乳腺癌bcl-2甲基化的检测及与表达、预后的关系

目的：建立bcl-2基因甲基化特异的PCR（MSP）检测方法，并探讨乳腺癌bcl-2甲基化与蛋白表达、预后因素（肿瘤大小，淋巴结转移，增殖细胞核抗原PCNA，雌、孕激素受体ER、PR情况）的关系。 方法： 设计bcl-2基因MSP引物，采用MSP方法检测54例乳腺癌bcl-2基因5’端启动子CpG岛甲基化状态。采用免疫组化S-P法检测54例乳腺癌bcl-2、PCNA、ER、PR的表达。 结果： 乳腺癌bcl-2甲基化率为29.6%。Bcl-2甲基化与其蛋白表达之间呈显著负相关（P＜0.01）。Bcl-2甲基化率高与不良的预后因素（PCNA标记指数LI高、ER-和PR-）显著相关（P＜0.01）。 结论： 该研究建立bcl-2基因MSP检测方法，MSP扩增和测序结果证实，bcl-2基因MSP引物设计是合理的。bcl-2甲基化有可能成为乳腺癌预后不良的分子检测指标。     

乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动子区CpG岛甲基化相关性

目的建立针对PELP1基因启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测方法,分析乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动区CpG岛甲基化的相关性。方法设计针对PELP1基因启动子区的MSP引物组,以甲基化和非甲基化DNA为模板验证MSP引物的特异性,建立针对PELP1基因启动子区的MSP检测方法。以DNA甲基转移酶抑制剂5'-氮杂-脱氧胞苷磷酸(5'-Aza-d C)分别处理MCF-7乳腺癌细胞、MCF-10正常乳腺导管上皮细胞,采用MSP检测PELP1基因启动子区甲基化状态变化,采用Western blot检测蛋白表达。结果针对PELP1基因启动子区设计的MSP引物组特异性良好,甲基化特异性引物仅在甲基化DNA模板获得阳性扩增条带,非甲基化引物仅在非甲基化DNA模板获得阳性条带。MCF-7乳腺癌细胞中PELP1基因启动子区呈非甲基化状态,MCF-10正常乳腺导管上皮细胞中PELP1基因启动子区呈甲基化状态,MCF-10细胞中PELP1蛋白表达水平为MCF-7细胞的1/16(P0.05)。采用5'-Aza-dC去除MCF-10细胞PELP1基因启动子区甲基化后,PELP1蛋白表达水平上升了9.7倍(P0.05)。结论所建立的PELP1基因启动子区MSP检测方法特异性良好,去甲基化可能是导致乳腺癌细胞中PELP1基因过表达的重要机制。     

CDH1基因启动子甲基化在上皮性卵巢癌转移方面的研究

目的探讨CDH1基因启动子甲基化对上皮性卵巢癌转移的影响。方法采用免疫组织化学方法检测38例正常卵巢上皮和80例上皮性卵巢癌组织中E-钙黏附素（E-cadherin）表达;应用甲基化特异的PCR（MSP）检测上述组织中CDH1基因启动子区甲基化;应用5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）使SKOV3细胞去甲基化,观察SKOV3细胞体外侵袭性的改变,并通过RT-PCR检测CDH1基因的改变。结果E-cadherin在正常卵巢组织中表达明显高于上皮性卵巢癌（P〈0．05）。34例CDH1基因启动子区甲基化全部出现在卵巢癌组织中,有淋巴结转移组织中甲基化明显高于无淋巴结转移者（P〈0．05）,而CDH1基因启动子区有甲基化的卵巢癌组织中E-cadherin表达明显降低（P〈0．05）。经5-Aza-CdR处理后的SKOV3细胞体外侵袭性降低（P〈0．01）,CDH1基因的表达明显上调（P〈0．01）。结论E-cadherin表达降低与上皮性卵巢癌转移关系密切,CDH1基因启动子区甲基化可能是导致E-cadherin蛋白表达减低的重要原因之一,因此启动子区甲基化与上皮性卵巢癌转移有关。     

乳腺癌中Livin基因及蛋白表达与细胞凋亡、增殖的关系

目的探讨Livin在乳腺癌表达及其与caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法采用SP法免疫组化和原位杂交技术检测Livin在正常乳腺组织（14例）、乳腺增生性病变（14例）、乳腺非浸润性癌（20例）和乳腺浸润性癌组织（52例）中Livin mRNA和其蛋白的表达以及caspase-3、Ki-67在乳腺癌组织中的表达。结果Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率分别为（7．1％、7．1％）、（28．6％、28．6％）、（65．0％、70．0％）、（73．1％、75．0％）,差异有统计学意义（P〈0．01）。Livin蛋白与mRNA表达之间差异无统计学意义（P〉0．05）。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关（P〈0．05）,与肿瘤大小和组织学分级无关。Livin蛋白与caspase-3的在乳腺癌表达呈负相关（P〈0．01）。Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki-67增殖指数（47．32％±22．34％）明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌Ki．67增殖指数（18．01％±23．34％）（P〈0．01）。结论Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌发生、发展中起重要作用,可作为乳腺癌新的分子标记物,可能成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。Livin蛋白通过与执行型caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡。Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤的发生、发展。     

散发性乳腺癌及乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化分析

目的 了解散发性乳腺癌及癌旁增生组织、乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化状态,探讨其与乳腺癌发生的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)结合巢式PCR技术,研究23例散发性乳腺癌及其癌旁增生组织、6例乳腺不典型导管增生组织及5例健康成人女性外周血淋巴细胞中BRCA1基因启动子区甲基化状态.结果 5例健康成人女性外周血淋巴细胞均表现BRCA1基因启动子区甲基化阴性;23例原发性乳腺癌组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化率为65.22%(15/23);癌旁增生组织检出CpG岛甲基化者11例,甲基化率为47.83%(11/23),且均为癌组织阳性患者;6例乳腺不典型导管增生组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化阳性者2例,甲基化率为33.33%(2/6);统计学检验结果表明,乳腺癌、癌旁增生组织之间,BRCA1基因启动子区甲基化阳性率无显著差异.结论 BRCA1基因启动子区CpG 岛甲基化是散发性乳腺癌发生过程中的早期事件,可能在乳腺癌发生中和乳腺增生病癌变过程中起重要生物学作用.     

上皮型钙粘素在宫颈鳞癌及癌前病变组织中的表达及其基因启动区CpG岛甲基化研究

目的检测上皮型钙粘素及其基因启动区CpG岛甲基化在宫颈癌组织及癌前病变组织中的表达及其在宫颈癌发病、侵袭和转移中的作用和意义。方法选择中南大学湘雅医院附属二院2006年10月～2009年10月40例宫颈鳞癌、52例宫颈上皮内瘤样病变（CINs）、18例正常宫颈。采用免疫组织化学法和甲基化特异PCR（MSP）法,检测E-cadherin蛋白表达及其基因启动子CpG岛甲基化状况。结果正常宫颈组织-CINs-鳞癌,这一演变过程中各组E-cad蛋白膜表达的阳性率和甲基化率分别为100%、61%、15%;0、28%、62.5%、100%分别呈降低和升高的趋势,各组比较差异均具有统计学意义（P〈O.05,P〈0.01）且与临床分期和病理分级（P〈O.05）;宫颈癌甲基化组（1/25））低于非甲基化组（5/15）,两者比较差异有统计学意义（P〈O.01）。结论 E-cad蛋白表达失活使其丧失了抑癌作用是宫颈癌发生、发展、转移的早期信号;其启动区CpG岛甲基化是E-cad蛋白灭活的机制之一。     

乳腺癌发生模型MCF10各细胞系中APC基因启动子区甲基化及mRNA表达检测

目的探讨乳腺癌发生模型MCF10中抑癌基因APC启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型的乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及经典乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺组织中APC基因启动子1A甲基化状态,然后用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果在MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系中,APC基因启动子1A处于低甲基化状态;与正常乳腺组织相比,各细胞系APC基因mRNA表达无明显减少,MCF10AT、MCF10CA1d、MCF10CA1h、MCF10DCIS．com的mRNA表达分别减少0．27、0．96、1．78、2．70、2．03倍,MCF10A和MCF-7分别增加0．02和0．33倍）。结论MCF10模型中乳腺癌的发生发展过程与APC基因启动子区异常甲基化无关。     

乳腺癌发生过程中NOEY2基因启动子区甲基化及mRNA表达

目的 探讨乳腺癌发生过程中抑癌基因NOEY2启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法 应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型中乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCFIODCIS．com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及正常乳腺组织中NOEY2基因启动子区CpG岛Ⅰ甲基化状态,然后用RT-PCR和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果 MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系均发生该基因启动子区CpG岛Ⅰ高度甲基化;与正常乳腺组织相比,上述细胞系mRNA表达显著减少。结论 NOEY2基因启动子区高度甲基化及相应的mRNA表达减少是乳腺癌发生过程中的早期事件,与乳腺癌发生有关,可能成为早期诊断乳腺癌的潜在分子生物学标记。     

乳腺癌中印记基因SLC22A18/TSSC5/BWR1A启动子区甲基化及mRNA表达的研究

目的： 研究印记基因SLC22A18启动子区甲基化对乳腺侵润性导管癌组织中的SLC22A18 mRNA表达的影响，探讨其与临床病理特征之间的关系。方法：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative RT-PCR）方法检测40例乳腺侵润性导管癌及其癌旁组织中SLC22A18 mRNA的表达，甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测SLC22A18基因启动子区的甲基化状态。检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-aza-dc）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231后，对SLC22A18基因启动子区DNA甲基化和mRNA表达的影响。结果：SLC22A18在40例乳腺侵润性导管癌中mRNA表达量低于癌旁组织（0.12±0.10 vs 0.69±1.05，P＜0.01）；40例乳腺侵润性导管癌及对应癌旁组织中，SLC22A18启动子区的甲基化发生率分别为75％和37.5%，差异有统计学意义（P＜0.01）；在40例乳腺侵润性导管癌组织中，甲基化组SLC22A18 mRNA表达量低于非甲基化组（0.11±0.08 vs 0.24±0.18，P＜0.01）。5-aza-dc和5-aza-dc/TSA能不同程度逆转乳腺癌细胞株MDA-MB-231中SLC22A18基因的甲基化状态，并上调SLC22A18基因表达。结论：SLC22A18基因甲基化与乳腺癌发生有一定的关联，SLC22A18基因表达下调与其启动子区CpG岛异常甲基化相关。     

RUNX3基因表达对判断人乳腺癌预后的价值

目的探讨乳腺癌组织中RUNX3基因的表达及其与乳腺癌生物学特征和预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测RUNX3蛋白在88例乳腺癌、40例乳腺纤维腺瘤和40例乳腺增生病组织中的表达。结果（1）RUNX3在乳腺癌中的阳性表达率为35．23％,明显低于在乳腺纤维腺瘤（85％）及乳腺增生病（87．5％）组织中的表达率,差异具有统计学意义（P〈0．05）。（2）RUNX3蛋白表达与乳腺癌有无浸润、临床分期、淋巴结转移、ER、PR表达相关,而与病人的年龄、肿瘤类型、病理分级无关。（3）RUNX3表达阳性者的：生存率高于表达阴性者的生存率（P〈0．05）。RUNX3阳性表达者,术后生存时间长。结论（1）乳腺癌组织中RUNX3蛋白表达降低,证明RUNX3基因可能作为一个抑癌基因参与乳腺癌的发生。（2）随着乳腺癌的临床进展,RUNX3表达下降。（3）RUNX3在乳腺癌中的表达对评价患者的预后有一定价值。     

雌激素受体α阴性乳腺癌雌激素受体α基因启动子区CpG岛甲基化和肼苯哒嗪去甲基化作用

目的 检测雌激素受体(ER)α阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞及ERα阴性乳腺癌组织中ERα基因启动子区CpG岛甲基化状态;探索肼苯哒嗪能否作为去甲基化药物恢复ERα基因表达。方法应用特异性聚合酶链反应(MSP)检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞和20例ERα阴性乳腺癌组织ERα基因3个启动子区A、B、CpG岛甲基化情况,肼苯哒嗪处理上述两种乳腺癌细胞,逆转录(RT)-PCR检测不同启动子调控下ERα基因异型体(isoform)ERα-A、ERα-B、ERα-C mRNA和ERα基因公共编码区mRNA表达。结果MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞启动子区ERα-A、ERα-B均存在CpG岛甲基化,ERα-C无甲基化,20例ERα阴性乳腺癌组织中,13例(65％)ERα-A、10例(50％)ERα-B CpG岛甲基化阳性。其中9例ERα-A、ERα-BCpG岛甲基化均阳性(45％),仅1例(5％)ERα-C存在CpG岛甲基化。肼苯哒嗪处理上述两种细胞后,检测到ERα-A、ERα-B mRNA和公共编码区mRNA表达。结论乳腺癌组织和细胞ERα基因表达沉默可能与ERα基因启动子区A、B甲基化有关,且肿瘤分期愈晚,甲基化程度愈高。肼苯哒嗪能作为去甲基化药物诱导ERα基因表达。     

结直肠癌中胰岛素样生长因子结合蛋白-相关蛋白1表达上调与其5′CpG岛低甲基化的相关性

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-相关蛋白1(IGFBP-rP1)在结直肠癌中的表达改变并分析其与该基因5′CpG岛甲基化改变的关系.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测46例结直肠癌组织和配对的正常黏膜中IGFBP-rP1基因的表达水平及5′CpG岛的甲基化状况,并通过T-A克隆、测序加以验证.不表达IGFBP-rP1基因的结肠癌细胞株LoVo和SW620经去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-dC)处理后,分别用RT-PCR和MSP检测IGFBP-rP1表达改变和甲基化状况.结果 mRNA水平上,IGFBP-rP1在结直肠癌组织中的表达水平高于配对的正常黏膜(P<0.01).在46例结直肠癌组织中,28例(60.9%)可检测到IGFBP-rP1基因5′CpG岛发生甲基化,而在配对的正常黏膜中,37例(80.4%)可检测到,二者差异有统计学意义(P<0.05).IGFBP-rP1基因的表达和甲基化水平之间存在负相关(P<0.05).5-aza-dC处理后,两株细胞均出现IGFBP-rP1基因的再表达,MSP法检测证实基因发生了去甲基化.结论 IGFBP-rP1基因的表达水平与5′CpG岛甲基化水平之间存在负相关.DNA甲基化是结直肠癌中IGFBP-rP1表达调控的一种机制.IGFBP-rP1低甲基化引起的基因表达上调可能与结直肠癌的发生发展有关.     

GSTP1在前列腺癌组织中的表达及其甲基化检测

目的寻找前列腺癌患者血清中的生物标志物,为临床前列腺癌的早期无创性诊断提供依据。方法采用免疫组化SP染色法检测前列腺癌组织中GSTP1表达;运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测前列腺癌患者癌组织和相应血清GSTP1基因启动子区5’端CpG岛甲基化程度。结果免疫组化结果:GSTP1在88例前列腺癌组仅有2例呈阳性反应且均为石蜡包埋标本;49例前列腺增生组均为阳性反应,其中38例呈现为强阳性反应。MSP检测结果:38例新鲜前列腺癌组织中,GSTP1基因高甲基化29例,此29例相应血清GSTP1基因高甲基化28例。对照组19例前列腺增生标本和对应的血清均没有检测到GSTP1基因甲基化。结论前列腺癌组织中GSTP1基因的表达与其启动子区甲基化程度呈负相关。前列腺癌患者的组织和血清中GSTP1甲基化检测结果相一致,检测血清中GSTP1的甲基化程度可反应癌组织中GSTP1基因的表达的情况。     

DNA methylation-dependent silencing of CST6 in human breast cancer cell lines

Cystatin M (CST6) is a candidate breast cancer tumor suppressor that is expressed in normal and premalignant breast epithelium, but not in metastatic breast cancer cell lines. CST6 is subject to epigenetic silencing in MCF-7 breast cancer cells related to methylation of the CpG island that encompasses the CST6 proximal promoter region and exon 1. In the current study, CST6 CpG island methylation and expression status was examined in a panel of breast cancer cell lines. Seven of 12 (58%) cell lines lack detectable expression of CST6 and treatment of these cells with 5-aza-2'-deoxycytidine resulted in a significant increase in CST6 expression, suggesting that the loss of expression may be related to methylation-dependent epigenetic silencing. Bisulfite sequencing of CST6 in a subset of breast cancer cell lines revealed CpG island hypermethylation in CST6-negative cells, and an absence of CpG island methylation in cells that express CST6. The extent of regional methylation was strongly associated with the lack of expression of CST6 among these cell lines. In particular, hypermethylation of the proximal promoter was significantly associated with CST6 gene silencing, and methylation of a number of individual CpGs was found to be statistically correlated with extinction of gene expression. These results establish a strong link between CST6 promoter hypermethylation and loss of CST6 expression in breast cancer cell lines, and suggest that methylation-dependent epigenetic silencing of CST6 may represent an important mechanism for loss of CST6 during breast carcinogenesis in vivo.     

软组织平滑肌肉瘤中p16基因的甲基化检测

目的 探讨软组织平滑肌肉瘤（ＬＭＳ）中p16基因ＩＮＫ４Ａ的甲基化状态及其与p16表达的关系。方法 应用ＭＳＰ法检测３８例软组织平滑肌肉瘤,１０例平滑肌瘤及５例正常平滑肌组织中p16基因ＩＮＫ４Ａ的甲基化状态,用免疫组织化学ＳＰ方法检测p16蛋白表达情况。结果 ３８例ＬＭＳ中９例发生异常甲基化,异常甲基化率为２３.7%（９／３８）。其中,７例p16蛋白表达阴性,２例p16蛋白弱阳性,在p16蛋白表达阴性的ＬＭＳ中,异常甲基化率为５０％（７／１４）。结论 p16基因第一外显子启动子区５‘CpG岛的异常甲基化是导致p16基因失活、蛋白缺如的重要基因外机制,并可能参与肿瘤的发生。     

宫颈癌脆性组氨酸三联基因的表达与血浆中的甲基化状态

目的探讨宫颈癌患者血浆中脆性组氨酸三联（fragile histidine triad, FHIT） 基因5′端CpG岛甲基化状态以及该基因在宫颈癌组织中的表达情况。方法用甲基化特异性聚合酶链反应（methylafion specific polymerase chain reaction, MS-PCR）对151例患者的血浆进行FHIT基因甲基化状态的研究，并用免疫组织化学方法检测FHIT蛋白的表达情况。结果31．13％的患者血浆FHIT基因发生甲基化；59．60％宫颈癌组织FHIT蛋白表达减弱或缺失，其中47．78％存在血浆FHIT基因的甲基化。结论血浆中FHIT基因甲基化是引起宫颈癌FHIT蛋白表达减弱的重要因素，利用它可以对宫颈癌进行无创伤诊断和预后的评估。     

NDRG-1基因甲基化与乳腺癌发生的关系

目的 对NDRG-1基因启动子区甲基化状态进行研究,探讨NDRG-1基因甲基化在乳腺癌发生中的作用.方法 采用双色荧光杂交微阵列基因芯片技术对33例乳腺癌样本和癌旁组织样本进行NDRG-1基因启动子区甲基化状态研究.结果 33例肿瘤样本和癌旁组织样本中NDRG-1基因启动子区CpG位点均有不同程度的甲基化,肿瘤组织中NDRG-1基因启动子区CpG位点甲基化率显著高于相应的癌旁样本组织(t=14.12,P＜0.05).结论 DNA甲基化作为NDRG-1基因的重要调控机制,NDRG-1基因启动子区过甲基化可能在乳腺癌的发生过程中起重要作用.     

Hypermethylation of CpG islands is more prevalent than hypomethylation across the entire genome in breast carcinogenesis

This study aimed to establish a high-throughput, genome-wide and non-gene-specific approach to assess the methylation status of multiple CpG islands in parallel and employ it to detect the CpG island methylation profiling alterations in breast carcinogenesis. We used methylation-sensitive restriction fingerprint (MSRF) to screen the permutations of primers that could detect varied and specific methylation profiling in genomic DNA isolated from four different cell lines. Five permutations of nine arbitrary primers were determined for the following experiments based on the above test. We then examined the methylation profiling alterations of CpG islands in 31 breast cancer tissue samples relative to their adjacent non-neoplastic tissues with modified MSRF that replaced silver staining with denatured high-performance liquid chromatography for size fraction. We found that two pairs of primers could reveal specific alterations of CpG methylation in the examined tissues, and 83.9% (26/31) of breast cancer tissues exhibited specific CpG island methylation profiling relative to their adjacent non-neoplastic tissues. Size fraction analysis revealed that hypermethylation of CpG islands was responsible for the aberrant methylation profiling in breast cancer tissues. Our work not only established a relative high-throughput, genome-wide and economic method to detect methylation alterations of CpG island profiling, but also revealed that hypermethylation of CpG islands was more prevalent than hypomethylation across the entire genome in our examined cancer tissues. The methylation profiling alterations revealed by two primer pairs used in the present study might be a novel marker for breast cancer.     

Methylation patterns of IGFBP7 in colon cancer cell lines are associated with levels of gene expression

Altered expression of insulin-like growth factor binding protein 7 (IGFBP7) has been found in colon cancer, but the exact regulatory mechanism has not been fully investigated. In order to elucidate the mechanisms underlying aberrant IGFBP7 expression in colon cancer, we used bisulphite sequencing PCR (BSP) to detect the detailed methylation profiles of the IGFBP7 5' CpG island. Exon 1 of the IGFBP7 gene was highly methylated in IGFBP7-negative cell lines but unmethylated in IGFBP7-positive lines. The methylation status of the promoter region and the intron 1 region was not so discriminating in IGFBP7-positive and -negative cell lines. Methylation-specific PCR (MSP) confirmed the hypermethylation of IGFBP7 exon 1 in IGFBP7-negative cell lines. Treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine (5-aza-dC) induced demethylation of the CpG island in exon 1 of IGFBP7, as examined by both MSP and bisulphate genomic sequencing. Furthermore, the expression of IGFBP7 was restored, as detected by both RT-PCR and immunocytochemistry. Our study is the first to provide detailed methylation profiles of the IGFBP7 5' CpG island and shows that hypermethylation of the CpG island in exon 1 of IGFBP7 is closely related to the absence of its expression in colon cancer cells.