淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

PKR抑制胰岛β细胞生长的机制研究

目的:探讨PKR激活诱导的胰岛β细胞生长抑制及其相关分子机制?方法:采用PKR激动剂BEPP处理INS-1细胞,MTT法检测其对细胞活力的影响;EdU荧光标记结合流式细胞术测定胰岛β细胞增殖及细胞周期变化;免疫印迹技术评价PKR下游信号分子eIF2α蛋白及其磷酸化水平变化,并检测细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达?结果:MTT显示BEPP呈剂量和时间依赖性抑制INS-1细胞生长活力(P < 0.05);EdU荧光标记显示细胞增殖显著下降;流式细胞术表明BEPP处理组G1期细胞比例明显升高,而S期细胞比例显著下降(P < 0.05);Western blot结果表明:BEPP能下调eIF2α磷酸化而不是其蛋白水平,同时伴随cyclin D1蛋白含量显著降低(P < 0.05)?结论:PKR激活剂BEPP能诱导eIF2α磷酸化,阻断蛋白合成,且通过下调cyclin D1蛋白水平,诱导胰岛β细胞G1期阻滞,抑制其增殖,从而导致机体胰岛β细胞整体功能的失代偿和2型糖尿病的发生?     

GSK-3β参与抑制肺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)对肺癌A549细胞增殖的影响及可能机制.方法:MTT法检测不同浓度曲古抑菌素A(TSA)和联合GSK-3β抑制剂SB216763对A549细胞增殖的影响;Western Blot法检测各组细胞中GSK-3β和磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)蛋白表达的变化;流式细胞仪分析细胞周期;免疫细胞化学法检测p27蛋白水平.结果:TSA以剂量依赖性抑制A549细胞生长,使细胞周期阻滞于GdG1期,用SB216763预处理后明显减弱了TSA对A549细胞的生长抑制作用和细胞周期阻滞.TSA对细胞GSK-3β蛋白表达无明显影响,却降低了pGSK-3β蛋白水平.p27蛋白表达增加;抑制剂SB216763使pGSK-3β表达增加,下调p27蛋白水平.结论:GSK-3β参与并促进了TSA对肺癌细胞的生长抑制和细胞周期阻滞效应,其机制可能与GSK-3β对p27蛋白的调节有关.     

Visfatin通过线粒体途径抑制胰岛β细胞凋亡

目的 探讨内脏脂肪素(visfatin)对棕榈酸诱导胰岛β细胞凋亡的影响.方法 小鼠胰岛β细胞株MIN6体外传代培养,进入对数生长期后进行实验.MTT法检测不同浓度visfatin(0～10-7 mol/L)作用24～72 h后MIN6细胞活力变化.流式细胞术检测0.5 mmol/L棕榈酸和(或)10-8 mol/L visfatin处理24 h后MIN6细胞凋亡率的变化;Western blotting检测MIN6抗凋亡蛋白bcl-2、bax、激活型caspase-3和胞质细胞色素C表达的变化.结果 Visfatin作用24～48 h,MIN6细胞活力呈剂量依赖性增加(P<0.05).流式细胞仪检测发现,10-8 mol/L visfatin处理24 h可明显降低棕榈酸诱导的细胞凋亡率(P<0.05);Western blotting结果 表明,10-8 mol/L visfatin可显著抑制棕榈酸引起的细胞内源性bcl-2表达的下调及激活型caspase-3和胞质细胞色素C表达的上调(P<0.05).结论 Visfatin可促进胰岛β细胞增殖,并通过细胞内线粒体途径抑制由棕榈酸诱导的胰岛β细胞凋亡.     

细胞周期调控蛋白在K562细胞的表达及意义

目的：探讨细胞周期调控蛋白CyclinD1,CyclinE,Cdk2,Cdk5在K562细胞增殖和分化时的不同表达。方法：本实验采用Western-Blotting-ECL方法分析了苦参碱作用K562细胞前、后24,48,72h,CyclinD1,CycliE,Cdk2,Cdk5的不同表达。结果：在增殖的K562细胞中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在分化的细胞中,随着DNA合成减少,CyclinD1,Cdk5表达增强。结论：在细胞从增殖向分化途径逆转时,伴随着一些特殊的Cyclin/Cdk表达的改变。     

MiR-105抑制肝癌细胞增殖能力的实验研究

目的 探讨miR-105对人肝癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 改变QGY-7703及HepG2两种细胞的miR-105表达,细胞克隆形成实验和软琼脂增殖试验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞仪检测细胞周期改变.结果 细胞克隆形成和软琼脂增殖实验显示,过表达miR-105可抑制QGY-7703及HepG2细胞增殖,反之抑制miR-105表达则促进细胞增殖;细胞流式检测显示miR-105过表达能促进两种癌细胞G0/G1期阻滞.结论 miR-105抑制肝癌细胞增殖,其机制与引起细胞周期阻滞有关.     

9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌CyclinD1、Cdk4表达的影响

目的:研究9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌A549、PG、SPC-A1的细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响,探讨其抑制非小细胞肺癌生长与影响CyclinD1、Cdk4表达的相关性。方法:采用半定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子CyclinD1、Cdk4表达的变化。结果:9-顺-维甲酸既可以降低PG、SPC-A1的CyclinD1表达(P<0.01),又可以降低PG、A549的Cdk4表达(P<0.01)。结论:9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌生长的抑制作用,与其调控细胞周期因子CyclinD1、Cdk4的表达密切相关。     

9—顺—维甲酸对非小细胞肺癌CyclinDl、Cdk4表达的影响

目的研究9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌A549、PG、SPC-A1的细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响,探讨其抑制非小细胞肺癌生长与影响CyclinD1、Cdk4表达的相关性.方法采用半定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子CyclinD1、Cdk4表达的变化.结果9-顺-维甲酸既可以降低PG、SPC-A1的CyclinD1表达(P＜0.01),又可以降低PG、A549的Cdk4表达(P＜0.01).结论9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌生长的抑制作用,与其调控细胞周期因子CyclinD1、Cdk4的表达密切相关.     

RIG-I上调抑制胰腺β细胞增殖机制研究

目的:探讨维甲酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)在小鼠胰岛β细胞株NIT-1生长中的作用及其相关分子机制?方法:应用不同浓度(1?5?10?20?50和100 μmol/L)的RIG-I特异性激动剂维甲酸(retinoic acid,RA)分别刺激NIT-1细胞6?12?24 h,上调RIG-I?MTT法检测细胞生长活力;real-time PCR测定RIG-I的 mRNA水平;免疫印迹法检测RIG-I和细胞周期蛋白P27蛋白水平;EdU和流式细胞术检测β细胞的增殖和分裂周期?结果:维甲酸处理能刺激NIT-1细胞RIG-I蛋白水平增加(P < 0.05),能剂量依赖地抑制NIT-1细胞生长活力(P < 0.05),且诱导NIT-1细胞G1期阻滞和周期抑制蛋白P27蛋白水平增加(P < 0.05)?结论:RIG-I的功能增强能诱导小鼠胰岛β细胞P27蛋白水平上调,一定条件下抑制β细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞,从而导致机体胰岛β细胞整体功能的失代偿,可能是2 型糖尿病发生发展的重要诱因?     

MicroRNA-494对胃癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的?探讨microRNA-494（miR-494）对胃癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法?选取2015年1月—2018年1月被陕西省肿瘤医院收治并行手术切除的60例患者的胃癌组织及对应癌旁组织（距肿瘤边缘>2?cm）标本。将胃癌细胞MGC803分为miR-494组和对照组。采用PCR检测胃癌组织及体外培养细胞中的miR-494表达水平。在MGC803细胞中过表达miR-494,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。PCR及Western blotting检测miR-494潜在靶点Cyclin D1的表达变化。结果?癌旁组织miR-494相对表达量较胃癌组织高（P?<0.05）。不同肿瘤直径、TNM分期miR-494相对表达量比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。对照组MGC803细胞miR-494相对表达量较miR-494组低（P?<0.05）。miR-494组OD值较对照组低（P?<0.05）。对照组CyclinD1 mRNA和蛋白相对表达量较miR-494组高（P?<0.05）。miR-494与CyclinD1免疫组织化学评分呈负相关（r?=-0.469,P?<0.05）。结论?胃癌组织中miR-494表达水平降低,过表达miR-494能通过下调Cyclin D1的表达发挥抑制胃癌细胞增殖和细胞周期进展的作用。     

miR-138-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨微RNA (microRNA,miR)-138-5p对胶质瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法 体外培养人胶质瘤U251细胞,采用随机数字表法将其分为对照组(n=6)、miR-NC组(n=6)、miR-138-5p组(n=6)、miR-138-5p+pc-NC组(n=6)、miR-138-5p+pc-细胞分裂周期5样(cell division cycle 5-like,CDC5L)组(n=6)。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-138-5p、CDC5L mRNA水平,检测细胞增殖活力、细胞周期和细胞凋亡以及细胞侵袭能力,检测细胞中CDC5L和侵袭相关蛋白表达。结果 miR-138-5p的过表达可下调CDC5L mRNA和蛋白水平,降低胶质瘤细胞增殖活力和侵袭能力,并诱导G2/M期细胞周期停滞,促进细胞凋亡,降低N-钙粘蛋白、波形蛋白水平,升高E-钙粘蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05);上调CDC5L表达可明显逆转过表达miR-138-5p对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响(P<0....     

miR-20a-5p通过下调BMPR2促进人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡

目的 探讨微小RNA-20a-5p（miR-20a-5p）是否通过下调骨形成蛋白2型受体（BMPR2）基因调控人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡。 方法 在永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中分别转染miR-20a-5p mimics,BMPR2小干扰RNA(si-BMPR2)或过表达质粒（pcDNA-BMPR2）。实时定量PCR（qRT-PCR）测定miR-20a-5p表达,免疫印迹（Western Blot）检测BMPR2、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、活化的的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白水平,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶报告基因检测分析miR-20a-5p和BMPR2之间的关系。共转染miR-20a-5p mimics和pcDNA-BMPR2,利用上述方法评估其对细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT信号通路的影响。 结果 过表达miR-20a-5p明显增加hCMEC/D3的细胞活性,CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。低表达BMPR2明显提高hCMEC/D3的细胞活性、CyclinD1蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）,高表达BMPR2时具有相反的效果。miR-20a-5p靶向BMPR2,并调控BMPR2蛋白的表达。高表达BMPR2可以逆转miR-20a-5p促hCMEC/D3增殖、PI3K/AKT信号通路活性和抑凋亡的作用。 结论 miR-20a-5p通过靶向BMPR2激活PI3K/AKT信号通路,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,并抑制凋亡。     

大鼠C6脑胶质瘤X刀治疗后细胞周期的改变及相关蛋白的表达

目的通过观察大鼠C6脑胶质瘤模型经X射线照射后细胞周期的改变及相关蛋白P16、CyclinD1和Cdk4的表达,探讨辐射对肿瘤的杀伤机制。方法建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型,通过免疫组化法检测其经X射线照射后P16、CyclinD1和Cdk4的表达情况及应用流式细胞仪检测其细胞周期的变化。结果肿瘤经X射线照射后,胶质瘤细胞出现G1百分数增多,S期细胞百分数减少,诱导发生了G1阻滞。P16蛋白表达量显著增高,Cyclin D1和Cdk4表达显著下降,与对照组相比具有显著性(P<0.05);且这种变化具有时程效应,即P16蛋白在24h时表达最高,CyclinD1、Cdk4在48h时表达最低。结论辐射可诱导细胞发生G1阻滞,P16、CyclinD1和Cdk4在辐射诱导的G1阻滞中起着重要的作用。     

MicroRNA-134对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨人宫颈癌组织中microRNA-134（miR-134）的表达及对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 PCR法检测宫颈癌组织中miR-134表达水平;在HeLa细胞内过表达miR-134,通过平板克隆形成试验检测细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;PCR及western blotting检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果 宫颈癌组织中miR-134的表达水平较正常宫颈黏膜组织低（P?<0.05）;过表达miR-134能够抑制宫颈癌HeLa细胞增殖（P?<0.05）、阻滞细胞周期进展（P?<0.05）,并促进细胞凋亡（P?< 0.05）;过表达miR-134后抑制HeLa细胞中CCND1 mRNA及蛋白的表达水平（P?<0.05）。结论 宫颈癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能下调CCND1的表达发挥抗癌细胞生长作用。     

miR-4295在鼻咽癌细胞增殖中的作用

目的探讨miR-4295在鼻咽癌细胞发生发展及增殖过程中的作用及相关的分子机制。方法通过脂质体转染miR-4295 mimic,inhibitor及其NC到鼻咽癌细胞株6-10B,CNE2。分别应用MTT实验、软琼脂集落形成实验检测miR-4295对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;WB和QPCR方法检测miR-4295、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21cip1、Rb、pRb在细胞中蛋白及mRNA的表达水平。通过Targetscan分析预测miR-4295与SOX9的3’UTR的结合情况,采用双荧光素酶报告实验检测miR-4295与SOX9的结合情况,同时采用WB检测细胞株中SOX9的表达。结果MTT、软琼脂集落形成实验均显示过表达miR-4295后鼻咽癌细胞增殖能力明显增强,细胞生长速率高于NC组,细胞集落形成个数多于NC组,差异均有统计学意义(P0.05);而miR-4295沉默后鼻咽癌细胞增殖能力明显降低,与NC-in组相比,差异有统计学意义(P0.05);WB及QPCR结果显示:过表达miR-4295后,细胞周期蛋白CyclinD1表达升高而细胞周期抑制因子p21cip1下调;通过Targetscan预测发现miR-4295靶向结合SOX9的3’UTR,荧光素酶活性检测结果发现miR-4295过表达后荧光素酶活性明显低于NC组及突变组,差异有统计学意义(P0.05)。结论上调miR-4295可通过抑制SOX9蛋白翻译从而促进鼻咽癌细胞增殖能力,并调节细胞周期相关蛋白,在鼻咽癌发生发展中扮演重要的角色。     

人参皂苷通过NF-κB/NLRP3途径改善狼疮性肾炎小鼠肾损伤

目的探讨土贝母苷甲通过调控miR-215-5p表达对膀胱癌T24细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法不同质量浓度土贝母苷甲(10、20、30 mg/L)处理人膀胱癌细胞T24。细胞分别转染miR-NC、miR-215-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-215-5p,随后用土贝母苷甲(30 mg/L)处理T24细胞。CCK-8实验检测细胞增殖；平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；Transwell实验检测细胞迁移及侵袭；qRT-PCR法检测miR-215-5p的表达；Western blotting法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达。 结果土贝母苷甲作用于T24细胞后,细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成、迁移及侵袭降低(P＜0.05),而miR-215-5p表达升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性递减或递增。miR-215-5p过表达可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭(P＜0.05)；抑制miR-215-5p可逆转土贝母苷甲对T24细胞恶性行为的抑制作用。 结论土贝母苷甲可通过促进miR-215-5p的表达而抑制膀胱癌细胞恶性行为。     

野生型P73β转染对胆管癌细胞的生物学影响

目的 应用野生型P73β转染胆管癌QBC939细胞,探讨P73β基因转染对胆管癌细胞生长的抑制机制.方法 应用野生型P73β转染胆管癌QBC939细胞,并以未作处理的QBC939细胞作为空白对照.用RT-PCR及Westem blotting检测细胞中P21、Cyclin D1及Cdk2表达量的变化.使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化.结果 转染了野生型P73β重组质粒的胆管癌QBC939细胞,P21相对表达量增高,Cdk2相对表达量明显减少,胆管癌细胞增殖率受到抑制.结论 野生型P73 β基因转染后对胆管癌细胞的生长有抑制作用,P73β基因可通过增加P21基因的表达,抑制Cdk2基因的表达,进而作用于S期的细胞,使细胞周期停滞,从而抑制胆管癌细胞增殖.     

miR-142-3p对膀胱癌细胞增殖和有氧糖酵解的影响及作用机制

目的探究微小RNA（miR）-142-3p对膀胱癌（BC）细胞增殖与有氧糖酵解的影响及作用机制。方法qPCR检测比较人BC细胞系（SW780、UMUC3、T24、BIU87）和人输尿管上皮细胞（SV-HUC-1）中miR-142-3p表达水平,选取低表达的BC细胞进行miR-142-3p过表达质粒转染;分别采用平板细胞克隆实验、CCK8-法、流式细胞术、2-NBDG葡萄糖摄取实验、糖代谢检测试剂盒检测miR-142-3p表达对BC细胞增殖、活性、周期、有氧糖酵解的影响。双荧光素酶和Westernblot法检测miR-142-3p与细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、乳酸脱氢酶A（LDHA）的靶向性及作用关系。过表达miR-142-3p的BC细胞分别转染CDK4或LDHA表达质粒,采用CCK8-法、2-NBDG葡萄糖摄取实验、糖代谢检测试剂盒测定转染后的BC细胞活性和有氧糖酵解情况。结果miR-142-3p在T24、UMUC3细胞中显著低表达（均P＜0.01）。T24、UMUC3细胞转染过表达miR-142-3p质粒后,克隆能力及活性显著下降（均P＜0.05）,细胞周期阻滞于G0/G1期（均P＜0.01）,2-NBDG荧光强度显著减弱（均P＜0.01）,葡萄糖消耗量和乳酸生成量显著减少（均P＜0.01）。miR-142-3p靶向抑制CDK4和LDHA蛋白表达（均P＜0.01）。CDK4或LDHA表达显著逆转了miR-142-3p过表达对T24细胞的活性和有氧糖酵解的抑制作用（均P＜0.05）。结论miR-142-3p通过靶向CDK4和LDHA抑制BC细胞增殖和有氧糖酵解。     

人Bcl-6 3’UTR区报告质粒及其表达载体的构建和功能检测

目的通过构建bcl-6 基因野生型、突变体3’UTR区及其编码序列（CDS）,观察miR-127 对bcl-6 的直接靶向调控作用及
bcl-6表达载体回复miR-127抑制细胞周期和细胞生长的功能。方法利用PCR方法扩增bcl-6基因3’UTR区序列及其CDS,分
别构建在pcDNA3.0-Luc和pcDNA3.0-Flag载体上,在bcl-6基因3’UTR质粒基础上应用重组PCR方法构建miR-127结合位点
突变的突变体报告基因质粒,应用荧光素酶报告基因系统检测miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用,在肝癌细胞HepG2中检
测过表达及敲低miR-127引起bcl-6基因表达抑制后细胞周期和细胞生长的改变,同时应用表达载体回复bcl-6蛋白水平,检测
bcl-6在miR-127调控细胞周期和细胞生长中的必要性。结果构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确,bcl-6 3’UTR
野生型和突变体报告质粒与miR-127共转293T细胞和HepG2细胞后荧光素酶报告基因检测显示miR-127明显降低野生型报
告质粒的活性,但对突变体活性没有影响,miR-127可引起HepG2细胞G2/M期阻滞并抑制细胞生长,bcl-6可以逆转miR-127
对细胞周期和细胞生长的影响。结论成功构建bcl-6基因3’UTR区野生型、突变体报告质粒和bcl-6基因的表达载体,荧光素酶
报告基因和回复实验证实均具有生物学功能。
     

山茶花提取物抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探究山茶花提取物通过调控miR-526b-3p的表达抑制磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 收集对数期SW1088细胞,用浓度为30、60、120 mg/L的山茶花提取物处理细胞,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,以正常培养SW1088细胞作为对照组;按照脂质体法将miR-NC、miR-526b-3p转染至SW1088细胞中分别记为miR-NC组、miR-526b-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-526b-3p转染至SW1088细胞中,并加入高剂量山茶花提取物分别记为anti-miR-NC+高剂量组、anti-miR-526b-3p+高剂量组。MTT、Transwell分别检测细胞增殖活性和细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、磷酸化的PI3K（p-PI3K）、磷酸化的AKT（p-AKT）蛋白表达水平;qRT-PCR检测miR-526b-3p相对表达量。结果 山茶花提取物或过表达miR-526b-3p可降低胶质瘤细胞SW1088增殖活性,同时降低细胞迁移数量、侵袭数量,以及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平,增加miR-526b-3p相对表达量。此外,高剂量组可降低SW1088细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白水平。抑制miR-526b-3p可减弱山茶花提取物对胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭以及PI3K/AKT信号通路的影响。结论 山茶花提取物可能通过调控miR-526b-3p/PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭