利拉鲁肽对胰岛素抵抗大鼠肝脏GRP78-JNK-GLUT2通路的影响

目的观察利拉鲁肽养胰岛素抵抗(IR)对高脂喂养大鼠肝脏内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白(GRP)78,cjun氨基末端激酶(JNK)及胰岛素信号通路相关分子蛋白激酶B(AKT)、葡萄糖转运子(GLUT)2表达的影响,探讨利拉鲁肽改善肝脏IR的可能机制。方法雄性Wistar大鼠54只,随机分为正常对照组(NC)16只和高脂组(HFD)38只,喂养8 w后每组取5只评估IR大鼠模型,再将高脂饮食大鼠分为HFD组、利拉鲁肽低剂量组(LL组)、利拉鲁肽高剂量组(HL组)。药物干预2 w测生化指标,苏木素-伊红(HE)染色观察肝细胞变化情况,Western印迹检测各组大鼠肝脏GRP78,GLUT2蛋白表达情况,磷酸化JNK和磷酸化AKT蛋白表达情况。Real-Time PCR测定GRP78、GLUT2 mRNA表达水平。结果 HE染色结果:在NC组中,肝细胞正常,HFD组肝细胞体积显著扩大,胞内存在大小不等的脂滴,细胞核移向周边,LL组肝细胞体积有所减小,胞内脂滴数目减少,体积缩小,HL组大鼠的肝细胞排列规整,胞内可见少量脂滴,其肝小叶及肝索结构完整。Western印迹结果:与NC组相比,HFD组GRP78、JNK磷酸化(P-JNK)蛋白表达水平增加,GLUT2、AKT磷酸化(P-AKT)蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义(P0. 05)。与HFD组相比,LL组与HL组GRP78、P-JNK蛋白表达水平减少,GLUT2、P-AKT蛋白表达水平增加,差异具有统计学意义(P0. 05)。与LL组相比,HL组GRP78、P-JNK蛋白表达水平减少,GLUT2、P-AKT蛋白表达水平增加,差异具有统计学意义(P0. 05)。PCR结果:与HFD组相比,LL组和HL组GRP78 mRNA降低(P0. 05);GLUT2 mRNA升高(P0. 05)。结论利拉鲁肽可能通过调节GRP78-JNK-GLUT2通路改善高脂喂养大鼠肝脏IR。     

IKKε在糖尿病大鼠肝脏的表达及利拉鲁肽对其干预作用的研究

目的观察糖尿病大鼠肝脏组织IKKε、核因子κB(NF-κB)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达及利拉鲁肽对其干预的作用。方法采用高脂饮食联合STZ诱导建立T2DM大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病组(T2DM)、低剂量利拉鲁肽组(LL)、高剂量利拉鲁肽组(HL),另设正常对照组(NC),每组各10只。Western blot检测肝脏组织IKKε、NF-κB、p-Akt的蛋白表达,RT-PCR检测IKKε、NF-κB的mRNA表达。结果 T2DM组FPG、FIns、HOMA-IR、TG、白介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)较NC组、LL组、HL组高(P0.05或P0.01),HL组FPG、FIns、IL-6、MDA、HOMA-IR较LL组低(P0.05)。与NC组比较,HL组、LL组、T2DM组IKKε、NF-κB的蛋白表达依次升高(P0.05或P0.01),p-Akt的蛋白表达依次降低[(0.762±0.112)vs(0.598±0.085)vs(0.476±0.112)vs(0.342±0.097),P0.05或P0.01]。结论肝脏组织IKKε表达升高可能参与了糖尿病的发生,利拉鲁肽呈浓度依赖下调肝脏组织IKKε的表达,可能是其改善IR、糖代谢的部分机制。     

利拉鲁肽对高脂饲养大鼠骨骼肌脂质沉积及骨骼肌超微结构的影响

目的研究胰高血糖素样肽1类似物利拉鲁肽对高脂喂养胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌脂质沉积及骨骼肌细胞超微结构的影响。方法雄性Wistar大鼠54只,随机普通饲养16只、高脂饲养38只,饲养8周后,各取5只大鼠判定大鼠IR状态,造模成功后,将高脂饲养大鼠分为高脂组、干预组1[利拉鲁肽100μg/(kg·d)]、干预组2[利拉鲁肽200μg/(kg·d)],每组11只,另11只普通饲养为对照组。药物干预2周后,检测骨骼肌内甘油三酯(mTG)、长链脂肪酰辅酶A(LCACoA),透射电镜观察大鼠骨骼肌细胞超微结构改变。结果与对照组比较,高脂组mTG、LCACoA含量升高[(19.58±1.63)μmol/g vs(9.99±0.90)μmol/g;(6.70±0.18)nmol/g vs(2.51±0.18)nmol/g,P0.01];与高脂组比较,干预组1LCACoA含量下降[(6.10±0.37)nmol/g vs(6.70±0.18)nmol/g,P0.05],干预组2mTG、LCACoA含量明显下降[(13.57±0.66)nmol/g vs(19.58±1.63)nmol/g,(4.73±0.31)nmol/g vs(6.70±0.18)nmol/g,P0.01]。干预组1和干预组2较高脂组和对照组脂滴减少、线粒体肿胀减轻。结论利拉鲁肽可呈浓度依赖性减少高脂喂养大鼠mTG和LCACoA含量,可能是减轻IR的原因之一。     

利拉鲁肽对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织中胰岛素JNK1信号通路的影响

目的探究利拉鲁肽对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏组织中胰岛素JNK1信号通路的影响。方法选取40只6周龄SPF级大鼠,采用高脂饮食喂养12周建立NAFLD大鼠模型。将NAFLD大鼠随机分为空白对照组(control)、模型组(model)、低剂量利拉鲁肽组(low lira)和高剂量利拉鲁肽组(high lira)。利拉鲁肽干预18 d后,测量大鼠体质量及肝指数变化;全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和血清胰岛素(FINS)变化;酶联免疫吸附法测定大鼠肝组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)及游离脂肪酸(FFAs)含量; Western blot检测大鼠肝脏组织中胰岛素受体(IR)、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、C-Jun氨基端激酶1(JNK1)及磷酸化C-Jun氨基端激酶1(p-JNK1)表达情况; HE染色观察大鼠肝脏组织病理学变化。结果与对照组相比,模型组大鼠体质量,肝指数,血清ALT、TG、TC、FINS、TNF-α、MAD、FFAs含量,p-IRS1、JNK1、p-JNK1蛋白表达量显著升高,SOD含量显著降低,差异有统计学意义(P 0. 01);血清FBG含量和IR蛋白表达量无显著变化(P 0. 05);相比模型组,利拉鲁肽组大鼠体质量,肝指数,血清ALT、TG、TC、FINS、TNF-α、MAD、FFAs含量,p-IRS1、JNK1、p-JNK1蛋白表达量显著降低,且高剂量组显著低于低剂量组(P 0. 01); SOD含量显著升高,且高剂量组显著高于低剂量组(P 0. 01);血清FBG含量和IR蛋白表达量无显著变化(P 0. 05)。结论利拉鲁肽可以缓解大鼠脂肪肝的发展,其作用机制可能与抑制JNK1信号通路及JNK1磷酸化相关,且在一定范围内呈浓度依赖性。     

二甲双胍对高脂喂养诱导小鼠脂肪肝和肝脏内质网应激的干预作用

目的 观察高脂饮食诱导小鼠肝脏脂质沉积及对肝脏内质网应激的影响,探讨二甲双胍对其的干预作用.方法 雄性C57BL/J6小鼠分为健康对照组、高脂组和二甲双胍组,每组14～15只.健康对照组小鼠常规喂养.高脂组及二甲双胍组均给予高脂饮食喂养,二甲双胍组于高脂喂养4周后给予二甲双胍干预,喂养8周后对小鼠行葡萄糖耐量实验,处死小鼠后测定各组肝脏TG含量,并测定内质网应激相关因子的基因和蛋白表达水平.组间数据进行单因素方差分析.结果 与健康对照组相比,高脂组的葡萄糖耐量曲线下面积(AUC)、肝组织TG均显著增加[998±87比1409±106,(10.05±0.29) umol/g比(27.11±4.76) μmol/g],而二甲双胍组的葡萄糖耐量和肝脏脂质沉积均显著改善,AUC和TG均显著低于高脂组[1178±90和(15.12±2.11) μmol/g],三组间比较差异均有统计学意义(F=55.328和89.212,P均＜0.01).与健康对照组相比,高脂组的肝脏内质网伴侣分子葡萄糖调节蛋白94(GRP94)的mRNA表达水平显著增加,反映内质网应激的磷酸化真核翻译起始因子2α(eIF2α)的蛋白表达水平(磷酸化eIF2α/总eIF2α)亦显著增加,而二甲双胍组GRP94 mRNA和eIF2α蛋白表达水平均显著低于高脂组,三组间比较差异均有统计学意义(F=84.002和137.321,P均＜0.05).结论 高脂饮食可引起小鼠肝脏脂质沉积,并伴肝细胞内质网应激;二甲双胍治疗可显著改善高脂饮食喂养小鼠的脂肪肝,其机制可能与二甲双胍改善肝脏内质网应激有关.     

高果糖、高脂饲料喂养小鼠肝脏脂质合成酶类与内质网应激相关因子蛋白表达变化

目的 探讨和比较高果糖、高脂饮食诱导的小鼠肝脏三酰甘油(TG)的发生机制及其与内质网应激的关系.方法 成年雄性C57BL/J6小鼠45只,质量25～30 g,按随机数字表随机均分为对照组、高脂组及高果糖组,每组15只.对照组予以普通饲料,高果糖组予以高糖饮食,高脂组予以高脂饮食,3组每日进食热量基本相等,经喂养8周后对小鼠行葡萄糖耐量(ipGTT)实验,处死小鼠后测定各组肝脏三酰甘油含量,并测定肝脏脂质合成酶类和内质网应激相关因子的蛋白表达.结果 不同饲料喂养8周后,高果糖组和高脂组的附睾脂肪含量均为(2.0±0.1)g/100 g(质量),明显高于对照组[(1.2±0.1)g/100 g(质量)P＜0.01].高果糖组和高脂组ipGTT实验后的血糖曲线下面积明显高于对照组(P＜0.01).与对照组相比,高果糖组和高脂组的肝脏TG水平显著增高(P＜0.01),其中高果糖组肝脏TG升高更明显,高果糖组肝脏TG水平显著高于高脂组(P＜0.01).与对照组相比,高果糖组的乙酰辅酶A羧化酶( ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD-1)表达增加(P＜0.01),而高脂组的FAS、ACC、SCD-1的表达减少(P＜0.05);反应内质网应激的磷酸化胰腺内质网激酶(p-PERK)、山梨醇要求激酶-1(p-IRE-1/t-IRE-1)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白表达在高果糖组和高脂组均增加(P值均＜0.01).结论 高果糖饮食和高脂饮食均可引起脂肪肝,二者通过不同机制引起脂肪肝,高果糖饮食促进内源性脂质生成,高脂喂养抑制肝内源性脂质生成,两种饮食均可诱发内质网应激,提示内质网应激与饮食因子诱导的脂肪肝的发生发展有关.     

白细胞介素-22对高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激的影响

目的观察IL-22对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠主动脉内质网应激的影响。方法 24只健康雄性ApoE~(-/-)小鼠(8周龄)被随机分为对照(Control)组、高脂(HF)组、HF+IL-22组,每组8只。Control组给予普通饲料,另外2组给予高脂饲料喂养12周。HF+IL-22组同时腹腔注射用PBS(含5%海藻糖)稀释的重组小鼠白细胞介素(rmIL-22)溶液0.1 mL/d,浓度200 ng/mL,其余小鼠腹腔注射等量的PBS溶液(含5%海藻糖)。实验12周后,检测各组小鼠血脂水平、主动脉内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白(GRP) 78、GRP94、C/EBP同源蛋白(CHOP)]mRNA及GRP78蛋白的表达水平。结果与Control组相比,HF组TC、HDL-C、TG和LDL-C水平显著升高(P0.05),GRP78、GRP94和CHOP的mRNA表达量亦显著升高(P0.05),GRP78蛋白表达量也显著升高(P0.01); HF+IL-22组较HF组TC和LDL-C水平显著降低(P0.05),GRP78、GRP94的mRNA表达量显著降低(P0.001),GRP78蛋白表达量也显著降低(P0.05),且HF+IL-22组较Control组LDL-C、TC、TG、HDL-C水平增高,GPP78、CHOP mRNA、GRP78蛋白表达增高,GRP94 mRNA水平降低(P0.05)。结论 IL-22能够改善高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激。     

利拉鲁肽改善糖尿病心肌病大鼠心脏脂质异位沉积的效果和机制研究

目的:观察利拉鲁肽对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心脏脂质异位沉积的改善效果,并探讨相关作用机制。方法:8周龄雄性Wistar大鼠60只,随机抽取8只作为对照组,其余DCM造模。DCM造模成功大鼠24只,随机分为DCM组、低剂量利拉鲁肽治疗组(LL组)及高剂量利拉鲁肽治疗组(HL组),每组各8只。LL组[0.2 mg/(kg·d)]和HL组[0.4 mg/(kg·d)]给予利拉鲁肽皮下注射,每日1次,干预8周后,行超声心动图检测心功能后麻醉处死大鼠。心脏采血检测大鼠血糖、血脂、胰岛素水平。采用苏木素伊红染色和透射电镜观察心脏形态学变化和超微结构改变;比色法测定心肌游离脂肪酸(FFA)和二酰甘油(DAG)含量;实时PCR检测腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、叉头框转录因子1(FOXO1)、白细胞分化抗原36(CD36)、过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)和B型利钠肽(BNP)基因表达情况;蛋白免疫印迹法检测AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、FOXO1和CD36蛋白表达情况。结果:与对照组相比,DCM组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平显著升高,胰岛β细胞功能指数显著降低;左心室射血分数、左心室短轴缩短分数和每搏输出量均显著降低,左心室舒张早期最大血流/二尖瓣心房收缩期最大血流比值(E/A)明显升高,等容舒张时间显著延长且心脏重量指数增加;心肌细胞线粒体旁和肌丝间存在大量脂滴,心肌组织中FFA和DAG水平显著升高(P均0.05)。与DCM组相比,LL组和HL组大鼠脂质异位沉积减少,心肌中AMPK mRNA和p-AMPK/AMPK蛋白表达均增加,FOXO1、CD36的mRNA和蛋白表达水平均降低,PPARα和BNP的mRNA表达水平也降低(P均0.05)。结论:利拉鲁肽通过激活AMPK-FOXO1-CD36信号通路,改善糖尿病心肌病大鼠心肌脂质异位沉积,从而改善左心室收缩和舒张功能,发挥心脏保护作用。     

胃旁路手术对高脂饮食诱导肥胖大鼠血浆ghrelin、GLP-1、PYY的影响

目的探讨胃旁路手术对高脂饮食诱导的肥胖大鼠血浆生长激素释放肽(ghrelin)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胃肠激素肽(PYY)的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组(ND组)10只、高脂饮食组20只,分别给予正常饮食及高脂饮食喂养,喂养12周后,高脂饮食组成功建模肥胖大鼠16只,随机分为高脂饮食假手术组(HFD组)8只,高脂饮食+Roux-en-Y胃旁路手术(RYGB)组(HFD+RYGB组)8只,HFD+RYGB组大鼠行RYGB,ND组及HFD组行假手术。4周后处死全部大鼠,收集血样采用ELISA法测定血浆生长激素释放肽、胰高血糖素样肽-1、胃肠激素肽浓度。结果与ND组比较,HFD组大鼠体重增加,HFD+RYGB组大鼠体重低于HFD组,3组大鼠的摄食量比较差异无统计学意义;与ND组比较,HFD组大鼠空腹血糖与胰岛素水平升高,HFD+RYGB组大鼠空腹血糖与胰岛素水平较HFD组下降,但差异无统计学意义;HFD组大鼠血浆ghrelin、PYY浓度高于ND组,HFD+RYGB组大鼠血浆ghrelin、GLP-1浓度高于HFD组,PYY浓度低于HFD组,差异有统计学意义(P0.05)。结论肥胖大鼠RYGB术后体重减轻,血浆GLP-1、PYY、ghrelin循环水平改变。     

高果糖、高脂喂养致小鼠肝脏内质网应激的时程变化

目的探讨高果糖与高脂饮食对比诱导的小鼠肝脏内质网应激(ERS)的发生时程变化。方法雄性C57BL/J6小鼠分为对照组、高果糖组及高脂组,分别在喂养3 d、8 w后测定各组小鼠空腹血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS)、肝脏甘油三酯(TG)含量,并测定各组小鼠肝脏ERS标志物——磷酸化胰腺内质网激酶(p-PERK)及磷酸化山梨醇要求激酶-1(p-IRE1/t-IRE1)的蛋白表达。结果喂养3 d后,与对照组相比,两组FPG、FINS无明显变化,而肝TG水平均显著增加;喂养8 w后,与对照组相比,两组FPG、FINS、肝TG水平均显著增加;喂养3 d后,与对照组相比,高果糖组的肝内p-PERK、p-IRE1蛋白表达显著增加,提示出现ERS,而高脂组GRP78、p-PERK的蛋白表达与对照组无显著区别;喂养8 w后,高果糖、高脂组的肝内p-PERK、p-IRE1蛋白表达均显著增加。结论短期和长期高果糖和高脂喂养均可引起肝内脂质沉积,但高果糖喂养小鼠在脂肪肝发生早期即可出现肝ERS,而高脂喂养小鼠则在长期喂养后方出现肝ERS,提示ERS与高果糖、高脂饮食诱导的脂肪肝发生发展均有关,但介导机制不同。     

内质网应激抑制剂4-苯基丁酸对高果糖喂养诱导小鼠脂肪肝的干预作用及机制

目的探讨内质网应激(ERS)抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)对高果糖饮食诱导小鼠肝脏脂质沉积及脂质从头合成通路的影响。方法雄性Wistar小鼠分为对照组、高果糖组和4-PBA组(自高果糖喂养第4周后给予4-PBA 1 g·kg-1·d-1),8 w后处死小鼠并测定各组小鼠空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS),测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量及肝脏甘油三酯(TG)含量;测定ERS标志物葡萄糖调节蛋白(GRP)78、GRP94的基因表达;并测定脂质合成标志物固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的基因表达。结果与对照组相比,高果糖组的FBG、FINS、肝TG均显著增加(均P0.01);与高果糖组比较,4-PBA组的上述指标均显著降低(均P0.01)。与对照组相比,高果糖组小鼠的肝内GRP78、GRP94基因表达显著增加(均P0.01),而4-PBA组上述基因表达均低于高果糖组(均P0.01)。高果糖组小鼠的肝内SREBP-1c和ACC基因表达显著增加(均P0.01),而4-PBA组上述因子基因表达均显著低于高果糖组(P均0.01)。结论长期高果糖喂养引起小鼠肝脏脂质沉积、ERS和脂质从头合成增加,ERS抑制剂4-PBA可改善高果糖饮食诱导的脂肪肝,其机制可能与ERS调控脂质从头合成有关。     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激通路相关分子葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 探讨AT1受体自身抗体(AT1-AA)对DN大鼠肾脏内质网应激(ERS)通路相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响. 方法 制备DN大鼠模型,ELISA检测血清AT1-AA,根据ELISA结果随机选择AT1-AA阳性和阴性DN大鼠纳入DN组(n=12),同时设立正常对照组(NC,n=6).电镜观察肾脏超微结构变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;RT-PCR测定大鼠肾组织GRP78和CHOP mRNA水平;Western blot分析肾组织中GRP78和CHOP蛋白的表达量. 结果 DN组肾脏细胞凋亡率较NC组升高,其中,AT1-AA阳性大鼠凋亡率高于AT1-AA阴性大鼠[(20.05±1.71)％vs(13.24±4.93)％](P＜0.01).与NC组相比,DN组肾组织GRP78、CHOP蛋白和mRNA水平均上调;进一步比较发现,AT1-AA阳性DN大鼠GRP78,CHOP蛋白及mRNA水平升高较AT1-AA阴性DN大鼠更明显. 结论 AT1-AA可能通过诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并经ERS相关的CHOP凋亡信号通路而促进肾脏细胞凋亡,加重肾脏损害.     

GLP-1对非酒精性脂肪肝大鼠TNF-α、TGF-β1及氧化应激的影响

目的探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对非酒精性脂肪肝(non-alconolic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转换生长因子-β1(TGF-β1)及氧化应激的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分为普通喂养组(ND组)、高脂饮食组(HFD组)、高脂饮食长效人胰升糖素样肽(GLP-1)干预组(GLP-1组),喂养至16周末时处死全部大鼠,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、TGF-β1、TNF-α、血清及肝组织匀浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)。结果体质量、肝指数及血清ALT、TG、TC、TGF-β1,HFD组明显高于ND组和GLP-1组(P0.05),ND组与GLP-1组比较,差异无统计学意义(P0.05);血清及肝组织匀浆中TG、TC、SOD、MDA、TNF-αHFD组均高于ND组和GLP-1组(P0.05),GLP-1组与ND组比较均稍有升高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 GLP-1能减轻NAFLD的脂肪变性,降低TNF-α及TGF-β1含量,改善氧化应激及脂质过氧化,提示使用GLP-1类似物利拉鲁肽等药物可作为治疗NAFLD的有效药物。     

利拉鲁肽改善非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脂肪沉积的机制探讨

目的 探讨利拉鲁肽改善肝脏脂肪沉积的潜在分子机制.方法 8周龄雄性C57BL/6J小鼠标准饲料喂养作为野生对照组(WT组,n=10);ApoE KO小鼠56只,随机分为标准饲料喂养组(ApoE KO组,n=10)、高脂喂养组(HF组,n=10)、高脂喂养+空载腺病毒组(Ad-shGFP组,n=6)、高脂喂养+脂联素RNM腺病毒组(Ad-shAcrp30组,n=10)、高脂喂养+脂联素RNAi腺病毒+利拉鲁肽组(Liraglutide组,n=10)、高脂喂养+脂联素RNAi腺病毒+等渗盐水组(Saline组,n=10).共喂养16周,于14和15周末给予Ad-hGFP组和Ad-hAcrp30组尾静脉分别注射Ad-shGFP和Ad-shAcrp30重组腺病毒(1×1010/ml).Liraglutide组第9周开始腹腔注射利拉鲁肽(1mg/kg,2次/d).16周末测血浆葡萄糖、血脂、脂联素及胰岛素等.取肝脏组织做HE染色及油红O染色.荧光实时定量PCR检测基因mRNA表达、蛋白免疫印迹Western blot检测相关蛋白表达.非正态分布数据采取自然对数转换.组间比较采用方差分析,组内比较采用SNK法.结果 与Ad-shGFP组相比,Ad-shAcrp30组脂肪组织脂联素mRNA、蛋白表达及血浆脂联素水平均降低(均P＜0.01);HF组的空腹血糖(FBG)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)较WT组及ApoE KO组均显著升高(均P＜0.01),给予Ad-shAcrp30后,FBG、TC、TG、FFA进一步升高.Ad-hAcrp30组肝脏TC及TG含量较HF组升高(P值均＜0.05).油红O染色见Ad-shAcrp30组肝内大量脂滴沉积,HE染色示Ad-shAcrp30组肝小叶结构紊乱.与Saline组相比,Liraglutide组体质量、血糖、血脂及ALT均显著降低(均P＜ 0.01);脂肪组织脂联素蛋白表达及血浆脂联素水平均显著升高(均P＜ 0.01);肝脏TG、TC均减少(P值均＜0.05);油红O染色提示肝脏脂滴明显变小,且数量减少;肝脏ACC、FAS表达下调,而磷酸化AMPK蛋白表达增加(P＜ 0.01).结论 利拉鲁肽可以显著改善高脂喂养联合低脂联素血症诱导的代谢紊乱并减轻肝脏脂质沉积.     

小檗碱抑制内质网应激炎症通路对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的探讨

目的观察小檗碱(BBR)对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤半影区内质网应激相关炎症通路的影响。方法72只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,采用高脂饮食和链尿佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型,数字抽签随机将糖尿病大鼠分为假手术组(Sham组)、糖尿病大鼠+BBR治疗组(BBR组)、糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型组(MCAO组)、糖尿病大鼠MCAO+BBR治疗组(MCAO+BBR组),纳入研究每组6只。治疗组在术前48 h、24 h和术后6 h经胃灌注给予相应剂量药物。采用线拴法制备大鼠MCAO模型,进行神经缺损评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调控蛋白78(GRP78)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、核因子(NF)-κB p65表达情况。结果在脑缺血半影区,缺血2 h再灌注24 h后,MCAO组大鼠神经功能缺损评分(2.83±0.41)分,高于MCAO+BBR组大鼠(1.67±0.52)分(P<0.05),促炎因子TNF-α和IL-1β和内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、PERK和NF-κB p65的表达水平亦增高(P<0.05)。BBR治疗亦可降低脑缺血再灌注半影区促炎因子(TNF-α和IL-1β)和内质网应激相关炎症通路蛋白(GRP78、PERK和NF-κB p65)的表达水平。结论BBR可通过抑制内质网应激相关炎症通路降低2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的炎症反应,发挥神经保护作用。     

噪声应激对大鼠心肌葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响与高血压及心肌重构的关系

目的 研究内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在噪声应激环境高血压大鼠模型心肌中的表达,并探讨GRP78和CHOP变化与高血压及其心肌重构的关系.方法 将成年雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠40只随机分为两组:噪声组(采用噪声环境建立高血压模型)和...     

Ghrelin对高脂喂养大鼠肝脏氧化应激及Akt/GSK3β信号通路的影响

目的探讨Ghrelin对高脂喂养的大鼠肝脏氧化应激水平及Akt/GSK3β信号通路的影响。方法成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、高脂饮食组(HFD组)和Ghrelin组,每组10只小鼠。NC组给予正常饲料喂养,HFD组及Ghrelin组给予高脂饮食,喂养6周后,进行药物干预4周:Ghrelin组给予Ghrelin(60μg/kg)每日两次腹腔注射,相应NC组及HFD组给予0.9%氯化钠溶液进行对照;结束后处死大鼠,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC);测定肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA);实时PCR检测肝脏组织Akt、GSK3βmRNA表达的改变。结果 Ghrelin组大鼠肝脏湿重、血TC及TG均低于HFD组(P0.05);Ghrelin组与HFD组比较,SOD明显增高(P0.05),MDA有所降低(P0.05);Ghrelin组与HFD组相比,肝脏组织Akt基因mRNA表达升高1.03倍(P0.05),GSK3β基因mRNA表达升高3.23倍,(P0.05)。结论 Ghrelin能改善高脂喂养大鼠血脂水平,减轻氧化应激损伤,其作用机制可能与Akt/GSK3β信号通路相关。     

长期高果糖饮食喂养对大鼠肝脏脂质沉积和炎症通路的影响

目的 探讨长期(8w)高果糖饮食对大鼠肝脏脂质沉积及肝脏炎症通路的影响.方法 雄性C57BL/J6大鼠分为对照组及高果糖组,经喂养8 w后处死大鼠测定各组肝脏甘油三酯(TG)含量和谷丙转氨酶(ACT)含量,并测定大鼠肝脏内JNK途径(p-JNK/t-JNK)和IκBα途径(p-IKKα/β/t-IKKα/β)的蛋白表达变化.结果 喂养8 w后,与对照组相比,高果糖组肝脏甘油三酯和谷丙转氨酶含量较对照组显著增加(P均＜0.01);与对照组相比,高果糖组的p-JNK/t-JNK、p-IKKα/β/t-IKKα/β和t-IκB的蛋白表达均显著增加(P均＜0.01).结论 8w高果糖喂养引起大鼠肝脏脂质沉积,同时伴有JNK和IKKα/β-NF-κB通路激活,提示肝脏两条炎症通路均介导了高果糖喂养诱导脂肪肝和肝胰岛素抵抗的发生发展.     

内质网应激介导的凋亡途径在大鼠酒精性脂肪性肝病中的变化及意义

目的研究内质网应激相关因子及其介导的凋亡途径在酒精性脂肪性肝病大鼠发病过程中的变化及意义。方法 Wistar大鼠40只随机分为正常组(8只)、模型组(酒精混合液喂养);模型组又分为4、8、12、16周4个时相点(各8只);采集标本后检测血清生化指标,观察肝脏病理组织学改变,对肝脏脂肪变程度和炎症活动度评分及肝组织中GRP78、SREBP1-c、Caspase-3蛋白表达及动态变化。结果与正常组比较,模型组大鼠第8周时肝组织中GRP78、SREBP1-c、Caspase-3蛋白表达开始升高,于16周时达最强,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论由GRP78、SREBP1-c、Caspase-3等相关调控因子介导的肝细胞内质网应激和凋亡反应途径参与了酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏脂肪变性和炎症反应,并与酒精性脂肪性肝病发病机制关系密切。     

高脂饮食对老年大鼠肝脏脂肪酸代谢及胰岛素敏感性的影响

目的 探讨增龄和高脂饮食对大鼠肝脏脂肪酸代谢及胰岛素敏感性的影响,了解老年大鼠胰岛素抵抗(IR)的发病机制. 方法 将22～24月龄雄性Wistar大鼠随机分为老年对照组和高脂组;4～5月龄大鼠作为青年对照组.老年对照组和青年对照组给予基础饲料,高脂组给予高脂饲料,喂养8周.用高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验评价各组大鼠胰岛素敏感性;肝脏三酰甘油经氯仿/甲醇抽提后用全自动生化分析仪测定. 结果 (1)老年对照组空腹血糖、胰岛素和游离脂肪酸均高于青年对照组,高脂组进一步升高,且血清三酰甘油和总胆同醇水平增高;(2)葡萄糖输注率老年对照组[(23.80±2.79)mU·kg-1·min-1]较青年对照组[(30.08±3.89)mU·kg-1·min-1]低,高脂组((18.83±2.18)mU·kg-1·min-1]最低,差异有统计学意义(P<0.01);高脂组8周末较4周末低;(3)肝脏三酰甘油老年对照组较青年对照组升高,分别为(16.6±4.8)μmol/g和(9.6±2.2)μmol/g,高脂组(24.7±6.6)μmol/g较老年对照组进一步升高(P<0.01);在老年组中,肝脏三酰甘油与葡萄糖输注率呈负相关.与空腹血糖呈正相关. 结论 与青年对照组比较,老年对照组更易出现脂肪酸代谢异常及IR;高脂饮食导致老年大鼠肝脏脂质积聚更加严重,进一步加重IR;肝脏脂质堆积可能参与了与增龄和高脂饮食相关IR的发生.