丝裂原活化蛋白激酶信号通路及其在细胞凋亡中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,存在于真核生物的大多数细胞内。从酵母到人类该信号通路非常保守,它能响应各种胞外和胞内刺激从而被激活,在多种细胞过程中发     

MAPK信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

骨髓间充质干细胞具有较强的自我更新及分化能力,在骨骼的生长发育与骨代谢方面具有较高的研究价值,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号通路是介导骨髓间充质干细胞分化的一条重要通路。本文通过查阅国内外大量文献,详细介绍MAPKs信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究现状,着重从MAPK 3条主要信号通路——P38 MAPK、JNK MAPK和ERK MAPK进行详细分析和总结,为相关基础研究提供一定借鉴。     

P38 MAPK信号通路在金黄色葡萄球菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡模型,探讨p38 MAPK信号转导通路在此凋亡过程中的作用。方法采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测金黄色葡萄球菌感染不同时间时U937细胞的凋亡率;利用Western blotting检测p38MAPK的磷酸化水平;预先用不同浓度的SB203580(p38 MAPK途径抑制剂)处理U937细胞,采用Annexin V FITC/PI双染分析感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果金黄色葡萄球菌可以诱导U937细胞凋亡,并且随着感染时间的延长,细胞凋亡率也逐渐增高。p38 MAPK在加入金黄色葡萄球菌15min后表达明显增高,30min时达高峰,随后,逐渐降低。总的p38 MAPK水平在整个实验期间内几乎无变化。用SB203580抑制p38 MAPK通路,引起抑制剂浓度依赖性的细胞凋亡率降低。结论金黄色葡萄球菌呈时间依赖性诱导U937细胞凋亡,p38 MAPK信号转导通路的激活在金黄色葡萄球菌诱导的U937细胞凋亡过程中起到了重要的作用。     

转胶蛋白通过阻断丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路抑制人甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的:探究转胶蛋白(transgelin, TAGLN)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)发生发展中的作用及其可能的信号通路。方法:收集100例PTC组织及对应100例癌旁正常甲状腺组织,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、Western印迹法和免疫组化分...     

沉默HIF-1α调控MAPK/ERK信号通路抑制NSCLC转移的分析

目的探讨HIF-1α在体内及体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞转移的影响及其作用机制。 方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HIF-1α在癌旁正常组织、肺鳞癌组织(LUSC)、肺腺癌组织(LUAD)、A549细胞和HEB细胞中的表达量。上调HIF-1α表达后,通过MTT、细胞侵袭和Western blot实验检测过表达HIF-1α对A549细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调HIF-1α表达后,Western blot检测A549细胞ERK和p-ERK蛋白的表达量。THBQ激活MAPK/ERK通路后,分析A549细胞增殖、侵袭和EMT能力。将细胞株植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,最后测量裸鼠移植瘤的体积和重量。 结果HIF-1α在NSCLC组织的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。A549细胞中HIF-1α表达水平明显高于HEB细胞(P<0.01),过能够促进A549细胞的增殖和侵袭,N-cadherin蛋白表达量明显上升,E-cadherin蛋白表达量明显下降。下调HIF-1α能够抑制A549细胞内MAPK/ERK通路,且抑制了A549细胞的增殖、侵袭和EMT。下调HIF-1α使裸鼠移植瘤的重量和体积明显减小。 结论沉默HIF-1α通过MAPK/ERK信号通路在体内及体外抑制NSCLC转移。     

PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞来源的Exosome促进同源肿瘤细胞增殖中的作用

目的:研究胃癌细胞来源的Exosome对同源肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导通路在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心的方法从胃癌MGC803细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的Exosome.应用透射电子显微镜观察Exosome的形态,MTT检测细胞活力,Weste...     

Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨Fas信号通路促进胃癌细胞侵袭转移的可能相关机制。方法以低浓度FasL处理胃癌细胞株AGS,免疫印迹及ELISA检测上皮间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)的分子生物学标记改变;稳定沉默Snail及Twist转录因子,transwell小室侵袭实验检测FasL处理后胃癌细胞的侵袭能力;免疫印迹检测信号通路激活状态及相应的抑制效应。结果 FasL可以诱导AGS细胞株出现EMT表型,并可促进胃癌细胞的侵袭转移能力。同时该过程中出现ERK1/2信号通路的激活,而抑制ERK1/2信号通路,可以抑制FasL诱导EMT及提高肿瘤侵袭能力的作用。胃癌组织中相应分子生物学标记的表达变化符合EMT的发生。结论 Fas信号通路能够激活ERK1/2通路诱导EMT的发生,并且能通过该机制增强胃癌细胞AGS的活动能力。     

ERK1/2信号通路与肿瘤关系的研究进展

胞外信号调节激酶(ERK)可以将细胞信号从受体传导至细胞核,是负责细胞外刺激的经典丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路。相关研究表明ERK通路的激活与许多肿瘤的发生发展密切相关,许多作用于ERK通路上游的抑制剂都表现出抗肿瘤活性。ERK1和ERK2是MAPK/ERK通路最重要的分子,因具有同质性,统称为ERK1/2。ERK1/2可以磷酸化多种底物,参与细胞的增殖、分化、迁移、侵袭、凋亡、癌性转化等重要过程。本文就ERK1/2信号通路及其与肿瘤增殖、凋亡和迁移侵袭的相关性进行综述,以期更好的指导肿瘤治疗。     

阿托伐他汀通过抑制ERK/MAPK信号通路改善H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的探究阿托伐他汀通过调节ERK/MAPK信号通路改善H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为空白对照组、模型组(H₂O₂处理)、阿托伐他汀组(阿托伐他汀+H₂O₂)、U0126组(ERK/MAPK信号通路抑制剂U0126+H₂O₂)、阿托伐他汀+LM22B-10组(阿托伐他汀和ERK/MAPK信号通路激活剂LM22B-10+H₂O₂)。采用MTT法、AO/EB染色法分别检测各组细胞活性、凋亡率;用酶联免疫吸附法检测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;荧光法检测活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测各组细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量降低,细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平增加,p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值上调(P均<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量升高,细胞凋亡率、LDH、MDA和ROS水平降低,且p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值下调(P均<0.05)。与阿托伐他汀组比较,阿托伐他汀+LM22B-10组细胞增殖活性、SOD和GSH-Px含量降低,凋亡率、LDH、MDA和ROS水平升高,同时p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值上调(P均<0.05)。结论阿托伐他汀能够改善H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路进而降低ROS介导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激损伤有关。     

乳腺癌中TSG101与MAPK／ERK信号通路的关系

目的 研究乳腺癌中TSG101与MAPK／ERK信号通路的关系。方法应用脂质体法将靶向TSG101的siRNA转染入乳腺癌细胞株MCF-7中。分别使用免疫荧光和Westernblot方法检测siRNA干扰后MCF-7中p-ERK蛋白表达的改变。使用免疫组织化学方法检测TSG101、p-ERK蛋白在54例人乳腺癌组织中的表达。结果TSG101siRNA转染后的MCF-7中p-ERK蛋白表达明显减少。TSG101和p-ERK蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为74．07％、81．48％。TSG101和p-ERK在乳腺癌组织中的蛋白表达存在正相关（r=0．371,P〈0．05）。结论TSG101在乳腺癌中可能通过MAPK／ERK信号通路发挥生物学作用。     

细胞外调节蛋白激酶通路对胃癌细胞化疗效果的影响

目的:观察细胞外调节蛋白激酶(extraeelluar regulated protein kinase,ERK)信号通路对胃癌细胞化疗效果的影响并探讨其机制.方法:足叶乙甙作用于胃癌SGC7901和BGC823细胞,采用MTT比色法检测细胞的生存率,采用流式细胞仪和Hoechst33258荧光染色检测细胞周期分布和凋亡,Western杂交法检测ERK1/2的磷酸化以及c-Myc和P53蛋白表达水平.同时采用PD98059抑制ERK信号通路后观察足叶乙甙对细胞增殖、凋亡、c-Myc和P53表达的影响.结果:足叶乙甙呈时间-剂量依赖性抑制SGC7901和BGC823细胞的生长并明显诱导细胞的凋亡,同时上调ERK1/2的活性(磷酸化水平),并增强c-Myc和P53的表达,与对照组比较,足叶乙甙组凋亡率明显增高(19.48%±1.57% vs 5.67%±0.81%.17.38%±1.49% vs4.97%±0.73%,均P<0.01),PD98059可明显增强足叶乙甙的细胞生长抑制作用并提高细胞的凋亡水平,与足叶乙甙组比较,足叶乙甙组 PD98059组凋亡率(34.35%±2.84%,32.11%±3.25%)明显增加(P<0.01);同时上调足叶乙甙诱导的P53表达,并抑制c-Myc表达的上升趋势.结论:足叶乙甙可活化胃癌细胞ERK信号通路而影响胃癌细胞的化疗效果,其机制可能是通过抑制P53并上调c-Myc的表达,从而抑制细胞的凋亡实现.     

乳香通过PTEN/Akt/COX-2通路诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的研究乳香对人胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度乳香处理SGC7901细胞不同时间,噻唑兰比色法检测乳香对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞术分析乳香对SGC7901细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)分析乳香对SGC7901细胞中同源性磷酸张力蛋白(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(PKB,亦称Akt)和环氧化酶2(COX-2)蛋白表达影响,划痕实验检测细胞迁移能力,裸鼠移植瘤实验验证乳香在裸鼠体内抑制肿瘤的效果。采用Graphpad Prism 6.0统计软件对数据进行分析。结果乳香能够抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,呈现剂量依赖和时间依赖性。乳香诱导SGC7901细胞的凋亡,呈现剂量依赖性。乳香能够诱导SGC7901细胞中PTEN的表达,抑制p-Akt和COX-2的蛋白表达。此外,乳香能够抑制裸鼠体内胃癌移植瘤的生长。结论乳香可以抑制胃癌细胞SGC7901的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,这可能与PTEN/Akt/COX-2信号通路相关。     

Akt介导VEGF信号通路在促进胃癌淋巴管新生中的作用

随着研究的深入,肿瘤淋巴管新生已被证实在实体肿瘤淋巴转移途径中起着至关重要的作用,并可作为一个评价肿瘤预后的重要指标.但长期以来由于缺乏对淋巴管内皮特异因子和淋巴管检测技术的认识,对淋巴管转移具体机制与肿瘤淋巴管新生分子途径尚未完全明确.Akt信号通路是细胞内一条重要的信号传导通路,与肿瘤发生、增殖、抗凋亡、转移等密切相关.近年来发现Akt在介导VEGF信号通路与肿瘤淋巴管转移或肿瘤淋巴管新生的也存在着密切关系.本文对Akt信号通路在胃癌淋巴管新生中重要作用与研究进展作一综述.     

Asymmetric dimethylarginine induces apoptosis via p38 MAPK/caspase-3-dependent signaling pathway in endothelial cells

Asymmetric dimethylarginine (ADMA), an endogenous inhibitor of nitric oxide synthase (NOS), is emerging as a key contributor for endothelial dysfunction and its effects on endothelium are not yet completely defined. The aim of this study was to investigate ADMA-induced apoptosis and its mechanisms in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Apoptosis was evaluated by in situ terminal uridine nick end labeling (TUNEL) assay and DNA fragmentation analysis. Caspase-3 activity was measured using a colorimetric protease assay kit. Activations of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) were characterized by Western blot and immunofluorescence. Intracellular oxidant production was measured using H(2)DCF-DA, an oxidant-sensitive fluorescent indicator. ADMA (3-30 microM) induced apoptosis of HUVECs in a dose- and time-dependent manner. Caspase-3 was activated during apoptosis and its specific inhibitor DEVD-CHO significantly attenuated ADMA-induced apoptosis. Phosphorylation of p38 MAPK was induced by ADMA, and p38 MAPK specific inhibitor SB203580 concentration-dependently prevented ADMA-induced caspase-3 activation and cell apoptosis. ADMA increased intracellular oxidant production, which was significantly suppressed by intracellular antioxidant PDTC, l-arginine or antisense endothelial NOS mRNA. They also markedly prevented ADMA-induced phosphorylation of p38 MAPK and cell apoptosis. In conclusion, our present results demonstrate that ADMA induces apoptosis of endothelial cell via elevation of intracellular oxidant production, which involves p38 MAPK/caspase-3-dependent signaling pathway.     

ERK on apoptosis of gastric cancer cells induced by microRNA-433

<正>Objective To investigate the role of ERK in the apoptosis of gastric cancer cells induced by miR-433.Methods Lentivirus was used to transfect BGC-823 gastric cancer cell line to over-express miR-433. The blank control group (BGC-823), negative control group(BGC-823+miR-433 negative control) and experimental group (miR-433+miR-433, BGC-823-pMD18-T-     

Roles of Fas signaling pathway in vitamin E succinateinduced apoptosis in human gastric cancer SGC—7901 cells

AIM: To investigate the roles of Fas signaling pathway in vitamin E succinate-induced apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cells. METHODS: Human gastric cancer SGC-7901 cells were treated with VES at 5, 10, 20 mg x L(-1), succinic acid and vitamin E as vehicle control and condition media only as untreated (UT) control. Apoptotic morphology was observed by DAPI staining. Western blot analysis was applied to measure the expression of Fas, FADD and caspase-8 proteins. After the cells were transiently transfected with Fas and FADD antisense oligonucleotides, respectively, caspase-8 activity was determined by flurometric method. RESULTS: The morphologically apoptotic changes were observed after VES treatment by DAPI staining. 23.7 % and 89.6 % apoptosis occurred after 24 h and 48 h of 20 mg x L(-1) VES treatment, respectively. The protein levels of Fas, FADD and caspase-8 were evidently increased in a dose-dependent manner after 24 h of VES treatment. The blockage of Fas by transfection with Fas antisense oligonucleotides obviously inhibited the expression of FADD protein. After SGC-7901 cells were transfected with Fas and FADD antisense oligonucleotides, caspase-8 activity was obviously decreased (P<0.01), whereas Fas blocked more than FADD. CONCLUSION: VES-induced apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cells involves Fas signaling pathway including the interaction of Fas, FADD and caspase-8.