bcl-xs增加鼻咽癌细胞对喜树碱诱导凋亡敏感性的实验研究

目的 :研究 bcl- xs 基因对喜树碱 (CPT)诱导鼻咽癌 CNE- 2 Z细胞凋亡的影响。方法 :利用脂质体L ipofect Amine将含有人 bcl- xs基因的重组真核表达质粒 pc DNA3xs导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE- 2 Z,G418筛选培养后 ,经 Western blot检测 bcl- xs的表达。以不含有 bcl- xs基因的 pc DNA3质粒转染 CNE- 2 Z作为对照细胞。喜树碱处理两种细胞一定时间后 ,通过激光流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 :Western blot检测证实获得稳定表达 bcl-xs的细胞 ,经过 0 .5μmol/L ,1.0μmol/L CPT处理 2 4小时后 ,激光流式细胞仪检测的凋亡峰值均高于对照细胞。结论 :bcl- xs能显著增加鼻咽癌 CNE- 2 Z细胞对喜树碱诱导凋亡的敏感性     

胆红素诱导神经细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响——胆红素对中枢神经细胞损伤机理的研究

目的　观察胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡及对其线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential,MMP)的影响 ,探讨高胆红素血症对中枢神经细胞损伤的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法　将胆红素 (0 0 2g/L)直接作用于体外培养的SH SY5Y细胞 ,在不同时间点通过倒置显微镜观察细胞形态的变化及存活情况 ;经Hoechst332 5 8染色后 ,在荧光显微镜下观察细胞核的形态变化 ;利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率 ;经罗丹明 12 3染色后 ,用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。结果　在 0 0 2g/L胆红素作用下 ,SH SY5Y细胞 2h后即可见较多细胞皱缩、变圆 ,4h可见有少数细胞飘起 ,细胞轮廓不清 ,6h可见大部分细胞飘起 ,并已开始崩解 ;染色质在胆红素作用 6h出现典型的凋亡样改变 ;细胞凋亡率随作用时间的延长明显增加 ,3h为 19 4 % ,4h为 76 4 % ,6h达到 79 0 % ;在胆红素作用 1h后反映线粒体膜电位相对荧光强度即由 (16 6± 1 5 5 6 )U下降到 (7 11± 0 70 1)U ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,并随作用时间的延长而进一步降低。结论　胆红素作用早期即可导致SH SY5Y细胞线粒体膜电位下降 ,既而发生凋亡 ,提示通过诱导听觉中枢神经元凋亡可能在高胆红素血症所致的听力损伤和听神经病发病中起重要作     

bcl—Xs增加鼻咽癌细胞对喜树碱诱导凋亡敏感性的实验研究

目的：研究bcl-Xs基因对喜树碱（CPT）诱导鼻咽癌CNE－2Z细胞凋亡的影响,。方法：利用脂质体LipofectAmine将含有人bcl-Xs基因的重组真核表达质粒pcDNA3x,导入入鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE－2Z,G418筛选培养后,经Western blot检测bcl-Xs的表达,以不含有bcl0Xs基因的pcDNA3质粒转染CNE－2Z作为对照,喜树碱处理两种细胞一定时间后,通过激光流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,结果：Western blot检测证实获得稳定表达bcl-Xs的细胞,经过0．5umol/L,1.0umol/L CPT处理24小时后,激光流式细胞仪检测的凋亡峰值均高于对照细胞,结论：bcl-Xs能显著增加鼻咽癌CNE－2Z细胞对喜树碱诱导凋亡的敏感性。     

鼻咽癌CNE-2Z细胞株受IL-24影响的研究

目的探讨白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株(简称CNE-2Z细胞)增殖的影响,为临床应用提供理论依据。方法取CNE-2Z细胞进行培养,用细胞计数及MTT抑制试验,检测IL-24对CNE-2Z细胞增殖的抑制作用,找出IL-24作用的峰浓度及最佳细胞增殖状况。采用碘化丙锭染色,流式细胞仪分析和细胞核形态两种方法同时检测体外培养的CNE-2Z细胞的凋亡状况。结果细胞计数及MTT法检测显示体外培养的CNE-2Z细胞在培养48 h增殖状况最差,并且存在峰浓度效应。IL-24 50 ng/ml可诱导CNE-2Z细胞的凋亡。结论IL-24可呈时间和剂量依赖性的抑制CNE-2Z细胞的增殖并诱导其凋亡。     

线粒体参与荛花酚诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡机制

目的探讨荛花酚诱导人鼻咽癌CNE细胞(简称CNE细胞)凋亡的效应,初步探索其与线粒体相互作用的机制。方法以不同浓度的荛花酚作用于CNE细胞,MTT检测分析荛花酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双标后流式细胞仪检测凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白(caspase-3、caspase-9、PARP、细胞色素C、Bax、Bcl-2)的表达。JC-1染色检测线粒体膜电位,DCFH-DA染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。结果荛花酚以时间和剂量依赖性方式抑制CNE细胞的增殖,荛花酚处理诱导CNE细胞发生明显凋亡,Bax/Bcl-2比值增加,细胞色素C从线粒体释放到胞浆,caspase-3和caspase-9活化,PARP发生剪切。荛花酚还可诱导CNE细胞线粒体膜电位下降,线粒体膜通透转运孔(PTP)开放,ROS含量升高。结论荛花酚可显著诱导CNE细胞的凋亡,机理与影响线粒体功能密切相关。     

双氢青蒿素诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及其机制

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用及其机制。方法:以体外培养的CNE-2细胞为研究对象,分别采用CCK-8法观察不同浓度和时间DHA对CNE-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测CNE-2细胞的凋亡率,caspase-3活性检测法检测不同浓度DHA处理后CNE-2细胞中caspase-3的活性变化。结果:CCK-8法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,CNE-2细胞的增殖显著抑制(P<0.05);流式细胞仪Annexin V-FITC法,结果显示DHA诱导CNE-2细胞凋亡具有浓度依赖性;caspase-3活性检测法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,caspase-3的活性显著提高(P<0.05)。结论:DHA能有效抑制CNE-2细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是能上调CNE-2细胞中caspase-3的活性。     

EGCG对鼻咽癌细胞增殖抑制和凋亡诱导时NF-κB和caspase-3的表达变化

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）作用于鼻咽癌CNE-2细胞后,对转录因子NF-κB和凋亡效应酶caspase-3表达的影响,以及这两个基因的表达与鼻咽癌细胞凋亡和增殖的关联性。方法体外培养鼻咽癌细胞CNE-2,MTT法检测细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期的改变。RT-PCR检测NF-κB和caspase-3的表达。结果EGCG能明显的抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导其凋亡,并表现为浓度依赖性：流式分析显示,EGCG干预鼻咽癌细胞CNE-2在48小时后,细胞被阻滞于G1期。80mg/L EGCG处理鼻咽癌细胞24小时和48小时后,均能下调NF-κB表达,上调caspase-3表达。结论EGCG可能通过抑制NF-κB和诱导caspase-3的表达来发挥其抗鼻咽癌细胞的生物学作用。     

亚砷酸诱导人鼻咽癌细胞Ras相关结构域家族1A基因去甲基化表达的研究

目的 研究亚砷酸诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株中抑癌基因Ras相关结构域家族1A基因(RAS association domain family gene 1A,RASSFIA)的表达.方法 体外培养的CNE-2Z细胞分别加入不同浓度的亚砷酸,并作用不同时间.应用台盼蓝染色法筛选出亚砷酸抑制CNE-2Z细胞生长的最佳浓度,检测IC_(50)值;流式细胞术检测细胞周期的改变;用终浓度为2 μmol/L、1 μmol/L、0.5 μmol/L的亚砷酸加入鼻咽癌CNE-2Z细胞系和不加药物的空白对照组,作用48 h后,采用甲基化特异性PCR法检测亚砷酸处理前后RASSF1A基因去甲基化的情况,采用反转录PCR检测鼻咽癌CNE-2Z细胞系中RASSFIA基因亚砷酸处理前后mRNA水平的表达情况,采用Western blot方法 检测亚砷酸处理前后RASSF1A基因蛋白质水平的表达情况.结果 亚砷酸对细胞增殖的抑制作用具有明显的时间和剂量效应.不同浓度的亚砷酸作用细胞24 h、48 h、72 h后,其IC_(50)值分别为(1.50±0.05)、(1.09±0.13)、(0.65±0.04)μmol/L,亚砷酸使细胞周期阻滞于S期和G2/M期;RASSF1A经亚砷酸作用后甲基化随着作用浓度的增高逐渐减弱,而去甲基化随着作用浓度的增高逐渐增强,且亚砷酸作用后RASSF1A在mRNA水平和蛋白质水平表达明显增强.空白对照组和不同浓度亚砷酸作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(P值均<0.05),不同浓度亚砷酸作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 亚砷酸可诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株中RASSF1A表达增强,从而阻滞鼻咽癌细胞的增殖分化.     

bcl-x_s促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的　利用促进凋亡基因bcl-xs 降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法　将含有人bcl -xs 基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 (CNE - 2Z) ,以不含有bcl-xs 基因的质粒转染CNE - 2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果　导入bcl-xs 的细胞与对照细胞相比 ,其对三氧化二砷的IC50 值明显降低 ,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论　bcl-xs 能显著提高鼻咽癌CNE - 2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性     

姜黄素诱导鼻咽癌NCE细胞凋亡机制的研究

目的探讨姜黄素诱导人鼻咽癌NCE细胞凋亡的分子机制。方法通过吖啶橙-嗅化乙锭复合染色、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶分析法检测、电镜和DNA片段化分析法分析姜黄素对NCE细胞凋亡的影响，并应用流式细胞术、Western Blot、RT—PCR方法探讨姜黄素对细胞线粒体膜电位、半胱氨酸蛋白酶-3（cysteine proteases-3，caspase-3）酶活性、胞质CytC、Fas mRNA及蛋白表达的影响。结果终浓度100μmol／L的姜黄素可诱导NCE细胞凋亡；与姜黄素共孵育12、24、48h，凋亡细胞的阳性率分别为25．6％、40．3％、54．5％。姜黄素处理后NCE细胞线粒体膜电位下降，12、24、48h的线粒体膜电位下降的阳性率分别是26．8％、42．3％、68．2％。caspase-3酶活性增强，12、24、48h表达caspase-3酶活性细胞的阳性率分别是80．5％、100％、100％。胞质CytC含量显著增强，Fas mRNA及蛋白表达水平上升，Fas蛋白阳性率由33．6％上升到89．9％。结论姜黄素可能通过线粒体途径与死亡受体途径诱导鼻咽癌NCE细胞凋亡。     

DNA拓扑异构酶I抑制剂诱导鼻咽癌上皮细胞凋亡的实验研究

拟从细胞凋亡角度出发，探讨能够诱导鼻咽癌上皮细胞凋亡的因素，为有效地防治该恶性肿瘤提供新的思路。方法：光镜下观察细胞的形态变化；流式细胞仪检测细胞周期变化及亚二倍体比例；ＤＮＡ凝胶电泳及二苯胺法测定ＤＮＡ片段化程度。结果：一定浓度的拓扑异构酶Ｉ抑制剂喜树碱（ＣＰＴ）体外作用于人低分化鼻咽癌上皮细胞系ＣＮＥ－２Ｚ细胞一定时间后，镜下可见细胞体积缩小，染色质凝聚，胞膜突起及凋亡小体形成等形态变化。２￣     

塞来昔布联合放射对鼻咽癌细胞株凋亡的影响

目的 探讨塞来昔布联合放射对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡的影响及其可能的机制.方法 实验分4组进行,分别为对照组、药物组(25μmol/L塞来昔布)、照射组(8 Gy X线)和实验组(25 μmol/L塞来昔布+8 Gy X线照射).克隆形成实验检测塞来昔布对CNE-2Z细胞的放射增敏作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率;免疫细胞化学染色检测B淋巴细胞-2(Bcl-2)、凋亡活化基因(Bax)蛋白表达;Western blot技术检测Caspase-3蛋白表达.结果 塞来昔布对人鼻咽癌细胞CNE-2Z有放射增敏作用,实验组中CNE-2Z细胞平均存活分数为0.50,细胞平均致死剂量为2.36,与对照组比较差异有统计学意义(P值均＜0.01);塞来昔布联合放射能够上调Bax的蛋白表达,对照组Box表达评分为1.221 ±0.116,实验组为2.758±0.256;同时抑制Bcl-2蛋白表达,对照组Bel-2表达评分为2.559±0.144,实验组为1.253±0.114,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);并明显增加肿瘤细胞的凋亡率(F=7.63,P＜0.01),差异有统计学意义;Western blot结果显示实验组Caspase-3蛋白表达增强.结论 Cox-2抑制剂塞来昔布联合放射能诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡,具有放射增敏作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of celecoxib combined with radiotherapy on apoptosis of CNE-2Z cell lines and the potential mechanisms.Methods Four groups were used,a control,celecoxib (25 μmol/L celecoxib) ,irradiation ( 8 Gy X ray) and celecoxib plus irradiation.The radiosensitising effect was detected by clone formation experiment.Flow cytometry was used to detect the apoptosis rate of cells.The expressions of Bcl-2 and Bax were assessed by immunocytochemistry.Western blot was used to examine the expression of Caspase-3.Results Celecoxib enhanced the radiosensitivity of CNE-2Z cells.In experimental group,the mean surviving fraction and the mean lethal dose of CNE-2Z cells were 0.50 and 2.36 respectively.Compared with the irradiated group,there was significant differences between the two groups (P ＜ 0.01 ).Celecoxib combined with radiotherapy up-regulation the expression of Bax.The score of the expression of Bax in the control group and the experimental group were 1.221 ±0.116 and 2.758 ±0.256 respectively.Celecoxib combined with radiotherapy could inhibit the expression of the protein of Bcl-2.The score of the expression of Bcl-2 in the control group and the experimental group were 2.559 ± 0.144 and 1.253 ± 0.114 respectively,with significant differences ( P ＜ 0.01 ).Celecoxib combined with radiotherapy cound increase the apoptosis rate of tumor cells with significant differences ( F =7.63,P ＜ 0.01 ).Western blot showed that the expression of Caspase-3 was strengthened.Conclusion Celecoxib combined with radiotherapy could induce apoptosis and enhance the radiosensitivity of human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cell lines.     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察其对鼻咽癌细胞生长的影响;透射电子显微镜检测细胞凋亡,应用流式细胞术观察DNA的含量和凋亡的变化情况,TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。结果：体外塞来昔布抑制CNE-2细胞生长,呈浓度和时间依赖性。透射电镜观察到细胞皱缩、胞质丢失、核质浓缩以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。流式细胞术显示细胞凋亡率显著增高,在80、100gmol／L浓度下细胞凋亡率分别为（10．47±0．18）％和（20．17±0．55）％,与对照组（1．57±0．27）％比较差异均有统计学意义;塞来昔布使G0／G1期细胞比例升高,S和G2／M期比例下降,呈一定剂量效应关系。TUNEL染色法显示药物组凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）。结论：塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,并诱导其凋亡;其机制可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

雷帕霉素靶向阻断作用对鼻咽癌细胞生长的实验研究

目的 研究雷帕霉素对鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2的生长抑制作用及对细胞周期的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒法(cellcounting kit-8,CCK-8法)观察不同浓度雷帕霉素在不同时间点对鼻咽癌细胞的生长抑制作用,光学显微镜下观察其形态学变化,流式细胞仪检测其细胞周期变化及细胞凋亡情况,反转录聚合酶链反应分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白基因的表达情况.结果 雷帕霉索在一定浓度范围内对鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2的生长抑制作用随药物浓度的升高而逐渐增强.光镜下可观察到细胞变圆、密度降低等形态学的改变.流式细胞仪显示,150 nmol/L雷帕霉素作用48 h,CNE-1和CNE-2细胞生长周期均出现G0/G1期阻滞,且变化亦随药物浓度升高而增强;但诱导细胞凋亡作用不明显.反转录聚合酶链反应显示雷帕霉素使CNE-2细胞株哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mRNA的表达下降(t=10.625,P＜0.01).结论 雷帕霉素对鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2具有生长抑制作用,可阻滞细胞周期进展,并可能通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达而抑制细胞生长和细胞周期.     

利用RNA干扰效应阻抑鼻咽癌细胞bcl-xL基因表达和诱导癌细胞凋亡的研究

目的研究RNA干扰(RNA interference)效应对人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE-2Zbcl-xL基因表达的抑制作用及其对CNE-2Z细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法使用美国Ambion公司提供的网上设计软件设计针对人bcl—xL基因的小干扰RNA(siRNA)序列，体外转录试剂盒合成siRNA；荧光素标记试剂盒标记siRNA；脂质体法将siRNA转入CNE-2Z细胞株。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率；RT—PCR法半定量检测siRNA对bcl—xL基因表达的抑制作用；噻唑蓝法检测siRNA对细胞生长增殖抑制作用；流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果荧光显微镜下荧光素标记的siRNA转染组可见到细胞内清晰的绿色荧光，而在未转染siRNA对照组未见；各siRNA转染组bcl—xL mRNA表达水平有不同程度的下调，下调范围在10％～70％之间，而在未转染对照组内bcl—xLmRNA表达水平无明显改变；细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖性(剂量增加，抑制率增高)和时间依赖性；各浓度siRNA4转染组可不同程度诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论体外转录合成的siRNA能特异有效地下调bcl—xL基因的表达，不同序列特异性的siRNA下调bcl—xL基因表达的能力不同；瞬时转染bcl—xLsiRNA4能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡；siRNA不仅为基因组功能分析提供了强有力的工具，而且为抗鼻咽癌基因治疗提供了新的思路。     

黄芩苷对鼻咽癌化疗期间激素使用影响的实验研究

目的 探讨黄芩苷对地塞米松干扰鼻咽癌细胞化疗效果的影响。方法 将常规培养的人低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z分为四组（空白对照组、单纯紫杉醇处理组、地塞米松干扰组、黄芩苷预处理组）。MTT法检测各组细胞的OD值并计算各组细胞的增殖率;RT-PCR法检测细胞中与增殖相关的基因Cyclin D1和Caspase-12的表达。结果 地塞米松对紫杉醇处理后的CNE-2Z细胞中凋亡基因Caspase-12的上调和原癌基因cyclinD1的下调均产生显著的抑制,紫杉醇诱导的细胞凋亡现象部分被地塞米松所逆转,导致CNE-2Z细胞的存活率增高;而加入了黄芩苷后,地塞米松的这种逆转效应被部分抑制。结论 地塞米松降低了CNE-2Z细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,黄芩苷能够对抗地塞米松的这种效应,部分恢复了鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

Bilirubin induced apoptosis of human neuroblastoma cell line SH-SY5Y and affected the mitochondrial membrane potential]

OBJECTIVE: To study whether bilirubin induces apoptosis of human neuroblastoma cell line SH-SY5Y and affects the mitochondrial membrane potential. METHODS: SH-SY5Y cells were exposed to bilirubin, then morphological changes of nucleus were assayed by Hoechst 33258 staining. The percentage of apoptotic cells was measured by flow cytometry. The mitochondrial membrance potential(MMP) was detected by flow cytometry through Rhodamine123 staining. RESULTS: MMP of SH-SY5Y cells significantly decreased from (16.6 +/- 1.556) U to (7.11 +/- 0.701) U (P < 0.01) after exposed to 0.02 g/L bilirubin for 1 h. The percentage of apoptotic cells was 19.4% after exposed for 3 h, and significantly increased to 76.4% after 4 h, but typical apoptotic nuclear changes occured after 6 h. CONCLUSION: Bilirubin could early cause disruption of MMP, then induce the apoptosis of SH-SY5Y cells.