金雀黄素对HEC-1B细胞增殖及荧光素酶报告基因表达影响的研究

目的 探讨金雀黄素对子宫内膜癌雌、孕激素受体阴性细胞系(HEC-lB细胞)增殖的影响及其受体作用机制,为临床运用金雀黄素抗肿瘤治疗提供理论依据.方法 体外培养子宫内膜癌HEC-lB细胞,金雀黄素作用浓度分别为10×10-6、20×l0-6、40× 10-6、80×l0-6、160×l0-6mol/L,作用时间分别为24、48、72、96 h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测金雀黄素对子宫内膜癌细胞增值的影响;同时采用荧光素酶报告基因的方法,检测不同浓度金雀黄素对雌激素应答原件(ERE)调控的雌激素受体α(ER-α)和雌激素受体β(ER-β)报告基因表达的影响,并比较其对ER-α和ER-β作用的差异性.结果 金雀黄素对HEC-1B细胞体外增殖有明显抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.01),其抑制作用随药物作用浓度增加和作用时间的延长而逐渐增强,呈剂量及时间依赖性.在金雀黄素浓度为20×10-6、40×10-6mol/L的作用下,报告基因的表达较空白对照组明显提高,差异有统计学意义(P＜0.01),且呈浓度依赖性;金雀黄素通过ER-β介导的报告基因表达水平的升高程度强于ER-α,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 金雀黄素可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调节子宫内膜癌细胞ER-α和ER-β的表达,调整ER-β/ER-α比例而实现.     

大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用MTT法检测不同浓度大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响,同时采用RT-PCR及Western Blot方法检测细胞中雌激素受体相关受体α(ERRα)mRNA及蛋白水平的变化。结果大豆甙元对Ishikawa细胞体外增殖有明显的抑制作用,并随药物浓度的增加及作用时间的延长其抑制作用逐渐增加,呈剂量及时间依赖性。低浓度(<40 mmol/L)大豆甙元对细胞中ERRαmRNA及蛋白水平无明显影响,而高浓度(≥40 mmol/L)大豆甙元可上调细胞中ERRα的表达。结论大豆甙元可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调控细胞中ERRα的表达实现。     

乳腺癌雌激素受体阳性细胞对雌激素受体阴性细胞增殖的影响

目的探讨雌激素受体(ER)表达不同的乳腺癌细胞间相互作用。方法 PCR法检测MDA-MB-231及MCF-7细胞中ER的基因表达。CCK-8法检测17β-雌二醇对MCF-7和MDA-MB-231细胞生长增殖的影响。将MDA-MB-231(雌激素受体阴性细胞)用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)法标记荧光信号,将其分别与MCF-7细胞(雌激素受体阳性细胞)和未标记荧光的MDA-MB-231细胞(雌激素受体阴性细胞)用Transwell侵袭小室分层共培养,加入或不加入雌二醇,检测MDA-MB-231细胞的增殖差异。结果 MCF-7细胞表达雌激素受体α(ESR1,ERα)和雌激素受体β(ESR2,ERβ),而MDA-MB-231细胞均不表达。17β-雌二醇浓度为10-11 mol/L时促MCF-7增殖作用最大,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),对MDA-MB-231细胞则无明显作用(P>0.05)。在加入雌二醇培养的MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞小室分层共培养组,经流式细胞仪检测发现MDA-MB-231平均荧光强度较对照组显著降低。结论雌激素受体阳性细胞在雌激素作用下,可促进雌激素受体阴性细胞的增殖。     

弓形虫对HPB-ALL细胞及CNE-2Z细胞增殖的影响

目的：探讨弓形虫对HPB—ALL细胞及CNE-2Z细胞增殖的影响。方法：取培养至对数生长期的HPB—ALL细胞和CNE-2Z细胞分别接种于96孔培养板中,加入不同浓度（1×10^4、2×10^4、4×10^4、8×10^4、16×10^4／mL）的弓形虫速殖子作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：弓形虫对HPB—ALL细胞增殖抑制率依次为14％、20％、33％、38％和39％,除第1组外,其余4组的吸光度值与对照组比较．差异均有统计学意义（P〈0．05）,且实验3、4、5组吸光度值与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;弓形虫对CNE-2Z细胞增殖抑制率分别是4％、9％、16％、20％和23％,其中实验4、5组吸光度与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：弓形虫逮殖子对体外培养的HPB—ALL细胞和CNE．2z细胞增殖有不同程度的抑制作用．     

姜黄素对肾小球系膜细胞增殖的影响及其意义

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响。方法:采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞活性(A值),并与地塞米松进行比较。结果:当姜黄素浓度≥6.25μmol/L时,系膜细胞增殖明显受到抑制,且表现为浓度依赖性;当姜黄素浓度≥50 μmol/L时,姜黄素抑制系膜细胞增殖的作用明显强于地塞米松(P<0.05)。结论:姜黄素能抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖,且作用强于地塞米松。     

异黄酮类植物雌激素通过雌激素受体对靶基因的转录调节作用

目的:观察异黄酮类植物雌激素染料木素和大豆苷元通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)对靶基因的转录调节作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体表达质粒的Hela细胞,观察染料木素和大豆苷元对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录激活作用;此外还观察ER拮抗剂ICI 182780对这两种植物雌激素转录激活作用的影响。结果:染料木素和大豆苷元均可通过ER的两种亚型ERα和ERβ激活ERE报告基因的转录,且这种转录激活作用能被ICI 182780所阻断。结论:染料木素和大豆苷元均能产生类雌激素样作用,通过ERα和ERβ激活ER靶基因的转录。     

孕酮、他莫西芬对子宫内膜癌细胞增殖及雌激素受体相关受体表达的影响

目的探讨孕酮及他莫西芬（tamoxifen,TAM）对子宫内膜癌细胞生长的影响及其对雌激素受体相关受体（ERRα）表达的影响。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用MTT法检测不同浓度孕酮及TAM对子宫内膜癌细胞生长的影响,同时采用Western Blot方法检测细胞中ERRα蛋白水平的变化。结果不同浓度孕酮对Ishikawa细胞体外增殖具有抑制作用,呈剂量-时间依赖性。TAM对Ishikawa细胞体外增殖具有双向作用,在×10-9~×10-7mol/L TAM作用下促进细胞增殖,并呈剂量-时间依赖性;在×10-5mol/L TAM作用下抑制细胞增殖。×10-9~10-6mol/L TAM作用后下调细胞中ERRα蛋白表达,×10-5mol/L TAM及孕酮作用后上调ERRα蛋白表达。结论孕酮及高浓度他莫西芬（×10-5mol/L）可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调控细胞中ERRα表达实现;而低浓度他莫西芬则促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

雌激素受体亚型对妇科疾病影响的研究进展

雌激素是女性重要的甾体激素,而女性生殖器官大部分为雌激素依赖性,而雌激素发挥生物作用主要是通过其受体（ ER α和ER β）,故雌激素受体的功能异常与妇科疾病的发生和发展有着密切的关系。同时,阐明正常和疾病状态雌激素受体的功能差异对于疾病的治疗有着重要意义。作者对雌激素受体与卵巢癌子宫内膜异位症、子宫内膜癌、宫颈癌、子宫肌瘤的关系作一综述。     

大豆苷元对免疫器官的影响

目的：研究大豆苷元对免疫器官的作用。方法：称重法测定小鼠的体重和脾脏、胸腺重量。结果：大豆苷元能显著增加小鼠的体重,及其脾指数和胸腺指数。结论：大豆苷元能增加小鼠的体重和免疫器官的重量。     

雌激素受体和过氧化物酶增殖子激活受体γ交叉对话对大豆苷原骨的保护作用

目的 探讨雌激素受体(ERs)和过氧化物酶增殖子激活受体γ(PPARγ)交叉对话对大豆苷原防治去势大鼠骨质疏松的作用.方法 将4个月龄大鼠随机分为6组:假手术组、去势组、去势+戊酸雌二醇组(E2)、去势+高剂量大豆苷原组(H-Dai,200 mg·kg~(-1)·d~(-1))、去势+中剂量大豆苷原组(M-Dai,50 mg·kg~(-1)·d~(-1))和去势+低剂量大豆苷原组(L-Dai,10 mg·kg~(-1)·d~(-1)),造模成功后,灌胃3个月后处死大鼠.以腰椎L_6和右股骨提取总RNA,RT-PCR方法检测ERα、ERβ和PPARγ mRNA表达;免疫组化检测腰椎L_4与左股骨3种蛋白表达.结果 不同剂量大鼠ERα mRNA和蛋白表达水平均显著低于ERβ.除H-Dai组大鼠股骨之外,ERβ mRNA在M-Dai组大鼠腰椎和股骨(0.0177±0.0010,0.0245±0.0013)和L-Dai组大鼠的腰椎及股骨(0.0276±0.0027,0.0278±0.0044)以及H-Dai组大鼠腰椎(0.0163±0.0037)的表达水平均显著高于去势组(0.0016±0.0005,0.0041±0.0014),且与E_2组差异无统计学意义,ERB蛋白的表达情况与之类似.组间比较显示随着大豆苷原剂量降低,ERβ mRNA及蛋白表达水平有增高的趋势,而PPARγ mRNA及蛋白表达水平则降低.结论 ERβ和PPARγ之间存在此消彼涨的交叉对话关系,可能参予介导大豆苷原防治去势大鼠骨质疏松症的量效作用.     

曲古菌素A对去乙酰化酶2在子宫内膜癌细胞株HEC-1B中表达的影响

目的研究曲古菌素A（TSA）对子宫内膜癌细胞株HEC-1B中去乙酰化酶2（HDAC2）和p53表达的影响,及TSA对HEC-1B增殖的抑制作用,探讨TSA诱导HEC-1B细胞增殖抑制的机制。方法用不同浓度的TSA（100、200、400nmol／L）分组培养HEC-1B细胞（0、24、48、72h）,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度、不同时间的TSA作用后子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖率。应用Western Blot以及RT-PCR方法检测HDAC2和p53的表达水平,研究TSA对其表达的影响。结果TSA对HEC-IB细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈时间依赖性（P〈0．01）。HDAC2在该细胞中的表达随TSA的剂量和时间呈减弱趋势,而p53的表达呈升高趋势。结论TSA具有去乙酰化酶抑制剂作用,抑制HDAC2的表达并促进肿瘤抑制因子p53的活化与表达,能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖。     

塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖和凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞后细胞增殖的变化;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;RT-PCR检测细胞中COX-2 mRNA的表达。结果MTT结果显示,塞来昔布对HEC-1B细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增加,S期和G2/M细胞减少,细胞凋亡率增加,各药物组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,在50~200μmol/L塞来昔布组,随着药物浓度的增加COX-2 mRNA的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论塞来昔布能抑制HEC-1B细胞的增殖,并能改变细胞周期和诱导凋亡,其机制可能与下调细胞中COX-2 mRNA的表达有关。     

Effect of artesunate on human endometrial carcinoma HEC-1B cells

Objective： To observe the effect of the artesunate （ART） on cellular proliferation in vitro, to search for the possible anti-tumor mechanism of ART on endometrial carcinoma at the molecular level and to provide the experimental and theoretical foundations for the clinical applications of ART. Methods： The cell proliferation was observed by microscope; MTT was used to examine the effects of ART on proliferation of HEC-1B cells, and flow cytometric analysis was used to detect cell cycle and apoptosis. The human endometrial carcinoma HEC-1B cells were conventionally cultured; ART was administered with a concentration of 40 μg/ml before the total RNA were extracted, mRNA expression of Survivin, Caspase-3, N-Cadherin, E-Cadherin, Fibronectinl and Cox-2 were detected using RT-PCR. Results： ART reduced proliferation in human endometrial carcinoma cell line HEC-1B in a dose- and time-dependent effect. The cells of G0/G1 stage were significantly increased （P〈0.05）, but the cells of G2/M stages were significantly decreased （P〈0.05）, so it has shown that the cell cycle was probably blocked in G0/G1 stage. After intervention with ART at 20 and 80 μg/ml for 48 h, cellular apoptosis rate respectively was （36.42±0.77）% and （11.77±0.58）%, and the difference was statistically significant compared with the control （[6.64±0.191%, P〈0.01）. The expression of Cox-2 mRNA in the ART group was lower than those of control group, yet the expression of Caspase-3 and E-Cadherin mRNA in the ART group was higher than those of control group. Conclusion： ART can inhibit HEC-1B cell growth and proliferation in a dose- and time-dependent manner. Furthermore, ART can induce apoptosis in a dose-dependent manner. ART is able to downregulate Cox-2 mRNA expression and to upregulate E-Cadherin and Caspase-3 mRNA expression. So we can conclude that ART could induce the endometrial carcinoma HEC-1B cell apoptosis and inhibit tumor cell proliferation.     

miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响

目的研究miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响。 方法构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。细胞实验分为空白对照组(HEC-1-A不做任何处理)、NC-miR组(转染miR-27a空载体)及miR-27a inhibitor组(转染miR-27a抑制剂)。qRT-PCR法检测各组细胞miR-27a表达情况;MTT比色法和平板克隆技术检测各组细胞增殖能力。 结果成功构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。miR-27a inhibitor组miR-27a水平及细胞增殖能力均低于NC-miR组及空白对照组(P＜0.05)。 结论miR-27a低表达抑制子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖能力。     

"益肾清火"方对牙周炎大鼠性激素受体基因表达的调节作用

目的观察中药“益肾清火”方对牙周炎大鼠牙龈组织中性激素受体基因表达的调节作用。方法以64只SD大鼠作为实验对象,分为空白对照组和牙周炎模型组,后者建模成功后又分为模型对照组、造模后灌服中药高剂量组和等效剂量组。空白对照组和模型对照组动物灌喂生理盐水,造模后灌服中药组动物则灌喂中药3个月。收集各组动物牙龈组织,采用实时PCR技术分别检测雌激素受体(ERα、ERβ)和雄激素受体(AR) mRNA的表达情况,并进行统计学分析。结果用药3月后,各组雄性动物ERα mRNA表达无显著差异;造模后灌服中药高剂量组雌性动物ERα mRNA表达显著高于空白对照组和模型对照组(P<0.01),而其与等效剂量组比较无显著差异(P>0.05)。各组组内ERα mRNA的表达在雌雄动物之间有显著性差异(P<0.01)。ERβ、AR mRNA在各组间和同组不同性别动物间的表达均无显著差异(P>0.05)。结论中药“益肾清火”方可以在一定程度上提高牙周炎大鼠牙龈组织中雌激素受体 mRNA的表达。     

大豆苷原和染料木黄酮对小鼠子宫内膜癌TN F-α、IL-1α及IL-6表达的影响

目的 探讨大豆苷原和染料木黄酮在雌二醇-17β(E2)所诱发的小鼠子宫内膜癌TNF-α、IL-1α、IL-6 mRNA表达变化中的作用.方法 利用定量RT-PCR法检测小鼠子宫内膜癌细胞TNF-α、IL-1α、IL-6 mRNA的表达量.结果 E2单独投与群TNF-α、IL-1α、IL-6 mRNA分别为(0.605±0.011)、(2.796±1.569)、(2.809±0.011).与E2单独投与群比较,E2和染料木黄酮和大豆苷原联合投与群,能够明显抑制E2刺激所诱发的TNF-α、IL-1α及IL-6表达的增强.结论 E2皮下注射的雌性ICR小鼠给予染料木黄酮和大豆苷原后,能够诱发TNF-α、IL-1α、IL-6 mtLNA的表达下调,对子宫内膜癌的预防有一定的意义.     

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的：研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3－E1甾体激素受体辅激活因子1（steroid receptor coactivator-1,SRC-1）和核受体辅抑制因子（nuclear receptor corepressor,NcoR）表达的调节作用及其机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞于含29／6胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α最低必须培养基（α—minimal essential medium,α—MEM）中,给予不同浓度大豆苷原或10^-6 mol／L的雌二醇作用3d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体（estrogen receptor,ER）拮抗剂ICI182780（Faslodex,ICI,10^-7 mol／L）和雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）特异性拮抗剂（methyl—piperidino—pyrazole,MPP,10^-6 mol／L）干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果：大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^-7mol／L和10smol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2．5倍（P〈0．05）和2倍（P〈0．05）。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35％（P〈0．05）。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^-7mol／L和10^-5 mol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1．8倍（P〈0．05）和2．4倍（P〈0．05）。结论：大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1／NcoR比值。ER8参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1／NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。     

醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及对PCNA表达的影响

目的研究醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及其分子作用机制。方法以不同浓度醋酸曲谱瑞林（0，10^-9，10^-8，10^-7，10^-6，10^-5mol／L）体外作用于中分化人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B（0mol/L组作为对照组，其余各组作为实验组），用MTT法检测细胞抑制率；免疫细胞化学检测HEC-1-B细胞PCNA蛋白表达，并用病理图像分析软件进行半定量分析。RT—PCR法检测HEC-1-B细胞PCNAmRNA的表达。结果①当醋酸曲谱瑞林浓度为10^-9mol／g时，HEC-1-B细胞即受到抑制，抑制率为36．8％；随着浓度的增大，抑制率渐高，到浓度为10^-5mol／g时抑制率上升至57．4％。与对照组比较，实验组抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。②浓度从10^-9 - 10^-5mol／L的醋酸曲谱瑞林作用72h后，PC—NA蛋白和PCNAmRNA表达均有不同程度的下降，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论醋酸曲谱瑞林在体外对HEC-1-B细胞可能有直接的抑制作用，且呈剂量依赖关系。醋酸曲谱瑞林抑制HEC-1-B细胞增殖的分子机制可能与下调PCNA蛋白表达有关。     

人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B中RASSF1A基因的甲基化及其表达

目的:研究Ras相关结构域家族1A基因(RASSF1A)启动子区域在子宫内膜癌细胞株HEC-1-B中的甲基化状态及其与RASSF1A基因表达的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(Methylation specialPCR,MSP)技术检测HEC-1-B细胞RASSF1A基因甲基化状态;采用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测HEC-1-B细胞RASSF1A mRNA表达;并观察去甲基化药物5-杂氮脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用后RASSF1A基因甲基化状态和RASSF1A mRNA表达。结果:子宫内膜癌细胞株HEC-1-B存在RASSF1A高甲基化,RASSF1A mRNA表达缺失或低表达。结论:子宫内膜癌细胞株HEC-1-B中的RASSF1A基因启动子区域DNA存在高甲基化,可能在子宫内膜癌的发生发展中起作用。