骨髓间充质干细胞中大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒的表达

背景：研究显示,白细胞介素10在脓毒症等炎性疾病发挥了抑制炎症反应、促进疾病转归的重要作用。 目的：构建大鼠白细胞介素10重组腺病毒,并以骨髓间充质干细胞为基因载体,观察外源基因在细胞中的表达情况。 方法：采用反转录-聚合酶链反应方法从SD大鼠新鲜脾脏组织中提取出的总RNA中克隆大鼠白细胞介素10基因,通过AdEasy系统成功包装、扩增并纯化出含目的基因的重组腺病毒颗粒。取大鼠骨髓细胞,利用密度梯度离心法和贴壁法分离并扩增骨髓间充质干细胞,并使用流式细胞仪进行表型鉴定。以不同感染倍数的Ad.rIL-10/Ad.GFP感染骨髓间充质干细胞,在荧光显微镜下观察感染效率,并用反转录-聚合酶链反应和Weatern blot方法检测目的基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。 结果与结论：成功构建了重组腺病毒Ad.rIL-10,计算病毒滴度为6.0×10¹⁰ pfu/mL。重组腺病毒Ad.rIL-10对骨髓间充质干细胞有较高的转染效率,当感染复数=200时为70%。提示含外源基因大鼠白细胞介素10的骨髓间充质干细胞持续高效地表达目的基因,是基因治疗的良好细胞载体。     

双基因重组腺病毒载体的构建及转染大鼠骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤

背景:脑源性神经生长因子对多巴胺能神经元、胆碱能神经元等多种神经元都有广泛作用,能促进干细胞更多的向神经元样细胞分化;低氧诱导因子1α可提高组织和细胞在缺血环境下的生存能力,维持局部成血管微环境方面比任何基因均有更广泛的生理作用。目的:通过构建脑源性神经生长因子联合三点突变型低氧诱导因子1α双基因重组腺病毒载体,探索其转染大鼠骨髓间充质干细胞后2种基因在体外常氧条件下对脊髓损伤促神经再生及血管新生的作用。方法:①利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1α编码区的第402、564和803位氨基酸,将突变后低氧诱导因子1α基因联合脑源性神经生长因子重组入腺病毒pAdEasy-1系统,包装病毒并测定滴度。②以4种病毒液连同空白组共分5组进行后续实验;将病毒液转染入骨髓间充质干细胞内观察转染效率,检测各组转染细胞中脑源性神经生长因子基因及低氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达情况。③进一步通过Western blot方法检测各组细胞中低氧诱导因子1α的下游成血管基因血管内皮生长因子蛋白表达情况。结果与结论:①编码区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸;4种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。②实验组、阳性对照组1脑源性神经生长因子mRNA及蛋白表达量明显高于其他组(P0.05);实验组、阳性对照组2细胞内低氧诱导因子1αmRNA及蛋白表达量、血管内皮生长因子蛋白表达均明显高于其他3组(P0.05)。结果说明单载体双基因腺病毒系统转染骨髓间充质干细胞后不仅能够在常氧条件下大量且高效表达脑源性神经生长因子及低氧诱导因子1α蛋白,还同时能够促进其下游血管内皮生长因子的高效表达,为基因联合细胞移植治疗脊髓损伤提供了一种新的方向。     

大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并进行诱导,观察诱导后细胞的形态及生长情况,用免疫荧光检测形成的细胞球的巢蛋白(nestin)的表达情况;形成的细胞球在含10%血清的培养液中进一步分化。结果显示:BMSCs在含EGF、bFGF、N2、B27的培养液中,逐渐形成nestin表达阳性的细胞球,在含血清的培养液中能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞及少突胶质样细胞。本研究结果提示经纯化的BMSCs能分化为NSCs,并具有进一步分化的能力。     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性心肌梗死

目的:比较经不同途径移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠急性心肌梗死(AMI)的疗效,探求更为适合的移植途径。方法:采集大鼠BMSCs,并进行培养及鉴定。以5-氮胞苷(5-aza)10μmol/L,诱导BMSCs为心肌样细胞并鉴定。建立大鼠急性心肌梗死模型并鉴定。对照组不予处理,静脉移植组和心外膜移植组分别经尾静脉和心外膜移植心肌样细胞悬液200μl(心肌样细胞5×10~6),联合移植组同时经尾静脉和心外膜分别移植心肌样细胞悬液各200μl。4周后观察SD大鼠心肌组织形态及蛋白表达情况。结果:静脉移植组、心外膜移植组、联合移植组的心肌梗死区域均可见有DAPI标记阳性的移植细胞,其中联合移植组较静脉移植组、心外膜移植组数量明显增多;H-E染色可见后三组较对照组梗死区域心肌细胞排列整齐,细胞核较完整,联合移植组梗死改善程度明显;后三组较对照组血管紧张素转换酶2(ACE2)表达水平升高,联合移植组较静脉移植组、心外膜移植组升高水平更显著。结论:经静脉、心外膜和两者联合移植诱导后的BMSCs均能促进梗死部位的组织修复,抑制心室重构,其中联合移植途径治疗效果更明显。     

大鼠骨髓间充质干细胞和免疫调节作用

目的 研究一氧化氮(nitric oxide,NO)在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的免疫调节作用.方法 贴壁筛选法分离培养Lewis大鼠骨髓间充质干细胞.以刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)作为刺激因素,SD大鼠外周血分离的T淋巴细胞作为反应细胞,采用CCK-8法检测T淋巴细胞与MSCs共培养后其增殖能力的变化.然后采用RT-PCR、Western blot检测MSCs诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA与蛋白的表达;Griess法检测上清液亚硝酸盐含量;ELISA检测上清液Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4的水平.结果 MSCs明显抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖,抑制作用因细胞比例的不同而有所区别.当实验组MSC:T为1:10时最明显,增殖率为(33.83±2.10)%,而1:80组[(78.62±3.80)%]与不含MSCs的阳性对照组[(79.03±1.70)%]差异无统计学意义(P＞0.05).实验组MSCs的iNOS mRNA与蛋白的表达以及上清液中亚硝酸盐含量均较阳性对照组明显上调,1:10～1:40的范围内呈明显递增趋势,但1:80组与1:40组差异无统计学意义(P＞0.05).在加入iNOS特异性抑制剂2-甲基-2-巯基硫酸脲(S-methylisothiourea sulfate,SMT)后,各组T淋巴细胞增殖率基本恢复.实验组IFN-γ含量随MSCs所占比例的降低而增加,各组IL-4含最差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MSCs对同种异体外周血T淋巴细胞的增殖有免疫调节作用,机制可能与其分泌的可溶性因子NO影响了 Th1/Th2平衡有关.

Abstract：

Objective To observe the role of nitric oxide(NO) in the immune regulatory effect of bone marrow mesenchymal stem cells(MSCs). Methods Bone marrow MSCs were isolated from Lewis rats by adherence screening. Concanavalin A (ConA) was adopted as the stimulator and T-lymphocyte isolated from peripheral blood of SD rats as the reactive cells. The changes of the ability of T-lymphocyte proliferation, when co-cultured with MSCs, were measured by CCK-8 assay. The inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA and protein expression on MSCs and were detected by RT-PCR, Western blot. The contents of nitrites and the levels of Th1 type cytokine IFN-γand Th2 type cytokine IL-4 were measured by Griess test and ELISA respectively, in the co-cultured supernatant. Results T-lymphocyte proliferation was inhibited by co-cultured MSCs, which was concentration-dependent. In this study, the inhibition was most obviously group[ (79.03 ± 1.70)% ] (P ＞ 0.05 ). The I NOS mRNA expression, protein and nitrite levels were signifigroups, the proliferation rate of T-lymphocyte recovered. The content of IFN-γwas increased with the ratio decline of MSCs in the experimental group and IL-4 in each group has no significant difference( P ＞ 0.05 ).Conclusion MSCs inhibited T-lymphocyte proliferation by influencing Th1/Th2 balance, and the secretion of soluble factor NO, which secreted by MSCs, may plays an important role in the immune regulation.     

重组腺病毒转染大鼠骨髓间质干细胞的研究

目的：观察腺病毒载体转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的有效性和外源性基因表达的时相性。方法:体外培养大鼠骨髓间质干细胞,用已构建好的Ad5-CMV-GFP真核载体分别转染培养的第3代（P3）及第8代（P8）BMSCs。流式细胞仪检测转染后第2、4、7及10d绿色荧光蛋白（GFP）的表达率。RT-PCR、Western杂交等方法检测腺病毒受体（CAR）在各代BMSCs中的基因和蛋白质的表达。结果:重组腺病毒对BMSCs的转染率可达80%,P3与P8代BMSCs转染率无明显差异（P>0.05）。转染后2d可见GPF表达,第7d表达达高峰,28d仍可见GFP在BMSCs中表达。CAR在P1明显低于P2、P3、P6、P8各代BMSCs（P0.05）。结论:重组腺病毒载体能有效转染骨髓间质干细胞,并维持1个月左右。P3与P8BMSCs均可作为基因治疗的高效分子载体。     

碱性成纤维细胞生长因子重组腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞的表型变化

背景:外源性碱性成纤维细胞生长因子在韧带组织的愈合过程中发挥着重要作用,采用转基因方法将外源性基因转入细胞内能促进碱性成纤维细胞生长因子分泌。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子重组腺病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞后表型变化及碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达。方法:取P2代骨髓间充质干细胞,分为3组,正常培养组为对照组,其他2组分别转染重组腺病毒(Ad.bFGF-eGFP)及空病毒(Ad.eGFP)。相差显微镜观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞增殖曲线,ELISA法分析各组细胞上清液中碱性成纤维细胞生长因子蛋白质量浓度。结果与结论:转染后细胞呈现均一的成纤维细胞表型;碱性成纤维细胞生长因子重组腺病毒组细胞增殖活性高于空病毒组及对照组;ELISA结果提示碱性成纤维细胞生长因子重组腺病毒组在7 d内上清液中碱性成纤维细胞生长因子蛋白质量浓度较空病毒组及对照组增加,差异有显著性意义(P0.05)。提示碱性成纤维细胞生长因子重组腺病毒转染骨髓间充质干细胞可促进其向成纤维细胞分化,增加增殖活力,促进其碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达。     

骨髓间充质干细胞研究进展

骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一.虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决.主要对间充质干细胞的异质性、分化与融合的问题、修复组织的机制、免疫性及研究方法等问题进行了综述.     

骨髓间充质干细胞研究进展

骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决。主要对间充质干细胞的异质性、分化与融合的问题、修复组织的机制、免疫性及研究方法等问题进行了综述。     

骨髓间充质干细胞研究进展

骨髓间充质干细胞是骨髓中除造血干细胞外的另一类具有自我更新和多向分化潜能的干细胞,在特定的诱导条件下可向三个胚层的细胞分化。本文就骨髓间充质干细胞的生物学特性、分离培养、活体示踪标记方法、诱导分化等方面的研究进展做一综述。     

骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠的心功能

背景：前期研究发现移植的骨髓间充质干细胞能在受损心肌组织内存活和分化。 目的：进一步观察局部注射移植同种异体骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠心功能的影响。 方法：体外培养的同种异体骨髓间充质干细胞达到一定数量(10⁶)后用BrdU标记。24只SD大鼠随机分为3组：正常对照组未行冠状动脉前降支结扎,取骨髓间充质干细胞约1 mL直接注射到冠状动脉前降支心肌的周围;假移植组：在冠状动脉前降支结扎后7 d,取等量DMEM培养液直接注射到梗死心肌的周围;骨髓间充质干细胞移植组：冠状动脉前降支结扎后7 d,取等量骨髓间充质干细胞直接注射到梗死心肌的周围;分别于移植前、移植后5周测定大鼠心功能。 结果与结论：①移植后5周假移植组最大左室收缩末压、左室内压最大(最小)变化速率均低于移植前(P < 0.01),而左室舒张末压高于移植前(P < 0.01);移植后5周骨髓间充质干细胞移植组最大左室收缩末压、左室内压最大(最小)变化速率高于移植前(P < 0.01),而左室舒张末压低于移植前(P < 0.01)。②移植后5周,骨髓间充质干细胞移植组大鼠的最大左室收缩末压、左室内压最大(最小)变化速率均高于假移植组(P < 0.01),而左室舒张末压明显低于假移植组(P < 0.01)。结果可见骨髓间充质干细胞移植可明显改善心肌梗死模型大鼠心功能。     

骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景:随着近年来对骨质疏松机制研究的深入,研究者逐渐把研究重点放在了成骨细胞的来源骨髓间充质干细胞上。目的:对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,观察骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性,分析骨质疏松的细胞病理学机制,以期为骨质疏松的防治提供一个有意义的药物靶标。方法:选用10月龄SD雌性大鼠去卵巢增龄3个月来复制骨质疏松模型,设假手术对照组。运用密度梯度离心法对两组大鼠骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,运用扫描电镜对培养的骨髓间充质干细胞进行形态学观察,并行生长曲线及贴壁率检测。结果与结论:骨质疏松大鼠的骨髓间充质干细胞增殖能力明显下降,与对照大鼠相比存在许多结构特征的差异。体外实验结果表明,骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的体外增殖能力下降可能是骨质疏松的细胞病理学机制。     

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

背景：骨髓间充质干细胞在骨髓中含量极低,体外培养难度较大。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的间充质干细胞,对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。 目的：建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化方法,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。 方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,绘制生长曲线,细胞周期分析,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分别向成骨、成脂方向诱导分化。 结果与结论：大鼠骨髓间充质干细胞生长以梭形细胞为主,呈放射状排列的细胞集落,细胞生长旺盛,可连续稳定传代10代以上。生长曲线及细胞周期显示骨髓间充质干细胞符合正常细胞生长特征且生长活跃。第3代骨髓间充质干细胞CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34,CD45呈阴性表达。成脂、成骨诱导后,油红O染色、碱性磷酸酶染色、von Kossa法染色和茜素红染色均呈阳性。全骨髓贴壁培养法操作简单,可大量分离、纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。实验所用的全骨髓贴壁法法为组织工程提供充足的种子细胞来源具有重要的现实意义。     

成年大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离

目的应用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法以不同培养条件,探讨体外获得高质量、高活性的成年大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的方法。方法取成年雄性SD大鼠双侧股骨,应用全骨髓贴壁法,分为10%国产TBD胎牛血清+DMEM组、10%国产TBD胎牛血清+DMEM/F12组、12.5%国产TBD胎牛血清+DMEM/F12组、10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12组4组,3只/组;应用密度梯度离心培养法,以10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12作为培养基,取3只大鼠作为一组。比较不同培养方法及培养条件对BMSCs生长增殖的影响。结果全骨髓贴壁法中10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12组原代细胞即可7～9 d达融合,传代到第4代细胞活力仍很好。其余3组原代细胞达融合的时间均超过10 d,且传代后细胞活力差,容易出现老化。密度梯度离心培养法原代贴壁细胞太少,无法达融合。结论本实验采用的培养方法中,10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12培养基的全骨髓贴壁分离法,是体外获取成年大鼠BMSCs最佳方法。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠溃疡性结肠炎

背景：近年已有干细胞移植修复慢性肠炎受损组织的报道,但其治疗机制尚不明确。 目的：观察移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布及分化情况,及对大鼠结肠黏膜的修复作用。 方法：取经鉴定的第3代大鼠骨髓间充质干细胞1×10⁶个,应用Hoechst 33342进行荧光标记,并将其经尾静脉移植入溃疡性结肠炎大鼠体内,分别于移植后3,7,14 d取材。 结果与结论：骨髓间充质干细胞移植后 3 d,大鼠结肠即可见荧光标记的细胞,移植后14 d,大鼠结肠荧光标记细胞仍较多,此时可见部分标记细胞表达细胞角蛋白。同时骨髓间充质干细胞移植后14 d,溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜白细胞介素10表达增高,肿瘤坏死因子α表达降低, 结肠黏膜的病理损伤明显好转。说明移植的骨髓间充质干细胞可迁移至结肠溃疡部位并分化为上皮细胞,同时可通过调节炎性因子的表达促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤的修复。     

大鼠骨髓间充质干细胞对免疫耐受的作用

目的:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs),观察和检测其生长特性及表面标记,探讨它对免疫耐受的作用.方法:通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养大鼠 BMSCs,观察细胞形态学变化,应用流式细胞术测定其表面分子 CD34、CD44 的表达.、将培养第 3 代的 BMSCs 经尾静脉输注大鼠,应用流式细胞技术检测大鼠外周血中CD4+CD25+Treg 比率,通过3H-TdR 掺入实验检测 BMSCs 对大鼠胸腺细胞自发增殖反应的影响.结果:体外培养的大鼠 BMSCs 呈贴壁生长,似成纤维细胞样,表面分子 CD44 表达阳性率为98%,但 CD34 表达阴性.输注 BMSCs 的大鼠外周血中CD4+CD25+Treg 占2.5%±O.69%,明显高于对照组(0.8%±0.14%)和PBS输注组(1.0%±0.23%),P<0.05;胸腺细胞白发增殖活性(cpm值3 275.41±1 736.05)明显低于正常对照组(7 368.25±2 532.13)和PBS输注组(6 143.71±2 380.47),P相似文献   

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠扩张型心肌病

1泸州医学院附属医院急诊科,四川省泸州市 646000;2哈尔滨医科大学附属第二医院心内科,黑龙江省哈尔滨市  150000 背景：扩张型心肌病所致的心肌纤维化是心力衰竭的病理基础,目前药物治疗、介入治疗和外科手术均不能替代坏死心肌和彻底改善心脏功能。 目的：观察异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠扩张型心肌病心脏功能的作用和心肌纤维化的影响。 方法：40只Wistar大鼠随机数字表法分为细胞移植组(n=15)、对照组(n=15)和空白组(n=10),前2组建立大鼠扩张型心肌病模型。造模成功4周后细胞移植组注射骨髓间充质干细胞悬液150 μL(含3×106个细胞),对照组和空白组注射等量培养液。 结果与结论：与空白组相比,细胞移植组和对照组移植前左室收缩末期内径增加,射血分数和缩短分数明显下降(P < 0.01);移植后4周,细胞移植组超声心动图检查和移植前相比,左室收缩末期内径下降、射血分数和缩短分数明显升高(P < 0.01)。细胞移植组心脏胶原的表达低于对照组(P < 0.05)。与对照组相比,其他2组基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达明显下降(P < 0.05)。提示骨髓间充质干细胞移植后可改善心肌纤维化及扩张型心肌病鼠的心脏功能。      

全骨髓贴壁接触培养SD大鼠骨髓间充质干细胞

背景：体外分离培养出生长状态好、高纯度、增殖能力强和数量充足的大鼠骨髓间充质干细胞,是将其作为种子细胞用于组织和细胞移植的重要前提。 目的：建立简便、快速、有效的SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养方法,并观察其生物学特性。 方法：采用全骨髓法将SD大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞进行体外分离培养,贴壁接种法进行细胞纯化、传代。观察细胞生长形态及特征,绘制细胞生长曲线,检测细胞表面标记物,采用体外诱导剂诱导细胞分别向成骨、成软骨、成脂方向分化。 结果与结论：全骨髓贴壁接种法分离培养的骨髓间充质干细胞生长旺盛、纯度高,细胞生长形态呈长梭形,极性排列,细胞生长呈S形生长曲线,群体倍增时间为29 h,细胞在连续传10代后仍具有较强的增殖能力。第3代骨髓间充质干细胞的表面标记物CD44、CD29、CD90均呈阳性表达,CD45、CD34、CD11b则呈阴性表达。第3代骨髓间充质干细胞分别经成骨、成软骨、成脂诱导剂诱导后,茜素红染色、碱性磷酸酶染色、von-kossa矿化结节染色、甲苯胺蓝染色和油红O染色均呈阳性。结果验证全骨髓贴壁接种法是一种简便可靠的体外分离培养方法,能获得纯度较高的骨髓间充质干细胞,经实验鉴定第3代骨髓间充质干细胞生物活性最佳,且具有多向诱导分化能力,适合作为后续实验的种子细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞作为重组腺病毒白细胞介素10表达系统载体细胞的研究

探讨间充质于细胞(MSC)作为重组腺病毒白细胞介素10基因表达系统(Ad.rIL-10)的载体细胞的可行性。方法 应用密度梯度离心结合贴壁法原代培养,并于体外扩增出MSC,运用流式细胞仪对MSC进行鉴定。用ELISA法检测外源基因rIL-10在MSC中的表达情况。结果 原代培养扩增出的MSC高表达CD29,CD105和CD166,不表达CD45,其中第4代MSC生长状态良好,12h贴壁率达90％。腺病毒包装IL- 10可以高效感染MSC,感染48 h后IL-10表达增加(48 h Ad.rIL-10组136.2μg/L;对照组5.1μg/L),并可持续维持高表达2周以上。结论 含外源基因IL-10的MSC高效而持久的表达目的基因,尤其是第1代至第4代的MSC,是基因治疗良好的细胞载体。     

microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平。分别于转染2、4和6 d后用RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白I(cTnI)的表达。结果 90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44;未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达。转染miRNA-1质粒后,miRNA-1表达水平明显上调。转染miRNA-1质粒2、4和6 d后,GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强。第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞。结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化。