腺苷A2A受体基因敲除小鼠瘢痕胶原亚型的变化

背景：作者前期研究发现腺苷受体激动剂可以刺激胶原合成,腺苷受体拮抗剂可以抑制胶原合成,并且可以减轻皮肤胶原纤维增生。腺苷A2A 受体基因敲除小鼠瘢痕转化生长因子β表达降低。 目的：利用苦味酸-天狼星红偏振光法观察腺苷A2A 受体基因敲除小鼠瘢痕胶原亚型的变化并探讨其机制。 方法：腺苷A2A受体基因敲除小鼠和野生型小鼠制作瘢痕模型,采用苦味酸-天狼星红偏振光法对瘢痕组织中胶原的性质及分布特点进行观察、确定瘢痕组织胶原类型、分布、排列与水平。 结果与结论：偏振光显微镜下可见野生型组小鼠增生性瘢痕组织中含有大量的嗜酸性胶原蛋白纤维束,Ⅰ型胶原纤维为红色,呈致密的条束状,显示很强的双折光性,腺苷A2A 受体基因敲除小鼠瘢痕缺乏粗大胶原束,呈稀疏的条束状,排列相对整齐、密度较为均匀,Ⅰ型胶原纤维水平减少(P < 0.01),瘢痕增生显著减轻。提示腺苷A2A 受体参与瘢痕增生,对预防瘢痕增生有积极意义。     

基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达

背景：与瘢痕疙瘩和增生性瘢痕发生机制相关的基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1信号传递通路研究多集中在体外成纤维细胞的培养上,而在组织中的相关研究少见报道。 目的：观察瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1蛋白的表达。 方法：取自2004/2008唐山市工人医院烧伤整形科手术患者,瘢痕疙瘩54例,增生性瘢痕42例。选取同期45例因非感染手术切除的正常瘢痕组织作为对照组,选取同期45例正常皮肤组织作为正常对照组。应用流式细胞仪检测4组中基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1的表达,分析两者的相关性。 结果与结论：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中转化生长因子β1的表达明显高于正常瘢痕组织和正常皮肤组织;正常瘢痕组织中转化生长因子β1的表达明显则高于正常皮肤组织,而基质金属蛋白酶13的表达与之相反。瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常瘢痕组织中基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1表达呈负相关。由此推测基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1在瘢痕组织中异常表达,二者可能具有协同负向作用,共同参与病理性瘢痕的发生发展。     

基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1在病理性瘢痕中的表达：与正常瘢痕及正常皮肤组织比较

背景：从基因和蛋白角度深入探讨病理性瘢痕的发病机制具有重要价值。 目的：检测病理性瘢痕中基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1蛋白的表达。 方法：选择2004/2009年唐山市工人医院烧伤整形科手术后保存的病理性瘢痕标本,其中瘢痕疙瘩54例,增生性瘢痕42例。选取同期45例因非感染性疾病行手术切除的正常瘢痕组织作为对照组,选取同期45例正常皮肤组织作为正常对照组。采用流式细胞术半定量检测组织中基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1的表达。 结果与结论：基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1在病理性瘢痕中的表达量明显高于正常瘢痕组织和正常皮肤组织,基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1在正常瘢痕组织中的表达明显高于正常皮肤组织,病理性瘢痕和正常瘢痕中基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1的表达呈正相关。结果表明基质金属蛋白酶7和转化生长因子β1的高表达及协同作用,可能促进病理性瘢痕的发生发展。     

核酶阻断IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR表达抑制病理性瘢痕形成的研究

目的研究胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)核酶抑制病理性瘢痕形成的作用。方法选取100只SPF级4~6周龄裸鼠,另选取2015年5月至2016年7月暨南大学医学院附属广州市红十字会医院18例烧伤整形科住院患者手术切除的组织病理性瘢痕标本。将瘢痕组织体外培养成纤维细胞并分为a~g 7组,分别转染IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR核酶后,检测培养基上清中羟脯氨酸含量。利用real-time PCR检测IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR mRNA水平。将小鼠随机分成A~H 8组,每组10只,分别散点注射不同浓度IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR核酶后,检测瘢痕增生组织体积大小,应用内参物竞争性PCR定量分析裸鼠瘢痕组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA水平的改变。利用Western Immunoblotting法分析经处理后Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白水平的变化。结果在成纤维细胞中转染不同浓度IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR核酶后,上清中羟脯氨酸含量和IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR mRNA水平均有所降低。单独转染IGF-ⅠR核酶及单独转染IGF-Ⅰ核酶对IGF-ⅠR mRNA水平无显著影响。在人增生性瘢痕裸鼠动物模型中注射IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR核酶后,裸鼠瘢痕组织体积减小,瘢痕增生组织中Ⅰ型前胶原mRNA水平和蛋白水平降低,Ⅲ型前胶原mRNA水平和蛋白水平均有所增高。结论IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR核酶可用于治疗病理性瘢痕形成。     

Smad3和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤中的表达:48∶40∶40例标本病理检测

目的:与病理性瘢痕发生机制相关的Smad3/转化生长因子β1信号传递通路研究多集中在体外成纤维细胞的培养上,在瘢痕疙瘩中的表达少见报道。检测病理性瘢痕中Smad3和转化生长因子β1蛋白的表达,探讨其在病理性瘢痕发生及发展中的作用。方法:实验标本均来自2004-06/2008-06河北医科大学附属唐山工人医院烧伤整形科手术患者,瘢痕疙瘩48例,年龄16～52岁;增生性瘢痕40例,年龄18～56岁;选取同期因其他手术切除的正常皮肤组织40例作为对照组。应用流式细胞术检测48例瘢痕疙瘩、40例增生性瘢痕及40例正常皮肤组织Smad3和转化生长因子β1的表达。结果:Smad3和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达明显高于正常皮肤组织中的表达(P0.05),Smad3和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩和增生瘢痕中的表达差异无显著性意义(P0.05)。瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中Smad3和转化生长因子β1表达呈正相关(r=0.4892,P=0.0004;r=0.4710,P=0.0022),Smad3和转化生长因子β1在正常皮肤组织中的表达未见明显相关性(P=0.4714)。结论:Smad3和转化生长因子β1在病理性瘢痕中高表达,Smad3和转化生长因子β1的协同作用可能参与病理性瘢痕的发生发展。     

病理性瘢痕组织中转化生长因子β1的表达及其临床病理学意义

目的 研究病理性瘢痕组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达,探讨其在病理性瘢痕组织的形成过程中所起的作用,为瘢痕的治疗提供理论依据.方法 采用免疫组织化学SP法,检测增生性瘢痕组织、瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织各32例中TGF-β1的表达.结果 增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组患者TGF-β1阳性表达率分别为84.4%和90.6%,与正常对照组TGF-β1表达阳性率28.1%比较,差异有显著性(P<0.05).增生性瘢痕组与瘢痕疙瘩组患者TGF-β1阳性表达之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 TGF-β1在病理性瘢痕组织的形成过程中起着重要作用.     

miR-2116-3p在人增生性瘢痕中的表达及作用

背景：目前多项研究证实了miRNA影响增生性瘢痕的发生发展,Ⅰ型胶原与增生性瘢痕成纤维细胞密切相关,猜测miR-2116-3p也有可能与增生性瘢痕的发生发展有关系。目的：探讨miR-2116-3p在人增生性瘢痕中的表达及作用。方法：收集新疆医科大学第一附属医院6例患者的增生性瘢痕组织与6例患者重睑术后正常皮肤组织,采用qRT-PCR法检测miR-2116-3p与Ⅰ型胶原的表达。取增生性瘢痕组织,原代培养第3-6代成纤维细胞,分为阴性对照组、miR-2116-3p模拟物组和miR-2116-3p抑制物组,分别转染对应的序列,用CCK-8法与EdU试剂盒检测细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR法与Western blot法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α平滑肌肌动蛋白的基因与蛋白表达,双荧光素酶实验验证其靶向结合。结果与结论：(1)增生性瘢痕组织中miR-2116-3p的mRNA表达量低于正常皮肤组织(P <0.01),Ⅰ型胶原的mRNA表达量低于正常皮肤组织(P <0.01);(2)转染后24,48,72 h,与阴性对照组比较,miR-21...     

微晶削磨术后瘢痕组织的形态学观察

目的：建立兔耳增生性瘢痕模型并观察微晶削磨术后瘢痕组织病理学的改变。方法：通过建立兔耳腹面瘢痕模型并对其进行微晶磨削处理，肉眼观察瘢痕的形态变化及其在光镜下成纤维细胞的含量和各类型胶原纤维的变化。结果：对兔耳增生性瘢痕进行微晶磨削术后瘢痕面积明显缩小,瘢痕组织表面鳞状上皮棘细胞层细胞增生，表皮下真皮乳头层及其真皮层内成纤维细胞轻度增生，胶原纤维排列趋于整齐，Ⅰ型胶原含量减少，而Ⅲ型胶原含量明显增多。结论：微晶磨削术对于皮肤浅表性瘢痕的修复与改建具有积极的意义。     

负极性驻极体5氟尿嘧啶贴剂抑制兔耳增生性瘢痕的生长

目的 :探讨不同干预手段对兔耳增生性瘢痕的生长影响。方法 :负极性驻极体、5-氟尿嘧啶(5-Fu)以及联合负极性驻极体与5-Fu分别作用于兔耳创面,4周后检测瘢痕增生指数,H-E染色和免疫组织化学显色检测转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的平均光密度。结果 :负极性驻极体、负极性驻极体与5-Fu联合均可通过抑制TGF-β的表达抑制Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成;且均可通过影响成纤维细胞的密度、胶原的合成和胶原纤维束的排布,抑制创面形成增生性瘢痕。结论 :负极性驻极体可影响胶原束的排布,且通过抑制TGF-β的表达抑制胶原的合成。驻极体和5-Fu联用作用机制与驻极体类似,但抑制瘢痕形成的效果更佳。     

病理性瘢痕中胰岛素样生长因子1及受体mRNA的表达

背景：多种肿瘤中胰岛素样生长因子1受体及其配体表达异常,且胰岛素样生长因子1是多种细胞的有丝分裂原和抗细胞凋亡的因子,控制多种细胞的增殖、分化和凋亡的进程。 目的：观察胰岛素样生长因子1及胰岛素样生长因子1受体在病理性瘢痕中的表达。 方法：收集中山大学附属第一医院烧伤外科收治患者增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及其正常皮肤等手术切除标本,荧光定量实时PCR检测不同组织中胰岛素样生长因子1及其受体mRNA的表达水平。 结果与结论：瘢痕疙瘩及增生性瘢痕中胰岛素样生长因子1 mRNA表达水平均高于正常皮肤(P < 0.05),且在瘢痕疙瘩及增生性瘢痕组织中胰岛素样生长因子1表达水平差异无显著性意义(P > 0.05),胰岛素样生长因子1受体在增生性瘢痕表达水平与正常皮肤接近(P > 0.05);而瘢痕疙瘩中胰岛素样生长因子1受体明显高于瘢痕周围正常皮肤(P < 0.05)。说明胰岛素样生长因子1及其受体在病理性瘢痕的形成过程中起重要作用。     

Smad泛素化调节因子-2及其mRNA在增生性瘢痕组织中的表达

目的研究烧伤后增生性瘢痕组织中Smad泛素化调节因子－2（Smurf2）及其mRNA的表达。方法选取烧伤后增生性瘢痕患者9例,取材于患者整形手术切除的瘢痕,同时取同一患者剩余正常皮肤作为对照。Western blotting方法检测smurf2蛋白水平,RT—PCR检测其mRNA表达;进一步分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞,加入外源件转化生长凶子β1（TGF—β1）刺激,观察Smurf2蛋白和mRNA水平的变化。结果增生性瘢痕组织中Smurf2蛋白水平和mRNA表达显著高于正常皮肤（P〈0．05）,而且,在外源性TGF—β1刺激下,瘢痕成纤维细胞中Smurf2蛋白和mRNA表达呈时间依赖性增加。结论烧伤后增生性搬痕组织中Smurf2及其mRNA表达增强;在TGF—β1刺激下,瘢痕成纤维细胞中Smurf2及儿mRNA表达逐渐增加。     

RhoA/ROCK-I信号通路与增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

背景:前期实验表明增生性瘢痕中RhoA和ROCK-I基因表达较正常皮肤高,提示RhoA/ROCK-I信号通路可能参与了增生性瘢痕的发生,但其在病理性瘢痕中的作用尚不清楚。目的:研究RhoA/ROCK-I信号通路在增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达调控中的作用。方法:分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用转化生长因子β1及Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对细胞进行干预实验。采用实时荧光定量PCR及免疫荧光细胞化学方法检测瘢痕成纤维细胞中RhoA,ROCK-I及CTGF mRNA与蛋白的表达。结果与结论:给予转化生长因子β1后,增生性瘢痕成纤维细胞中RhoA,ROCK-I及CTGF mRNA与蛋白表达明显增多(P0.01);而Y-27632能阻碍转化生长因子β1的作用;但单独给予Y-27632并不引起瘢痕成纤维细胞中RhoA,ROCK-I及CTGF的mRNA与蛋白表达改变。说明转化生长因子β1可通过RhoA/ROCK-I信号通路调控CTGF mRNA与蛋白的表达,即RhoA/ROCK-I信号通路参与了瘢痕成纤维细胞CTGF的表达调控,阻断RhoA下游通路是增生性瘢痕治疗靶点之一。     

转化生长因子βⅠ型受体与糖尿病发病有关

上海医科大学附属华山医院肾内科吴永贵进行的一项研究表明,糖尿病大鼠肾皮质中转化生长因子βⅠ型受体,表达上与糖尿病肾病发病有一定联系,苯那普利对转化生长因子βⅠ型受体有抑制作用。为探讨转化生长因子βⅠ受体在糖尿病大鼠肾皮质中的表达及血管紧张素转换酶抑制...     

碱性成纤维细胞生长因子与瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的代谢

背景:研究证实碱性成纤维细胞生长因子有促进创面愈合的作用,然而其在促进创面愈合的同时是否会引起成纤维细胞的增殖而导致瘢痕增生已受到学者的广泛关注。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成和降解的调控作用。方法:增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养瘢痕成纤维细胞。取第2代细胞,采用氯胺T法、RT-PCR和Westernblot法检测不同浓度(0~500μg/L)碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕来源的成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及细胞基质金属蛋白酶1合成和分泌的影响。结果与结论:碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达均无促进作用。低质量浓度碱性成纤维细胞生长因子对细胞基质金属蛋白酶1的表达无明显影响,但随着质量浓度的升高表现为增高趋势,以50,100,500μg/L组增高最显著(P0.05或P0.01)。同时,细胞基质金属蛋白酶1的表达在细胞与上清中变化一致。说明高质量浓度碱性成纤维细胞生长因子可以通过增加细胞基质金属蛋白酶1的合成来促进胶原蛋白降解,从而避免细胞外基质的过度沉积。     

中枢神经损伤后TGF-β1信号通路对神经再生的影响

中枢神经损伤后TGF-β1信号通路被激活,引起损伤周边的瘢痕组织的增生与形成,瘢痕组织包括损伤中心区的纤维瘢痕和损伤周边的胶质瘢痕。虽然在早期对修复血脑屏障起着重要的作用,但后期瘢痕组织的过度增生会产生大量的抑制神经再生的细胞外基质,如硫酸软骨素蛋白糖。因此,在损伤后期抑制TGF-β1信号的持续激活可能促进神经轴突的再生。从TGF-β1信号通路与瘢痕组织形成的相关性研究中枢神经损伤后的神经再生机制具有重要意义。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ在增生性瘢痕中的表达及其意义

目的 探讨核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)在增生性瘢痕中的表达状况及其意义. 方法 术中切取16 例增生性瘢痕组织及每位患者手术时取皮修剪后的残余皮片.应用免疫组织化学检测增生性瘢痕和正常皮肤中PPAR-γ蛋白的表达并分析其与瘢痕增生程度的关系. 结果 免疫组织化学显示PPAR-γ蛋白在增生性瘢痕和正常皮肤中均有表达,但是在增生性瘢痕(32.18±17.84)中表达较正常皮肤(50.80±22.40)低. 结论 核内受体PPAR-γ在增生性瘢痕中呈下调表达,提示PPAR-γ的激活可能是增生性瘢痕治疗的一种新方法.     

比较不同方法在检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达中的应用北大核心CSCD

胶原是构成人体细胞外基质的重要组成部分,其主要类型为Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原。胶原的异常沉积可见于多种病理改变中,如在皮肤增生性瘢痕和器官纤维化等疾病过程中,均伴有肌成纤维细胞的分化和胶原表达的上调,最终造成组织收缩和瘢痕形成,影响机体正常功能。检测胶原表达的方法多种多样,在选择使用何种方法时常常使实验人员难以抉择。我们通过体外培养骨髓间充质干细胞（bone marrow－derived mesenchymal stem cell,BMSC）,经过诱导刺激使其向肌成纤维细胞分化,并使用多种方法检测其Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,并对各方法的优缺点进行比较。     

不同瘢痕组织中Survivin蛋白的表达及临床意义

目的分析不同瘢痕组织中Survivin蛋白的表达及临床意义。方法选取58例病理性瘢痕组织,20例正常皮肤组织,检测病理性瘢痕及正常皮肤中Survivin蛋白表达的阳性率、分布情况及Survivin蛋白IOD值。结果光学镜下,病理性瘢痕在表皮基底层、部分棘层和表皮下均可见Survivin阳性细胞,胞浆及部分胞核颜色为棕黄色至褐色;病理性瘢痕组织中Survivin蛋白阳性表达率显著高于正常皮肤(P0.05)。瘢痕疙瘩中和癌变瘢痕中Survivin蛋白IOD值均显著高于增生性瘢痕(P0.05);癌变瘢痕与瘢痕疙瘩中的Survivin蛋白IOD值比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 Survivin抗凋亡的作用参与了病理性瘢痕形成过程,研究Survivin蛋白的表达对鉴别和诊断不同瘢痕组织有重要的意义。病理性瘢痕组织中Survivin蛋白阳性表达率显著高于正常皮肤,瘢痕疙瘩和癌变瘢痕中Survivin蛋白IOD值显著高于增生性瘢痕,故Survivin蛋白的阳性表达情况及Survivin蛋白IOD值对鉴别和诊断不同瘢痕组织有重要的意义。     

增生性瘢痕与正常皮肤的蛋白质组学研究

目的 比较增生性瘢痕与正常皮肤组织的蛋白质组表达差异,筛选出增生性瘢痕的特异蛋白质.方法 以中山大学附属第一医院烧伤外科2010年1月至5月8例增生性瘢痕患者的增生性瘢痕组织和3例整形外科患者正常躯干皮肤为研究对象,运用蛋白质组学技术、双向凝胶电泳对比分析增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中蛋白表达差异,选择差异蛋白点进行MALDI - TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 获得重复性较好的双向电泳荧光染色图谱,增生性瘢痕和正常皮肤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白点分别为2975和3053,对其中表达差异超过4倍的蛋白点进行质谱分析和数据库检索,共鉴定出24种蛋白质,其中上调蛋白有11种,下调蛋白有13种.结论 成功地建立增生性瘢痕的双向电泳荧光染色图谱,鉴定出增生性瘢痕组织与正常皮肤组织间的差异蛋白质表达.     

PLOD2参与人皮肤纤维化的形成

目的探讨瘢痕组织中赖氨酸羟化酶2(PLOD2)基因的表达与Ⅰ型胶原(COLIα1)形成之间的相关性。方法用RT-PCR及Western blot检测瘢痕组织和正常皮肤组织中PLOD2及COLIα1mRNA的表达及Ⅰ型胶原蛋白的含量;设计并合成3种PLOD2ASODN(分别针对PLOD2翻译起始部、第一与第二外显子连接部、终止密码部),分别转染入NIH/3T3小鼠成纤维细胞,用RT-PCR及Western blot检测细胞PLOD2和COLIα1mRNA表达及Ⅰ型胶原的含量。结果瘢痕组织中PLOD2的表达和Ⅰ型胶原的含量明显高于正常皮肤组织(P<0.05);3种ASODN对成纤维细胞PLOD2mRNA的表达及Ι型胶原的形成均产生抑制作用(P<0.05),其中针对PLOD2翻译起始部的ASODN抑制率最高(P<0.001);在瘢痕组织与正常皮肤组织之间,以及反义ODN治疗各组之间,COLIα1的表达无差异。结论PLOD2高表达与Ⅰ型胶原形成密切相关,PLOD2ASODN阻止Ⅰ型胶原形成的作用位于COLIα1mRNA转录后水平。