5-氨基乙酰丙酸光动力杀伤人鼻咽癌细胞株的实验研究

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力学效应(PDT)杀伤人鼻咽癌细胞株CNE2的可能性.方法 对培养的CNE2分别加入不同浓度的5-ALA(0.01、0.05、0.10、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)孵育4h,予波长630nm的半导体激光照射,照射能量密度分别为20、10、5、2J/cm2,继续孵育6、12、24h,用四唑盐比色法分别测定细胞存活率.结果 5-ALA-PDT能有效杀伤人鼻咽癌CNE2细胞,其杀伤程度与照射后孵育时间、5-ALA浓度和激光剂量呈正相关(P＜0.01).激光照射后12h,激光能量为20J/cm2,5-ALA浓度为0.5mmol/L时,其杀伤作用最明显.结论 体外培养CNE2细胞对5-ALA介导的PDT敏感.     

5-氨基乙酰丙酸光动力学疗法杀伤人结肠癌两个细胞株的对比研究

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力学疗法(photodynamie therapy,PDT)对体外培养人结肠癌LoVo和CoLo205细胞的生物作用.方法 于体外培养的LoVo和CoLo205细胞分别加入不同浓度的5-ALA(0.1、0.5、1.0、1.5、2.0和2.5 mmol/L)孵育6 h,以波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24 h, 用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率;荧光分光光度计检测LoVo与CoLo205细胞内PpⅨ荧光强度.结果 5-ALA-PDT对体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞均有杀伤作用,两者无显著性差异(P>0.05).其杀伤作用大小与5-ALA的浓度和激光剂量成正相关(P<0.01).激光能量为20 J/cm2,5-ALA的浓度为1.0 mmol/L时,其杀伤LoVo、CoLo205细胞的作用最明显;LoVo与CoLo205细胞内PpⅨ荧光强度差异无显著件意义(P>0.05).结论 5-ALA-PDT可有效杀伤体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞,且对两种细胞的杀伤作用无显著性差异.     

皮肤癌细胞的5-氨基酮戊酸光动力效应研究

目的研究AIA－PpIX在皮肤癌细胞中的药代动力学规律,分析ALA—PDT对皮肤癌细胞的光动力作用机制。方法利用荧光光谱技术测量皮肤癌细胞A431和A375的ALA—PpIX的荧光强度。利用激光共聚焦显微技术研究ALA—PpIX在皮肤癌细胞中的分布。用倒置相差显微镜观察ALA－PDT作用后细胞的形态学变化。使用CCK－8（CellCounting Kit-8）比色法测定AIA-PDT后细胞的存活率。结果两种皮肤癌细胞内ALA—PpIX的含量随着ALA浓度的增大而增加,当ALA浓度为0．6mM时,ALA-PpIX的含量已基本达到饱和,0．6mM为最佳的药物孵育浓度。给予细胞0．6mMALA孵育4h后,检测到AIA—PpIX弥散分布于两种皮肤癌细胞的胞浆内和细胞膜上。两种细胞经AIA－PDT后的形态发生显著变化。在光剂量增加到1．74J／cm^2时,A431和A375细胞的存活率均下降到25％以下。结论两种皮肤癌细胞吸收ALA后合成PpIX的特性没有显著差异。在相同孵育时间条件下,A431合成PpⅨ的含量比A375高。A431和A375对ALA-PpIX的最佳药物孵育浓度为0．6mM。ALA—PDT对两株皮肤癌细胞均有明显的抑制作用,A431对ALA-PDT更敏感。     

5-ALA-PDT对两种鼻咽癌细胞EBV-C666-1和CNE2的杀伤效应研究

目的比较处于不同细胞生长期的EBV-C666-1和CNE2鼻咽癌细胞加入相同浓度5-氨基酮戊酸(5-Aminolevulinic acid,5-ALA)孵育相同时间后,所产生PpⅨ总量的差异以及对PDT的响应情况。方法通过计数法测定C666-1和CNE2细胞的生长曲线,利用荧光光谱技术检测处于不同生长期的细胞吸收5-ALA所生成的PpⅨ含量,应用激光共聚焦显微技术观察5-ALA-PpⅨ在两种细胞中的亚细胞分布。分别在细胞培养24,48和72 h后,对两株细胞进行光动力(photodynamic therapy,PDT)实验,使用CCK-8(cell counting Kit-8)比色法测定细胞存活率。结果 C666-1细胞中5-ALA-PpⅨ的含量明显低于CNE2细胞。同种细胞在不同生长期吸收5-ALA后所生成的PpⅨ的含量也存在显著差异。5-ALA-PpⅨ主要分布在C666-1细胞的线粒体,而在CNE2细胞中主要分布于细胞膜。相同实验条件下,C666-1细胞在培养24和48 h的PDT实验中,存活率低于CNE2,而在细胞培养72 h后的PDT实验中,存活率高于CNE2。结论处于不同生长期的C666-1和CNE2细胞吸收5-ALA后所生成的PpⅨ的含量存在显著差异,细胞中PpⅨ的含量和分布是影响PDT疗效的重要因素。     

5-氨基酮戊酸-光动力疗法治疗复发性尖锐湿疣

目的评价5-氨基酮戊酸-光动力疗法（ALA-PDT）治疗复发性尖锐湿疣的临床疗效。方法复发性尖锐湿疣患者62例,以5-ALA水溶液湿敷患处,3 h后以635 nm半导体激光照射,能量密度261 J/cm2,照射时间20 min,每周治疗1次。治疗后6个月判断治愈率及不良反应。结果 62例患者治愈率为87.1%。主要的不良反应为局部可忍受的刺痛,1例患者肛门口处出现浅表瘢痕。结论 ALA-PDT治疗复发性尖锐湿疣安全可靠,疗效满意。     

5-氨基酮戊酸-光动力疗法治疗尖锐湿疣临床观察

目的 观察5-氨基酮戊酸-光动力疗法(ALA-PDT)治疗尖锐湿疣的疗效和安全性.方法 外生殖部尖锐湿疣患者28例,先后2次将5% ALA霜涂于病变处及其周围5 mm范围皮肤黏膜上,间隔2 h.第2次涂ALA霜后2 h,以功率300 mW、光斑直径15～20 mm、时间20 min、能量密度100 J/cm2、波长635nm半导体激光照射病损区.1周后判定疗效,随访1～3个月观察复发情况.结果 28例患者经过1～2次治疗后治愈26例,治愈率92.9%.随访3个月,复发9例,复发率34.6%.多数患者治疗后局部出现轻度水肿.结论 ALA-PDT可有效治疗外生殖器尖锐湿疣,降低皮损复发率,且不良反应少.     

5-氨基酮戊酸-光动力疗法治疗尖锐湿疣疗效观察

目的观察5-氨基酮戊酸-光动力疗法治疗尖锐湿疣的疗效。方法尖锐湿疣患者50例,病变主要见于尿道口,其次是宫颈口、包皮、大阴唇和肛周。病变及其周围先涂以20%的5-氨基酮戊酸凡士林霜,然后以波长632.8nm,功率100mW,光斑直径2～4cm,能量密度100mJ/cm2的He-Ne激光照射。结果尿道口处病变痊愈率为97.2%,复发率为2.8%;宫颈口处病变痊愈率为75%,复发率为25%;包皮处病变痊愈率为75%,复发率为25%;肛周治愈率为40%,复发率为60%。结论5-氨基酮戊酸-光动力疗法治疗尖锐湿疣疗效确切,复发率较低,其疗效与病变部位、治疗次数相关。     

5-氨基酮戊酸-光动力学疗法作用于白血病细胞的研究--细胞实验中PDT剂量计算的数学模型

目的 将5-氨基酮戊酸-光动力学疗法(ALA-PDT)应用于血液肿瘤的研究开创了AIA-PDT研究的一个新领域，本文对该领域的作用机理的数学模型及细胞实验进行了研究。方法 主要建立细胞实验中PDT剂量计算的数学模型。结果 数学模型中所推导的一些参数都是实验或临床中可观测和调制的量，其基本参量包括：光功率密度E、ALA的细胞孵育量P和光照持续时间T等。结论 论文主要的试验数据获得包括：PDT剂量(ALA剂量及孵育时间，光波长及剂量范围)的摸索；ALA-PDT后血细胞活性的检测；影响ALA-PDT疗效的因素等。论文对ALA-PDT的剂量计算进行了建模分析，通过上述式子就可计算出PDT中涉及的很多参量。     

局部5-氨基酮戊酸光动力疗法治疗男性尿道口尖锐湿疣的临床疗效

目的评价局部5-氨基酮戊酸光动力疗法治疗尿道尖锐湿疣的临床疗效和安全性。方法男性尿道口尖锐湿疣患者84例,将20%氨基酮戊酸浸湿的无菌脱脂棉敷于尿道口,塑料薄膜封包4h,以波长635nm,功率260～300mW,能量密度100～120J/cm2的半导体激光照射20～30min。每7～10d治疗1次,共治疗3次,治疗后6个月评估治愈率、复发率及不良反应。结果尿道口的疣体治愈率为95.2%,复发率为4.8%。主要不良反应有轻度糜烂、疼痛、渗液,没有瘢痕、尿道狭窄和系统不良反应发生。结论 ALA-PDT疗法具有清除率高,复发率低,耐受性好的特点,是治疗尿道口尖锐湿疣的好方法。     

5-氨基酮戊酸-光动力疗法联合微波治疗尖锐湿疣的临床疗效

目的比较5-氨基酮戊酸-光动力疗法（5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy,ALA-PDT）和微波治疗尖锐湿疣的临床疗效。方法尖锐湿疣患者90例,分为3组,A组为特殊部位（尿道口、系带或宫颈部位）的疣体患者20例,采用5-ALA-PDT治疗,每周治疗一次,3次为一疗程。其余70例患者随机分为两组,每组35例,B组为采用ALA-PDT联合微波治疗组,根据疣体大小一次或分次清除疣体;C组为单纯微波治疗组。ALA-PDT微波治疗。末次治疗后7 d进行疗效评价,术后3个月随访评价复发率。结果 A组患者治疗后7 d的清除率为95.2%,总复发率为10.0%。B组和C组末次治疗后7 d的清除率均为100%,术后总的复发率分别为8.6%,28.6%,三组比较差异有显著意义（P〈0.05）。结论 ALA-PDT联合微波治疗尖锐湿疣疗效确切,复发率低。ALA-PDT可有效治疗特殊部位疣体,临床使用范围广。     

Effect of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy on keratinocyte proliferation and apoptosis in condyloma acuminatum

BackgroundThe effect of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy on keratinocyte proliferation and apoptosis in condyloma acuminatum tissues was evaluated.MethodsAn immunohistochemical method and TdT-mediated dUTP nick end labeling were performed to detect the positive expression of the keratinocyte proliferation-related gene Ki-67 and apoptosis, respectively, in condyloma acuminatum tissues.ResultsOf 52 cases, 44 showed positive expression of Ki-67 in condyloma acuminatum keratinocytes before the treatment, with a positive expression rate of 84.62% (44/52), an expression strength of mostly ++ − +++, and a Ki-67 proliferation index of 80.26 ± 5.07%. After treatment, 22 cases showed positive expression of Ki-67 in condyloma acuminatum keratinocytes, with a positive expression rate of 42.31% (22/52), an expression strength of mostly − − ++, and a proliferation index of 42.67 ± 3.06%. The differences in the positive expression rate, expression strength, and proliferation index in the before- and after-treatment groups were statistically significant (χ² = 20.070, P < 0.001). For visible apoptotic cells in condyloma acuminatum keratinocytes before the 5-aminolevulinic acid photodynamic treatment, the expression strength was mostly + − ++, and the average apoptotic index was 13.94 ± 2.35%; after treatment, the expression strength was mostly ++ − +++, and the average apoptotic index was 73.88 ± 7.65%; the difference in the apoptotic index between the before and after treatment groups was statistically significant (P < 0.001).Conclusion5-Aminolevulinic acid photodynamic therapy can inhibit the proliferation and promote the apoptosis of keratinocytes, and represents an effective mechanism for treating condyloma acuminatum.     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率（IC50）分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

三联疗法治疗女性尖锐湿疣的疗效观察

目的观察CO2激光、5-氨基酮戊酸光动力疗法、中药内服联合治疗(简称三联疗法)尖锐湿疣的疗效。方法将168例尖锐湿疣患者按抽签法随机分为两组,观察组85例采用三联疗法治疗;对照组83采用CO2激光联合中药内服方法治疗;两组患者治疗结束后均随访6个月,比较两组的疗效。结果观察组的治愈率和6个月后的复发率分别为91.4%和3.5%。对照组的治愈率和6个月后的复发率分别为67.8%和11.9%。观察组的治愈率明显高于对照组,而观察组的复发率显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论使用三联疗法治疗尖锐湿疣,能明显提高治愈率,降低复发率。     

咖啡酸苯乙酯对人大肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的观察咖啡酸苯乙酯（CAPE）对人大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法以大肠癌细胞株HCT116为研究对象,对20只BAL13／c裸鼠建立人大肠癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组和治疗组各10只。治疗组以CAPE5mg／d,观察两组第7、14、21、28天皮下移植瘤生长情况及裸鼠体重的变化;治疗结束时取肿瘤组织及心、肝、肺、肾、肠等行病理组织学检查,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果CAPE对HCT116裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,与对照组相比,瘤体重量明显降低、体积减小（P〈0．01）,坏死面积显著增加,凋亡指数明显升高,但对裸鼠体重无明显影响,心、肝、肺、肾、肠等组织未见明显病理学改变。结论CAPE具有抑制人大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用,可能与其诱导细胞凋亡有关。     

蛋白酶体抑制剂MG-132及其与顺铂联合应用对喉癌Hep-2细胞株的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG-132对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响,及其与顺铂(DDP)联合应用对喉癌细胞的毒性作用。方法以Hep-2细胞为实验对象,分别用0、1、2.5、5、10、20μmol/L的MG-132干预Hep-2细胞48h;另用2.5μmol/L MG-132分别干预细胞0、12、24、48、72h。将细胞分为4组:对照组(不做处理)、MG-132组(加入终浓度1μmol/L的MG-132)、单用DDP组(分别加入终浓度为10、20、40、80μmol/L的DDP)及MG-132+DDP组(加入1μmol/LMG-132和10、20、40、80μmol/L的DDP),各组干预细胞48h。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖抑制率及凋亡率的变化。结果MTT检测结果显示MG-132可有效抑制Hep-2细胞的增殖,呈浓度(r=0.944,P<0.01)及时间依赖性(r=0.945,P<0.01),48h时的半数抑制量(IC50)=2.50μmol/L;与单用DDP比较,MG-132联用DDP后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。DDP的IC50由62.22μm...     

人卵巢癌拓扑替康耐药细胞株SKOV3/TPT的建立及生物学特性的研究

目的建立人卵巢癌拓扑替康（TPT）耐药细胞株（SKOV3／TPT）,研究其生物学特性和耐药特点。方法模拟临床用药特点,采用大剂量TPT（2160ng／ml）冲击建成人卵巢癌SKOV3／TPT耐药细胞株。MTT法检测多药耐药性,流式细胞仪测定细胞周期、胞内药物的积聚及P糖蛋白（Pgp）表达,从生长曲线、光镜下形态、超微结构等方面比较耐药细胞和SKOV3细胞某些生物学特性的差异。结果成功建立了SKOV3/TPT耐药株,耐药指数为10．67,对喜树碱、米托蒽醌及长春新碱有明显的交叉耐药,对紫杉醇、顺铂、5氟尿嘧啶、足叶乙甙和甲氨蝶呤敏感。与SKOV3细胞相比,SKOV3/TPT耐药细胞倍增时间延长;G2＋M期的比例明显增加（P〈0．01）;细胞内TPT浓度明显减少（P〈0．05）;无Pgp过表达。结论SKOV3/TPT细胞株呈中等水平耐药,耐药性稳定,呈非典型的多药耐药特征;对TPT耐药的主要原因可能与细胞内药物浓度降低和细胞周期改变及凋亡有关,与Pgp的过表达无关。     

5-Aminolevulinic acid-based photodynamic therapy of chordoma: In vitro experiments on a human tumor cell line

BackgroundChordomas are very rare tumors of the skull base and the sacrum. They show infiltrating and destructive growth and are known to be chemo- and radio-resistant. After surgical resection, the recurrence rate is high and overall survival limited. As current adjuvant treatments are ineffective, new treatment concepts are urgently needed. 5-aminolevulinic acid-based photodynamic therapy (5-ALA based PDT) showed promising results for malignant gliomas. However, it is unknown so far, whether chordomas accumulate protoporphyrin IX (PPIX) after application of 5-ALA and whether they are sensitive to subsequent 5-ALA based PDT.MethodsThe immortalized human chordoma cells U-CH2 were used as in vitro model. After incubation for 4 h or 6 h with different 5-ALA concentrations, PPIX accumulation was determined by flow cytometry. To assess sensitivity to PDT, chordoma cells were incubated at 30.000 cells/well (high cell density) or 15.000 cells/well (low cell density) with graded doses of 5-ALA (0–50 μg/ml) in 96-well plates and subsequently exposed to laser light of 635 nm wavelength (18.75 J/cm²). Cell survival was measured 24 h after exposure to laser light using the WST-1 assay.ResultsU-CH2 cells dose-dependently accumulated PPIX (ANOVA; p < 0.0001). PPIX fluorescence was significantly higher, when cells were incubated with 5-ALA for 6 h compared to 4 h at higher 5-ALA concentrations (ANOVA/Bonferroni; p ≤ 0.05 for ≥ 30 μg/ml 5-ALA). For both cell densities, a 5-ALA dose-dependent decline in viability was observed (ANOVA; p < 0.0001). Viability was significantly lower at higher 5-ALA concentrations, when 30.000 cells/wells were treated compared to 15.000 cells/well (ANOVA/Bonferroni; p ≤ 0.001 for ≥ 30 μg/ml 5-ALA). LD50 was 30.25 μg/ml 5-ALA.ConclusionThe human UCH-2 cell line was a very useful in vitro model to study different effects of 5-ALA based PDT. For the first time, it could be shown that human chordoma cells may be destroyed by 5-ALA/PDT.     

反义bcr／ab1重组逆转录病毒表达载体的构建及其转染对K562细胞系的影响

用逆转录聚合酶链反应技术从Ｋ５６２细胞系中扩增出ｂｃｒ／ａｂ１融合区２５３ｂｐＤＮＡ片段，经反复连接与克隆，得到含同方向串联的２、３和４个拷贝的该融合基因片段的克隆载体ｐＵＣｓ。这些片段分别反向连接到逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲｎｅｏ。ＤＮＡ序列分析、限制性内切酶分析和菌落原位杂交证实：不同拷贝数的ｂｃｒ／ａｂ１融合区基因片段已反向插入ｐＤＯＲｎｅｏ。利用脂质体介导，将重组质粒导入Ｋ５６２细胞系后，观察到转染细胞的增殖明显被抑制     

125I-脱氧尿嘧啶核苷对淋巴瘤细胞Raji和Daudi的杀伤作用

目的 探讨¹²⁵I-脱氧尿嘧啶核苷(¹²⁵I-UdR)在淋巴瘤细胞Raji和Daudi中的特异性摄取及其杀伤效应。方法 测量Raji、Daudi细胞和细胞核在含不同放射性浓度¹²⁵I-UdR的培养液中培养不同时间后的活度;用噻唑蓝(MTT)实验和碘化丙啶(PI)染色周期分析评价¹²⁵I-UdR对Raji和Daudi细胞的杀伤作用。结果 Raji和Daudi细胞摄取¹²⁵I-UdR的量明显高于Na¹²⁵I对照组(P<0.05),在100kBq/ml浓度时,Raji和Daudi细胞摄取¹²⁵I-UdR的量分别为(14 414±95)和(6916±53.69)Bq/10⁶细胞,而对Na¹²⁵I的摄取量分别为(68±3.8)和(324±32.8) Bq/10⁶细胞;细胞和细胞核中¹²⁵I-UdR的量随培养基中¹²⁵I-UdR放射性浓度以及培养时间的增加而增加;¹²⁵I-UdR组的存活分数明显低于Na¹²⁵I对照组(P<0.05),以500kBq/ml浓度培养48h时, Raji和Daudi细胞¹²⁵I-UdR组的存活分数分别为(19.78±1.39)%和(43.17±2.69)%,而Na¹²⁵I组的存活分数分别为(79.10±1.79)%和(80.36±6.12)%;细胞存活分数有随培养基中放射性浓度增加而降低的趋势。结论 ¹²⁵I-UdR可被Raji和Daudi细胞特异性摄取并进入细胞核中,进而杀死细胞,其作用具有明显的时间-效应和剂量-效应关系。