中国流行株HIV—1gag和hIL—2／hIL—6核酸疫苗构建与实验免疫研究

目的 探讨中国流行株ＨＩＶ－１ｇａｇ与ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６共表达重组核酸疫苗闰的免疫效果。方法 以核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体,构建重组核酸疫苗质料ｐＩＲＥＳ１－ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－ｇａｇ－ｈＩＬ－２、ｐＩＲＥＳ１－ｇａｇ－ｈＩＬ－６,通过间接免疫荧光试验、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ｇａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,进行淋巴细胞转化试验、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测,结果 构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖、诱导特异性ＣＴＬ反应,当和ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６共表达时免疫效果更加显著。讨论 与Ｇａｇ蛋白共表达的ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gp120基因在大肠杆菌中的高效表达

目的提高人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）包膜糖蛋白ｇｐ１２０基因在原核系统中的表达量。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增出５６０ｂｐ的ＨＩＶ－１ＬＡＶ株ｇｐ１２０Ｎ端基因片段，经ＥｃｏＲⅠ及ＳａｌⅠ酶切后插入高效表达载体ｐＥＴ２８ａ，得到重组质粒ｐＥＴ１２０，并转化表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导高效表达出ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因片段。结果间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验表明，表达产物具有良好的抗原性及特异性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析结果表明，ｇｐ１２０表达量占总菌体蛋白的５０％。结论在原核系统中高效表达了ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gp120基因在大肠杆？…

目的 提高人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）包膜糖蛋白ｇｐ１２０基因在原核中的表达量。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增出５６０ｂｐ的ＨＩＶ－１ＬＡＶ株ｇｐ１２０Ｎ端基因片段，经ＥｃｏＲⅠ及ＳａｌⅠ酶切后插入高效表达载体ＰＥＴ２８ａ得到重组质粒ｐＥＴ／１２０，并转化表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导高效表达出ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因片段。结果 间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒ     

含人PDGF—B链基因不同上游序列报告基因的构建和表达

本研究构建了含人ＰＤＧＦＢ链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因ｐＳＩＳ－１７５８／＋４３Ｌｕｃ和ｐＳＩＳ－４０２／＋４３Ｌｕｃ，经与ｐＳＶβＧａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＣｏｎｔｒｏｌＶｅｃｔｏｒ共转染血管内皮细胞后，测定了基础水平和ＴＮＦα作用下细胞裂解液中的荧光素酶和β半乳糖苷酶活性。结果表明：在ＴＮＦα作用下，ＰＤＧＦＢ链基因上游序列上调内皮细胞荧光素酶的表达，其主要调控区可能位于－１７５８／－４０３ｂｐ之间。     

重组HIV-1腺病毒伴随病毒的构建及表达

目的 构建带有ＨＩＶ－１ ｇａｇ或ｇｐ１２０基因的重组腺病毒伴随病毒ＡＡＶ－ＨＩＶ ｇａｐ或ＡＡＶ－ＨＩＶ ｇｐ１２０。方法 共转染法获取重组ＡＡＶ－ＨＩＶ;免疫酶法检测病毒滴度。结果 测定制备的重组腺病毒伴随病毒ＡＡＶｇａｇ４２,ＡＡＶＧＰ４２,ＡＡＶｇｒＲｊ６,病毒滴度在１０＾４～１０＾５范围。结论 构建了带有ｇａｇ和ｇｐ１２０基因的重组ＡＡＶ－ＨＩＶ,可以感染真核细胞并有较高的表达,可以用于做靶细胞,为发展新型的ＨＩＶ－１重组ＡＡＶ病毒载体活疫苗打下基础。     

共表达HIV-1与IL-6核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫原性的研究

目前我国ＡＩＤＳ的流行已进入快速增长期 ,因此应用现代生物技术研制新型ＡＩＤＳ疫苗 ,改进早期开发疫苗的缺陷 ,提高其质量是当前的迫切任务。本研究利用分子生物学方法在真核表达载体基础上构建ＨＩＶ结构基因与细胞因子ＩＬ 6基因共表达重组质粒作为核酸疫苗 ,进行小鼠免疫试验 ,探讨核酸疫苗对机体细胞免疫反应能力及细胞因子ＩＬ 6作为免疫佐剂的效果。构建表达中国流行株ＨＩＶ 1Ｂ亚型ｇｐ12 0基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ 1Ｂ亚型ｇｐ12 0基因与ＩＬ 6基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＬ 6 ,检测其在哺乳动物细胞…     

α—干扰素对正常与甲亢甲状腺细胞生成c—AMP的调节作用

采用甲状腺细胞单层培养及标记免疫分析法，对比研究α－干扰素（ＩＦＮ－α）对正常与Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺细胞生成ｃＡＭＰ的影响，结果显示：（１）基础状态下，１０＾－３、１０＾－１和１０ｕ／ｍｌ的ＩＦＮ－α可刺激正常甲状腺细胞产生ＣＡＭＰ，刺激强度随ＩＦＮ－α浓度的增大而减弱，当试验剂量达１０＾３ｕ／ｍｌ时，ＣＡＭＰ的生成量与无刺激的对照组比较无统计学差异，此浓度区间的ＩＦＮ－α对ＧＤ甲状腺细胞     

IL—2基因直接转移促进CDR^＋缺损小鼠免疫功能的恢复

探讨ＩＬ－２基因直接转移治疗小鼠ＣＤ４缺陷的可能性。方法 ｐＣＩ－ｈＩＬ－２质粒ＤＮＡ直接注入ＣＤ４缺陷小鼠大腿肌肉内。用免疫组法检测ｈＩＬ－２蛋白的表达，同时测定小鼠的免疫功能。结果 ｐＣＩ－ＩＬ－２质粒ＤＮＡ可在注射部位肌纤维内表达ＩＬ－２蛋白。ＣＤ４缺陷小鼠脾细胞中ＣＤ＾＋４Ｔ细胞增多，脾细胞对有丝分裂素ＣｏｎＡ增殖反应明显增强。     

HSV—1 SM44株糖蛋白D基因真核表达载体的构建及其免？…

目的 构建ＨＳＶ－１型ＳＭ４４株糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的真核表达载体,并用此重组质粒直接免疫小鼠,探讨ＨＳＶ－１ ｇＤ基因作为基因疫苗的可能性。方法 从ＨＳＶ－１基因组中扩增ｇＤ的全编码基因,克隆入载体ｐＵＣ１９中,测序鉴定后转入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）。所得重组质粒ｐｃＤ－ＮＡ－ｇＤ以电穿孔法转染ＣＨＯ细胞,并以荧光染色法鉴定表达效果。用ｐｃＤＮＡ－ｇＤ免疫小鼠,ＥＬＩＳＡ法检测基因免疫     

α—2b干扰素治疗不同基因型肝疗效与免疫指标的关系

根据Ｏｋａｍｏｔｏ基因分型法对２８例丙肝患者的病毒基因进行了分型，１８例为ＨＣＶ－Ⅱ型，１０例为ＨＣＶ－Ⅱ型，重点研究了α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅱ型患者和ＨＣＶ－Ⅱ型患者免疫功能的不同改变，在α－２ｂＩＦＮ治疗前，ＨＣＶ－Ⅱ型患者和ＨＣＶ－Ⅱ型患者之间ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＣＤ４百分比，ＣＤ８百分比及ＣＤ４／ＣＤ８比值６项指标无明显差别，α－２ｂＩＦＮ治疗８ｗ时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４／ＣＤ８     

用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV—2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白g

目的 用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统在昆虫细胞Ｓｆ９中表达ＨＩＶ－２外膜糖蛋白ｇｐ１０５跨膜糖蛋白ｇｐ３６,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将ＨＩＶ－２外膜蛋白ｇｐ１０５和跨膜蛋白ｇｐ３６全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＴＨａ和ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＴＨｂ中我角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＨＴａ－ｐｇ１０５和ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＨＴｂ－ｇｐ３６,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,并在昆虫细胞Ｓｆ９中表达ＨＩＶ－２的ｇｐ１０５和ｇｐ３６。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明,ｐｇ１０５基因表达产物为－６６０００ｕ糖蛋白,ｐｇ３６基因则表达－４１０００ｕ糖蛋白,与天然产物一致。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示：     

5‘上游序列对TNFα诱导内皮细胞血小板源生长因子—B链基因…

目的和方法：为探讨人血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）－Ｂ链基因５‘上游序列在ＴＮＦα诱导内皮细胞该基因转录中的调控作用,本研究将构建的一系列含人ＰＤＧＦ－Ｂ链基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒,与内参照质粒ｐＳＶ－β－Ｇａｌ共转染培养的人脐静脉内皮细胞,分别检测了不同浓度和不同持续时间ＴＮＦα作用下转染内皮细胞荧光素酶比活性,观察了５’上游序列的定向删切对ＴＮＦα诱导内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链基因转录的     

CD8T细胞转换成能产生TH2细胞因子并辅助B细胞的非溶细胞CD8—CD4—…

ＣＤ８＋Ｔ细胞是抵抗病毒和胞内寄生茵感染的主要防御机构。其干扰－ｒ（ＩＦＮ－ｒ）产生能力以及其溶细胞活性是对这些病原体的免疫应答的关键性因素。在ＩＬ－４存在的情况下，小鼠的成熟ＣＤ８＋Ｔ细胞性并且不产ＩＦＮ－ｒ的ＣＤ８＾－ＣＤ４＾－细胞群。可是，这些ＣＤ８＾－细胞能产生大量的ＩＬ－４，ＩＬ－５和ＩＬ－１０，并能辅助激活静止的Ｂ细胞。因而，ＣＤ８效应机能机能是多样化的。     

人源性抗HIV—1 V3环噬菌体抗体的基因克隆与序列分析

以ＨＩＶ－１ ｇｐ１２０Ｖ３环的合成环肽为抗原,从人的噬菌体抗体组合文库中,筛选出与ＨＩＶ－１ Ｖ３肽具有结合活性的人源性噬菌体抗体,用ＥＬＩＳＡ测定其活性,竞争抑制实验证实了该噬菌体抗体的特异性。序列分析表明,重链基因的ＩｇＧ１亚类,可变区属ＶＨ Ｉ亚组,与胚系基因ＤＰ－８８的同源性最高。Ｄ区为Ｄ３－３,Ｊ区为ＪＨ５,轻链为ｋ亚型,可变区属ＶＬ ＩＶ亚群,Ｄ区为ＤＰＫ２２,Ｊ链为ＪＫ４胚系。     

抗人免疫缺陷病毒1型gp120人源单链抗体的表达

目的研究人源抗人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）ｇｐ１２０单链抗体（ＳｃＦｖ）。方法以人工合成的ＨＩＶ－ｌｇｐ１２０Ｖ３环多肽为抗原，利用噬菌体抗体库技术，筛选含有抗－ｇｐ１２０ＳｃＦｖ基因的噬菌体，提取质粒，转化大肠杆菌ＨＢ２１５１，表达可溶性ＳｃＦｖ。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，表达产物分子量为２８ｋＤ左右，且具有ｃ－ｍｙｃ活性；ＥＬＩＳＡ和Ｄｏｔｂｌｏｔ结果表明，可溶性ＳｃＦｖ具有较好的抗原结合活性和较强的特异性；竞争性ＥＬＩＳＡ实验结果进一步证明表达产物的特异抗－ｇｐ１２０活性。结论该技术便捷有效，可大量获得人源抗ＨＩＶ抗体片段，为进一步研究抗ＨＩＶ抗体的生物活性和ＨＩＶ感染诊治打下基础     

丙型肝炎病毒DNA核酸免疫的初步探讨

目的：探索ＨＣＶ－ＤＮＡ核酸免疫效应。方法：将构建的重组体ｐＣＤ－ＨＣＶｓ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用ＥＬＩＳＡ和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测了免疫鼠血清抗体、脾细胞和ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原的增殖反应。结果：重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１、ｐＣＤ－ＨＣＶ２和ｐＣＤ－ＨＣＶ３均可诱导小鼠（ｎ＝６）产生抗体（０．６６５￣０．７０７,ＯＤ值）和脾细胞对ＨＣＶ抗原增殖反应（ｎ＝６,ＳＩ为３．８９￣４．４７）,但各重组体间的     

α-2b干扰素治疗不同基因型丙肝疗效与免疫指标的关系

根据Ｏｋａｍｏｔｏ基因分型法对２８例丙肝患者的病毒基因进行了分型，１８例为ＨＣＶ－Ⅱ型，１０例为ＨＣＶ－Ⅲ型。重点研究了α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅱ型患者和ＨＣＶ－Ⅲ型患者免疫功能的不同改变：在α－２ｂＩＦＮ治疗前，ＨＣＶ－Ⅱ型患者和ＨＣＶ－Ⅲ型患者之间ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＣＤ４百分比、ＣＤ８百分比及ＣＤ４／ＣＤ８比值６项指标无明显差别。α－２ｂＩＦＮ治疗８ｗ时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４／ＣＤ８比值明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者ＣＤ４／ＣＤ８比值。α－２ｂＩＦＮ治疗１个疗程（１２ｗ）时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４百分比，ＣＤ４／ＣＤ８比值明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者。α－２ｂＩＦＮ治疗１个疗程后第４周（１６ｗ）时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４百分比，ＣＤ４／ＣＤ８比值仍明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者，但在整个治疗过程中，ＨＣＶ－Ⅲ型和Ⅱ型患者ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ和ＣＤ８百分比４项指标改变无显著差异。α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅲ型患者，其ＣＤ４百分比，ＣＤ４／ＣＤ８比值改变明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者。这可能是α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅲ型患者疗效明显好于ＨＣＶ－Ⅱ型患者重要原因之一。     

IL-2基因直接转移促进CD4+缺损小鼠免疫功能的恢复

目的探讨ＩＬ－２基因直接转移治疗小鼠ＣＤ４缺陷的可能性。方法ｐＣＩ－ｈＩＬ－２质粒ＤＮＡ直接注入ＣＤ４缺陷小鼠大腿肌肉内。用免疫组化法检测ｈＩＬ－２蛋白的表达，同时测定小鼠的免疫功能。结果ｐＣＩ－ＩＬ－２质粒ＤＮＡ可在注射部位肌纤维内表达ＩＬ－２蛋白。ＣＤ４缺陷小鼠脾细胞中ＣＤ４＋Ｔ细胞增多，脾细胞对有丝分裂素ＣｏｎＡ增殖反应明显增强。对ｓＲＢＣ的免疫应答无论是体液免疫或细胞免疫应答均高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论ｐＣＩ－ＩＬ－２质粒ＤＮＡ直接肌内注射可部分纠正ＣＤ４缺陷小鼠的免疫功能。     

体外单核巨噬细胞诱生IFN-α的因素分析

观察了Ｍ－ＣＳＦ预处理、ＩＦＮ－γ预处理、长程培养及新城疫病毒（ｎｅｗ－ｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）刺激４个因素对正常人外周血单核细胞体外产生ＩＦＮ－α水平的影响,采用生物活性法检测ＩＦＮ－α。结果表明：单独使用Ｍ－ＣＳＦ不能诱生ＩＦＮ－α;单独使用ＩＦＮ－γ或单独使用ＮＤＶ均只诱生较低水平ＩＦＮ－α,只有Ｍ－ＣＳＦ＋ＩＦＮ－γ＋ＮＤＶ或ＩＦＮ－γ＋ＮＤＶ联合使用方可诱生较高水平的ＩＦＮ－α,并且发现Ｍο、－Ｍφ长程培养也是向高产发展的一个重要因素。结论：人血Ｍο、－Ｍφ在适当体外培养条件下,可以诱发较高水平的ＩＦＮ－α     

针对HIV—1进入细胞过程的抑制研究进展

ＨＩＶ１进入宿主细胞的过程可简单归纳为：ＨＩＶ１首先通过其囊膜糖蛋白复合物ｇｐ１２０ｇｐ４１中的ｇｐ１２０与靶细胞上的受体ＣＤ４结合，使得ｇｐ１２０的构象发生改变，并继而与靶细胞上的辅受体ＣＸＣＲ４或ＣＣＲ５结合，结果导致ｇｐ４１的构型改变，暴露出其融合肽并插入到宿主细胞膜，从而启动病毒膜与细胞膜的融合，完成病毒进入宿主细胞的感染过程。１针对ＨＩＶ１ｇｐ１２０与ＣＤ４结合反应的抑制剂１．１可溶性ＣＤ４片段及其衍生物早期研究曾证明重组表达的可溶性ＣＤ４片段对体外培养的ＨＩＶ１具有明显的抑制活性，在…