高糖毒性对胰岛β和α细胞功能的影响及机制探讨

一、高糖毒性对胰岛β细胞分泌功能的影响及机制 "胰岛β细胞葡萄糖毒性"通常指长期稳定高血糖状态所导致的胰岛β细胞非生理性和不可逆性的损伤,然而糖尿病患者体内的血糖波动亦是糖稳态紊乱的一个重要方面.     

肾炎患者糖代谢及胰岛α.β细胞功能的观察

本文观察了66例肾炎患者空腹血胰升血糖素、胰岛素、C肽和血糖的改变。男46例,女20例,年龄11～71岁,平均42岁,对其中35例做了口服葡萄糖耐量试验(OGTT),观察以上四种物质血中浓度的变化。肾炎病人与53例正常人相比,结果如下:(1)肾炎病人有明显高胰升血糖素血症。肾功能愈差,胰升血糖素愈高。服葡萄糖后,胰升血糖素下降不明显。尿毒症常伴有血胰升血糖素升高,这是肾清除率下降之故;(2)空腹高胰岛素血症及糖耐量减低,提示胰岛素抗     

线粒体融合蛋白2对棕榈酸处理的胰岛β细胞的影响及机制研究

目的:探讨线粒体融合蛋白2（Mfn2）对棕榈酸（PA）处理的小鼠胰岛β细胞的影响及机制。方法:使用浓度梯度的PA分别处理小鼠胰岛β细胞MIN6细胞,通过CCK8法检测细胞活性,并确定后续实验的PA浓度。通过转染慢病毒构建Mfn2敲低和Mfn2过表达稳定转染细胞系,将MIN6细胞分为Mfn2敲低空载对照（ShNC-Mfn...     

棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法培养于含0.5 mM棕榈酸的培养基中的MIN6细胞为实验组,仅含5%BSA的培养基培养的MIN6细胞为对照组,采用流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测两组MIN6细胞凋亡情况。实验组于培养12(实验1组)、24(实验2组)、36(实验3组)h后,对照组于培养36 h后,采用Western blot法检测MIN6细胞中的凋亡诱导因子(AIF)及survivin。构建survivin过表达载体并转染实验组细胞,36 h后,同前法检测转染及未转染survivin过表达载体的MIN6细胞在含棕榈酸培养基中的凋亡情况。结果培养36 h后实验组MIN6细胞凋亡率为30.27%±3.15%,明显高于对照组的4.61%±0.51%(P<0.01)。实验1、2、3组MIN6细胞核中的AIF的相对表达量高于对照组,sur-vivin相对表达量低于对照组(P均<0.05)。棕榈酸培养36 h后,转染survivin过表达载体的MIN6细胞凋亡率为11.6%±2.09%,低于未转染者的31.27%±2.97%(P<0.01)。结论棕榈酸可诱导小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡,可能与下调survivin表达和激活AIF凋亡信号通路有关;survivin表达上调可抑制棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡。     

游离脂肪酸对胰岛β细胞及α细胞功能影响研究

分为FFA正常组与升高组，分别对血糖、胰岛素、C肽、胰高血糖素(0、60、120、180min)结果进行对比分析。结果两组比较，其血糖、胰岛素、C肽、胰高血糖素(0、60、120、180min)均无显著性差异。结论FFA升高组对胰岛β细胞及α细胞功能影响与正常组相比无差异。可能FFA不是一个独立的损害胰岛细胞功能的因素，以及同时存在一些保护胰岛细胞、抵消FFA毒性作用的因素有关。另外，FFA损害的可能是胰岛素分泌的第一时相。     

游离脂肪酸对胰岛β细胞及α细胞功能影响研究

分为FFA正常组与升高组,分别对血糖、胰岛素、C肽、胰高血糖素(0、60、120、180min)结果进行对比分析.结果两组比较,其血糖、胰岛素、C肽、胰高血糖素(0、60、120、180min)均无显著性差异.结论FFA升高组对胰岛β细胞及α细胞功能影响与正常组相比无差异.可能FFA不是一个独立的损害胰岛细胞功能的因素,以及同时存在一些保护胰岛细胞、抵消FFA毒性作用的因素有关.另外,FFA损害的可能是胰岛素分泌的第一时相.     

胰岛β细胞损伤的分子机制探讨

1型糖尿病的病理生理机制为自身免疫T细胞特异性破坏胰岛β细胞[1].越来越多的研究显示,胰岛β细胞的破坏同样在2型糖尿病的发生发展中发挥重要作用.2型糖尿病胰岛β细胞损伤的可能机制包括内质网应激、氧化应激、淀粉样物质沉着、脂毒性和糖毒性等[2].这些机制导致的炎症反应开始时可能促进胰岛β细胞的修复和再生,但持续存在的炎...     

糖代谢对胰岛β细胞再生的调控

近期一项来自美国和以色列的研究发现,小鼠产生胰岛素的胰岛β细胞有很强的再生能力,提示原则上再生疗法可在糖尿病患者中得以应用.众所周知,应激条件下生理性的β细胞再生有赖于残存的β细胞增生,但调控和激发这种反应的因素尚未清楚.     

生长激素和生长抑素对大鼠胰岛β细胞功能和糖代谢的影响

目的探讨生长激素（GH）和生长抑素（SS）对大鼠胰岛β细胞功能和糖代谢的影响。方法分组给大鼠连续15d皮下注射GH、SS,测定体内GH、胰岛素及血糖水平;镜下观察胰腺和胰岛β细胞形态。同时设立安慰剂对照组。结果GH组GH水平及血糖水平较正常对照组升高（P〈0.05）;SS组GH水平及β细胞分泌功能指数较正常对照组降低（P〈0.05）;胰岛素水平及胰岛素敏感性指数各组间差异无显著性（P〉0.05）;光镜下胰岛β细胞染色GH组较正常对照组加深,SS组和正常对照组着色较淡。结论GH可以诱导胰岛素抵抗（IR）,SS可以改善IR。     

蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞活力的影响及其机制

目的 研究蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂对胰腺癌细胞系PANC-1活力的影响及其机制.方法 用PP2A抑制剂斑蝥素和冈田酸处理PANC-1细胞.通过Western印迹检测核因子(NF) -κB通路的激活程度.通过转染PP2A活性亚基cα(PP2A cα)表达质粒、NF-κB抑制蛋白激酶(IKK)α和NF-κB抑制蛋白(IκB)α的显性负性突变体、p65干扰质粒,分别从各环节阻断NF-κB通路,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力.结果 PP2A抑制剂可使IKKa磷酸化,进一步使IκBa磷酸化并降解,继而释放p65入核.过表达PP2Acα、IKKα显性负性突变体、IκBα显性负性突变体或干扰p65可分别使斑蝥素对细胞活力的抑制率下降(31.85±13.37)％、(23.48±8.98)％、(22.63±5.81)％、(20.88±3.24)％,使冈田酸对细胞活力的抑制率下降(40.17±11.65)％、(27.34±14.28)％、(24.85±3.39)％、(27.08±3.81)％.结论 PP2A抑制剂通过PP2A/IKKα/IκBα/p65依赖性通路发挥抗胰腺癌作用.     

甲状腺激素对胰岛β细胞的影响及其可能机制

甲状腺功能亢进(甲亢)患者可并发糖耐量减低甚至糖尿病,其机制可能是甲状腺激素(TH)毒性诱发的胰岛β细胞分泌功能损害.TH可通过核受体、促甲状腺激素释放激素(TRH)以及生长抑素、儿茶酚胺、连接肽酶和细胞因子途径等影响胰岛β细胞功能.由于甲亢状态下存在明显的氧化应激,而氧化应激可导致胰岛β细胞凋亡,诱发2型糖尿病,推测TH也可能通过氧化应激机制造成胰岛β细胞凋亡和胰岛素分泌缺陷.     

Wnt信号通路对体外培养小鼠胰岛β细胞的影响

目的 研究Wnt信号通路对体外培养的小鼠NIT-1胰岛细胞增殖和凋亡的影响.方法 高糖或细胞因子诱导胰岛细胞损伤,给予Wnt3a蛋白孵育,激活Wnt通路.Tunnel及流式细胞术检测细胞凋亡,BrdU检测细胞增殖.实时定量PCR检测同源异型结构域蛋白转录因子2(Pitx2)、T细胞特异性转录因子7类似物2(TCF7L2)mRNA的表达.结果 Wnt蛋白干预组细胞的凋亡减少(P<0.01),增殖增加,促进增殖的相关基因表达上调.结论 激活Wnt通路能促进胰岛细胞的增殖及减少其凋亡.     

白藜芦醇对db/db小鼠胰岛β细胞功能的影响

目的观察白藜芦醇对db/db小鼠胰岛β细胞的作用并探讨其可能机制。方法取12只db/db小鼠,随机分为糖尿病(DM)组和白藜芦醇干预组,每组各6只,另设对照(Con)组小鼠6只。干预4周后,比较各组OGTT后血糖水平,免疫组织化学分析胰岛中3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK-1)蛋白表达量的改变。体外培养小鼠胰岛细胞株MIN6细胞并分为正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、高糖+白藜芦醇(HG+Res)组、高糖+白藜芦醇+PI3K特异性抑制剂Wortmannin(HG+Res+Wo)组。Western blot测定4组细胞PDK-1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKt)水平,CCK-8法和流式细胞仪检测MIN6细胞增殖、凋亡率;ELISA测定上清液中胰岛素水平。结果与DM组比较,白藜芦醇干预组OGTT血糖曲线下面积下降(P0.05)、胰岛细胞PDK-1蛋白表达增加[阳性率(0.57±0.32)%vs(1.74±0.47)%,P0.01];与HG组比较,白藜芦醇干预后MIN6细胞中PDK-1、p-Akt蛋白增加、上清液中胰岛素水平增加[(124.95±5.37)vs(181.19±30.77)pmol/L]、细胞增殖(D值)增加[(0.71±0.10)vs(1.02±0.09)]、凋亡率下降[(19.3±2.1)%vs(11.2±1.4)%](P0.01);与HG+Res组比较,HG+Res+Wo组MIN6细胞PDK-1表达、Akt磷酸化水平减低,上清液中胰岛素水平及细胞增殖下降、凋亡率增加(P0.05)。结论白藜芦醇可能通过激活胰岛β细胞PDK-1/Akt通路、改善胰岛β细胞功能。     

p53凋亡刺激蛋白2基因肝脏条件性敲除小鼠的构建和鉴定*

目的 采用Cre-LoxP系统构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因肝脏条件性敲除小鼠。 方法 利用自行设计的sgRNA 序列,在ASPP2基因两端插入LoxP序列,构建ASPP2-flox 小鼠。采用PCR法和测序法对F0代和F1代小鼠进行基因型鉴定。将ASPP2-flox F1小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏敲除ASPP2基因小鼠。采用PCR法进行基因型鉴定。采用Westernblot和免疫组化法检测ASPP2基因肝脏敲除小鼠肝脏ASPP2蛋白表达。结果 对F0代和F1代动物基因行PCR和测序结果表明,构建ASPP2-flox 小鼠成功;F1代杂合子的基因型为ASPP2 fl/-;将F1代杂合子与Alb-Cre小鼠进行杂交后,回交ASPP2 fl/-小鼠,其基因型为ASPP2fl/fl CreT, 即为ASPP2肝脏条件性敲除小鼠;经Western blot和免疫组化法检测显示ASPP2fl/fl CreT小鼠肝脏ASPP2 蛋白表达显著减少。结论 基于Cre-LoxP系统成功构建ASPP2基因肝脏条件性敲除小鼠,为后续实验作了良好的基础。     

化疗对老年结直肠癌患者血糖代谢及胰岛β细胞功能的影响

目的探讨化疗对老年结直肠癌患者血糖代谢及胰岛β细胞功能的影响。方法选取老年结直肠癌患者37例,于化疗开始前、化疗2个月时、化疗4个月时、化疗6个月时抽取空腹静脉血,测定空腹血糖(FPG)、胰岛素、C-肽水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素分泌功能指数(HOMA-%β)。结果化疗期间发生血糖异常者占同期化疗的18.92%,其中FPG受损者占同期化疗的13.51%,糖尿病者2例,占同期化疗的5.41%,化疗前和化疗6个月后FPG水平差异显著(P<0.05)。FOLFOX方案和XELOX方案对患者血糖异常发生的影响差异无统计学意义(P>0.05)。异常血糖组于化疗2个月时(3~4个周期)开始出现血糖异常升高,差异显著(P<0.05)。32例患者化疗前和化疗6个月后空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)差异显著(P<0.05),空腹C-肽、胰岛素分泌功能指数(HOMA-%β)无统计学差异(P>0.05)。结论化疗可引起老年结直肠癌患者血糖代谢的异常,其机制可能与胰岛素抵抗、胰岛素分泌相对不足有关。     

胰岛β细胞自身免疫的分子机制

根据美国糖尿病学会(ADA，1997)和世界卫生组织(WHO，1999)糖尿病分型诊断的新建议，1型糖尿病可分为免疫介导性和特发性两种亚型。遗传易感因素[如人白细胞抗原(HLA)-DQ／DR、胰岛素基因的可变串联重复序列(INS-VNTR)和细胞毒性T淋巴细胞抗原(CTLA)-4等]与环境因素(如病毒感染、饮食成分及化学毒素等)相互作用，致使免疫调节失衡[如辅助性T细胞(Th)1功能亢进，Th2功能减弱等]，胰岛β细胞的免疫耐受性丧失而遭受免疫攻击，发生自身免疫性糖尿病。换言之，免疫介导性1型糖尿病系由自身免疫选择性破坏胰岛β细胞，引起胰岛素分泌缺乏所致。     

Ghrelin抑制胰岛β细胞胰岛素释放的机制探讨

目的探讨ghrelinx对小鼠胰腺β细胞株NIT-1细胞胰岛素释放的影响及其作用机制。方法NIT1细胞与不同浓度ghrelin和高浓度葡萄糖孵育后，放免法测定上清液胰岛素含量，RTPCR法检测葡萄糖转运子2（GluT2）、胰十二指肠同源盒-1（PDX-1）、含两个跨膜区的内向整流钾通道（Kir6．2）及磺酰脲受体1（SUR-1）等基因的表达。NIT-1细胞与不同浓度ghrelin孵育不同时间后，MTT法检测细胞增殖情况。结果（1）10^-9mol／L至10^-7mol／L ghrelin呈剂量依赖性抑制NIT-1细胞高浓度葡萄精刺激的胰岛素释放；（2）10^-7mol／L ghrelin硅著降低Kir6．2mRNA的表达，但对GluT2、PDX-1及SUR-1 mRNA的表达无明显的效应；（3）Ghrelin对NIT-1细胞的增殖无垃著影响。结论Ghrelin可抑制胰岛β细胞高浓度葡萄糖刺激的胰岛素释放，该效应可能是由于下调ATP敏感性钾通道组成成分Kir6．2基因的表达所致。     

针灸对2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的影响

目的 探讨针灸对2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的影响及作用机制.方法 将造模成功的大鼠按随机化原则分为针刺组、用药组、安慰剂组,同时将普食大鼠作为正常对照组,每组各10只.针刺组大鼠取"后三里"(相当于足三里)、内庭和胰俞穴给予针刺治疗,用药组用罗格列酮(0.2 mg/kg体重)灌胃,安慰剂组用生理盐水(2 ml/kg体重)灌胃,均1次/d,连续4 w.观察治疗前后空腹血糖变化;实验结束时,HE染色观察大鼠胰腺组织学改变,免疫组化标记胰岛β细胞,末端脱氧核糖核酸缺口标记法(TUNEL)+免疫组化法标记凋亡的胰岛β细胞.结果 针刺组、用药组胰岛β细胞凋亡率均明显低于安慰剂组(P＜0.01),针刺组胰岛β细胞凋亡率有低于用药组的趋势,但无显著性差异(P＞0.05).结论 针刺可有效抑制2型糖尿病大鼠胰岛β细胞的凋亡.     

激素原转化酶2对胰岛β细胞激素分泌的影响

2型糖尿病(T2DM)以胰岛素抵抗(IR)与胰岛β细胞进行性减少为主要特征,近几年的研究结果 表明激素原转化酶2(PC2)在DM的发生、发展中扮演重要角色,成为IR与胰岛β细胞功能缺陷两大发病机制间的纽带,在β细胞进行性减少的过程中起到中心作用.本文就PC2对胰岛β细胞激素分泌的影响进行综述.