单克隆抗体检测血吸虫病人血清特异性循环免疫复合物的初步探讨

本文系探讨用ⅢD_(10)McAb识别18例慢性血吸虫病患者血清CIC,并与经聚乙二醇(PEG)沉淀的CIC对照,二者结果相似.该McAb-ELISA方法检测血吸虫病慢性患者67例,46例呈阳性反应,21例呈阴性反应而对肺吸虫病患者59例、健康人23例全部呈阴性反应.初步结果表明,该方法检测血清CIC具有较高的特异性.     

应用单克隆抗体检测血吸虫人血清特异性循环免疫复合物的初步研究

抗血吸虫ＭｃＡｂ应用于ＥＬＩＳＡ（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫病人血清中抗原特异性ＣＩＣ，并与其提取的ＣＩＣ沉淀物为对照，二者结果完全相同。另与“抗原非特异性”ＣＩＣ检测法（ＰＥＧ法）作对照。慢性血吸虫病患者６７例ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ有４６例呈阳性反应（６８．７％），２１例呈阴性反应（３１．３％），对肺吸虫病患者５９例、健康人２３例全部呈阴性反应；而ＰＥＧ法，肺吸虫病患者全部呈假阳性反应，健康     

家兔日本血吸虫循环抗原及其特异性免疫复合物的动态观察

应用单抗酶联免疫吸附试验（ＥＬｌｓＡ），对日本血吸虫感染兔肠相关蛋白糖阳极循环抗原（ＧＡｓｃＡＰ）及其特异性循环免疫复合物（ＧＡｓｃＡｐ－ＩＣ），进行了动态检测。中度（２００尾蚴／兔）和轻度（５０尾蚴／兔）感染家兔可在感染后第２周和第４周检出ＧＡＳＣＡＰ；第４和第６周检出ＧＡＳＣＡＰ－ＩＣ。ＧＡＳＣＡＰ和ＧＡＳＣＰ－ＩＣ的升降趋势，呈显著的伴随关系。感染兔在接受一次性吡喹酮治疗后，ＧＡＳＣＡＰ和ＧＡＳＣＡＰ－ＩＣ很快阴转，表明日本血吸虫病ＧＡＳＣＡＰ和ＧＡＳＣＡＰ－ＩＣ的检测具有早期诊断和疗效考核意义。     

包虫病人循环免疫复合物的初步研究

用包虫病人血清与亲和层析纯化的包虫病抗原制成人工免疫复合物,证实了可溶性免疫复合物主要为抗原轻度过剩的复合物成分。提示其具有致病的作用。用PEG沉淀法检测49例包虫病人血清免疫复合物的阳性率为22.45％。用Pernice法检测特异性免疫复合物的阳性率仅为8.16％。PEG沉淀物经8M尿素解离后,包虫抗原的检出率为20.4％。36例肝包虫病人pEG沉淀法阳性者10例(27.77％)尿素解离物中检出抗原者9例(25％)。8例肝包虫病人用pEG沉淀法未检出阳性,而解离物中检出抗原者1例(12.5％)。经IHA和间接ELISA法未检出血清抗体的包虫病人中,在pEG沉淀的解离物中检出抗原者各为18.18％(4/22)和10％(1/10)认为在血清pEG沉淀的解离物中检测包虫抗原是测定特异性免疫复合物的较好方法。     

脑囊虫病病人血清中特异性和非特异性免疫复合物的检测

采用羊抗人ＩｇＧ抗体包被酶标板,以酶标兔抗囊虫囊液抗体为识别系统,建立了血清中完整囊虫特异性免疫复合物的捕捉法ＥＬＩＳＡ技术,结果发现８２．３５％的脑囊虫病人血清中存在着囊虫特异性免疫复合物,对照组有６．６７％的假阳性率。同时,采用Ｃ１ｑ捕捉法测定了血清中非特异性免疫复合物,发现囊虫病人血清中非特异性免疫复合物的含量为７．３４±１１．６３μｇ／ｍｌ,对照组为２．９２±１．６６μｇ／ｍｌ,囊虫病人血清中非特异性免疫复合物明显高于正常人。相关研究未发现囊虫病人特异性和非特异性免疫复合物之间有相关性。     

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的 探讨抗可溶性虫卵抗原（SEA）卵黄抗体（IgY）检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（S-ELISA）检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法（SEA-ELISA）作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度（y）与吸光度（A450）值（x）呈明显的正相关（y=459．22x-108．14,r=0．9481）。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100．00％（9／9）,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84．44％（38／45）,健康人的特异性为96．00％（48／50）。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。     

单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫病人循环抗原

制备抗日本血吸虫排泄分泌抗原单克隆抗体(McAb),应用于斑点酶联免疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原.血吸虫病人血清的阳性率为80.9％(152/188),其中EPG为1～24、25～99和≥100的病人检出率分别为76.8％、86、6％和100％。血吸虫病人经吡喹酮治疗1年以上粪检阴性者50例,均为阴性.并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人、丝虫病人和健康人血清均为阴性.McAb-Dot-ELISA操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。     

单克隆抗体Dot－ELISA检测包虫病人循环抗原的研究

用单克隆抗体－斑点酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测４６例确诊包虫病患者血清循环抗原,３５例呈阳性反应,阳性率为７６．０９％。１４例猪囊虫病人,５０例健康人血清均为阴性,上述结果表明本方法具有较好的敏感性和特异性,而且操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于包虫病的诊断和疗效考核。     

应用单克隆抗体ELISA检测包虫病人循环免疫复合物的研究

应用抗包虫单克隆抗体F1建立了检测包虫病人循环免疫复合物和解离抗原的ELISA法。102例包虫病人中CIC阳性率为50％(51/102),其中手术前检出率为62.62％(33/53),手术后检出率为36.73％(18/49)。二者差异显著(P<0.005)。用PEG沉淀的免疫复合物经尿素解离后检测包虫抗原的阳性率为58.82％(60/102)。CIC与解离抗原二者累积阳性率达到86.27％(88/102)。表明在包虫病人中CIC的存在是普遍的。F1单克隆抗体ELISA法在检测包虫病人CIC和解离抗原上有极高的敏感性,因而证明F1单克隆抗体所识别的抗原表位是形成CIC的主要抗原成分。在IgG型CIC阳性的血清中解离抗原的检出率仅为48.1％(23/51)。可能是由于IgG抗体的高度亲和力,由其形成的CIC解离效率低。在IgG-CIC阴性血清中,检出解离抗原的阳性率高达72.5％(37/51),证明了在相当部分包虫病人血清中可能存在着IgE和IgM型CIC。解离抗原阳性率高表明这类CIC容易解离。在17例特异性IgG抗体阴性的包虫病人中CIC阳性者10例(58.82％),解离抗原阳性者9例(52.94％),二者累积阳性率为76.47％(13/17)。说明CIC与解离抗原的检测在IgG抗体阴性的包虫病人诊断上有实际意义。     

乙肝患者血清中HBeAg特异性循环免疫复合物的检测及意义

为了解循环免疫复合物在乙肝发病及转归中的意义，采用ＥＬＩＳＡ法测定ＨＢｅＡｇ特异性免疫复合物，并与非特异性循环免疫复合物结果相比较。检测乙肝病毒感染不同时期１２０名病全和４０名健康成人。结果：１．ＨＢｃ－ＩＣ与ＨＢＶ复制有关，其血清学标志的转换可作为预后的指标之一；２．ＣＩＣ与复制水平有关，ＨＢｅ－ＩＣ仅为ＣＩＣ的组成部分之一。     

单克隆抗体反向间凝试验的建立及其在日本血吸虫病诊断上的应用

ＭｃＡｂ－Ｇ３－ＲＩＨＡ诊断血吸虫病、采用绵羊红细胞，经戊二醛固定、鞣酸鞣化，致敏纯化肠相关ＭｃＡｂ，然后冷冻干燥用于检测宿主血清中循环抗原，并以ＩＨＡ对比检测ＣＡｂ。以之检测６３０份样本，其中正常人２２４例，ＲＩＨＡ假阳性率为４．４％，ＩＨＡ为４．９１％；急性血吸虫病１６５例，ＲＩＨＡ阳性率９８．７９、ＩＨＡ９９．３９％；疫区人群２４１份，ＲＩＨＡ阳性率７１．７８％，ＩＨＡ为８４．２３％；其中粪检阳性者ＲＩＨＡ阳性率８６．６７％（６５／７５），粪检阴性者的阳性率是６５．０６％（１０８／１６６），而ＩＨＡ的阳性率分别为９６．０％（７２／７５），７８．９２％（１３１／１６６），ＥＰＧ≥３０的慢性血吸虫病者ＲＩＨＡ及ＩＨＡ阳性率均为１００．０％，当ＥＰＧ＜３０时，ＲＩＨＡ和ＩＨＡ阳性率分别是６９．２３％、９２．３１％。实验结果显示：急性血吸虫病人群循环抗原ＧＭＲＴ为慢性患者的２１．７６倍，不同感染度的慢性患者循环抗原ＧＭＲＴ较为接近。急、慢性血吸虫病血清中ＣＡｂ显著多于循环抗原。本法操作简便，有较好的特异性与敏感性，适用于血吸虫病循环抗原的检测。     

McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果

本文报告了用抗日本血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体致敏血球建立反向间接血凝试验,对66例急性血吸虫病,123例慢性血吸虫病,57例肝吸虫病,54例钩虫病和82例非疫区健康人血清的检测效果。结果显示,该方法检测急、慢性血吸虫病血清的敏感性分别达到98.5％和81.3％,与肝吸虫病血清交叉反应率为10.5％,与钩虫病血清未见交叉反应,与非疫区健康人血清仅有1.2％的假阳性反应。与平行对照的McAb-Dot-ELISA反应结果相比,两者在检测敏感性和特异性上差别均无显著意义,具有较高符合率,表明McAb-RIHA试验是一种诊断效率和可靠性较高的检测日本血吸虫病血清循环抗原的方法,尤其适宜基层和现场应用。     

包虫病患者循环抗原检测中血清不同处理方法的比较研究

本文比较了在包虫病人循环抗原检测中，数种血清不同处理方法。结果证实，在检测包虫病人循环抗原时，预先用胰蛋白酶消化可以使血清免疫复合物中的循环抗原较彻底地游离。用３．５％聚乙二醇沉淀血清中的免疫复合物，再以１％胰蛋白酶消化，较不处理组敏感性提高６倍，较传统的酸解组增加４倍多。另外，将处理血清的稀释液中氯化钠浓度加大，或将血清用１０％牛血清白蛋白孵育，可明显降低本底值，Ｐ／Ｎ值可分别提高１．２倍和１．３倍。     

抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体的研制及初步应用

目的制备抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体并研究其初步应用。方法用广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选分泌高滴度、高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用所得的单克隆抗体以Western blotting检测广州管圆线虫病患者血清,并建立双抗体夹心ELISA法检测感染大鼠血清。结果获得3株分泌高滴度抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株(2A2、3F1、4H2),其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、猪囊尾蚴、旋毛虫抗原均不发生交叉反应。3株单克隆抗体均可识别广州管圆线虫成虫可溶性抗原蛋白Mr 15 000,以及患者血清中两种循环抗原Mr24 000和Mr15 000。双抗体夹心ELISA检测阳性率为76.5%。结论制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的单克隆抗体,且在循环抗原的检测方面有应用前景。     

肝硬化 肝癌患者血清循环免疫复合物的研究

采用一种简单、敏感的放射免疫法测定了101例肝病患者(25例肝癌,17例肝硬化,26例慢迁肝,33例乙肝病毒携带着)的血清循环免疫复合物,并观察了各组肝功能的变化以及HBV标志.结果表明:肝癌组的IgG-CIC含量及γ-GT含量明显高于其它各组.IgG-CIC 5.21(PHC),3.43(LC),2.41(CPH)及1.92(ASC),P<0.01.γ-GT 262(PHC).63.1(LC),44.7(CPH)以及18.7(ASC),P<0.01.伴有HBV感染的肝癌组中有80%可检出IgG-CIC,而CPH及ASC组中仅有50%可检出IgG-CIC.研究结果还表明:肝癌组中,IgG-CIC含量随着AFP含量的升高而上升.但在AFP过度升高时,IgG-GIC反而降低.这可能提示:随着肿瘤的生长,IgG-CIC升高,AFP值随肿瘤恶化逐渐上升,致使IgG-CIC从结合补体转变成非结合补体,导致IgG-CIC的下降.根据结果提示:HBV感染与肝癌发生有着密切关系.     

检测感染旋毛虫猪血清中循环抗原以诊断和监测本病的研究和应用

用目测快速双抗体夹心—ELISA法检测61头感染旋毛虫猪血清中CAg,40头(65.6±6.1％)呈阳性反应。100头正常猪均为阴性,30头感染囊虫和30头感染弓形体的猪,仅有1头感染弓形虫的猪出现轻度交叉反应,该猪未能追踪检查是否合并旋毛虫感染。对北京海淀区224头(1987年自外地引进),陕西商县50头和河南省新野县258头被屠杀的猪,进行流行病学调查,35头(6.6％)CAg显示阳性,其中71.4％(25/35)同时伴有抗体阳性。本法以TMBS为底物,不仅对人体无毒,而且不需新鲜配制,配好的底物溶液可以长期保存备用。本实验操作简便,完成全过程仅需20分钟,以目测观察结果,特别适于基层开展应用。实验中所需特异性抗体及酶的结合物,均系我室自制,价格低廉,相当稳定,在低温下保存2年,其效价不变,对人和动物均适用。     

单克隆抗体胶乳凝集试验检测囊虫病循环抗原

采用抗猪囊虫单克隆抗体化学交联胶乳免疫微球，分别检测了囊虫病患者脑脊液和血甭中的循环抗原，阳性率分别为９０％（２７／３０）和７４．６３％（５０／６７）。同时对比检测了脑脊液和血清中的囊虫抗体，结果表明，脑脊液的抗体检出率明显低于血清，循环抗原的检出率则无显著性划。本实验方法检测循环抗原简便易行，有较高的特异性和敏感性，既可用于早期诊断和现症病人的确定，也可用于疗效考核。     

应用特异性单克隆抗体测定脑囊虫病患者血清及脑脊液中循环抗原

应用特异性单克隆抗体作DOT－ELISA和竞争ELISA检测65例脑囊虫病患者血清和脑脊液中游离循环Ag（FCAg）和循环免疫复合物抗原（CICAg）。血清FCAg阳性率分别为81．3％和81．5％（0．20～87．0μg／ml）,CICAg阳性率为95.4％和92．3％（0.19～120.0μg／ml）,脑脊液测定FCAg阳性单为78．5％和86.2％（0．32～25.0μg／ml）,CICAg阳性率为90.8％和93.8％（0.19～46.4μg／ml）。结果表明检测总循环抗原（包括游离部分和复合物部分）有利于提高脑囊虫病的诊断。