缓释骨形态发生蛋白-2听泡内植入对豚鼠内耳功能的影响

目的观察缓释骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2,BMP-2）植入豚鼠听泡内的成骨诱导情况及对耳蜗功能的影响。方法制备猪小柱状脱细胞松质骨,与BMP-2复合。选择20只豚鼠,耳后进路进入听泡,左耳植入复合BMP-2的脱细胞松质骨,右耳植入单纯脱细胞松质骨作为对照。分别在植入前、植入即刻、植入后3个月对动物进行ABR测试。并在植入3个月后行组织学及耳蜗基底膜铺片硝酸银染色观察,了解BMP-2诱导成骨情况及对听泡、耳蜗大体结构和毛细胞形态的影响。结果术后动物健康状况良好。植入后即刻,实验耳及对照耳ABR反应阈略有下降,3个月时恢复正常。植入3个月后,耳蜗及听泡大体形态正常,组织学检查可见含BMP-2脱细胞松质骨孔隙内有新骨形成,未见耳蜗及听泡骨质异常增生,镫骨底板关节无固定;硝酸银染色示毛细胞形态正常,无毛细胞缺失。结论缓释BMP-2听泡内植入可诱导新生骨形成,但对动物听泡大体形态无影响,不会引起局部骨质异常增生,对动物听功能无影响,有可能应用于听骨链缺损修复重建。     

原位组织工程构建兔听小骨的研究

目的将猪小柱状脱细胞松质骨与骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic proteins 2，BMP-2）复合制成听骨赝复物，植入兔听泡内，观察其原位成骨状况。方法制备猪小柱状脱细胞松质骨，与BMP-2复合作为听骨赝复物。选择5只新西兰大耳白兔，采用耳后进路，听泡后外侧骨壁钻孔，清除听泡内部分黏膜组织，一侧植入复合BMP-2听骨赝复物，对侧耳植入单纯脱细胞骨小柱作为对照。术后3个月，通过大体及病理切片观察听骨赝复物成骨情况。结果术后5只兔健康状况良好。术后3个月，植入的复合BMP-2脱细胞松质骨与听泡骨壁接触部位结合紧密，表面被再生黏膜覆盖，病理学检查发现有新骨形成，而对照耳仅有黏膜覆盖，无新骨形成。结论复合BMP-2的猪脱细胞松质骨可于兔听泡内形成新生骨组织，有可能用于听骨链缺损重建。     

脱细胞骨微管用于构建组织工程化听骨赝复物的可行性

目的观察脱细胞骨微管用于制备组织工程化听骨的可能性。方法制备脱细胞骨微管,观察其组织相容性及生物力学变化,并作为含复合骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)胶原海绵载体,植入动物中耳空腔,进行异位诱导成骨观察。结果脱细胞骨微管具有良好的生物相容性,其生物力学性能无显著变化。负载含BMP-2胶原海绵后,可以在中耳腔内诱导形成新生骨组织。结论脱细胞骨微管负载含BMP-2胶原海绵可用于构建组织工程化听骨赝复物。     

头低位模拟失重状态对豚鼠耳蜗听功能与超微结构的影响

目的探讨头低位模拟失重对豚鼠耳蜗听功能与超微结构的影响。方法 22只豚鼠随机分为实验组16只和对照组6只。实验组采用头低位模拟失重法,身体纵轴与水平线呈-30°,于实验前、失重5天后即刻及脱离失重3天后分别测试豚鼠听性脑干反应(ABR),然后取耳蜗行扫描电镜和透射电镜观察。对照组不作任何处理。结果对照组豚鼠ABR反应阈为23.48±6.04dB SPL,实验组实验前为24.22±4.04,模拟失重5天后即刻ABR反应阈为41.61±7.01dB SPL,与实验前和对照组比较差异有显著统计学意义(P<0.05);脱离失重3天后实验组ABR反应阈为27.50±3.54dB SPL,与实验前相比差异无显著统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察发现失重5天后即刻豚鼠耳蜗内、外毛细胞散在缺失,纤毛融合、倒伏;透射电镜检查见内、外毛细胞细胞局部空泡形成,脱离失重3天后上述病变均有明显恢复,但未完全恢复正常。结论模拟失重5天即可以导致豚鼠耳蜗听觉功能和超微结构的损伤,脱离失重3天后听功能可以恢复正常,但其超微结构还没有完全恢复正常。     

内耳色素对爆震性听损伤保护作用的实验观察

目的　探讨内耳色素与爆震性听损伤的关系。方法　利用耳蜗铺片、石蜡切片、透射电镜及扫描电镜观察爆震前后白化豚鼠和杂色豚鼠耳蜗形态结构的变化 ,并对爆震前后白化豚鼠和杂色豚鼠听性脑干反应(ABR)反应阈进行测定。结果　白化豚鼠的耳蜗形态损伤和听功能损伤均较杂色豚鼠严重。结论　爆震后白化豚鼠耳蜗形态学损伤及ABR反应阈的改变均较杂色豚鼠明显。提示内耳血管纹色素颗粒与爆震性内耳损伤有关 ,机理可能为色素颗粒参与调节爆震后内淋巴液中钙离子浓度的平衡及参与清除爆震后耳蜗产生的氧自由基     

西地那非对豚鼠噪声性听觉损伤阈移的影响

目的 探讨西地那非(sildenafil)对豚鼠噪声性听觉损伤阈移的影响.方法 将豚鼠按随机数字表法分为对照组、噪声暴露组和西地那非给药组,每组10只.西地那非组及噪声组豚鼠在白噪声(A计权声压级110 dB)暴露1周后分别腹腔注射西地那非10 mg/(kg·d)及生理盐水4mL/(kg·d),连续给药4周.分别测试噪声暴露前1日、噪声暴露后1、2及4周听性脑干反应(ABR)阈值,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态变化.结果 噪声暴露1后,噪声暴露组豚鼠ABR阈值(声压级)平均提高19.1 dB,随着时间推移,阈移逐渐加大,暴露后4周,阈值平均提高22.0 dB;西地那非组噪声暴露后ABR阈值提高19.8 dB,给药后阈移逐渐减小,给药后4周,阈值仅平均提高4.8 dB.西地那非组与噪声暴露组相比,除噪声暴露结束后这一时间点以外,其余给药后各时间点ABR阈值差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).扫描电镜显示,噪声组豚鼠耳蜗内、外毛细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而西地那非组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象.结论 西地那非能够减轻噪声对豚鼠耳蜗毛细胞的损害,降低噪声性听觉损伤引起的ABR阈值升高.     

葛根对老年豚鼠听功能的保护作用

目的 观察葛根是否对老年豚鼠听功能具有保护作用.方法 选取16只28～30月龄豚鼠,随机分为用药组和对照组,每组8只.用药组豚鼠皮下注射葛根提取液2 g·kg~(-1)·d~(-1),对照组使用等量生理盐水注射,共8周.观察两组豚鼠用药前及用药结束后ABR反应阈的变化;应用基底膜荧光染色铺片比较两组动物基底膜的变化.结果 注射葛根后用药组ABR反应阈提高4.84±3.28 dB,较对照组(11.12±3.72 dB)明显减少(P<0.05),基底膜荧光染色铺片显示用药组毛细胞缺失数目较对照组减少.结论 葛根对老年豚鼠听功能具有保护作用.     

谷氨酸／天冬氨酸转运体抗体对豚鼠听性脑干反应及毛细胞形态的影响

目的 研究谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate--aspartate transporter,GLAST)抗体对豚鼠耳蜗听性脑干反应(ABR)和耳蜗毛细胞形态的影响.方法 健康豚鼠20只随机分为实验组和对照组,每组10只.实验组耳蜗鼓阶内灌注GLAST抗体,对照组灌注人工外淋巴液,观察两组术后3、6、9天ABR反应阈、耳蜗基底膜铺片和透射电镜的形态学改变.结果 实验组术后第3天ABR波形消失,术后第9天无恢复;对照组术后第3天8只动物ABR波形消失,术后第6天和第9天全部动物引出ABR波形,平均阈值分别为62.50±5.25、47.50±6.18dB SPL,差异有统计学意义(P<0.05).随着GLAST抗体灌注后时间延长,实验组内、外毛细胞及纤毛出现不同程度缺失,透射电镜显示内、外毛细胞及神经末梢胞浆、线粒体空化,细胞核染色质边集等凋亡早期征象.对照组的损伤较轻,与ABR阈值改变相一致.结论 耳蜗内GLAST抗体灌注后出现耳蜗毛细胞、神经末梢的损伤及ABR波形消失,提示GLAST抗体阻断耳蜗Corti器中的GLAST,导致谷氨酸的神经毒性表达.     

变压器噪声暴露对豚鼠旷场行为及听功能的影响

目的 探讨变压器噪声对豚鼠旷场行为及听功能的影响.方法 取32只健康成年(5～6月龄)豚鼠随机分为实验组和对照组,每组16只.实验组给予录制的变压器噪声(声压级范围40.8～55 dB SPL,频谱范围150～2 000 Hz)连续暴露28天,10小时/天(晚10点到早上8点),对照组在相同条件下饲养,无噪声暴露.在噪声暴露前1天、噪声暴露第28天记录实验组、对照组的旷场行为并对两组豚鼠进行DPOAE、ABR检测后,取耳蜗行常规耳蜗铺片和硝酸银染色,观察耳蜗毛细胞损害情况.结果 噪声暴露28天后,两组豚鼠旷场行为差异无统计学意义(P＞0.05);1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0kHz DPOAE反应幅值差异无统计学意义(P＞0.05).噪声暴露前1天及噪声暴露28天后实验组豚鼠的ABR反应阈分别为31.38±1.78、32.13±2.24 dB SPL,与对照组(分别为31.89±1.03和31.75±1.57 dB SPL)比较差异均无统计学意义(P＞0.05).噪声暴露28天后实验组豚鼠耳蜗外毛细胞形态基本正常,毛细胞缺失率(1.31％±0.52％)与对照组(0.85％±0.23％)比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 声压级范围为40.8～55 dB SPL、频谱范围为150～2 000 Hz的变压器噪声连续暴露28天(10小时/天)对成年豚鼠旷场行为及听功能无明显影响.     

急性化脓性中耳炎豚鼠耳蜗形态和功能改变

对3只因听泡置管导致急性化脓性中耳炎发作的豚鼠进行了脑干诱发电位（ABR）测试和耳蜗Corti氏器扫描电镜观察。发现3只豚鼠患耳Corti氏器均有程度不等损害，ABR阈分别提高45、60和30dB。提承急性中耳炎可引起内耳形态和功能变化。文中对引起损害的机制进行了讨论。     

水杨酸钠对爆震性聋治疗作用的实验研究

目的　探讨水杨酸钠(NaSA)对豚鼠爆震性聋的治疗效果及其作用机制。方法　豚鼠分为爆震组、爆震+NaSA组、NaSA组。每组动物12只。爆震动物暴露于平均压力峰值176.7dB(SPL);水杨酸钠为腹腔注射400mg/kg,每日一次。实验前和实验后第1d、3d、1周、2周、4周分别检测ABR阈值;扫描电镜观察毛细胞形态改变,耳蜗铺片计算毛细胞损伤数;测定耳蜗组织丙二醛(MDA)含量。结果　爆震组于爆震第1d、3d、1周、2周、4周的ABR阈移分别为46.75±13.56、38.0±12.4、35.5±10.67、41.5±12.57、33.75±8.42dB,爆震+NaSA组则分别为46.65±11.7、38.25±9.52、30.5±9.17、30.0±9.8、23.0±6.57dB,两组间于1周,2周,4周显著性差异(P＜0.05)。形态学改变与听阈改变一致,耳蜗铺片计算外毛细胞损失数,两组有显著性差异(P＜0.05)。耳蜗组织MDA检测,两组于2周,4周有显著性差异(P＜0.05)。单纯NaSA给药后24h内ABR阈值有暂时性升高,14h后基本恢复正常。结论　NaSA可部分减轻爆震所致的听力损失。可能因NaSA在一定程度上清除了爆震产生的过量的过氧化物,从而保护毛细胞,使听力得到部分恢复。     

成纤维细胞生长因子耳蜗内灌注防治爆震性聋的实验研究

选用豚鼠１９只，震前于圆窗龛放银球电极测复合动作电位（ＣＡＰ）反应阈，爆震后测ＣＡＰ，于耳蜗底回打孔，分别灌注酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ），４８小时后再测ＣＡＰ，处死动物做耳蜗琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）组化染色铺片。结果爆震后灌注ｂＦＧＦ、ａＦＧＦ两组动物４８小时ＣＡＰ平均阈值分别为８８．７ｄＢ和９３．２ｄＢ，而单纯打孔组和灌注外淋巴组ＣＡＰ平均阈值分别为１１     

The effect of Hath1 r-expression in of guinea pig cochlea at one month after noise damage

Objective To study effects of Adenovirus-mediated Hath1 expression in guinea pig cochlea at one month after exposure to intensive noise. Methods Normal hearing guinea pigs, weighing 250-300g, received exposure to 200 rounds of impulse noise at 170 dB sound pressure level (SPL). The virus vector was inoculated into the left cochlea 1 month after noise exposure. Animals were tested using ABR and prepared for morphological examinations includeing immunocytochemistry and SEM 4 weeks after vector inoculation. Results The adenovirus mediated report gene expressed in the damaged area. There were no significant differences between treated and control animal in ABR threshold and morphologic changes. No new hair cells appeared in the Hath1 reated animals. Conclusion Forced hath1 ver-expression in the cochlea 1 month after noise exposure does not lead to appearance of new hair cells.     

The effect of Hath1 over–expression in of guinea pig cochlea at one month after noise damage

ObjectiveTo study effects of Adenovirus–mediated Hath1 expression in guinea pig cochlea at one month after exposure to intensive noise.MethodsNormal hearing guinea pigs, weighing 250–300g, received exposure to 200 rounds of impulse noise at 170 dB sound pressure level (SPL). The virus vector was inoculated into the left cochlea 1 month after noise exposure. Animals were tested using ABR and prepared for morphological examinations includeing immunocytochemistry and SEM 4 weeks after vector inoculation.ResultsThe adenovirus mediated report gene expressed in the damaged area. There were no significant differences between treated and control animal in ABR threshold and morphologic changes. No new hair cells appeared in the Hath1 treated animals.ConclusionForced hath1 over–expression in the cochlea 1 month after noise exposure does not lead to appearance of new hair cells.     

Math1基因内耳导入后噪声性聋豚鼠听功能改变观察

目的观察Math1基因内耳导入对噪声性聋豚鼠听功能的影响,探讨Math1基因过表达对噪声损伤耳蜗的生物学效应,为内耳基因治疗提供实验基础和理论依据。方法经脉冲噪声致聋的豚鼠45只（各频率ABR阈值均≥95dB SPL）,雌雄不限,实验开始时体草250～300g。随机分为3组：Ad—Math1-EGFP组（30只）;Ad—EGFP组（5只）;空白组（10只）。各组豚鼠在基因转导后4周、8周分别测试双耳ABR。测试完毕后处死动物,观察听泡及耳蜗尤炎性病变者记录听阈结果。结果Math1导入后4周,导入耳各频率ABR阈值低于对照耳（右耳）,也低于Ad—EGFP组及空内组,平均达到85dBSPL。Math1导入后8周,导入耳各频率ABR阂值低于对照耳（右耳）,也低于Ad—EGFP组及空白组,与4周时比较,进一步好转,平均达到75dB SPL。结论Math1基因内耳导入可使噪声导致全聋的豚鼠听功能部分恢复,为噪声性聋的治疗打开了新的思路和手段。     

Effects of glucocorticoid receptor antagonist on CAPs threshold shift due to short-term sound exposure in guinea pigs

OBJECTIVE: The steroid drugs are used for the standard treatment of sudden sensorineural hearing loss. However, clinical results on the effect of glucocorticoids in acoustic trauma have not yet been understood well. The effects of glucocorticoid receptor (GR) antagonist, mifepristone, on the cochlea sensitivity loss due to short-term sound exposure were studied in the guinea pig. METHODS: Mifepristone (20 mg/kg) was injected subcutaneously immediately after the noise exposure to 4 kHz pure tone of 100 or 120 dB SPL for 10 min and also at 1 day and 3 days later. Seven days after the sound exposure, the compound action potentials (CAPs) of the cochlear nerve and the 2f(1)-f(2) distortion product oto-acoustic emissions (DPOAEs) were recorded. RESULTS: No significant CAP threshold losses were observed in either mifepristone or saline administration after the exposure at 100 dB SPL. After the exposure at 120 dB SPL, administration of mifepristone elevated the CAP threshold at 5-8 kHz significantly as compared with the saline administration. The DPOAE output shifts of both saline and mifepristone groups were similar to each other. CONCLUSION: Mifepristone may influence inner hair cells (IHCs) and afferent nerve fibers beneath the IHC without having influence on outer hair cells (OHCs). It is suggested that glucocorticoid plays an important role in the improvement of hearing impairment after loud sound exposure.     

缝隙连接阻断剂1-庚醇对豚鼠听觉的作用

目的：探讨缝隙连接在维持正常的听功能方面可能发挥的作用。方法：通过向豚鼠外淋巴中注入缝隙连接阻断剂1-庚醇（1-heptanol），然后检测给药前后豚鼠听性脑干诱发反应（ABR）阈值和潜伏期的改变，并借助透射电镜观察药物对豚鼠耳蜗中的缝隙连接结构的影响。结果：注射1-heptanol后，豚鼠ABR阈值显著提高，潜伏期延长（P〈0．01），并随时间推移呈动态升高趋势。同时，通过电镜可以观察到在豚鼠耳蜗中存在着大量的缝隙连接结构，其主要分布在毛细胞和其下的支持细胞间。1-heptanol可以使缝隙连接结构破坏，毛细胞水肿、变性。结论：缝隙连接阻断剂1-heptanol能明显影响豚鼠的听功能，缝隙连接结构在听觉形成过程中起着重要的作用。