野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建、表达及纯化

背景与目的 nm23-H1基因是一个肿瘤转移抑制基因,但关于nm23-H1基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚.该实验目的就是构建nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法 通过PCR方法扩增野生型和突变型nm23-H1目的片断,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测.结果 通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体序列正确,编码框正确.转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,且均为可溶性蛋白,Western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-H1蛋白分子量为20 kDa,与预计值相符.结论 成功构建pET28a-nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,所表达蛋白可用于下一步实验研究.     

乳腺癌中nm23-H1基因的表达研究

 目的 探讨乳腺癌ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达情况与各临床病理参数之间的关系。方法应用免疫组化 ＳＰ法，研究了１５６例乳腺癌中 ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达。结果 ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与病人年龄，组织学类型无明显关系（Ｐ＞０．０５），而与淋巴结转移，临床分期及术后生存期有明显关系（Ｐ＜０．０５）。结论 检则ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达可作为乳腺癌研究中的重要指标，对乳腺癌的预后判定上有重要意义。     

nm23-H1 mRNA在胃癌表达的研究

目的探索nm23-H1基因mRNA的表达与胃癌发生、发展、组织学类型、转移的相关性.方法39例胃癌组织标本及38例正常胃黏膜标本通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测nm23-H1mRNA表达.结果胃癌组织nm23-H1mRNA表达(33.3%)与正常黏膜(28.9%)无显著性差异;nm23-H1mRNA表达未显示与胃癌淋巴结转移或远处转移的相关性.结论胃癌组织与正常黏膜均存在nm23-H1表达,nm23-H1基因可能没有起到抑制胃癌转移的作用.     

胰腺癌组织nm23-H1和PCNA的表达和其临床意义

目的研究胰腺癌组织中 nm23-H1 和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达与生物学行为及预后之间的关系.方法用免疫组织化学方法(SABC)对39例胰腺导管癌nm23-H1基因和PCNA的表达进行检测.结果39例胰腺导管癌中nm23-H1基因蛋白的表达率为66.67%,PCNA平均增殖指数为27.5±16.4;nm23-H1的表达与组织学分级有关,P＜0.05,而与临床分期关系不大,P＞0.05;PCNA增殖指数与组织学分级和临床分期有关,P＜0.01;nm23-H1和PCNA与淋巴结转移呈正相关;nm23-H1的高表达与肿瘤细胞的高增殖状态有关,P＜0.01;nm23-Hl和PCNA的高表达均与患者的预后差密切相关,P＜0.05和P＜0.01.结论nm23-H1和PCNA是反映胰腺癌生物学行为和预后的重要指标.     

靶向mrp1基因shRNA表达载体构建

目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体.方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体.经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果.结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体.结论:为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础.     

靶向mrp1基因shRNA表达载体构建

目的：构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法：根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2．1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果：成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体。结论：为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础。     

宫颈癌nm23-H1和MMP-9蛋白的表达及其临床意义

目的探讨宫颈癌组织中nm23-H1和MMP-9蛋白的表达及临床意义.方法采用免疫组化S-P法分析55例Ⅰ、Ⅱ期术后宫颈癌组织中nm23-H1和MMP-9蛋白的表达情况.结果nm23-H1和MMP-9在伴有淋巴结转移宫颈癌中的阳性表达率为27.3%和90.9%,无淋巴结转移为59.1%和61.4%,两组间差异有显著意义,P=0.041,P=0.032;nm23-H1和MMP-9表达与病理类型、组织分级和临床分期无明显相关.结论检测宫颈癌转移相关基因表达并分析其表达的相互关系有助于判断宫颈癌的转移潜能及指导术后干预治疗.     

非黑素性皮肤癌中nm23-H1的表达和意义

目的　探讨nm2 3 H1在非黑素性皮肤癌的表达和意义。方法　用单克隆抗体免疫组织化学S P法检测在非黑素性皮肤癌 46例 ,nm2 3 H1阳性细胞数 >3 0 %的癌细胞为过度表达。结果　正常皮肤、基底细胞癌、无转移及有转移的鳞状细胞癌的阳性表达率分别为 10 0 %、81 8%、65 %及 2 1% ,其差别有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　nm2 3 H1基因在非黑素性皮肤癌的浸润及淋巴结转移中起重要作用。     

宫颈癌nm23-H1和MMP-9蛋白的表达及其临床意义

目的：探讨宫颈癌组织中nm23-H1和MMP-9蛋白的表达及临床意义。方法：采用免疫组化S-P法分析55例Ⅰ、Ⅱ期术后宫颈癌组织中nm23-H1和MMP-9蛋白的表达情况。结果：nm23-H1和MMP-9在伴有淋巴结转移宫颈癌中的阳性表达率为27．3％和90．9％，无淋巴结转移为59．1％和61．4％，两组间差异有显著意义，P=0．041，P=0．032；nm23-H1和MMP-9表达与病理类型、组织分级和临床分期无明显相关。结论：检测宫颈癌转移相关基因表达并分析其表达的相互关系有助于判断宫颈癌的转移潜能及指导术后干预治疗。     

膀胱癌中nm23-H1基因突变及表达的意义

目的：探讨ｎｍ２３－Ｈ１基因在膀胱癌中突变及表达的意义。方法：应用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）方法检测ｎｍ２３－Ｈ１基因在２５例膀胱癌组织及１５例对照组织中突变和表达情况。结果：对照粘膜中未检测出ｎｍ２３－Ｈ１基因突变,而在２５例膀胱癌组织中发现６例出现ＰＣＲ产物单链泳动状态异常,异常率为２４％。癌组织和对照组织均有ｎｍ２３－Ｈ１基因ｍＲＮＡ的表达,８８     

nm23-H1表达预测大肠癌转移的价值研究

 目的　大肠癌预后取决于是否存在肿瘤转移,目前尚无肯定的观测大肠癌细胞恶性潜能的生物学指标。本研究目的在于探讨nm23-H1作为预测大肠癌转移指标的潜在价值。方法　采用免疫组织化学链霉菌亲合物素蛋白—生物素酶标(SP)方法对58例存档大肠癌标本进行nm23-H1蛋白表达检测,用SSPS统计软件包对nm-H1表达与临床病理参数的关系进行分析。结果　正常大肠粘膜和大肠腺瘤nm23呈阳性表达,62.1%大肠癌组织阳性表达。nm23表达与肿瘤分级、淋巴结及肝转移负相关(P值分别为0.0100,0.2087,0.00376)。nm23阳性表达的大肠癌患者预后好(P=0.0002)。结论　nm23-H1是预测大肠癌细胞转移潜能和预后的敏感指标。     

CD44v6和nm23-H1在肺癌中的表达

[目的]研究CD44v6和nm23-H1蛋白在肺癌中的表达.[方法]对78例原发性肺癌采用S-P法进行免疫组化研究.[结果]CD44v6和nm23-H1蛋白表达在不同的肺癌临床分期、病理分化程度和淋巴结转移状况下均有显著差异,两者与肺癌的性别、年龄、肿块大小和病理类型均无关.[结论]CD44v6和nm23-H1检测可作为预测肿瘤转移潜能及预后的参考指标.     

鼻咽癌组织中nm23-H1和survivin蛋白表达及其临床意义

目的探讨nm23H1和survivin基因蛋白表达与鼻咽癌（NPC）预后的相关性，方法对115例NPC放疗前活检标本，应用免疫组织化学技术检测nm23-H1和surivin基因蛋白在NPC组织中的表达情况，并分析两基因的表达与NPC分期、放疗敏感性、生存率、转移及复发之间的关系。结果NPC组织中nm23-H1和survivin蛋白阳性表达率分别为47．8％和68．7％。NPC分期、淋巴结转移、生存率及远处转移与nm23-H1蛋白低表达有密切关系，而survivin的高表达则与鼻咽癌的颈淋巴结转移、放疗敏感性、生仔率及复发有密切关系。nm23-H1蛋白表达与survivin表达呈负相关（P〈0．05）。结论nm23-H1蛋白低表达和survivin高表达对判断病变进展、预测放疗敏感性、生存率及转移和复发有重要参考价值。     

PCNA和nm23-H1在原发性肝癌中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和抗癌基因nm23-H1蛋白产物与原发性肝癌的关系.方法用LSAB免疫组化法对41例原发性肝癌组织PCNA和nm23-H1蛋白产物进行检测.结果肿瘤组织的分化程度愈低,PCNA表达愈强,Ⅱ级以上的肿瘤表达强度100%.nm23-H1则相反,Ⅰ级66%阳性,Ⅱ级以上为14.6%.结论PCNA的表达强度可作为原发性肝癌的分级指标之一.nm23-H1的表达有助于了解肝癌的生物学行为和判断预后.     

PCNA和nm23-H1在原发性肝癌中的表达及意义

目的：探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和抗癌基因nm23—H1蛋白产物与原发性肝癌的关系。方法：用LSAB免疫组化法对41例原发性肝癌组织PCNA和nm23—H，蛋白产物进行检测。结果：肿瘤组织的分化程度愈低，PCNA表达愈强，Ⅱ级以上的肿瘤表达强度100％。nm23-H1则相反，Ⅰ级66％阳性，Ⅱ级以上为14．6％。结论：PCNA的表达强度可作为原发性肝癌的分级指标之—。nm23—H，的表达有助于了解肝癌的生物学行为和判断预后。     

VEGF和nm23-H1在甲状腺肿瘤中的表达及意义

目的 探讨VEGF和nm23-H1在甲状腺肿瘤中的表达意义。方法 用免疫组化S-P法检测40例甲状腺良性病变、83例甲状腺癌中VEGF和nm23-H1的表达。结果 VEGF在正常甲状腺组织呈阴性表达,在甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺乳头状癌、滤泡癌、未分化癌表达阳性率分别为20.0％、26.7％、46.0％、60.0％和72.7％,与组织学类型密切相关(P<0.001);nm23-H1表达阳性率分别为80.0％、73.3％、61.5％、60.0％、45.6％,与组织学类型无相关性(P>0.05)。结论 VEGF是鉴别甲状腺良恶性肿瘤及判断其生物学行为的有效指标。     

食管癌组织中nm23-H1蛋白表达及其临床意义

为探讨ｎｍ２３Ｈ１蛋白表达在食管癌中的临床意义，应用免疫组化ＳＰ法研究了６１例食管癌组织标本中ｎｍ２３Ｈ１蛋白表达与食管癌临床病理特征及预后的关系。ｎｍ２３Ｈ１蛋白阳性表达率为５４．１％（３３／６１），表达与性别、年龄、肿瘤部位、大小、病理类型及浸润程度无关。食管癌旁无淋巴结转移组ｎｍ２３Ｈ１阳性表达率为６１．５％（３２／５２），显著高于有转移组（１１．１％，１／９）。此外与术后肿瘤转移、复发有关，ｎｍ２３Ｈ１阳性表达组的术后生存时间明显长于ｎｍ２３Ｈ１阴性表达组（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ｎｍ２３Ｈ１蛋白高表达对食管癌转移有一定的抑制作用，检测其表达有助于对食管癌生物学行为的了解和预后的判断。