瘦素对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及调控机制的研究

目的:研究瘦素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及对雌、孕激素受体和VEGF的mRNA表达水平的影响,进而揭示瘦素对乳腺癌MCF-7细胞系作用的分子生物学机制。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞系,分为对照组、瘦素组和雌激素组。给药后用MTT法测570nm分光光度值。实时荧光定量PCR法观察各组雌、孕激素受体及VEGF的mRNA表达水平。结果:与对照组相比,瘦素可以呈时间和剂量依赖的方式促进MCF-7细胞增殖,并上调细胞中雌、孕激素受体及VEGF的mRNA表达水平,P<0.05。结论:瘦素有促进乳腺癌细胞增殖的作用,该作用的发挥可能与其上调雌、孕激素受体与VEGF的表达有关。为乳腺癌的内分泌治疗提供了新的理论依据。     

雌孕激素对乳腺癌MCF-7细胞热休克蛋白mRNA水平的影响

目的：研究一定浓度雌、孕激素作用于MCF-7细胞一定时间后,细胞中VEGF、Hsp70、Hsp90和NF-κBp50 mRNA水平上的变化,进而揭示雌、孕激素对乳腺癌MCF-7细胞株作用的分子生物学机制.方法：体外培养人乳腺癌MCF-7细胞株,分4组给予不同处理因素,分别为对照组、雌激素组、孕激素组和雌孕激素混合组.给药72 h后MTT法测细胞570 nm分光光度值.RT-PCR法观察各组Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA表达水平.结果：与对照组相比,10^-9mol/L雌激素促进细胞生长作用最明显,10-7mol/L孕激素本身对MCF^-7细胞生长无明显影响,但在雌、孕激素混合组孕激素部分抑制雌激素促细胞增殖作用,具有统计学意义.与对照组相比,雌激素上调细胞中Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA水平;孕激素组Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA水平与对照组差异无统计学意义.孕激素可以部分抑制雌激素对MCF-7细胞Hsp70、Hsp90、VEGF和NF-κBp50 mRNA的上调作用.结论：雌激素促进乳腺癌细胞生长,可能是雌激素与癌细胞受体结合后通过某种途径刺激Hsp70、Hsp90、NF-κBp50及VEGF的表达,进而抑制癌细胞的凋亡,促进细胞增殖.孕激素通过抑制雌激素对Hsp70、Hsp90、NF-κBp50和 VEGF mRNA的上调作用,进而抑制其促进细胞增殖作用.雌、孕激素促进或抑制细胞增殖,与其对Hsp70、Hsp90、NF-κBp50及VEGF基因的调控是密切相关的.     

他莫昔芬对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制

目的 探讨他莫昔芬(TAM)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制.方法 采用对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,以无血清无酚红高糖DMEM培养基对其进行24 h的培养,然后将其分别接种并分为对照组(无血清无酚红高糖DMEM培养基)、TAM组(含有1μmol/L TAM的无血清无酚红高糖DMEM培养基),采用Western blot法、RT-PCR法检测两组MCF-7细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达水平,采用Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力.结果 TAM组MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均明显高于对照组,VEGF、MMP-9、MMP-2 mRNA相对表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);TAM组MCF-7细胞的侵袭能力相对数明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01).结论 TAM可能发挥类雌激素功能,促进乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力,这与其提高MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2表达水平有关.     

舒肝凉血方与三苯氧胺合用对人乳腺癌细胞MCF-7生长及ER表达影响

[目的]了解舒肝凉血方与三苯氧胺合用对体外培养的雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞MCF-7的生长及雌激素受体表达的影响.[方法]人乳腺癌细胞MCF-7分别加入终浓度20%的含药血清培养液,孵育24、48、72h,MTT法检测各组含药血清对细胞的生长抑制效应.MCF-7细胞加入20%的含药血清培养液,共同孵育48h,提取细胞蛋白质及总RNA,用Western blot法检测各组细胞中雌激素受体α表达,RT-PCR法检测各组细胞ERα mRNA的表达水平.[结果]MTT结果显示,三苯氧胺、中药、三苯氧胺 中药均可抑制MCF-7细胞的体外生长,且有时间依赖性,三苯氧胺加中药组抑制作用最强.采用RT-PCR检测到三苯氧胺组、中药组、三苯氧胺 中药组的ERαmRNA表达略低于对照组,统计学分析差异无显著性.Westem blot结果显示中药组ERα蛋白表达下调,三苯氧胺组及三苯氧胺 中药组的ERα蛋白表达上调.[结论]中药舒肝凉血方与三苯氧胺合用有协同效应,抑制乳腺癌MCF-7细胞的体外生长,并使ERα蛋白的表达上调.     

miR-206通过调节ERα水平影响乳腺癌细胞MCF-7对他莫昔芬敏感度的初步研究

目的 探讨乳腺癌细胞株MCF-7中miR-206能否调节ERα表达水平并影响乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感度。方法 将miR-206 mimic、miR-206 inhibitor及相应阴性对照（miR-206 mimic NC、miR-206 inhibitor NC）分别转染乳腺癌MCF-7细胞,RT-PCR法检测转染后各组乳腺癌细胞中miR-206和ERα mRNA的表达量,用5 μg/ml他莫昔芬处理MCF-7细胞后,MTT法检测不同转染组细胞增殖情况。结果 miR-206 mimic组中乳腺癌细胞miR-206表达升高,ERα mRNA表达降低; miR-206 inhibitor组中乳腺癌细胞miR-206表达降低,ERα mRNA表达升高。他莫昔芬作用24 h后,miR-206 mimic组与阴性对照组（miR-206 mimic NC）的乳腺癌细胞增殖抑制差异无统计学意义（t=-1.169, P=0.276）;miR-206 inhibitor组的乳腺癌细胞增殖抑制明显强于阴性对照组（miR-206 inhibitor NC）（t=-3.054, P=0.016）。结论 下调miR-206表达可以增加ERα阳性乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感度。     

瘦素对乳腺癌生长细胞动力学和形态学影响的研究

目的：研究瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞生长的作用。方法：分别使用0、25、50、100和200nmol／L瘦素作用于细胞株MCF-7细胞，同时在上述作用后24、48和72h采用光学显微镜观察细胞形态学改变，采用MTT比色方法，观察不同浓度瘦素对MCF-7细胞生长刺激的剂量、时间效应，比较在相对应剂量胰岛素情况下，二者对细胞增殖刺激作用的强弱。结果：加用瘦素各组细胞比未加瘦素细胞密度增加，形态变异。与正常对照组相比，各浓度瘦素（25、50、100和200nmol／L）均可明显促进MCF-7细胞增殖，其中50、100和200nmol／L瘦素作用24、48和72h后差异均有统计学意义，P〈0．05。瘦素对MCF-7细胞的增殖作用呈现一定的时间和剂量依赖效应。胰岛素各相对应组之间与瘦素比较，细胞增殖刺激作用差异无统计学意义，P〉0．05。结论：瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖有刺激作用，且这种作用呈现一定的剂量、时间依赖效应，结果提示瘦素是促进乳腺癌细胞增殖的因素之一。     

下调VEGF表达对人乳腺癌细胞凋亡相关基因影响的研究

目的:研究下调VEGF基因的表达对人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡及相关基因表达的影响,探讨敲减VEGF后乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制.方法:体外化学合成针对VEGF基因的siRNA序列,在脂质体Li-pofectamine2000TM 介导下转染MCF-7细胞,RT-PCR检测VEGF、Survivin及wtP53表达水平,比色法检测Caspase-3的活性,免疫组织化学法检测Survivin蛋白的表达,并用图像分析软件分析蛋白表达强度.结果:靶向VEGF的siRNA转染MCF-7后,明显促进了细胞凋亡,VEGF mRNA表达明显减少;Survivin基因mRNA及蛋白水平表达下调(P<0.01);p53的mRNA表达上调,Caspase-3活性增高.结论:敲减VEGF基因可促进MCF-7细胞的凋亡,其主要途径可能是下调Survivin的表达,活化Caspase-3来实现.     

PCDGF shRNA对乳腺癌细胞系MCF-7增殖凋亡和VEGF表达的影响

背景与目的：畸胎瘤细胞源性生长因子（PC cell-derived growth factor,PCDGF）是调节乳腺癌细胞增殖和凋亡的重要因子,然而其作用机制目前尚不清楚。本研究通过构建并体外转染针对PCDGF的shRNA,分析PCDGF对乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及细胞中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法：RT-PCR法检测PCDGF在4种乳腺癌细胞系中的表达,构建含2条shRNA的RNAi质粒,脂质体转染质粒于MCF-7细胞中,MTT法检测转染前后细胞增殖变化,ELISA法检测VEGF表达。结果：被检测的4种乳腺癌细胞中均有不同程度的PCDGFmRNA表达,转染shRNA质粒对MCF-7细胞PCDGF mRNA表达抑制率为59．8％;转染质粒后MCF-7细胞增殖受到抑制,实验组早期细胞凋亡率为30．41％,晚期细胞凋亡率为35．38％;阴性对照组早期细胞凋亡率为3．69％,晚期细胞凋亡率为15．39％。同阴性对照质粒相比,转染阳性质粒的MCF-7细胞VEGF的表达抑制率为47．2％。结论：PCDGF调节MCF-7细胞的增殖、凋亡和VEGF的表达。     

VEGF-C短发夹RNA抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭能力的实验研究

目的探讨应用靶向VEGF—C的短发夹RNA（shRNA）质粒载体在体外抑制乳腺癌细胞株MCF-7生物学活性的影响。方法制备携带有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的VEGF—C—shRNA质粒载体，脂质体转染方法转入乳腺癌细胞株MCF-7，通过倒置荧光显微镜及流式细胞术检测细胞的转染效率，RT—PCR及Western blot检测转染细胞内VEGF—CmRNA及蛋白的表达变化，MTT法检测细胞增殖抑制率，重组基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果高效转染入VEGF—C—shRNA的MCF-7细胞VEGF—C mRNA及蛋白表达水平显著下降；VEGF—C ShRNA对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用，其抑增殖效应呈时间依赖性；VEGF—C—shRNA可抑制乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭重组基底膜的能力，与阴性shRNA转染组、空载体组及空白组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；结论VEGF-C在乳腺癌增殖、侵袭转移中发挥重要作用，通过RNA干扰技术实现VEGF—C沉默在乳腺癌的基因治疗中具有可行性。     

GRM4正向别构调节剂抑制乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡

背景与目的：代谢型谷氨酸受体4（glutamate metabotropic receptor 4，GRM4）在多种恶性肿瘤中高表达并与肿瘤患者的预后相关，但GRM4在乳腺癌中的生物学作用仍不清楚。本研究拟探讨GRM4的两种正向别构调节剂VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞的增殖及凋亡的影响，进而为乳腺癌的靶向治疗提供思路。方法：在体外培养的乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和SK-BR-3中分别单独加入VU0364439、VU0364770以及联合使用两种试剂，利用CellTiter-Glo^®发光细胞活力测定法定量检测各组乳腺癌细胞系的增殖活性；利用Annexin Ⅴ-PI双染法检测各组乳腺癌细胞系的凋亡水平；通过实时荧光定量聚合酶链反应（realtime fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）技术测定GRM4基因在6种乳腺癌细胞系中的表达情况，在GRM4表达水平最高的细胞中单独加入或联合使用VU0364439及VU0364770，用RTFQ-PCR检测GRM4基因表达的改变。结果：与对照组相比，单独使用及联合使用VU0364439及VU0364770显著抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和SK-BR-3的增殖水平，并促进MCF-7细胞凋亡现象的发生；联合使用与单独使用VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞增殖及凋亡的作用差异无统计学意义（P＞0.05）；RTFQ-PCR实验表明GRM4在MCF-7细胞中的表达水平最高；在MCF-7细胞中分别单独使用或联合使用VU0364439及VU0364770均能激活GRM4的表达。结论：GRM4的正向别构调节剂能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用可能是通过激活GRM4基因的表达引起的，本研究为探索GRM4在乳腺癌中的作用机制以及开发新的乳腺癌靶向治疗方法奠定了基础。     

骨肉瘤组织中雌、孕激素受体的表达及临床意义

目的探讨骨肉瘤组织中雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）的表达及其与临床特征的关系。方法应用免疫组化改良ＳＰ方法对６５例骨肉瘤蜡块组织进行了ＥＲ、ＰＲ检测。结合临床特点进行统计学分析。所有病人术前均未接受内分泌治疗。结果骨肉瘤中ＥＲ表达的阳性率为４０％（２６／６５）,ＰＲ表达的阳性率为３２３％（２１／６５）;临床无转移,存活时间长之骨肉瘤中ＥＲ、ＰＲ表达的阳性率高于临床有转移、存活时间短者,差异有显著性意义（Ｐ＜００５）;不同性别、年龄、发病部位的骨肉瘤中ＥＲ、ＰＲ表达的阳性率无显著性差异（Ｐ＞００５）。结论骨肉瘤中存在ＥＲ、ＰＲ,ＥＲ、ＰＲ的检测可提示为骨肉瘤生物学行为,对病人预后的评估及探讨骨肉瘤内分泌治疗提供重要的理论依据。     

Estrogen and progesterone receptor profile patterns in primary breast cancer

Summary Estrogen (ER) and progesterone receptor (PgR) analyses have been performed in 884 primary, malignant human breast tumor biopsies. Receptor contents were evaluated with respect to age and menopausal status. The frequency of ER + tumors was found to be significantly higher in postmenopausal than in pre/perimenopausal women. Age rather than menopausal status was found to be associated with this difference. The significant association with age was found in the post- but not the pre/perimenopausal women.The frequency of PgR + tumors was found to be significantly lower in the postmenopausal than in the pre/perimenopausal women. Neither age nor menopausal status alone could account for this difference, which appears to be due to a compound effect of the two factors.The distribution of receptor profile patterns is described according to menopausal status. The patterns differ significantly in pre- and postmenopausal women. PgR dominates in the premenopausal tumor while ER dominates in the postmenopausal tumor. This difference is apparent within the subgroup of ER + PgR + patients as well.The current tenets for prediction of recurrent disease utilizing steroid hormone receptor determinations are discussed for the group of ER + PgR + patients.sponsored by The Danish Cancer Society     

肝细胞癌患者外周血性激素受体和糖皮质激素受体的含量

为探讨性激素受体(Sex Hormone Receptor)和糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor.GR)与肝细胞癌(Hepa- tocelular carcinoma.HCC)的关系及其意义,应用放射配体测定13例HCC患者及23例正常人外周血淋巴细胞雌激素受体(Es- trogen Receptor.ER)和雄激素受体(Androgen Receptor.AR)及外周血细胞GR水平.正常人ER和AR分别为616±106和687±109位点/细胞;GR为5360±1684位点/细胞.HCC患者ER和AR分别为968±120和2903±860位点/细胞.HCC伴肝硬化GR为3112±1130位点/细胞、不伴肝硬化为4536±1201位点/细胞.AR水平明显高于对照组,提示HCC可能为雄激素依赖性肿瘤;GR水平与肝硬化负相关,提示GR下降反映肝硬化的程度.     

Gender-related invasion differences associated with mRNA expression levels of melatonin membrane receptors in colorectal cancer

Melatonin inhibits growth and invasive capacity of colon cancer cells in vitro through its membrane (MT1 and MT2) and/or nuclear receptors (RORα). Previous studies showed that this indoleamine is present in both the normal and colon cancer at similar levels. Therefore, we analyzed MT1, MT2, and RORα expression in tumor samples versus normal mucosa (NM) from patients suffering from colorectal cancer (CRC). Given the existence of sex differences in the incidence and pathology of CRC and the involvement of steroid receptors in the oncostatic actions of melatonin in some types of cancer, we also analyzed the expression of androgen (AR) and estrogen receptor (ER) α and ERβ. Finally, we conducted some experiments in colon cancer cell lines to corroborate the experiments carried out in human tumors. We found a decreased expression of MT1, MT2, AR, ERα, and ERβ in tumor samples versus NM, but no changes in RORα expression in the whole cohort of patients. Classifying tumors by stage and gender, MT1, MT2, AR, ERα, and ERβ expression decreased in both early stage and advanced tumors, but only in male patients. On the other hand, MT1 and MT2 expression correlated positively with AR, ERα, and ERβ expression in male patients and with ERα or ERβ in female patients. In vitro, the invasive capacity was higher in cells with the least expression of MT1, MT2, and AR, and nonselective MT1/MT2 agonists inhibited cell growth and invasion. These results could indicate a possible interaction of these pathways.     

100例甲状腺癌中ER,PR表达及分析

目的检测甲状腺癌中ER、PR的表达,并且探讨它们的表达与肿瘤浸润转移的关系。方法应用SABC免疫组化方法,检测100例甲状腺癌中ER、PR的表达。结果甲状腺癌中ER、PR阳性表达分别为67.0％和62．0％,均与细胞分化程度、组织学类型有关,但其阳性表达与年龄、性别无关。无淋巴结转移组的甲状腺癌中ER、PR阳性率为75.4％和70．5％,显著高于有转移组的53．8％和48．7％（P＜0．05）、结论ER、PR可作为肿瘤分化及恶性程度的评价指标,并且能反映预后。     

人胃癌NKM—45细胞株胞浆,胞核性激素受体含量测定及分析

作者采用葡聚糖包被活性炭法测定了人胃低分化腺癌ＮＫＭ－４５培养细胞中分离的胞浆及胞核ＫＣＩ抽提组分中的ＥＲ、ＰＲ和ＡＲ的含量。结果显示胃癌ＮＫＭ－４５细胞的胞浆及胞核抽提液中ＥＲ含量为２４．８ｆｍｏｌ／ｍｇ和２５．１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，而ＰＲ含量为１６．４ｆｍｏｌ／ｍｇ和１８．６ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，ＡＲ均为阴性（＜１０ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白），说明ＮＫＭ－４５细胞为ＥＲ及ＰＲ阳性细胞，且ＥＲ和ＰＲ在该胃癌细胞的胞浆、胞核中均存在。作者认为胃癌可能是性激素依赖性肿瘤，适当的内分泌治疗可能对胃癌有效。     

乳腺癌肿瘤组织不同部位雌孕激素受体的表达

目的 探讨乳腺浸润性导管癌肿瘤组织中不同部位雌、孕激素受体表达情况.方法 收集32例手术切除乳腺浸润性导管癌肿瘤标本,于每例肿瘤标本4个不同部位取材,用免疫组化方法检测各部位雌、孕激素受体表达情况.结果 肿瘤组织不同部位雌、孕激素受体检测结果一致性好,最好Kappa值分别为0.789和0.810,最差Kappa值分别为...     

Influence of the menstrual cycle on the concentrations of estrogen and progesterone receptors in primary breast cancer biopsies

Summary There is controversy in the literature regarding the effects of endogenous hormones on estrogen receptors (ER) and progesterone receptors (PR) in young women with breast cancer.We studied 117 young women with primary breast cancer and assessed their breast biopsies for ER and PR. The women had a record of their last menstrual period prior to breast biopsy. The menstrual cycle was divided into four phases — early proliferative (days 1–7), late proliferative (days 8–15), early secretory (days 16–22), and late secretory (days 23–30). There were lower levels of both ER and PR in biopsies excised during the early secretory phase than in other phases of the cycle; early proliferative phase receptor positive medians of ER = 77 fmol/mg protein and PR = 467 fmol/mg protein fell to ER = 28 fmol/mg and PR = 128 fmol/mg protein in the early secretory phase.     

雌激素和雄激素受体在肺癌中的表达

背景与目的男性与女性肺癌流行病学表现明显不同,可能与性激素水平有关,有数据显示性别因素是肺癌明显独立的预后因子。本研究通过检测雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)在肺癌中的表达,探讨其与临床和病理学特征之间的关系。方法应用免疫组化S-P法检测105例(男84,女21)肺癌组织标本中ER、AR的表达。结果ER和AR总阳性率分别为14.3%(15/105)和20%(21/105)。肺癌组织中ER阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、组织分化程度及TNM分期、肿块大小、淋巴结转移情况等无关。AR的阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、组织分化程度及肿块大小等情况无关,而在Ⅲ期肺癌患者中显著高于Ⅰ期肺癌,淋巴结转移N2组与N0组之间也存在统计学差异(x~2=4.7828,P=0.0287)。结论ER阳性表达与肺癌的生物学行为可能无关。AR的阳性表达与肺癌进展和淋巴结转移程度可能相关。