基于PI3K/AKT信号通路探讨汉黄芩素对宫颈癌HeLa细胞移植瘤抑制作用影响

目的 探究汉黄芩素对宫颈癌HeLa细胞移植瘤的抑制作用及机制。方法 随机选取2018年1月—2020年12月常熟市中医院的50只Balb/c小鼠进行宫颈癌荷瘤模型造模,随机分为5组：模型对照组、阳性对照组、小剂量组、中剂量组及大剂量组。模型对照组不做特殊处理,阳性对照组腹腔注射25 mg/kg环磷酰胺,小剂量组、中剂量组、大剂量组小鼠灌胃25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg汉黄芩素。处死小鼠取出瘤体,比较各组肿瘤质量、体积,计算肿瘤生长抑制率;取出胸腺、脾脏并计算相关脏体指数。将小鼠肿瘤分为两份,一份采用伊红-美兰(HE)染色进行组织学观察;另一份采用免疫印迹法检测各组小鼠PI3K、AKT、p-AKT表达情况。结果 阳性对照组的肿瘤生长抑制率为69.63%,大剂量组、中剂量组、小剂量组的肿瘤生长抑制率分别为77.78%、54.81%和31.85%均高于模型对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。大剂量组肿瘤生长抑制率为77.78%高于阳性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。免疫印迹法结果显示,与模型对照组比较,大剂量组、中剂量组与小剂量组PI3K、...     

黄芩苷通过FOXO3/CCL22信号通路调控结外NK/T细胞淋巴瘤细胞生长的机制研究

目的:探讨黄芩苷对结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)细胞生长的影响及相关机制。方法:培养正常NK细胞及人ENKTCL细胞株SNK-6和YTS,分别采用5、10、20μmol/L的黄芩苷处理SNK-6和YTS细胞并设置对照,EdU法检测细胞增殖,FCM法检测细胞凋亡,Western blot检测BCL-2、Bax、FOXO3和CCL22蛋白的表达;设计并合成干扰质粒,采用PEI转染试剂对FOXO3 siRNA干扰质粒和CCL22 pcDNA过表达质粒进行转染,建立动物模型并进行验证。结果:对照组和5、10、20μmol/L黄芩苷处理组SNK-6细胞的增殖率分别为(56.17±2.96)%、(51.92±4.63)%、(36.42±1.58)%、(14.60±2.81)%,各组YTS细胞的增殖率分别为(58.85±2.98)%、(51.38±1.32)%、(34.75±1.09)%、(15.45±1.10)%,各组SNK-6细胞的凋亡率分别为(5.93±0.74)%、(11.78±0.34)%、(28.46±0.44)%、(32.40±0.37)%,各组YTS细胞的凋亡率分别为(7.9...     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

黄芩苷诱导T细胞淋巴瘤凋亡的初步研究

目的:探讨黄芩苷对T细胞淋巴瘤细胞的诱导调亡作用及其机制。方法:采用黄芩苷处理白血病细胞株Jurkat,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法测定细胞生长抑制率,细胞甩片瑞氏染色法观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9及AKT/ERK-MYC信号通路的表达,并用Calcusyn软件分析其与阿霉素、环磷酰胺联合使用的药效。结果:黄芩苷作用于Jurkat细胞48 h后的半数抑制浓度(IC50)为(24.32±1.01)μg/mL,且其生长抑制作用呈药物浓度-时间依赖性。黄芩苷组细胞呈现细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测凋亡细胞百分比亦明显高于对照组,且呈药物浓度依赖性,而这种作用可被pan-caspase抑制剂ZVAD-FMK逆转。黄芩苷作用于Jurkat细胞48 h后,活化剪切型caspase-3、caspase-8、caspase-9表达均上调,AKT/ERK-MYC通路被抑制。此外,黄芩苷与阿霉素联合使用具有显著的协同效应。结论:黄芩苷可有效抑制T细胞淋巴瘤细胞增殖,诱导内源性和外源性凋亡,抑制AKT/ERK-MYC信号通路,并与阿霉素有显著的协同效应,具有良好的临床应用前景。     

莲房原花青素对人肝癌细胞HepG2生长及凋亡的作用

目的：通过莲房原花青素（LSPC）抑制人肝癌细胞HepG2的生长及诱导其凋亡探讨原花青素抗肿瘤作用的分子机制。方法：以四甲基噻唑蓝(MTT)来分析不同浓度LSPC对人肝癌细胞HepG2的存活率的影响；用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡；通过RT-PCR分析LSPC引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平的变化。结果：原花青素可诱导HepG2细胞凋亡，药物组的生长明显受到抑制（P<0.05），且还呈浓度依赖性。生长抑制损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平随着LSPC浓度增加表达量也增加。结论：原花青素可抑制人肝癌细胞HepG2凋亡，具有抗肿瘤的药理作用。     

汉黄芩素对胃癌细胞分泌TGF-β1及诱导Treg细胞的影响

目的观察汉黄芩素对胃癌细胞分泌TGF-β1的影响,明确汉黄芩素是否可抑制幼稚T细胞向Treg细胞的转化。方法分别在缺氧及常氧条件下培养胃癌细胞株AGS、BGC823,并在其培养体系中加入汉黄芩素。以ELISA法检测胃癌细胞培养上清中TGF-β1的浓度。以胃癌细胞培养上清制备条件培养基,分别培养磁珠分选的CD4+CD25-T细胞72 h,流式检测Foxp3+Treg细胞的比例。结果常氧条件下,汉黄芩素对AGS细胞分泌TGF-β1无明显抑制作用,而对BGC823细胞分泌TGF-β1有抑制作用;缺氧条件下,汉黄芩素对AGS细胞和BGC823分泌TGF-β1均有抑制作用。以常氧培养的AGS细胞培养上清为条件培养基,汉黄芩素组与溶媒组CD4+Foxp3+T细胞比例无明显差异;以缺氧培养的AGS细胞培养上清为条件培养基,汉黄芩素组较溶媒组CD4+Foxp3+T细胞比例明显降低。结论汉黄芩素可抑制缺氧导致的胃癌细胞TGF-β1高表达,并可抑制其诱导Treg细胞的能力。     

黄芩苷对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察黄芩苷对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法:30只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组、黄芩苷组(均n=10).对照组喂养普通饲料,糖尿病组及黄芩苷组喂养高糖高脂饲料.喂养6周后,糖尿病组及黄芩苷组一次性腹腔注射链尿佐菌素30mg/kg,1周后建立糖尿病模型.黄芩苷组灌胃黄芩苷150 mg/(kg·d),糖尿病组和对照组用等容量生理盐水灌胃.灌胃12周后,测定24 h摄食量、体重、空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白水平,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率.免疫组化法检测survivin蛋白的表达.结果:与对照组比较,糖尿病组及黄芩苷组24 h摄食量、空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高(P<0.05或P<0.01),体重、高密度脂蛋白水平下降(P<0.05或P<0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01),survivin蛋白表达水平下降(P<0.01),胆固醇水平差异无显著性(P>0.05);与糖尿病组比较,黄芩苷组24 h摄食量、空腹胰岛素、甘油三酯水平下降(P<0.05或P<0.01),体重显著升高(P<0.01),空腹血糖、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平差异无显著性(P>0.05),心肌细胞凋亡率下降(P<0.01),survivin蛋白表达水平升高(P<0.01).结论:黄芩苷可以抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因survivin表达有关.     

汉黄芩素的抗肿瘤研究进展

<正>癌症是全世界最常见的死亡原因之一~([1]),发现新的抗肿瘤药物是当前医药研究的必要方向之一。近年来越来越多的国内外学者开始关注传统中药及其化学成分治疗肿瘤的效果及其作用机制的研究,黄芩的主要有效成分汉黄芩素便是其中之一。本文就近年来国内外学者对汉黄芩素的抗肿瘤作用研究进展进行综述如下。1汉黄芩素简介汉黄芩素是传统中草药黄芩的主要活性成分之一,是从黄芩根中分离的天然植物衍生的黄酮类化合物~([2])。其化学名称为5,7-二羟基-8-甲氧基     

肿瘤坏死因子α诱导蜕膜细胞凋亡模型建立及黄芩苷对蜕膜细胞凋亡的影响

目的:探索建立肿瘤坏死因子诱导蜕膜细胞凋亡模型,观察黄芩苷对早孕蜕膜细胞凋亡的影响,初步分析黄芩清热安胎作用机制。方法:实验于2006-04/09在湖南中医药大学国家重点二级实验室病理生理实验室完成。取湖南中医药大学第一附属医院门诊人流手术室正常妊娠40d健康孕妇人流组织,患者知情同意。体外常规进行蜕膜细胞培养,选取经鉴定的4、5代细胞蜕膜细胞,用不同浓度(0.5,2.0,10.0,50.0μg/L,共设4组,并设空白对照组)的肿瘤坏死因子α作用于蜕膜细胞,四甲基偶氮唑盐比色实验分析肿瘤坏死因子α对蜕膜细胞活力的影响,荧光细胞染色观察确定蜕膜细胞凋亡模型的建立。选取适宜浓度的黄芩苷作用于正常蜕膜细胞及肿瘤坏死因子α诱导的凋亡蜕膜细胞(设肿瘤坏死因子α模型组,黄芩苷组,肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,并设空白对照组),培养24h后,四甲基偶氮唑盐比色实验分析黄芩苷对蜕膜细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:实验成功获取足够量的细胞,经泌乳素免疫组化鉴定为较高纯度的蜕膜细胞。①肿瘤坏死因子α作用后的蜕膜细胞活性均低于空白对照组,并且随着肿瘤坏死因子α浓度越大,活力越小。10.0,50.0μg/L肿瘤坏死因子α作用后蜕膜细胞活性与空白对照组比较,差异有显著性意义[(0.196±0.040),(0.106±0.020),(0.317±0.020),P<0.05]。但50.0μg/L时经形态学观察有部分细胞漂浮、死亡。②肿瘤坏死因子α模型组蜕膜细胞活性低于黄芩苷组和肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,差异具有显著性意义[(0.27±0.03),(0.49±0.01),(0.38±0.02),P<0.05]。③流式细胞术示空白对照组蜕膜细胞凋亡率低于其他各组,差异均有显著性意义[(1.48±0.45)%,(16.40±0.82)%,(9.78±0.26)%,(10.96±0.92)%,P<0.05]。在荧光显微镜下,肿瘤坏死因子α作用后凋亡的蜕膜细胞细胞核变小皱缩,可见致密强荧光。结论:肿瘤坏死因子α能明显抑制人蜕膜细胞增殖分裂的过程,诱导该细胞凋亡,可用于人蜕膜细胞凋亡模型的建立。而黄芩苷对肿瘤坏死因子α诱导的蜕膜细胞凋亡具有一定对抗抑制作用。     

黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究黄芩苷对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响,并从抗凋亡的角度探讨其作用机制。方法:采用小剂量高脂高糖喂养联合链脲佐菌素单次注射法造成2型糖尿病大鼠模型,黄芩苷[150mg(kg·d)]灌胃8周,8周后称体重、肾重,计算肾指数;收集大鼠血液和24h尿,测定血糖和尿微量蛋白;一侧肾脏采用TUNEL法检测凋亡及免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,另一侧肾脏液氮保存后采用荧光实时定量RT-PCR法测Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果:与对照组比较,糖尿病组肾脏凋亡细胞数明显增多。Bax和Bcl-2表达均增强,Bax/Bcl-2增高(P<0.01);黄芩苷治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Bax表达减弱,Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低(P<0.01)。结论:黄芩苷可以抑制糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡,其作用机制可能与影响凋亡基因Bax和Bc1-2表达有关。     

FOXN2通过PI3K/AKT信号通路对肾癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究FOXN2通过PI3K/AKT信号通路对肾癌增殖、凋亡的影响.方法 实验分FOXN2过表达组、空载体对照组、对照组三组;检测FOXN2在人正常肾上皮细胞HK-2和肾癌细胞786-O中的表达;检测FOXN2过表达组、空载体对照组、对照组细胞的增殖情况和凋亡情况;检测FOXN2过表达组、空载体对照组、对照组细胞P...     

肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO2放射敏感性体外实验研究

目的：探讨体外培养的人肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株LO2的放射敏感性。方法采用6-MVX线分次照射细胞,进行克隆形成实验,流式细胞仪测细胞凋亡。结果 HepG2的细胞存活曲线较陡峭,细胞凋亡率升高幅度较达。结论 HepG2与LO2有不同的放射生物学特性,相比而言HepG2的放射敏感性较高。     

黄芩茎叶中野黄芩苷的提取工艺研究

目的:优选黄芩茎叶中野黄芩苷的最佳水提工艺。方法:采用L9(34)正交试验,以HPLC法测定水提液中野黄芩苷含量作为评价指标,优选黄芩茎叶的最佳水提工艺。结果:最佳水提工艺条件为:加10倍量的水,提取3次,每次提取1h;此工艺下所得到的野黄芩苷的含量为0.4106mg/g。结论:此提取工艺可行、可控。     

苦参碱抗人肝癌细胞株HepG2的作用及其机制研究

苦参碱是中药苦参的主要抗肿瘤活性成分，体外实验研究表明：苦参碱可抑制肝癌细胞增殖，其抑制方式，药物剂量和作用时间有关。一定浓度苦参碱诱导HepG2在细胞水平、代谢水平和基因水平均发生了不同程度的分化。苦参碱可诱导HepG2细胞凋亡。苦参碱抑制HepG2细胞增殖是通过激活G1期押癌基因p53、Rb、p21、p27、p16和促凋亡基因Bax的表达，抑制癌基因c-myc和抗凋亡基因Bcl-2的表达，从而诱导细胞分化、凋亡，其中起主导作用的可能是Wp53和Rb基因。     

PI3K/AKT信号通路与缺血性脑损伤引起的细胞凋亡研究进展

PI3K/AKT信号通路是细胞内调控信号转导的一个重要途径,其组成较为复杂,参与细胞增殖、凋亡、代谢等活动。缺血性脑损伤是一个复杂的病理过程,而细胞凋亡在此过程中发挥重要作用。PI3K/AKT信号通路是细胞存活的关键通路,在缺血性脑损伤、神经退行性疾病及肿瘤等诸多疾病中起调控作用。因此,研究该通路并探讨其在缺血性脑损伤中的作用对进一步探寻此类疾病的治疗具有重要意义。     

瑞芬太尼抑制人肝癌细胞Notch信号通路及细胞生长的研究

目的 探讨瑞芬太尼对肝癌细胞增殖、周期和凋亡及其相关Notch信号通路的影响。方法 通过体外培养肝癌细胞HepG2,采取不同浓度(0、5、50、500 ng/mL)的瑞芬太尼处理细胞,并设为瑞芬太尼各剂量组。采用500 ng/mL瑞芬太尼和20μmol/L Notch通路抑制剂DAPT处理细胞,分别设为瑞芬太尼组、瑞芬太尼+DAPT组。采用CCK8检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测p27、Cyclin D1、Bax、cleaved cas-3和Notch通路相关蛋白的表达。结果 0、5、50、500 ng/mL的瑞芬太尼均可以降低肝癌细胞的450 nm处的光密度值(OD_{450 nm}值)、S期细胞比率,增加G₀/G₁期细胞比率、细胞凋亡率,上调p27、Bax、cleaved cas-3蛋白表达,下调Cyclin D1、Notch1、Hes1蛋白表达,并呈浓度依赖性。瑞芬太尼+DAPT组的OD_{450 nm}值、S期细胞比率、Cyclin D1蛋白表达低于瑞芬太尼组,...     

LASS2通过AMPKα/mTORC1信号通路诱导HepG2肝癌细胞自噬和凋亡

目的 研究LAG1长寿保障基因2(LASS2)过表达对HepG2肝癌细胞凋亡、自噬的作用及可能的信号通路。方法 采用HepG2肝癌细胞进行研究,设置空白对照组、空载组(重组腺病毒Adv-GFP感染细胞)、实验组(重组腺病毒Adv-LASS2-GFP感染细胞)。感染48 h后分别提取各组细胞总RNA和蛋白,采用实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)、Western blot检测LASS2 mRNA、蛋白表达水平的变化;CCK-8实验评价各组细胞增殖能力的差异及流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白(BCL2、Bax)、自噬相关蛋白(SQSTM1、LC3A/B、Beclin-1)及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)α/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路相关蛋白(t-AMPKα、p-AMPKα、t-Raptor和p-Raptor)的表达水平。结果 与空白对照组、空载组相比,实验组LASS2 mRNA、蛋白相对表达水平均明显上调(P<0.001),且HepG2肝癌细胞增殖能力明显被抑制(P<0.001)。流式细胞仪检...     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。