四跨膜蛋白8对糖尿病肾小管上皮细胞自噬活性的实验研究

目的探讨四跨膜蛋白8(Tspan 8)对糖尿病肾小管上皮细胞自噬活性的影响及机制。方法将HK-2细胞分为正常组(NG,5.5mmol/L D-葡萄糖)和高糖组(HG,30mmol/L D-葡萄糖)。高糖培养的HK-2细胞分别转染Tspan 8基因的随机无靶点阴性对照(shCtrl)和特异性基因敲减序列(siRNA)。Western blot和qPCR检测Tspan 8表达;Western blot检测蛋白激酶B(Akt)及其磷酸化水平(p-Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化水平(Ⅱ/Ⅰ)。结果高糖刺激后,Tspan 8表达升高约1.5倍(P0.01);与shCtrl组比较,Tspan 8siRNA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高3倍,p-Akt表达降低约1.5倍,p-mTOR表达降低约2倍(P0.01)。结论 Tspan8可能通过激活mTOR信号通路,负向调节糖尿病肾小管上皮细胞的自噬活性。     

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬的影响及机制

目的 探讨抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬中的影响。方法 分离培养纯种新西兰兔腹腔原代巨噬细胞并分为4组,加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002（10 μmol/L）组、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂雷帕霉素（10 nmol/L）组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂曲西立滨组（20 μmol/L）以及空白对照组。共培养4 h、12 h后分别收集细胞,运用透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,细胞免疫荧光法检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）分子的表达,Western blot检测 Akt、mTOR、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）及自噬相关蛋白Beclin-1和自噬蛋白Atg5-Atg12连接体的表达,单丹酰尸胺（MDC）染色法观察自噬溶酶体的变化。结果 与空白对照组相比,透射电镜下LY294002组自噬体、自噬空泡、髓磷脂图像等自噬标记物明显减少,雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多;激光共聚焦显微镜下LY294002组LC3Ⅱ表达显著减少,雷帕霉素组、曲西立滨组表达显著增多;Western blot结果显示LY294002组Beclin-1及Atg5-Atg12蛋白表达水平显著下降,p-mTOR、p-Akt蛋白表达显著减少;雷帕霉素组、曲西立滨组Beclin-1及Atg5-Atg12蛋白表达水平明显上调,共培养4 h后p-Akt表达增多,雷帕霉素组p-mTOR表达增多,曲西立滨组减少;共培养12 h后雷帕霉素组、曲西立滨组p-mTOR表达显著减少,雷帕霉素组p-Akt表达显著增多,曲西立滨组显著减少;MDC染色显示LY294002组自噬溶酶体明显减少,雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多。结论 抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路能促进兔原代巨噬细胞自体吞噬,抑制PI3K能减少兔原代巨噬细胞自体吞噬,可能是不同类型的PI3K分子通过其他通路起作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路激活自噬通路研究荜茇改善小鼠肺纤维化的机制

目的 研究荜茇是否可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路诱导自噬改善小鼠肺纤维化。方法 将50只小鼠随机分为5组即空白组、博来霉素模型组(BLM组)、低剂量组(LD组)、高剂量组(HD组)、雷帕霉素组(RAPA组)。空白组予等容积生理盐水,其余小鼠通过气管内滴注博来霉素(5mg/kg)诱导建立PF模型,造模2周后开始灌胃给药,LD和HD组给予荜茇(5g/kg、10 g/kg)灌胃,RAPA组予自噬诱导剂雷帕霉素(5 mg/kg),连续给药4周。使用Anires2005系统测量小鼠肺功能即用力肺活量(FVC)和动态顺应性(Cdyn),并检测羟脯氨酸(HYP)含量水平。苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察小鼠肺组织纤维化,免疫组化法和RT-qPCR测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测巨噬效应蛋白(Beclin-1)、自噬相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达水平,并检测通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR相...     

DPC4基因通过mTOR信号通路诱导胰腺癌细胞自噬

目的验证过表达DPC4基因对胰腺癌细胞增殖侵袭的抑制作用,探讨mTOR信号通路对其激活自噬的调控作用。方法构建DPC4过表达载体,转染胰腺癌JF305细胞,CCK-8、Transwell检测其对胰腺癌JF305细胞的增殖侵袭能力,透射电镜观察自噬小体,Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、mTOR、p-mTOR、4EBP1、p-4EBP1的表达。结果过表达DPC4可以抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭;激活自噬,电镜下DPC4过表达细胞中自噬颗粒明显增多;自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ在过表达DPC4的JF305细胞中表达升高,同时下调p-mTOR和p-4EBP1的表达水平。结论 DPC4基因可以抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力,其作用机制与抑制mTOR信号通路、激活自噬相关。     

丙型肝炎病毒核心蛋白活化内源性大麻素系统诱导不完全线粒体自噬

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白活化内源性大麻素系统诱导不完全线粒体自噬的机制。方法HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与肝星状细胞(LX-2细胞)共培养。共培养后高效液相色谱-质谱联用技术检测2-AG水平,分光光度法测定检测线粒体呼吸链酶复合体活性,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,激光共聚焦显微镜检测Ca~(2+)浓度和线粒体膜电位,试剂盒检测线粒体丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,蛋白质免疫检测大麻素受体1(CB1R)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62蛋白表达。计量资料采用t检验。结果与LX-2细胞和HepG2细胞共培养组相比,LX-2细胞和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组,2-AG水平增加,线粒体呼吸链酶复合体活性下降,ROS水平和Ca~(2+)浓度升高,线粒体膜电位下降,MDA升高而SOD下降,CB1R水平升高,p-Akt和p-mTOR表达下降,LC3-Ⅱ表达增加,而p62蛋白表达无明显差异。结论 HCV核心蛋白增加2-AG水平,上调CB1R表达;增加线粒体ROS水平和Ca~(2+)浓度,降低线粒体膜电位;下调Akt和mTOR活性引起不完全线粒体自噬。     

前列地尔调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的自噬

目的 探讨前列地尔[又称前列腺素(PG)E1]对心肌缺血再灌注损伤的影响及其可能的作用机制。方法 进行原代乳鼠心肌细胞的分离和培养，将细胞随机分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组、PGE1组和PGE1+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)组，除对照组外，其余组进行H/R处理，CCK-8检测细胞活力；试剂盒检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平；流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)产生和凋亡；Western印迹检测细胞微管相关蛋白轻链(LC)3、自噬效应蛋白(Beclin)1、p62、磷酸化(p)-PI3K、PI3K、p-蛋白激酶B(AKT)、AKT、p-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和mTOR蛋白表达。结果 成功分离培养原代乳鼠心肌细胞。与对照组相比，H/R组心肌细胞增殖能力显著降低，LDH、CK-MB、MDA和ROS水平显著升高，SOD水平显著降低，凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达显著升高，p62、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低(均P<...     

自噬在非酒精性脂肪性肝病中的变化及作用

自噬是一种溶酶体依赖性降解途径,已有大量研究报道,自噬参与了非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生及发展.在NAFLD早期,自噬增强,并可以通过抑制引起NAFLD的“二次打击”延缓NAFLD的进展.在NAFLD晚期,由于自噬相关基因(Atg)7降解、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路过度激活、高胰岛素血症、自噬-溶酶体蛋白水解功能减弱、自噬体膜及溶酶体膜脂质构成改变、肝细胞内钙离子水平增加引起自噬减弱,加重了NAFLD.     

华良姜素对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的]探讨华良姜素对PDGF-BB诱导下血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及可能的机制。 [方法]利用25 μg/L的PDGF-BB处理人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移。实验分为正常对照组、PDGF-BB组(模型组)、PDGF-BB+华良姜素(10、20、40 μmol/L)组和DMSO组。采用CCK-8实验检测HA-VSMC增殖活力,Transwell实验检测HA-VSMC迁移能力,Western blot检测自噬效应蛋白p62、LC3、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平的变化。 [结果]PDGF-BB处理后,HA-VSMC增殖和迁移能力显著上调(P＜0.01),华良姜素显著抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMC的增殖和迁移,且随浓度的上升抑制能力越明显(P＜0.05)。与模型组比较,40 μmol/L华良姜素处理后,LC3Ⅰ以及mTOR蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62与p-mTOR蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),同时发现40 μmol/L华良姜素与AMPK抑制剂Compound C,对PDGF-BB诱导的HA-VSMC AMPK/mTOR信号通路的影响一致。 [结论]华良姜素可抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMC的增殖和迁移,其作用机制可能是通过上调AMPK/mTOR信号通路,抑制自噬实现。     

Parkin促进HepG2细胞自噬并抑制星型孢菌素诱导的细胞凋亡

目的 观察Parkin在星型孢菌素(staurosporine, STS)诱导的HepG2细胞凋亡及细胞自噬中的作用。方法 流式细胞仪检测STS作用前后线粒体膜电位变化；Western blotting检测经STS处理后HepG2细胞caspase3、caspase7、PARP、Parkin/PINK1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、ATg5、Vps34表达水平；免疫荧光法检测线粒体细胞色素C的释放情况；双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬指示系统检测细胞自噬率。在HepG2细胞中过表达重组载体Parkin-flag,经STS处理后，蛋白质印记法检测凋亡蛋白表达变化，双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬指示系统检测细胞自噬率改变。结果 与对照组相比，STS下调线粒体膜电位并促进细胞色素C释放，同时上调凋亡蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase7及PARP表达水平。经STS处理后Parkin蛋白表达被抑制，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及自噬相关蛋白ATg5、Vps34的表达下降。转染mRFP-eGFP-LC3后，STS组自噬体及自噬溶酶体形成明显减少。过表达Parkin...     

mTOR信号通路在心血管系统中作用研究的进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它是调控细胞生长、增殖、翻译、代谢及自噬的关键蛋白激酶,最初因为其能被雷帕霉素抑制而被认识。研究表明,mTOR在调节心血管系统的生理与病理过程中起到关键的作用。本文重点回顾了mTOR信号通路在心血管系统中作用研究的进展。     

辛伐他汀对哮喘小鼠细胞自噬和炎症的影响及其机制的实验研究

目的观察不同剂量辛伐他汀对哮喘小鼠自噬和炎症的影响及机制。方法32只小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、低剂量辛伐他汀组(C组40 mg/Kg)、高剂量辛伐他汀组(D组60 mg/Kg),每组8只。B、C、D三组采用卵清蛋白+氢氧化铝造模,C、D组同时给予辛伐他汀40 mg/kg、60 mg/kg灌胃。采用H.E染色观察肺组织,Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、mTOR、p-mTOR,RT-PCR法检测Atg5和Beclin1 mRNA。结果A组支气管未见炎症细胞浸润,管腔规则、黏膜上皮正常;B组可见大量炎症细胞浸润,管壁增厚,气道黏膜增生;C、D组上述表现较B组减轻,且D组改善更明显。与A组比较,B组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D两组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1 mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,D组上述指标变化更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠自噬水平增加,p-mTOR/mTOR信号通路蛋白降低;辛伐他汀可能通过阻断mTOR信号通路进一步提高LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA水平,从而缓解气道炎症。     

ROS调节mTOR信号通路参与自噬的研究进展

自噬是真核细胞中普遍存在的一种物质降解途径,通过自噬溶酶体介导,清除自身多余或受损的细胞器,参与正常细胞内稳态的维护,对机体生长、发育和衰老均起重要作用。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种丝/苏氨酸蛋白质激酶,接受并整合细胞内外的各种信号,是调节蛋白质翻译与细胞生长等多种生理活动的中心信号分子。而活性氧类(ROS)作为第2信使分子,可介导多种细胞信号通路并发挥广泛的生理效应。研究发现,在自噬的过程中,ROS可通过一定的途径激活或抑制mTOR通路,但其调节机制极其复杂。本文就自噬过程中ROS与mTOR之间相互调节机制的研究进展进行综述。     

ATF3转录调控HSP110对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的影响

目的 探讨ATF3调控HSP110表达对低氧刺激下人肺动脉平滑肌细胞增殖及自噬的影响。 方法 体外培养人肺动脉平滑肌细胞，单独感染ATF3沉默腺病毒或共感染HSP110过表达腺病毒，48 h后加入自噬激活剂雷帕霉素预处理3 h，建立缺氧细胞模型，24 h后，CCK-8法检测细胞增殖能力，流式细胞术分析细胞凋亡，Real-time PCR检测ATF3、HSP110 mRNA的表达，Western blot检测ATF3、HSP110、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62蛋白的表达，免疫荧光观察LC3斑点形成，荧光素酶报告系统鉴定ATF3对HSP110的调控作用。 结果 缺氧组ATF3和HSP110的表达显著增加（P<0.01），ATF3沉默后，细胞增殖能力下降，凋亡率增加（P<0.01），同时自噬蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表达及LC3荧光斑点显著减少(P<0.01)，自噬降解底物p62的表达明显增加(P<0.01)，而加入雷帕霉素或共感染HSP110过表达腺病毒后，ATF3沉默对细胞增殖和自噬的抑制作用显著减弱(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，ATF3可上调HSP110启动子活性。 结论 ATF3调控HSP110表达增加而促进人肺动脉平滑肌细胞增殖，其机制可能与介导细胞自噬有关。     

mTOR信号通路与胃癌的相关性研究

正哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的一种,其自酵母中分离出来,在P13K/AKT/mTOR信号通路中是蛋白激酶B(Akt)的下游底物。mTOR是一种含有2549个氨基酸残基的蛋白质分子,生理状态下,该蛋白在各种刺激因子的作用下发挥调控细胞周期、细胞生长增殖等作用,因此mTOR在多种肿瘤组织中表达异     

自噬相关信号通路调控骨相关疾病发生发展的作用机制研究进展

自噬是细胞内大分子物质与细胞器被次级溶酶体进行降解与消化的过程，借此维持细胞的自我稳定。自噬在维持骨骼的动态平衡中具有关键性的调控作用，其可通过磷酸酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核因子κB(NF-κB)、Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）、腺苷单磷酸激活的蛋白激酶（AMPK）等信号通路调控成骨细胞、软骨细胞、骨髓间充质干细胞和破骨细胞的增殖、分化等生物学行为，调控骨相关疾病的发生发展。     

miR-145-5p对肾缺血/再灌注损伤大鼠的肾脏保护作用及其机制

目的 观察miR-145-5p对肾缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾损伤的影响,并探讨其肾脏保护作用是否与通过蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信号通路而调控自噬水平有关。方法 将40只SD大鼠随机分成Sham组、I/R组、I/R+agomir组、I/R+agomir+LY组,每组10只;除Sham组外均建立肾I/R模型,I/R+agomir组和I/R+agomir+LY组在建模操作前3 d经尾静脉注射miR-145-5p agomir 10 nmol/L,I/R+agomir+LY组同时腹腔注射AKT特异性抑制剂TLY294002 50 mg/kg,Sham组和I/R组经尾静脉注射等量PBS溶液。各组分组处理2 d,比较血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平及肾组织损伤评分,肾组织miR-145-5p表达,肾组织细胞凋亡率及促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2表达,肾组织自噬相关蛋白LC3B荧光表达强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、肌球蛋白样Bcl-2结合蛋白(Beclin1)、自噬相关蛋白5(Atg5)表达,肾组织AKT/mTOR通路相关蛋白p-AKT/AKT、p-mTOR/...     

替米沙坦诱导大鼠肝细胞自噬促进肝脏胆固醇代谢的机制研究

目的探讨替米沙坦诱导大鼠肝细胞自噬对肝脏胆固醇代谢的影响及作用机制。方法将肝脏原代细胞分为正常对照组(Con)、替米沙坦1μmol/L组(Tel 1组)、替米沙坦3μmol/L组(Tel 3组)、替米沙坦10μmol/L组(Tel 10组)、替米沙坦10μmol/L联合PPARγ抑制剂GW 9662组(Tel+G组)。Tel 1、Tel 3、Tel 10组分别按1、3、10μmol/L浓度加入替米沙坦,Tel+G组加入10μmol/L替米沙坦及PPARγ抑制剂GW9662,培养24 h。检测肝细胞胆固醇浓度,Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)、自噬蛋白区域(Beclin-1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶分子(mTOR)表达水平。结果 Tel 3、Tel 10组胆固醇水平低于Con、Tel 1组(P<0.05)。Tel 1、Tel 3、Tel 10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1蛋白水平依次升高(P<0.05)。与Con、Tel 1组比较,Tel 3、Tel 10组p-AMPK/AMPK蛋白比值升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR蛋白比值降低(P<0.05)。与Tel 10组比较,Tel+G组胆固醇水平、p-mTOR/mTOR蛋白比值升高(P<0.05),LC3II/I比值、p-AMPK/AMPK蛋白水平降低(P<0.05)。结论替米沙坦可通过诱导大鼠肝细胞自噬影响肝脏细胞胆固醇代谢,其机制可能与激活AMPK/mTOR途径和上调PPARγ有关。     

mTOR信号通路在冠心病的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸激酶,mTOR与特异性蛋白作用形成mTORC1和mTORC2两种复合物。mTOR信号通路在细胞的蛋白质合成、自噬、存活、应激中起着关键的调节作用。越来越多的研究表明mTOR信号通路在冠心病的发生、发展方面起着重要调控作用。本文主要讨论mTOR在冠心病中的作用机制研究。     

丹参多酚酸盐保护体外循环后心脏功能的研究

目的探讨细胞自噬参与体外循环术(cardiopulmonary bypass,CPB)后心脏功能减退的主要分子机制及丹参多酚酸盐治疗对CPB后心脏功能的改善。方法健康雄性中华小型猪15只,随机分为CPB组6只、治疗组6只和对照组3只。监测各组小型猪心功能、血流动力学及炎性因子的变化,以及免疫组织化学测定的凋亡指数和心肌、肾小球超微结构的改变。应用Western blot法定量分析各组细胞自噬通路相关信号的改变。结果与对照组比较,CPB组CPB后2h白细胞介素(IL)1β、TNF-α、IL-10水平明显升高,伴随有心脏功能的减退。与CPB组比较,治疗组CPB后2hIL-1β、IL-2、TNF-α水平明显下降,心脏功能明显好转,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB后2h,CPB组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路活性增强,但LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值仍较对照组明显增高,而治疗组mTOR信号通路活性较CPB组进一步增强,伴LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值较CPB组明显下降。结论丹参多酚酸盐能保护CPB后心脏功能,这与其参与AMP蛋白激酶和mTOR信号通路调控抑制CPB后心肌细胞自噬活性有关,也与其抗炎症和氧化应激相关。     

CGRP通过抑制过度自噬减轻缺氧/复氧心肌细胞损伤

目的 研究探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对缺氧/复氧(H/R)H9c2心肌细胞自噬的影响及其潜在的机制。方法 将六孔板中的H9c2心肌细胞随机分为4组，每组3孔：空白组、正常培养细胞、H/R组(对H9c2心肌细胞缺氧3 h复氧2 h,制备H/R模型)、H/R+CGRP(CGRP组),于H/R前20min向培养孔中加入1×10^-1 mol/L CGRP预处理。H/R组+CGRP+CGRP_8～37(CGRP_8～37组)于H/R前30 min加入1×10^-7 mol/L CGRP_8～37作用10 min,加入CGRP作用20 min。利用台盼蓝染色检测细胞存活率；检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性；利用Tunel法检测细胞凋亡；采用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位水平；利用Western印迹法测定H9c2心肌细胞微管相关蛋白Ⅰ轻链(LC)3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P-mTOR的表达水平。结果 与空白...