Twf1基因对心肌细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响研究

目的探讨抑制Twf1基因表达对高糖诱导的心肌细胞增殖、凋亡及NF-κB信号的影响。方法高糖刺激H9c2细胞,将H9c2细胞分为对照组(5.5 mmol/L的葡萄糖处理细胞)、NC组(瞬时转染无干扰作用的si RNA后用5.5 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)、高糖组(瞬时转染无干扰作用的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)和Twf1-siRNA组(瞬时转染干扰Twf1表达的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)。Western blotting检测蛋白表达,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量。结果高糖可引起H9c2细胞Twf1表达升高,转染Twf1-siRNA后H9c2细胞Twf1的表达明显降低;高糖组细胞活力低于NC组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均高于NC组,差异均有统计学意义(P0.05);Twf1-siRNA组的细胞活力高于高糖组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均低于高糖组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论抑制H9c2细胞Twf1基因表达可逆转高糖诱导的细胞活力降低及凋亡的增加,其机制可能与细胞内ROS含量降低及NF-κB信号下调有关。     

异鼠李素对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤保护作用的研究

目的探讨异鼠李素(ISO)对高糖高脂诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞损伤的保护作用及机制。方法不同浓度ISO预处理MIN6细胞后高糖高脂培养48 h,CCK8法筛选ISO最佳干预浓度。细胞分为正常对照(Con)组(11. 1 mmol/L葡萄糖)、高糖高脂损伤模型(M)组(33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)及ISO预处理(ISO+M)组(10μmol/L ISO+33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)。流式细胞术测定各组细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞凋亡及NO含量M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 01)。IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA,p-IKKβ、p-IκB、iNOS蛋白与NF-κB p65蛋白表达M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 05)。结论 ISO可减轻高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,可能与抑制IκB激酶(IKK)/IκB/NF-κB/iNOS通路活性有关。     

Protective effect of osteoprotegerin in vascular endothelial cells cultured with high glucose and its possible mechanism

目的 探讨护骨素对高糖诱导的血管内皮细胞保护作用及机制.方法 人脐静脉内皮细胞分别在正糖(5 mmol/L葡萄糖)、高糖(25 mmol/L葡萄糖)、高糖+护骨素(25 mmol/L葡萄糖+2 μg/ml护骨素)、高渗(5mmol/L葡萄糖+20 mmol/L甘露醇)环境下培养72小时.以流式细胞术测定各组细胞的凋亡;Western blot法分析各组细胞磷酸化核转录因子(NF-κB)抑制蛋白激酶β (p-IκKβ)、NF-κB抑制蛋白激酶β(IκKβ)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、bcl-2及bax表达水平.结果 (1)与正糖组相比,高糖组内皮细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);高糖+护骨素组细胞凋亡明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05);(2)与正糖组相比,高糖组p-IκKβ表达显著增高(P＜0.01),IκBo和bcl-2表达显著降低(P＜0.01);高糖+护骨素组p-IκKβ明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05),IκBα和Bcl-2表达水平明显高于高糖组,而又低于正糖组(P＜0.05).结论 高糖通过激活IκKβ/NF-κB信号通路引起血管内皮细胞凋亡;护骨素具有抗高糖诱导的IκKβ/NF-κB活性作用,从而降低内皮细胞凋亡,保护内皮细胞.     

葡萄糖浓度变化对乳鼠心肌细胞的影响及其机制的探讨

目的 观察不同浓度的葡萄糖培养对乳鼠心肌细胞形态及功能的影响,并初步探讨其机制.方法 建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成低糖(5.5 mmol/L)组、高糖(25.5 mmol/L)组、间歇性高糖(5.5 mmol/L和25.5 mmol/L交替培养)组以及高糖(25.5 mmol/L)+蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220(50 nmol/L)组,培养5 d后,观察心肌细胞搏动情况,测定心肌细胞直径,并应用Western blot检测心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、核因子(NF)-κB和c-fos的蛋白表达水平.结果 不同浓度葡萄糖培养的心肌细胞在搏动频率、细胞直径以及PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和c-fos的蛋白表达水平存在差异,其中高糖组心肌细胞搏动频率、细胞直径以及PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和c-fos的蛋白表达水平显著高于低糖组[高糖组比低糖组:搏动频率(64.15±1.55)次/min比(57.22±1.91)次/min,细胞直径(20.11±0.91)μm比(17.18±0.82)μm,P均＜0.01],间歇性高糖组的上述指标则显著高于高糖[间歇性高糖组比高糖组:搏动频率(66.60±2.02)次/min比(64.15±1.55)次/min,细胞直径(22.39±0.92)μm比(20.11±0.91)μm,P均＜0.01]和低糖组[间歇性高糖组比低糖组:搏动频率(66.60±2.02)次/min比(57.22±1.91)次/min,细胞直径(22.39±0.92)μm比(17.18±0.82)μm,P均＜0.01],而PKC抑制剂Ro-31-8220则能逆转高糖所诱导的上述变化[高糖+PKC抑制剂Ro-31-8220组比高糖组:搏动频率(62.17±1.58)次/min比(64.15±1.55)次/min,细胞直径(18.41±0.78)μm比(20.11±0.91)μm,P均＜0.01].结论 高糖或间歇性高糖的环境能够导致心肌细胞肥大,搏动频率增加,同时影响心肌细胞PKC-α、PKC-β2、NF-κB和c-fos的表达和活性,而PKC抑制剂Ro-31-8220能够逆转高糖所诱导的上述变化.因此高糖特别是间歇性高糖可能通过PKC/NF-κB/c-fos途径诱导了心肌细胞结构和功能的改变,导致了糖尿病心肌损害.     

高糖及核因子κB通路诱导足细胞上皮间充质转分化的研究

目的:探讨高糖对小鼠足细胞上皮间充质转分化(EMT)与迁移的影响及其分子机制。方法:以永生化小鼠足细胞株(足细胞)为研究对象,设置正常糖组(5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、核因子κB(NF-κB)特异性抑制剂小白菊内酯(PTL)+高糖组,作用时间24h。采用Transwell检测细胞迁移能力,Western Blot检测蛋白表达,q PCR检测mRNA表达情况,免疫荧光检测NF-κB入核情况。结果:与正常糖及甘露醇组比较,高糖刺激足细胞24h后细胞的迁移能力明显增强(P0.05),足细胞特征性蛋白nephrin明显下调(P0.05),纤连蛋白(FN)及mRNA表达显著增加(P0.05),而E钙黏蛋白(E-cadherin)及其mRNA表达明显下降(P0.05)。同时,与上述对照组比较,高糖明显上调p-IκBα(P0.05)下调IκBα(P0.05)促使足细胞胞质中的NF-κB入核同时上调p-p65的表达;干预细胞PTL后,足细胞的EMT和迁移得到明显抑制(P0.05),nephrin蛋白表达明显上升(P0.05)。结论:高糖通过激活NF-κB通路诱导足细胞发生EMT及迁移。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的 探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制.方法 (1)将人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(11 mmol/L、22 mmol/L、33 mmol/L、44 mmol/L葡萄糖),以上各组细胞培养48小时,采用流式细胞术及Hoechst 33258核染色观察各组细胞凋亡情况.(2)人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖)、高糖+雷帕霉素组(雷帕霉素预处理24小时后加入33 mmol/L葡萄糖),以上分组细胞均培养48小时,Western blot分析各组马铃薯球蛋白(Tuberin)、P-Tuberin、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、P-P70S6K、bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果 (1)与正常对照组早期凋亡率(2.9200 +0.0159)％相比,高糖组明显增加,且呈剂量依赖性[(4.8400 ±0.0092)％、(6.7200±0.0041)％、(8.4900 ±0.0047)％、(9.9500±0.0124)％,P均＜0.05)];高渗对照组早期凋亡率(2.9200±0.0023)％与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与正常对照组晚期凋亡率(2.3700±0.0059)％比较,高糖组晚期凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性[(3.2500±0.0280)％、(4.3600±0.0191)％、(5.9800±0.0083)％、(7.0100±0.0099)％,P均＜0.05];高渗对照组细胞凋亡率为(2.3600±0.0205)％,与正糖对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)与正常对照组比较,高糖组P-Tuberin/Tuberin(1.2774±0.0026比1.0052±0.0012)、P-P70S6K/P70S6K(1.2129 ±0.0065比0.8157 ±0.0030)、Bax/β-actin (0.7484±0.0004比0.3966 ±0.0029)表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P均＜0.05),bcl-2/β-actin表达明显降低(0.2949±0.0010比0.6398±0.0011,P＜0.05);高糖+雷帕霉素组P-P70S6K/P70S6K(0.9287±0.0019)、Bax/β-actin(0.5558±0.0052)表达水平低于高糖组(P＜0.05),bcl-2/β-actin (0.4546±0.0023)表达高于高糖组(P＜0.05).结论 高糖可能通过激活Tuberin/mTOR活性,从而降低bcl-2、增加Bax表达而导致血管内皮细胞凋亡.     

N-乙酰半胱氨酸对高糖合并缺血缺氧小胶质细胞中Toll样受体4通路的作用研究

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对高糖合并缺血缺氧小胶质细胞中Toll样受体4(TLR4)通路的作用。方法体外培养小胶质细胞,分为7组:正常组、对照组、高糖组、模型组、NAC组、NAC高糖组和NAC模型组(后3组加NAC 1mmol/L干预),分别在不同的培养液、正常培养箱或缺氧培养箱培养12h建立体外细胞模型。采用TUNEL染色观察小胶质细胞凋亡的病理变化,采用RT-PCR检测各组细胞TLR4通路中TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平。结果对照组、高糖组和模型组较正常组小胶质细胞凋亡率显著升高(0.36±0.03、0.33±0.02、0.37±0.02 vs 0.15±0.02,P0.05),NAC组、NAC高糖组和NAC模型组较对照组、高糖组和模型组小胶质细胞凋亡率显著下降(0.20±0.02 vs 0.36±0.03,0.21±0.02 vs 0.33±0.02,0.22±0.02 vs 0.37±0.02,P0.05),仅高糖组与NAC高糖组MyD88无明显差异(P0.05),NAC组、NAC高糖组和NAC模型组TLR4,MyD88,NF-κB,IL-1βmRNA表达较对照组、高糖组和模型组明显降低(P0.05)。结论NAC可以减轻高糖及缺血缺氧对小胶质细胞的损伤,其机制可能与抑制TLR4炎症相关通路有关。     

阿托伐他汀联合厄贝沙坦改善高血压患者的心血管重塑

目的:分析阿托伐他汀联合厄贝沙坦对原发性高血压(EH)患者动脉及心室重塑的改善作用。方法:选择我院的114例EH患者,依据治疗方案不同分为:厄贝沙坦组(72例,仅接受厄贝沙坦治疗);联合治疗组(42例,予以阿托伐他汀联合厄贝沙坦治疗)。治疗3月后,比较两组患者的颈动脉内膜-中膜厚度(IMT)、左室舒张末内径(LVEDd)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁舒张末期厚度(LVPWTd),室壁运动积分指数(WMSI)及血压、血脂水平的差异。结果:与厄贝沙坦组相比,联合治疗组的IMT[(0.98±0.13)mm比(0.81±0.08)mm]、LVEDd[(55.2±3.9)mm比(43.3±2.8)mm]、IVST[(14.9±2.6)mm比(11.5±1.8)mm]及WMSI[(1.67±0.22)比(1.39±0.16)]显著降低(P0.05);联合治疗组的血压[(144±12)/(94±8)mmHg比(136±16)/(86±8)mmHg]、总胆固醇[(5.87±0.96)mmol/L比(4.53±0.57)mmol/L]及低密度脂蛋白胆固醇[(3.46±0.59)mmol/L比(2.68±0.42)mmol/L]显著降低(P0.05),高密度脂蛋白胆固醇[(0.87±0.13)mmol/L比(1.36±0.24)mmol/L]显著升高(P0.05)。结论:应用阿托伐他汀联合厄贝沙坦能显著改善EH患者的血脂水平,动脉及心室重塑程度。     

原花青素对高糖环境下大鼠内皮祖细胞血管内皮生长因子受体2及其传导通路的影响

目的探讨高糖环境下原花青素(OPC)对体外培养的大鼠内皮祖细胞血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)及其下游相关通路的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离大鼠骨髓内皮祖细胞(EPC);分别检测正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)培养的EPC增殖和氧化应激产物产生情况,再通过在不同原花青素浓度下检测各时间点EPC增殖的方法,筛选出最佳原花青素浓度(30 mg/L);分别用Matrigel基质胶检测正常糖+OPC组、正常糖组、高糖+OPC组、高糖组EPC成管能力;最后在1、3、5、7天分别检测正常糖+OPC组、正常糖组、高糖+OPC组、高糖组EPC的丙二醛水平以及VEGFR-2、p-AKT、核因子κB(NF-κB)和核因子κB抑制蛋白α(IKB-α)的相对表达量。结果随时间推移,高糖组中EPC细胞凋亡和氧化应激产物均较正常糖组逐渐增多;正常糖+OPC组、正常糖组EPC成管数目无明显差异,高糖+OPC组成管数目较高糖组明显增多;在1、3、5、7天时OPC在正常糖浓度下对EPC产生的氧化应激产物及VEGFR-2、p-AKT、NF-κB和IKB-α蛋白的相对表达量没有显著影响,而在高糖环境下可以明显降低氧化应激产物的生成及上调VEGFR-2、p-AKT和NF-κB蛋白相对表达量,下调IKB-α蛋白相对表达量。结论原花青素可能通过缓解高糖环境对EPC的氧化损伤作用,上调内皮祖细胞VEGFR-2及其下游通路蛋白表达,进而促进细胞增殖。     

枸杞多糖通过核因子κB信号通路对过氧化氢诱导的神经细胞损伤保护作用的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导神经细胞PC12损伤的保护作用及分子机制。方法 PC12细胞分为正常对照组(Con)、H_2O_2诱导模型组(H_2O_2)、H_2O_2+75 mg/L LBP组(H_2O_2+LBP 75)、H_2O_2+150 mg/L LBP组(H_2O_2+LBP 150)、H_2O_2+300 mg/L LBP组(H_2O_2+LBP 300)、H_2O_2+300 mg/L LBP+丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)组(H_2O_2+LBP 300+PMA)。CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,比色法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。结果与Con组比较,H_2O_2组细胞存活率降低[(100.00±5.25)%vs(53.37±2.57)%,P0.05]、ROS水平升高[(20.05±2.14)%vs(46.24±3.27)%,P0.05],MDA水平升高[(8.17±0.41)vs(20.06±1.06)mmol/L,P0.05],SOD活性降低[(19.39±1.17)vs(8.42±0.53)U/ml,P0.05],凋亡率升高[(4.82±1.01)%vs(33.62±3.18)%,P0.05]。与H_2O_2组比较,不同浓度LBP能缓解H_2O_2诱导的氧化损伤,减少细胞凋亡,而NF-κB信号通路激活剂PMA可逆转LBP对PC12细胞损伤保护作用。结论 LBP通过抑制NF-κB信号通路活化,对H_2O_2诱导的神经细胞损伤有保护作用。     

厄贝沙坦对糖尿病鼠心肌组织葡萄糖转运蛋白4干预研究

目的探讨厄贝沙坦对糖尿病鼠心肌组织中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的作用及其意义。方法8周龄体重为250~300g雄性Wistar大鼠27只,腹腔注射STZ(50mg/kg)制成糖尿病鼠模型,饲养11周;观察A组(正常对照组)、B组(糖尿病对照组)、C组(厄贝沙坦用药组:血糖稳定1周后厄贝沙坦50mg/kg.d灌胃)造模前、造模后48小时及造模后11周心肌组织GLUT4(免疫组化法测定)及血糖变化(普通生化法测定)。结果(1)GLUT4的变化:B组术后48hGLUT4无明显改变,但术后11周时GLUT4水平明显下降[(208.89±10.96vs143.56±16.99)组化灰度值;P<0.01];C组术后48hGLUT4未见明显变化。(2)血糖的变化:A组,不同时间血糖无明显变化,B组,术后48h及术后11周,血糖升高[(16.89±2.46,18.45±2.60vs3.80±1.09)mmol/L,P均小于0.01]。C组,术后48h血糖升高,术后11周时血糖较48h有所下降但未达统计学意义[(18.32±4.06vs15.84±2.60)mmol/L,P>0.05)。结论糖尿病时心肌组织GLUT4水平下降可能参与糖尿病心肌病的形成;厄贝沙坦具有上调糖尿病心肌组织GLUT4的作用,提示ARB在糖尿病患者中早期应用还能改善病人糖的摄取、代谢。     

艾塞那肽对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨艾塞那肽对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的作用及相关机制。方法将足细胞系MPC5细胞按照不同葡萄糖培养浓度和干预因素分为以下5组:正糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖,n=3)、甘露醇高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇,n=3)、高糖组(25.0 mmol/L葡萄糖,n=3)、高糖+艾塞那肽组(25.0 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L艾塞那肽,n=3)和高糖+艾塞那肽+LY294002组(25.0 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L艾塞那肽+50μmol/L磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂LY294002,n=3)。采用原位缺口末端标记法荧光染色观察细胞凋亡,膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内裂孔膜肾病蛋白(nephrin)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)以及磷酸化Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动子(p-BAD)水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用最小显著性差异t检验。结果与正糖对照组和甘露醇高渗对照组比较,高糖组足细胞凋亡率显著增加[分别为(28.60±2.65)%、(4.50±0.75)%和(4.55±0.65)%,t=-19.19、-19.15,均P<0.01],细胞内nephrin蛋白表达降低(分别为0.22±0.03、0.72±0.06和0.73±0.08,t=11.43、11.52,均P<0.01),p-AKT和p-BAD蛋白表达下调(分别为0.14±0.03、0.83±0.06和0.86±0.04,0.16±0.03、0.66±0.06和0.68±0.04,均P<0.01)。与高糖组比较,高糖+艾塞那肽组足细胞凋亡率显著下降,细胞内nephrin表达升高,p-AKT和p-BAD蛋白表达上调(均P<0.01)。而高糖+艾塞那肽+LY294002组较高糖+艾塞那肽组足细胞凋亡率增加,细胞内nephrin蛋白表达降低,p-AKT和p-BAD蛋白表达下调(均P<0.05)。结论艾塞那肽通过上调足细胞中nephrin蛋白表达和减少足细胞凋亡从而保护高糖诱导的足细胞,其机制可能与激活AKT/BAD信号途径有关。     

运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠Toll样受体促炎通路的影响

目的研究不同运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR2)、TLR4及白细胞介素6(IL-6)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为对照组(n=20)和糖尿病动脉粥样硬化组(n=80)。对照组予普通饲料喂养,糖尿病动脉粥样硬化组予高糖高脂喂养后腹腔注射STZ(30mg/kg)建立糖尿病动脉粥样硬化模型,后再随机分为模型亚组及小、中、大运动量亚组,对后3亚组进行游泳运动干预。干预后采用ELISA测定各组血浆IL-6、NF-κB的浓度及采用Western blott测定主动脉组织中TLR2、TLR4的表达。结果运动前,模型亚组血浆IL-6[(58.06±5.38)vs(14.21±4.04)ng/ml]、NF-κB[(154.24±9.24)vs(65.99±8.63)ng/ml]较对照组升高(P0.01);各运动亚组运动干预后血浆IL-6、NF-κB较运动前下降(P0.01)。模型亚组主动脉组织中TLR2[(1.19±0.04)vs(0.57±0.04)]、TLR4蛋白表达[(1.25±0.05)vs(0.68±0.06)]较对照组升高(P0.01);运动干预的各亚组运动后主动脉组织中TLR2、TLR4较模型亚组降低,以中、大运动量亚组下降明显(P0.01或P0.05)。结论糖尿病动脉粥样硬化大鼠动脉组织TLR2、TLR4蛋白表达及血浆IL-6、NF-κB增高,运动可以改善上述与促炎通路有关的因素。     

罗格列酮对高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞炎症和增殖的影响

目的 探讨罗格列酮(RSG)对高浓度葡萄糖孵育下的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 以不同浓度的葡萄糖和罗格列酮单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,ELISA方法检测培养基中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平;采用流式细胞术检测VSMCs细胞凋亡率及Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达;Western印迹检测胞浆中VSMCs Bcl-xl蛋白表达及NF-κBp65和IκBα的表达.结果 高葡萄糖浓度(11.2、22.5 mmol/L)培养可明显增加上清中MCP-1的浓度,促进VSMCs增殖,抑制其凋亡,上调Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,同时使NF-κB p65表达增加,IκBα表达下降;30及100 μmol/L RSG以浓度依赖形式减少VSMCs对MCP-1的分泌,抑制高葡萄糖培养下(11.2、22.5 mmol/L)VSMCs Bcl-xl、Bcl-2表达,促进其凋亡;下调NF-κBp65表达,促进IκBα表达.RSG拮抗剂GW9662(10 μmol/L)预处理可部分拮抗RSG的作用.结论 RSG可能通过对NF-κB通路的调控,减少炎症因子MCP-1分泌,下调Bcl-xl、Bcl-2表达,从而抑制高糖葡萄糖培养下的VSMCs炎症反应并促进其凋亡,从而在2型糖尿病大血管病变的防治中发挥重要作用.     

葡萄糖和厄贝沙坦对单核巨噬细胞系凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和厄贝沙坦对人单核巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmol/L佛波酯诱导分化72 h后,将细胞分为对照组、不同浓度葡萄糖组(5、8、12和15 mmol/L)和厄贝沙坦干预组,葡萄糖组将不同浓度葡萄糖与诱导分化的巨噬细胞孵育24 h,厄贝沙坦干预组用厄贝沙坦预先孵育2 h后,再加入15 mmol/L葡萄糖共同孵育24 h。用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,5 mmol/L葡萄糖组凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达差异无显著性(P>0.05),其余高糖组该受体mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),并且其表达呈浓度依赖性;厄贝沙坦可显著抑制此作用,使该受体表达明显降低。结论高糖以浓度依赖方式上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,这可能是导致动脉粥样硬化发生的机制之一;厄贝沙坦可显著抑制这一作用,可能在抗动脉粥样硬化中起作用。     

不同糖化血红蛋白水平的新诊断2型糖尿病患者胰岛功能的临床观察

目的比较不同HbA1c水平的新诊断T2DM患者胰岛功能的变化。方法将165例新诊断T2DM患者根据HbA1c水平分为A、B、C组,A组54例,6.0%≤HbA1c7.0%;B组53例,7.0%≤HbA1c9.0%;C组58例,HbA1c≥9.0%。采用标准餐试验联合胰岛素释放试验检测0、30、60、120min血糖和胰岛素,胰岛β细胞分泌指数(HOMA-β)、ΔI30/ΔG30、AUCI60~120/G60~120评估胰岛功能,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评估IR,Matsuda指数(ISIM)评估IS,处置指数(DI30、DI60~120)评价校正IS后的胰岛功能。结果随HbA1c升高,A、B、C组FPG[(7.7±0.8)vs(9.0±1.9)vs(13.4±3.2)mmol/L]、2hPG[(12.03±1.23)vs(16.08±2.67)vs(23.58±3.99)mmol/L]、G0[(7.10±0.86)vs(8.93±1.59)vs(13.80±3.35)mmol/L]、G30[(10.16±1.86)vs(12.19±2.50)vs(16.98±3.78)mmol/L]、G60[(12.57±1.81)vs(15.03±2.72)vs(20.11±4.08)mmol/L]和G120[(11.49±2.48)vs(14.78±3.53)vs(21.05±4.43)mmol/L]逐渐升高;I0[(20.09±12.76)vs(18.74±7.88)vs(15.30±11.71)mIU/L]、I30[(38.92±12.59)vs(34.27±20.56)vs(23.95±16.55)mIU/L]、I60[(72.80±39.38)vs(52.96±32.48)vs(36.16±27.22)mIU/L]、I120[(106.62±61.09)vs(64.57±40.75)vs(43.09±23.08)mIU/L]、HOMA-β[(130.58±107.33)vs(74.68±38.34)vs(42.66±35.70)]、AUCI60~120/G60~120[(58.06±33.85)vs(28.90±18.90)vs(14.31±9.78)]和DI60~120[(458.22±174.30)vs(239.27±113.05)vs(89.91±49.93)]逐渐降低(P0.05)。C组TG[(3.40±1.44)vs(1.89±0.88),(2.29±1.23)mmol/L]、HOMA-IR[(11.66±7.13)vs(6.30±3.66),(7.47±3.58)]较A、B组高,年龄[(45.10±9.30)vs(51.40±7.80),(49.70±8.80)岁]、ΔI30/ΔG30[(2.44±1.50)vs(8.27±6.33),(6.77±5.16)]和DI30[(13.86±7.23)vs(58.21±18.14),(45.31±17.99)]较A、B组低(P0.05)。Spearman相关性分析结果显示,HbA1c与HOMA-IR呈正相关,与HOMA-β、ΔI30/ΔG30、AUCI60~120/G60~120、DI30和DI60~120呈负相关。多元线性回归分析结果显示,DI60~120、HOMA-IR、HOMA-β为HbA1c的影响因素。结论随HbA1c水平升高,新诊断T2DM患者糖代谢紊乱加重,胰岛素分泌功能逐步减退,在HbA1c≥9.0%患者中尤为明显。     

CUE结构域蛋白2对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响研究

目的探讨CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法肾小管上皮细胞HK-2分为高糖处理组(HG)、转染对照载体后给予高糖处理组(NC+HG)、转染过表达CUEDC2载体后给予高糖处理组(CUEDC2+HG)及对照组(Con)。流式细胞仪测定细胞凋亡;试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平和培养液中TNF-α、IL-8水平。结果与Con组比较,HG组细胞凋亡率、MDA、TNF-α及IL-8升高[(6.23±0.65)%vs(18.56±3.14)%,(0.06±0.01)vs(0.15±0.02)nmol/mg,(29.54±3.56)vs(56.10±6.30)mg/L,(10.42±1.23)vs(19.59±1.68)mg/L;P0.05],SOD活性降低[(36.20±2.78)vs(20.17±1.45)U/mg,P0.05];与NC+HG、HG组比较,CUEDC2+HG组细胞凋亡率、MDA、TNF-α及IL-8降低[(17.14±2.98)%vs(18.56±3.14)%vs(11.47±1.20)%,(0.14±0.01)vs(0.15±0.02)vs(0.10±0.02)nmol/mg,(55.49±5.97)vs(56.10±6.30)vs(41.20±3.75)mg/L,(19.59±1.68)vs(20.12±2.35)vs(14.65±1.42)mg/L,P0.05],SOD活性升高[(20.17±1.45)vs(19.64±1.37)vs(25.96±3.26)U/mg,P0.05]。结论过表达CUEDC2可减少高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症因子释放,降低细胞氧化应激,减少细胞凋亡,保护高糖诱导损伤的肾小管上皮细胞。     

醌型二氢生物喋呤还原酶基因表达变化对高糖环境下NRK-52E细胞葡萄糖调节蛋白75表达的影响

目的探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(QDPR)基因对高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52E葡萄糖调节蛋白75(GRP75)的影响及其在DN中的可能作用机制。方法构建过表达及敲低QDPR基因的NRK-52E模型,分别予5.4 mmol/L和30 mmol/L葡萄糖培养基培养,Western blot检测GRP75在OLETF大鼠肾皮质及细胞模型各组的表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果与LETO鼠比较,OLETF大鼠肾皮质GRP75含量降低[(1.53±0.27)vs(0.79±0.26),P0.01];与NRK-52E组比较,NRK-52E高糖组的GRP75含量降低[(0.62±0.03)vs(0.46±0.06)]、G0/G1期细胞增多[(39.80±1.31)%vs(50.35±0.33)%]、S期细胞减少[(48.55±1.85)%vs(37.17±0.10)%](P0.05);过表达QDPR使高糖环境下GRP75含量降低[(0.85±0.10)vs(0.45±0.16),P0.05]、G0/G1期细胞增多[(43.73±0.48)%vs(61.87±0.17)%,P0.01],S期细胞减少[(42.42±0.66)%vs(25.29±0.12)%,P0.01];敲低QDPR不影响GRP75表达量与细胞周期。结论 GRP75在DN模型中含量减少,QDPR基因可能通过GRP75及细胞周期影响DN发生发展。     

甘精胰岛素联合格列美脲及阿卡波糖治疗磺脲类治疗失效的2型糖尿病患者血糖控制效果的观察

目的研究甘精胰岛素联合格列美脲及阿卡波糖治疗发生磺脲类治疗失效(SFS)的T2DM患者的临床效果。方法选取SFS的T2DM患者48例,采用甘精胰岛素联合格列美脲及阿卡波糖治疗方案,持续3个月,对比治疗前后的血糖及相关指标变化情况。结果经3个月治疗后,TG、TC、LDL-C较治疗前降低,HDL-C较治疗前提高,但比较差异无统计学意义(P0.05);FPG[(11.2±1.8)vs(5.4±1.2)mmol/L]、2 hPG[(16.7±5.5)vs(8.7±3.6)mmol/L]、24 h最高血糖值[(20.1±3.5)vs(10.2土2.4)mmol/L]、平均血糖值[(15.6±3.3)vs(6.5±1.3)mmol/L]、HbA_1 c[(10.9±1.3)%vs(7.6±0.8)%]、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)[(13.06±6.35)vs(9.02±3.16)]均较治疗前降低(P0.05),FC-P[(2.04±0.16)vs(2.29±0.20)ng/ml]、2 hC-P[(3.59±0.61)vs(4.13±0.72)ng/ml]、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)[(142.64±26.95)vs(178.86±33.92)]均较治疗前提高(P0.05);24 h血糖达标维持时间长于治疗前[(19.2±-3.7)vs(2.5±1.6)h](P0.05)。结论甘精胰岛素联合格列美脲及阿卡波糖治疗SFS的T2DM患者能有效控制血糖,患者24 h血糖控制效果更佳。     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉核因子-κB/单核细胞趋化因子1表达的影响

目的观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉核因子-κB/单核细胞趋化因子1(NF-κB/MCP-1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法将26只雄性SD大鼠按照随机数字表法分成普通饲料对照组(n=9)和高脂饲料组(n=17),高脂饲料组喂养12周后再按照随机数字表法分成模型组(n=8)和吡格列酮组(n=9)。分组干预4周后,平行检测各组血脂、血糖水平,HE染色观察主动脉组织形态学改变,免疫组化法检测主动脉NF-κB/MCP-1的表达。结果高脂饲料组大鼠喂养12周后,与对照组比较,三酰甘油、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平明显升高[(1.729±0.472)mmol/L比(0.929±0.150)mmol/L,(2.981±0.318)mmol/L比(1.831±0.226)mmol/L,(0.499±0.337)mmol/L比(0.195±0.051)mmol/L,均为P<0.05];给药4周后,与模型组相比,吡格列酮组血清三酰甘油、总胆固醇水平明显降低[(0.731±0.319)mmol/L比(1.534±0.172)mmol/L,(1.720±0.249)mmol/L比(3.084±0.984)mmol/L,均为P<0.05],且主动脉内皮组织基本完好,偶有脱落,平滑肌增生不明显。与对照组相比,模型组NF-κB、MCP-1表达水平也明显升高(0.506±0.083比0.215±0.021,0.378±0.100比0.167±0.012,均为P<0.01);与模型组相比,吡格列酮组NF-κB、MCP-1表达水平明显下降(0.250±0.033比0.506±0.083,0.171±0.012比0.378±0.100,均为P<0.01)。结论吡格列酮能够减轻高脂血症对动脉内膜的损伤。