HBV垂直传播的细胞分子机制研究(英文)

目的:探讨HBV垂直传播状况、细胞分子机制及其对胎儿的影响。方法:将46例HBV感染孕妇按HBeAg(+)和HBeAg(-)进行分组,以PCR法对46例HBV感染孕妇产前血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBV-DNA进行检测,并对新生儿脐血血清及脐血单个核细胞(CBMC)中HBV-DNA进行检测,同时选取10例健康孕妇为正常对照。结果:HBV感染孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别为69.57％(32/46)和41.30％(19/46),分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为56.52％(26/46)和21.74％(10/46)。其中HBeAg(+)组孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别为100.00％(25/25)和60.00％(15/25);分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为88.00％(22/25)和32.00％(8/25)。HBeAg(-)组孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别33.33％(7/21)和19.05％(4/21),分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为19.05％(4/21)和9.52％(2/21)。两者相比差异有显著性(P<0.01和P<0.05)。健康孕妇血清、PBMC及其所分娩新生儿脐血血清、CBMC中均未检出HBV-DNA。结论:HBV确可经胎盘垂直传播,其传播途径可通过直接传播,亦可通过PBMC介导,PBMC介导的HBV垂直传播较隐匿,HBeAg(+)孕妇发生HBV垂直传播的危险性高。     

外周血单个核细胞在乙肝病毒母婴传播中的作用

目的 探讨母婴单个核细胞(PBMC)中乙肝病毒DNA (HBV-DNA)与血清HBV-DNA之间的关系.方法 选择血清HBV-DNA阳性产妇55例,依据入院时血清HBV-DNA的检测结果分为病毒高载量组(≥106copies·ml-1,n=25)和低载量组(<106copies·ml-1,n=30),分别提取产妇外周血及新生儿脐血中PBMC,荧光定量PCR法测定两者中HBV-DNA.另外选择乙肝病毒标志物阴性的产妇及其新生儿10例作为阴性对照组.结果 阴性对照组母婴PBMC及血清HBV-DNA均阴性.病毒高载量组产妇的新生儿血清HBV-DNA阳性率为20%(5/25),低载量组产妇的新生儿血清HBV-DNA均阴性,两组新生儿间血清HBV-DNA阳性率差异有统计学意义(P<0.05);病毒高载量组产妇PBMC HBV-DNA阳性率高于低载量组(分别为84.0%和43.3%,P<0.05);PBMC HBV-DNA阳性产妇的新生儿脐血PBMC HBV-DNA阳性率明显高于PBMC HBV-DNA阴性产妇的新生儿(P<0.05).有4例新生儿中脐血PBMC HBV-DNA及血清HBV-DNA均阳性,11例仅脐血PBMC HBV-DNA阳性,1例仅血清HBV-DNA阳性.结论 血清HBV-DNA阴性的新生儿其PBMC HBV-DNA可独立阳性;在检测母婴血清HBV-DNA的基础上进行母婴PBMC HBV-DNA的检测是高危母婴筛查的重要补充,可弥补目前新生儿宫内感染诊断的不足.     

HBsAg与HBeAg阴性孕妇乙肝垂直传播的临床观察

目的观察HBsAg与HBeAg阴性孕妇的新生儿乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染状况。方法选择HBsAg和HBeAg阴性、其他HBV血清标志物阳性孕妇的新生儿作为观察组,同期HBV血清标志物全部阴性孕妇的新生儿作为对照组。采用套式PCR方法检测两组新生儿血清及外周血单个核细胞（PBMC）中的HBV—DNA。结果观察组32例新生儿中,血清HBV—DNA阳性4例,阳性率12．5％（4／32）,PBMC中HBV—DNA阳性8例,阳性率25％（8／32）,其中血清与PBMC均阳性1例,宫内感染率34．3％（11／32）。对照组21例新生儿血清HBV—DNA和PBMC中HBV—DNA均为阴性。结论HBsAg及HBeAg阴性而其他HBV血清标志物阳性的孕妇也可能发生HBV的垂直传播。     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒在母婴垂直传播中的作用

目的：探讨HBsAg、HBeAg阳性孕妇外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒(HBV)DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用。方法：对HBsAg／HBeAg双阳性共67对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯PBMC后，经抽提、纯化后的DNA进入PCR扩增反应，引物为HBVC区基因序列。结果：67名HBsAg及HBeAg双阳性的孕妇中有35例(52．2％)PBMC中HBV DNA阳性，25例孕妇在血清及PBMC中均发现HBV DNA。67名新生儿有22例感染HBV DNA，感染率32．8％，其中血清HBV DNA阳性者10例，PBMC HBV DNA阳性者19例，二者均阳性者7例。结论：母亲PBMC内HBV DNA阳性可能导致新生儿PBMC中HBV DNA阳性，PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径，同时，HBsAg及HBeAg阳性母亲若血清HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染HBV的危险性。     

不同分娩方式与乙型肝炎病毒母婴垂直传播关系的研究

目的:观察不同分娩方式对乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播关系的影响。方法:选取我院妇产科自2008年5月至2012年3月收治的260例乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性孕妇及其新生儿作为研究对象,按照分娩方式不同分为剖宫产组112例和阴道顺产组148例。两组均于孕妇入院时及新生儿出生24h内给予乙肝免疫球蛋白及乙肝疫苗常规注射,同时检测血清HBsAg、抗-HBs及HBV-DNA水平,比较不同分娩方式对乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播的影响。结果:本组260例HBsAg阳性孕妇分娩24h内共计出现HBV母婴垂直传播23例,占8.85%。随着HBV-DNA水平逐渐增高,母婴垂直传播率也逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.01)。产前孕妇HBV-DNA水平≤1010copies/L时,两组婴儿垂直传播感染率、HBV-DNA阳性率比较无明显差异(P>0.05);HBV-DNA水平>1010copies/L时,剖宫产组婴儿垂直传播感染率、HBV-DNA阳性率较阴道产组显著降低(P<0.05)。结论:入院时HBV-DNA水平可显著影响孕妇母婴垂直传播发生率,剖宫产可以显著降低HBV母婴垂直传播发生率。     

母婴血清HBV-DNA定量分析及其相关意义

目的:通过研究乙肝孕妇血清中HBV-DNA含量、血清学指标与胎儿宫内感染的关系,找出可致胎儿宫内感染的孕妇血清HBV-DNA临界值,以指导临床。方法:对孕妇于分娩前应用ELISA法检测乙肝标志物5项指标,选择64例阳性病例再用FQ-PCR技术进行HBV-DNA定量检测。同样对64例新生儿脐血分别进行上述两项检测。结果:①HBsAg、HBeAg阳性组血清HBV-DNA含量明显高于其他模式组,有显著性差异,说明HBV-DNA含量与HBeAg的存在有明显的关系;②对孕妇血清HBV-DNA含量与脐血HBV-DNA含量进行等级相关分析,显示二者呈正相关;③当孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝/ml时其宫内感染率明显高于含量≤104拷贝/ml组,HBV母婴传播率有显著性差异。结论:①HBV-DNA定量分析可准确测量孕妇体内HBV复制水平,且优于ELISA法,二者结合更有意义;②孕妇血清HBV-DNA含量的高低反映HBV垂直感染的强弱,脐血中HBV-DNA含量与母血含量呈正相关;③孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝/ml时其宫内感染率明显增高,可以作为HBV母婴传播的预测指标指导临床。     

FQ-PCR检测HBV DNA效果分析

目的检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA拷贝数,分析乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)与血清免疫标志物的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清样本中HBV-DNA含量;同时酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBV血清标志物(HBVM),并对检测结果进行分析。结果在HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)和HBsAg(+) HBeAg(+)组HBV-DNA阳性率分别为96.1%（298/310）和96.6%（28/29）,病毒含量为：1.85×108copies/ml;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)和HBsAg(+)HBcAb(+)组患者血清HBV-DNA阳性率分别为44.2%(80/181)和82.9%（31/41）,病毒含量为：4.8×106copies/ml。血清中HBeAg与HBVDNA含量密切相关。结论荧光定量PCR在乙肝的诊断、判断传染性强弱及评价抗病毒治疗效果方面具有较大的临床应用价值。     

替比夫定阻断高病毒载量乙肝携带孕妇母婴传播20例的疗效观察

目的通过观察替比夫定阻断高病毒载量乙肝携带孕妇母婴垂直传播效果,探讨妊娠期抗病毒治疗对乙型肝炎母婴传播的阻断意义和疗效.方法2011年10月至2012年4月,我院门诊检查HBsAg阳性孕妇测定其血清HBV-DNA含量均在106拷贝/ml以上的病例20例,随机分为两组,实验组12例于妊娠28周至分娩期间一直服用替比夫定600mg,1次/天,对照组8例不用药物干预.观察所有孕妇孕期和分娩前HBV-DNA含量、HBV血清标志物情况.检测分娩后新生儿脐血中HBV-DNA含量、HBV标志物情况.结果20例乙肝病毒携带的孕妇中,实验组11例未检出HBV-DNA(<5×102拷贝/ml),1例HBV-DNA降至103拷贝/ml,对照组8例检出HBV-DNA仍维持在106拷贝/ml以上,所有新生儿均发育正常,实验组12例新生儿脐血中HBV-DNA<5×102拷贝/ml,HBsAg呈阴性.对照组仅1例新生儿脐血中HBV-DNA<5×102拷贝/ml,HBsAg呈阴性.结论替比夫定可以显著降低HBV-DNA载量,降低新生儿宫内感染几率,对阻断母婴HBV垂直传播有效.     

分子杂交技术对外周血单个核细胞及肝细胞内HBV—DNA的初步研究

本文分别用转移印迹杂交和斑点杂交检测61例乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)及血清中的HBV-DNA。同时用转移印迹杂交和原位杂交检测其中31例患者肝活检组织中的HBV-DNA。结果发现血清、PBMC及肝组织HBV-DNA阳性率分别为26.2％(16/61),24.6％(15/61)及48.4％(15/31)。同一个体内,血清、PBMC及肝组织内HBV-DNA之间无明确的关联,血清HBV-DNA阴性时,仍可在11例患者的PBMC或肝内检出HBV-DNA。结果表明,PBMC可能也是独立于肝外的HBV贮存及复制的场所。血清HBV-DNA阴性不能否定体内仍有HBV复制的可能。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV-DNA检测的临床意义

目的 研究HBV感染者血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBV-DNA的感染情况.方法 采用荧光定量PCR技术对112例乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测.结果 PBMC内HBVDNA阳性60例,阴性52例;PBMC内HBV-DNA阳性患者HBeAg阳性率68.3%,较PBMC内HBV-DNA阴性患者显著增高(P＜0.05);血清和PBMC检测结果一致的患者占总检出率的79.5%.肝硬化组PBMC内HBV-DNA阳性率高于急性乙型肝炎组和慢性肝炎组(P＜0.05).结论 血清与PBMC内HBV-DNA阳性率以及HBeAg阳性率存在明显的相关性.PBMC中HBV-DNA的持续存在可能与乙肝易慢性化有关.     

HBV-DNA的含量与宫内感染的关联性

目的：探讨孕妇血清中HBV—DNA含量与胎儿宫内感染及造成宫内感染的相关因素．方法：用ELISA方法筛选HBsAg阳性孕妇228例,并用定量PCR技术检测HBsAg阳性孕妇血清以及脐血中HBV—DNA．新生儿根据有无HBV感染分为胎儿感染组及非感染组（对照组）,调查宫内感染的相关因素,结果：HBsAg,HBeAg、抗HBc阳性孕妇的新生儿脐血HBV—DNA捡出率21％（14／68）;HBsAg．抗HBe,抗HBc阳性者为1．7％（2／117）;HBsAg和HBeAg双阳性者为20％（3／15）;HBsAg和抗HBc阳性者为11％（2／19）;HBsAg单一抗原阳性者脐血中未捡出HBV—DNA．胎儿总感染率为9,2％（21／228）．胎儿宫内感染率随孕妇血清中HBV—DNA含量增加而升高,宫内感染的危险性越大．胎儿感染组与非感染组在多种临床相关因素中先兆早产孕妇胎儿感染者多于非感染组（P〈0．05）．结论：孕妇不同的感染状态影响宫内HBV感染率,HBeAg与HBV—DNA高滴度是胎儿宫内感染的高危因素．孕妇出现先兆早产使胎儿的感染率增加．     

Relationship between Maternal PBMC HBV cccDNA and HBV Serological Markers and its Effect on HBV Intrauterine Transmission

Objective To investigate the relationship between maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) hepatitis B virus(HBV) covalenty closed circular deoxyribonucleic acid(cccDNA) and other HBV serological markers and its effects on HBV intrauterine transmission. Methods We enrolled 290 newborns and their hepatitis B surface antigen(HBsAg) positive mothers. HBV cccDNA in PBMC and HBV DNA in serum were detected by a real‐time PCR‐TaqM an probe while HBV serological markers were detected with an electrochemiluminescence immunoassay. Results There was a positive correlation between the levels of PBMC HBV cccD NA and serum HBV DNA and HBeA g(r = 0.436 and 0.403, P 0.001). The detection rate of pattern A [‘HBsA g(+), HBeA g(+), and anti‐HBc(+)'] was significantly higher in the PBMC HBV cccD NA positive group than in the control group(χ2 = 48.48, P 0.001). There was a significant association between HBV intrauterine transmission and PBMC HBV cccD NA(χ2 = 9.28, P = 0.002). In the presence of serum HBV DNA, HBeA g, and PBMC HBV cccD NA, the risk of HBV intrauterine transmission was three times higher(OR = 3.69, 95% CI: 1.30‐10.42) than that observed in their absence. The risk of HBV intrauterine transmission was the greatest(OR = 5.89, 95% CI: 2.35‐14.72) when both PBMC HBV cccD NA and pattern A were present. A Bayesian network model showed that maternal PBMC HBV cccD NA was directly related to HBV intrauterine transmission. Conclusion PBMC HBV cccDNA may be a direct risk factor for HBV intrauterine transmission. Our study suggests that serological markers could be combined with PBMC‐related markers in prenatal testing.     

胎盘HBV-DNA定量检测与宫内感染关系的研究

目的 探讨胎盘HBV—DNA含量与官内感染的关系及作为胎盘传染性和病毒复制的直接指标的可靠性。方法 采用FQ～PCR（荧光探针定量聚合酶链反应）检测344例HBV标志物阳性孕妇足月分娩后的胎盘的HBV—DNA含量，并分别检测同一孕妇分娩前的外周血及脐血的HBV—DNA含量，比较其测定值范围及相互关系。结果 344例孕妇按乙肝标志物组合，分为三组，分别检测分娩前外周血HBV—DNA、胎盘HBV—DNA及脐血HBV—DNA，检出率分别为：（1）HbsAg携带组90例，22．2％（20／90）、33．3％（30／90）和5．6％（5／90）；（2）大三阳组134例，70．9％（95／134）、85．8％（115／134）和11．9％（16／134）；（3）小三阳组120例，20.8％（25／120）、20．8％（25／120）和3．3％（4／120）。孕妇乙肝标志物阳性以大三阳组HBV—DNA阳性率最高，胎盘组织HBV—DNA含量与母血HBV—DNA含量有一致性和相关性。结论 外周血HBV—DNA阳性孕妇更易发生胎盘感染。官内感染的程度可随胎盘组织HBV—DNA含量增加而程度加重。胎盘HBV—DNA含量可作为一个宫内感染的判断指标。     

HBV携带产妇的血清及乳汁HBV-DNA载量的差异与母乳喂养安全性的研究

目的 探讨HBV携带产妇的血清、乳汁中HBV-DNA不同裁量与实施母乳喂养安全性的关系及对母婴传播阻断效果的影响.方法 应用荧光定量聚合酶链反应和酶免疫测定(EIA)技术对91例HBsAg、HBeAg双阳性产妇血清、乳汁及婴儿24月龄血标本进行HBV-DNA定量和HBVM检测.32例婴儿采用母乳喂养,59例采用人工喂养.对两种喂养方式的婴儿做3(T3)、9(T9)、12(T12)、24(T24)个月追踪检测观察.结果 HBsAg、HBeAg双阳性产妇的血清、乳汁中HBV-DNA阳性率为100%、49.45%(P＜0.005),HBV-DNA平均含量(拷贝数/毫升的对数,(-x)±s)为(7.43±1.81)、(4.02±1.01);初乳HBV-DNA的检出率随母血HBV-DNA载量的增加而增加,两者呈正相关.母乳和人工两种方式喂养的婴儿HBV感染率为15.63%和13.56%,统计学处理X2=0.022,P＞0.05差异无显著性;母乳喂养组抗体几何平均滴度(GMT)明显高于人工喂养组;发生HBV-DNA感染的13例婴儿T24血标本HBV-DNA载量为(3.24±0.23).结论 HBsAg、HBeAg双阳性产妇血清HBV-DNA载量大于109cps/mL的婴儿是母婴传播的高危易感人群.HBV感染的婴儿HBV-DNA水平较低,病毒载量＜104cps/mL.乳汁HBV-DNA阳性率和病毒载量明显低于血清,HBV携带产妇的婴儿接受正规乙肝基因工程疫苗(Hbice)全程免疫或Hbice和HBIG(乙肝免疫球蛋白)的主、被动联合免疫后,母乳喂养不影响母婴传播阻断效果,母乳喂养有助于提高婴儿抗-HBs的GMT水平.     

被动免疫对HBV携带孕妇母婴传播及乳汁中HBVM的影响

目的探讨高效价乙肝免疫球蛋白（HBIG）被动免疫对乙肝病毒（HBV）母婴传播及HBV携带孕妇初乳中HBV感染性标志物（HBVM）的影响。方法将326例HBV携带而肝功能正常的孕妇按知情自愿原则分成2组，其中实验组210例，于孕晚期注射HBIG共3次；对照组116例，孕妇不接受HBIG注射。前瞻性追踪所有孕妇的新生儿外周血HBVM情况及产妇初乳中HBVM及HBV-DNA情况。结果试验组新生儿HBV宫内感染率为10．48％（22／210），对照组新生儿HBV宫内感染率为27．59％（32／116），二者比较差异有统计学意义（P：0．0000）。HBsAg单阳性的220例孕妇中，试验组和对照组新生儿HBV宫内感染率分别为7．64％和26．32％，二者比较差异有统计学意义（P=0．0000）。HBsAg和HBeAg均阳性的106例孕妇中，试验组和对照组新生儿HBV宫内感染率分别为22．73％和32．50％，二者比较差异无统计学意义（P〉0．05）。试验组产妇初乳中HBsAg阳性率、HBeAg阳性率和HBV．DNA滴度比对照组均低，但二者分别比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论孕晚期HBIG被动免疫仅可降低HBsAg单阳孕妇HBV宫内传播率，而对HBsAg和HBeAg阳性孕妇并无明显阻断作用；HBIG被动免疫对HBV携带产妇初乳中HBVM及HBV-DNA无明显影响。     

广西孕妇乙型肝炎病毒宫内感染及其危险因素的研究

目的：为深入揭示乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）宫内感染及其危险因素。方法：采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对广西１１６例ＨＢｓＡｇ阳性和５２例ＨＢｓＡｇ阴性孕妇外周血及其引产胎儿胎心血进行ＨＢＶ血清学樗狐和ＨＢＶ ＤＮＡ检测。结果：ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性、ＨＢＶ ＤＮＡ阳性孕妇肺儿ＨＢＶ ＤＮＡ检出率（５１．３％、９０．２％、８３．８％）均分别显著高于对照组     

外周血单个核细胞与乙型肝炎病毒的垂直传播相关性研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）垂直传播是指HBV从亲代传给子代的一种传播方式,包括母婴传播、父婴传播和遗传传递,外周血单个核细胞（PBMC）在机体的免疫反应中起重要作用.PBMC是HBV肝外的一个重要靶细胞,HBV存在该细胞中,并在其中复制和表达.HBV侵入PBMC后,HBV DNA通过其整合酶形成共价闭合环状DNA整合到细胞的核内基因组上,调控相关基因的表达,抑制细胞正常功能.孕妇PBMC中HBV-DNA阳性是新生儿宫内感染的高危因素,PBMC中HBV-DNA是否阳性直接影响孕期免疫阻断治疗,降低宫内感染率的疗效.     

乙肝病毒宫内感染临床诊断研究

目的探讨乙型肝炎病毒宫内感染的临床诊断条件。方法收集乙肝表面抗原阳性80例孕妇外周血及其新生儿脐带血进行乙肝标志物和乙肝病毒DNA(HBV-DNA)含量检测,6月龄随访检测其中44例大三阳孕妇新生儿外周血乙肝标志物和HBV-DNA含量。结果乙肝表面抗原阳性80例孕妇新生儿脐血HBsAg、HBeAg、HBV-DNA阳性检出率分别为17.50%(14/80)、25.00%(20/80)、15.00%(12/80)。44例大三阳孕妇新生儿出生脐血HBsAg、HBeAg、HBV-DNA阳性检出率分别为31.82%(14/44)、45.45%(20/44)、27.27%(12/44),6月龄外周血为9.09%(4/44)、4.5%(2/44)、6.81%(3/44)。12例HBV-DNA阳性的新生儿均由大三阳且HBV-DNA载量105copies/mL孕妇所分娩。结论宫内感染率统计应以孕妇传染性的大小分层统计研究,应有统一检测时间及宫内感染的判断指标。新生儿出生脐血HBsAg和(或)HBV-DNA阳性作为宫内感染筛查指标,持续至6月龄HBsAg和(或)HBV-DNA乃阳性可作为宫内感染诊断指标。     

免疫阻断治疗对外周血单个核细胞感染HBV孕妇宫内感染率的影响

目的:探讨孕妇HBV感染外周血单个核细胞时,免疫阻断治疗对新生儿宫内感染率的影响。方法:HBsAg阳性孕妇34例,以套式PCR法测定治疗前外周血单个核细胞(PBMC)中HBVDNA,其中阳性14例(A组),阴性20例(B组),所有孕妇行乙肝免疫球蛋白少量多次肌注,测定新生儿血清HBsAg,血清HBVDNA,PBMC HBV-DNA。结果:A组新生儿宫内感染率为57.1%(8/14),B组新生儿宫内感染率为5%(1/20),两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论:孕妇PBMC中HBVDNA阳性是新生儿宫内感染的高危因素,PBMC中HBVDNA是否阳性直接影响孕期免疫阻断治疗,降低宫内感染率的疗效。