDH条带密度百分率(%)表示。结果1.高脂饮食组大鼠体质量、体长、尾长及Lee′s指数明显高于基础饮食组(Pa<0.001);2.高脂饮食组大鼠血清血糖及抵抗素水平明显升高,与基础饮食组比较均有显著性差异(Pa<0.01);3.高脂饮食组大鼠下丘脑SOCS-3 mRNA表达水平显著高于基础饮食组(P<0.05);4.二组大鼠血清抵抗素水平与下丘脑SOCS-3 mRNA表达水平无明显相关性(Pa>0.05)。结论高脂饮食可导致大鼠血清抵抗素水平升高,进而诱导SOCS-3基因表达,在肥胖、抵抗素所致的胰岛素抵抗过程中SOCS-3可能发挥了重要的介质作用。     

多球壳菌素对高糖诱导肾小球系膜细胞肥大及细胞外基质合成的影响

目的观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)大小及分泌细胞外基质(ECM)成分的影响及从冬虫夏草中提取的免疫抑制活性成分———多球壳菌素(ISP-1)的干预效应。方法正常糖(5.6 mmol/L D-glucose)及高糖(25.2 mmol/L D-glu-cose)条件下培养GMC,并设高糖加ISP-1(100 mg/L)组。采用流式细胞仪测各组GMC体积[前向角散射光(FSC)平均强度表示细胞大小,ELISA检测高糖条件下不同时间点(0、24、48、72 h)细胞培养上清液中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原(PcolⅢ)、透明质酸(HA)及层黏连蛋白(LN)含量及ISP-1干预后分泌水平变化。结果同正常糖组比较,高糖可使GMC发生肥大,同时高糖环境下GMC分泌的ColⅣ、FN、PcolⅢ、HA及LN明显增加(P<0.05),48~72 h更明显;ISP-1能有效抑制高糖的上述作用(P<0.05)。结论高糖可致GMC肥大和ECM合成增加,ISP-1对高糖所致GMC肥大和ECM合成增加有抑制作用,有望用于糖尿病肾病防治。     

急性心力衰竭患儿血浆脑钠素及心钠素水平的变化

目的探讨急性心力衰竭患儿血浆脑钠素(BNP)及心钠素(ANP)水平变化及其意义。方法选择不同病因的充血性心力衰竭(CHF)患儿46例及肺炎患儿40例、先天性心脏病患儿31例、健康儿童40例,应用酶联免疫吸附法分别检测血浆BNP及ANP水平,用多普勒超声心动图测量心力衰竭患儿心衰期及恢复期心脏指数(CI)及左室射血分数(LVEF)。结果CHF患儿心衰前期BNP即开始升高,心衰时达高峰(P<0.001),恢复期BNP水平渐下降,但仍高于正常值(P<0.001);心衰时心脏CI、LVEF均明显下降(P<0.01);CHF患儿心衰时升高的BNP水平与CI、LVEF均呈明显负相关(r=-0.61,0.79P均<0.05);同时测定的ANP动态变化趋势与BNP类似;CHF患儿心衰时的BNP/ANP比值远远高于正常对照;心衰时BNP与ANP异常率比较有显著差异(P<0.05);心衰时BNP水平与LVEF、CI值相关性优于ANP。结论CHF患儿血清BNP及ANP水平明显升高.且与心衰程度关系密切,BNP反映心脏功能改变较ANP更敏感,更具有特异性。     

缺氧缺血性脑病新生儿血浆神经肽Y和降钙素基因相关肽的变化

目的：研究缺氧缺血性脑病新生儿血浆神经肽Y(NPY)和降钙素基因相关肽(CGRR)的变化。方法：采用放免法动态观察42例中度HIE患儿和30例正常对照组NPY和CGRP在急性期和恢复期的变化以及与脑血流的相关性。结果：观察组NPY总体水平高于对照组,尤以窒息后第2,3天为著[(168.3±10.9)ng/L vs(86.7±5.4)ng/L],差异有显著性(P<0.01);观察组CGRP总体水平低于对照组,尤以窒息后第2,3天为著[(48.4±3.7)ng/L vs(81.3±16.8)ng/L],差异有显著性(P<0.01)。结论：NPY,CGRP在HIE的发病机理中可能起重要的作用,参与了HIE的发生和发展;HIE第2～3天脑血管痉挛收缩,是应用扩血管治疗的最佳时期。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织内皮素变化及降钙素基因相关肽的保护作用

目的探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)脑组织内皮素(ET)的变化及降钙素基因相关肽(CGRP)的保护作用。方法7日龄SD大鼠制成缺氧缺血性脑病(HIE)模型,随机分组处理,1.CGRP治疗组:于模型制备成功后即给予CGRP 3μg/(kg.d),腹腔内注射,共3 d;2.生理盐水对照组:每天给予同剂量生理盐水腹腔内注射;3.正常对照组(假手术组);仅给予暴露左颈总动脉。各组于3 d后断头取脑,采用放射免疫法检测脑组织ET含量。结果生理盐水对照组脑组织ET含量最高(93.41±12.73)ng/L,与正常对照组(57.58±6.31)ng/L比较有显著差异(P<0.01);而CGRP治疗组(61.68±6.83)ng/L,与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论CGRP能抑制HIE减轻血管收缩作用,改善脑循环,从而抑制ET的致损伤作用。     

减肥对单纯性肥胖儿童糖耐量及胰岛素分泌功能的影响

目的探索单纯性肥胖儿童糖耐量减低(IGT)的干预方法。方法测定14例单纯性肥胖儿童经日服葡萄糖耐量实验(OGTT),诊断为IGT,男10例,女4例;年龄8-15岁;体质量(57.7-114.0)kg,体质量指数(BMI)(30.18±1.71)。给予中医循经推拿和行为矫正及饮食、运动调整综合减重治疗2个月。结果14例IGT肥胖儿童减肥治疗2个月后9例OGTT恢复正常,体质量下降至(49-95)kg;BMI下降至(25.30±1.35)kg;治疗后空腹胰岛素、餐后2 h胰岛素、餐后2 h血糖[(14.23 ±2.35)mIU/L、(47.20±10.26)mIU/L、(5.63±0.91)mmol/L]较治疗前[(32.54±7.13)mIU/L、(164.53±33.60)mIU/ L、(8.75±1.09)mmol/L]明显下降(P<0.05,<0.01,<0.05);空腹血糖(4.80±0.52)mmol/L和治疗前(5.36±1.59) mmol/L比较无明显差异(P>0.05)。结论减肥是干预单纯性肥胖儿童IGT、改善胰岛素抵抗及预防2型糖尿病的最好方法。