阴沟肠杆菌菌株中携带小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛irp-2基因的检测

目的:了解从云南战区感染性腹泻患者粪便标本中分离的阴沟肠杆菌是否携带小肠结肠炎耶尔森菌H IP(H ighPathogen ic ity Island)毒力岛irp-2基因,并研究菌株的毒力及耐药情况。方法:用PCR扩增法检测毒力岛irp-2基因,小白鼠腹腔注射检测毒力。结果:从1040例腹泻病人粪便分离的25株阴沟肠杆菌中,检测出18株携带小肠结肠炎耶尔森菌H IP毒力岛irp-2基因,毒力试验证实有较强毒力,药敏试验筛选出了敏感、中度敏感及耐药三类药敏谱。结论:云南战区检出的阴沟肠杆菌含有小肠结肠炎耶尔森菌H IP毒力岛irp-2基因且为毒力较强的菌株,对人类的健康具有潜在性的威胁。建立的药敏谱,为军队和地方今后在治疗由此菌引起的感染提供重要参考。     

我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查

目的　了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法　使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果　在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中 ,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株 ,检出率为 2 7.0 5 % (436 / 16 12 )。从市售食品标本中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为 10 .2 3% (9/ 88)。从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为 5 .71% (16 / 2 80 )。携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便。结论　携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛 ,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌 ,对我国人民的健康是一个潜在的威胁     

由携带耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌引起的腹泻

2000年8月28日,途经沈阳的某旅行团发生腹泻爆发,发病76人,主要症状为腹痛、腹泻,经流行病学资料分析、实验室检测,证实为由携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌引起的腹泻爆发.     

江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌分布特征初步研究

目的了解江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布特点和毒力特征。方法用常规方法从家畜家禽粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，PCR法检测其五种毒力相关基因，同时对国内分离到的O：8血清型菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果从该地区293份家畜家禽粪便标本中分离到91株小肠结肠炎耶尔森菌，分离率为31．06％。未分离到国内主要流行血清型O：3和O：9，其中有39．57％菌株毒力基因分布特征为：ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-，有60．43％菌株为ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、VirF^-，两株国外引进的强毒菌株具有相同的脉冲图形，与国内分离到的O：8血清型菌株存在显著的差异。结论致病性小肠结肠炎耶尔森菌的分布具有局限性，江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布可能以非致病菌为主。     

浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌(动物株)分子生物学特征初探

目的：了解浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌的血清型别、毒力基因分布等情况。方法：利用常规细菌分离方法从家禽、家畜和鼠类粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，并进行毒力基因检测，同时对血清型O：3、O：5和O：8的菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果：2004～2005年，从全省各点采集的动物标本中共分离到22株小肠结肠炎耶尔森菌，分布于11个血清型，并以O：8和O：3为主。PCR检测将分离到的22株小肠结肠炎耶尔森菌毒力携带情况分为4型：Ⅰ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋），Ⅱ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-），Ⅲ型（ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、virF^-），Ⅳ型（ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-）。脉冲场凝胶电泳分析，O：3型菌株显示有2种带型，O：5型菌株的带型完全相同，O：8型菌株的带型则存在明显差异。结论：浙江省的从动物分离的小肠结肠炎耶尔森菌以非致病性菌株居多，且存在一定的地区差异。猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者，应警惕致病性小肠结肠炎耶尔森菌通过猪感染人和其它动物以及环境的危险。     

徐州市2004年小肠结肠炎耶尔森菌人及动物带菌情况调查报告

目的：调查本地区小肠结肠炎耶尔森菌人群及动物感染情况，毒力基因携带情况，血清型分布情况及生物型别。方法：10月中旬采集牛、羊、猪、狗粪便共358份，4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并做生化实验，可疑菌株做血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果：检出阳性菌株15株（其中2株携带毒力基因），检出率为4．2％（其中猪的检出率5．1％；羊的检出率5．7％；狗的检出率4．3％；牛的检出率0％）。结论：本次调查在羊、猪、狗粪便标本中检出小肠结肠炎耶尔森菌，带毒菌株的血清型为0：3，生物型为1B。检出的其余血清型别菌株均不带毒力质粒。人和牛粪便标本中未检出小肠结肠炎耶尔森菌。     

2011～2012年赤峰市松山区动物中检出41株小肠结肠炎耶尔森菌

目的了解赤峰市松山区境内鼠类,家畜家禽携带小肠结肠炎耶尔森菌情况,为疾病预防控制工作提供科学依据。方法采集鼠类、家畜家禽的粪便、脏器等样品,进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离、培养、鉴定和生物血清分型,并用PCR方法进行毒力因子检测。结果 2011～2012年共检验各类样品412份,检出小肠结肠炎耶尔森菌41株,皆来自猪咽拭子。2011年总检出率为16.02%,猪咽拭子的检出率高达28.28%。41株小肠结肠炎耶尔森菌中,携带了ail,ystA,yadA,virF,rfbc基因的3/O：3生物血清型菌株占95.12%;4/O：4生物血清型菌株占2.32%;其他占2.32%。结论赤峰市松山区境内的猪咽部携带小肠结肠炎耶尔森菌,猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者。     

小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛:结构与功能

小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛(Yen HPI)是最近发现的又一细菌毒力岛,其结构和功能的研究将进一步加深人们对小肠结肠炎耶尔森菌毒力或致病力的认识。本文综述了该毒力岛结构和功能的研究进展。     

天津蓟县致病性小肠结肠炎耶尔森菌分布调查

目的 了解天津蓟县致病性小肠结肠炎耶尔森菌菌株分布情况.方法 于2006年6月用常规方法从腹泻病患者、家畜的粪便样本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,并进行生物化学鉴定、血清分型、相关毒力基因检测以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果 从腹泻病患者和猪粪便中分离到的5株致病性小肠结肠炎耶尔森菌均为O:3血清型.全部携带毒力基因(ail、ystA、radA、virF),其中4株菌经脉冲场凝胶电泳分析属于同一带型(K6GN11C30021).另有1株带型为KGGN11C30026.结论 该县从腹泻病患者与宿主动物中分离到的致病性小肠结肠炎耶尔森菌有4株属于同一个克隆系,初步推断猪为当地小肠结肠炎耶尔森菌感染人群的主要来源.     

缺失耶尔森菌HPI irp6基因EAggEC的构建

目的 构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒，并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株。方法 根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列，设计PCR引物，扩增并克隆了irp6结构基因，在体外进行精确突变后，插入氯霉素抗性基因。再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒pKNGl0l中，构建成irp6基因重组自杀质粒pKH6，并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggECl7.2为出发菌株，通过体内同源重组，置换其irp6基因。结果 经接合转移和同源重组，利用蔗糖抗性筛选，pKH6上的同源序列有效的置换了EA6gECl7-2的ir6基因。结论 以小肠结肠炎耶尔森菌为靶构建的irp6基因重组自杀质粒成功的缺失了EAggECl7-2的ir6基因，获得了携带耶尔森菌强毒力岛的EAggECl7-2 irp6基因缺失株EAG6，为进一步研究其功能打下了基础。     

产毒性和致病性大肠埃希菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛分布的研究

目的：了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性（ETEC）和致病性大肠埃希菌（EPEC）中的分布。方法：用聚合酶链反应扩增和原位杂交方法。结果：在检测的93株ETEC和10株EPEC的毒力岛的检出率分别为32.25%(32/93)和30.00%(3/10),1株肠聚集性大肠埃希菌（EAggEC)也检出了毒力岛,而且这些阳性菌株中的岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA（asntRNA)位点。结论：ETEC、EPEC以及EAggEC是致病性较强的病原菌,而小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在ETEC和EPEC中具有阳性率较高的分布,对于进一步研究大肠埃希菌毒力变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化具有重要意义。     

几种肠道菌中细胞致死性肿胀毒素的检测及其细胞毒性初步研究

目的了解肠出血性大肠杆菌、非典型致泻性大肠杆菌、志贺菌及部分肠杆菌中CDT毒素基因存在情况及其细胞毒性。方法用PCR方法检测cdt基因,并将阳性菌株培养上清与HeLa细胞共同孵育检测细胞形态的改变,初步评价CDT毒素的表达及其细胞毒性。结果在肠出血性大肠杆菌O157∶NM中,cdt基因检出率为16.28%（7/43）,其中3株为cdt-Ⅲ型,其他4株为cdt-Ⅰ型;携带HPI毒力岛的非典型致泻性大肠杆菌中cdt基因检出率为6.25%（5/80）;在志贺菌中,cdt基因检出率为2.67%（4/150）,非典型致泻性大肠杆菌和志贺菌检出的cdt基因全部为cdt-Ⅰ型。而在O157∶H7大肠杆菌、枸橼酸杆菌和沙门菌未检出cdt基因。所有cdt基因阳性菌株均使HeLa细胞出现典型的细胞肿胀变化,效应滴度介于1∶2到1∶16之间。结论CDT毒素只在肠出血性大肠杆菌O157∶NM、携带HPI毒力岛的非典型致泻性大肠杆菌和志贺菌中检出,且检出率均比国外同类菌株低,其存在是否与疾病严重程度相关及其细胞毒性机制尚须进一步研究予以证明。     

致病性大肠埃希菌高致病性毒力岛irp2基因序列的扩增与分析

目的探讨致病性大肠埃希菌（EPEC）中高致病性毒力岛（HPI）irp2基因与致病性的关系。方法根据Genebank中irp2基因设计特异性引物，应用聚合酶链反应（PCR）技术扩增基因全长，克隆入pUCm-T载体，并通过酶切和测序鉴定。结果160株EPEC中有16株（10．00％）扩增出278bp基因片段，该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPI irp2基因的同源性高达97％以上。结论部分EPEC具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列，该毒力岛可能与EPEC的致病性有一定相关性。     

山东省腹泻病人携带耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的调查

目的 了解携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌的易感人群、感染率、临床症状、分离率。方法 对4个医院1997年6～11月就诊泻患者,进行流行病学调查并收集大便标本,进行细菌分离和鉴定。结果 在671例腹泻病人中,共检出20个属种449株致病毒,志贺菌检出率为25.48%,致泻性大肠杆菌为15.05%,对于176株疑似产志贺样毒素且具侵袭大肠杆菌(ESIEC)菌株采用irp-2、irp-B基因探针进行菌落原位杂交,检出42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌。与42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌相关的腹泻病人所表现的临床症状为食欲不振、腹痛、腹泻、寒战、乏力、体温正常或低热,粪例多为粘液便或水样便,日腹泻次数超过6次以上者为33例,占78.57%。各年龄组均有感染,10岁以下儿童为主,占33.33%.结论 自671例腹泻病人的粪便标本中,分离到的志贺菌占首位,致泻性大肠杆菌次之;在致泻性大肠杆菌以携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌为主(6.26%)。     

2006-2010年高密市小肠结肠炎耶尔森菌调查

目的了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌及动物带菌情况。方法 2006-2010年采集家畜家禽粪便、冷冻食品共2 097份,4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并作生化鉴定,将可疑菌株做进一步的血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果 2 097份标本中分离出131株小肠结肠炎耶尔森菌,总的检出率为6.25%,其中O∶3(携带毒力基因ail+、ystA+、rbfc+)和O∶9血清型的检出率分别为0.76%和1.52%。108株仅携带ystB基因(82.44%);26株不携带任何基因(19.85%)。131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型,其中生物1A型占74.80%;生物3型占1.52%;生物4型占0.76%。结论本地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌,有感染人和动物及引起食源性型疾病的可能,因此必须加大该菌的监测力度,以预防小肠结肠炎耶尔森菌病的感染流行。     

The ail gene is present in some Yersinia enterocolitica biotype 1A strains

One chromosomal virulence marker of Yersinia is the gene ail, which encodes Ail, an outer membrane protein that promotes attachment and invasion. A high correlation has been found between the ail gene and the virulence of Yersinia. Here, we report two Yersinia enterocolitica biotype 1A strains that are usually nonpathogenic and carry the ail gene. The ail gene sequences of biotype 1A strains displayed similarity to the bioserotype 1B/O:8 strain 8081. The finding suggests that ail-based detection methods for Y. enterocolitica alone are insufficient to detect real pathogenic strains.     

The detection of Yersinia enterocolitica in surface water by quantitative PCR amplification of the ail and yadA genes

Yersinia enterocolitica has been detected in surface water, and drinking untreated water is a risk factor for infection. PCR-based methods have been used to detect Y. enterocolitica in various sample types, but quantitative studies have not been conducted in water. In this study, quantitative PCR (qPCR)-based methods targeting the Yersinia virulence genes ail and yadA were used to survey the Grand River watershed in southern Ontario, Canada. Initial testing of reference strains showed that ail and yadA PCR assays were specific for pathogenic biotypes of Y. enterocolitica; however the genes were also detected in one clinical Yersinia intermedia isolate. A survey of surface water from the Grand River watershed showed that both genes were detected at five sampling locations, with the ail and yadA genes detected in 38 and 21% of samples, respectively. Both genes were detected more frequently at colder water temperatures. A screening of Yersinia strains isolated from the watershed showed that the ail gene was detected in three Y. enterocolitica 1A/O:5 isolates. Results of this study show that Yersinia virulence genes were commonly detected in a watershed used as a source of drinking water, and that the occurrence of these genes was seasonal.     

徐州市小肠结肠耶氏菌的病原性实验研究

目的：研究徐州地区从腹泻病人、家养动物中分离的16株、5种血清型的小肠结肠耶氏菌的病原性。方法：用生化生物分型，自凝性（AA）试验、钙依赖性（CD）试验，PCR检测毒力基因来检验不同菌株的致病性。用ATB Expression自动鉴定系统对致病菌株做药敏试验。结果：仅2株狗源性菌与1株人源性菌为致病菌，他们均为生物3型／血清型O：3，二者耐药模型完全一致。结论：徐州地区，小肠结肠耶氏菌生物3型／血清型O：3是致病菌型，他在狗和人群之间分布关系密切，其他型别菌株可能不致病或潜在致病。