人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7编码区序列变异研究

目的获取人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列并进行变异分析,为新型分子诊断方法的研发提供目标序列。方法通过导流杂交基因芯片技术获取人乳头瘤病毒16型感染宫颈脱落细胞。设计特异性引物,扩增人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析。结果通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞的分型检测,获得了人乳头瘤病毒16型感染阳性标本;选择其中3份阳性标本核酸为模板,通过特异性引物均成功扩增出大小介于750 bp和1 000 bp之间的目的序列;分别克隆到T载体上并测序,得到3条人乳头瘤病毒16型早表达基因E6/E7的编码区序列,克隆并测序后向GenBank核酸数据库提交获收录,登录号分别为EU869316、EU869317和EU869318;经BLAST分析,3条序列与GenBank序列PPH16（Accession：K02718）的E6/E7编码区序列一致性均为99%,且存在8种碱基置换,其中4种为同义突变,另4种则可引起所编码的相应氨基酸残基改变。结论本研究得到了与HPV高危型16型PPH16高度相似的E6/E7编码序列,为HPV致病机制和新型分子检测方法研究奠定了基础。     

宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒52型感染及整合状态分析

目的 探讨人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染及其整合状况在宫颈病变中的意义.方法 应用HPV L1 通用引物MY09/11 和HPV52 E6 型特异性引物进行多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测宫颈脱落细胞标本中HPV 总感染及HPV52 感...     

安徽省阜阳地区人感染HPV的基因型分布调查

目的调查人感染人乳头瘤病毒(HPV)的基因型分布。方法 2016年1月-2019年12月在本院妇科做宫颈癌筛查的患者2 467例,采集棉试子标本,检测宫颈细胞中的23种HPV病毒,分析病毒基因型分布情况。结果 2476例患者中HPV阳性545例,感染率22.09%。其中高危型感染392例(占71.93%),多重感染166例(占30.46%)。常见感染的6种基因型分别为HPV-52、HPV-16、HPV-58、HPV-18、HPV-61和HPV-66,且无论是在单一基因型感染还是多重HPV基因型感染中,HPV-52、HPV-16、HPV-58和HPV-18均是常见基因型;不同年龄组HPV感染人群中,中年组(39～58岁)HPV感染率显著高于其他年龄组(P0.05,但不同HPV基因型感染的年龄分布差异无统计学意义(P0.05)。结论 HPV的流行和分布存在地域差异,本地区以HPV-16、52、58、18为常见基因型。     

安徽省阜阳地区人感染HPV的基因型分布调查北大核心CSCD

目的调查人感染人乳头瘤病毒(HPV)的基因型分布。方法2016年1月-2019年12月在本院妇科做宫颈癌筛查的患者2467例,采集棉试子标本,检测宫颈细胞中的23种HPV病毒,分析病毒基因型分布情况。结果2476例患者中HPV阳性545例,感染率22.09%。其中高危型感染392例(占71.93%),多重感染166例(占30.46%)。常见感染的6种基因型分别为HPV-52、HPV-16、HPV-58、HPV-18、HPV-61和HPV-66,且无论是在单一基因型感染还是多重HPV基因型感染中,HPV-52、HPV-16、HPV-58和HPV-18均是常见基因型;不同年龄组HPV感染人群中,中年组(39~58岁)HPV感染率显著高于其他年龄组(P<0.05,但不同HPV基因型感染的年龄分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论HPV的流行和分布存在地域差异,本地区以HPV-16、52、58、18为常见基因型。     

痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7的构建及鉴定

目的　构建及鉴定含有人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）18型E6、E7基因的痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7。方法　以HPV18型全基因质粒为模板,PCR扩增HPV18 E6、E7基因,克隆到痘苗病毒转移载体pSC65中,获得重组转移载体pSC65-HPV18 E6、E7。重组转移载体转化大肠杆菌,挑取孤立菌落PCR初步筛选。选择阳性菌落提取质粒,酶切及测序鉴定。结果　阳性菌落质粒酶切结果显示有340bp、500 bp大小的目的基因片段,表明为重组转移载体。测序结果证实重组转移载体包含HPV18 E6、E7基因。 结论　成功构建包含HPV18 E6、E7基因的痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7,研究结果为进一步构建包含HPV18 E6、E7基因的重组痘苗病毒奠定基础。     

新疆妇女宫颈脱落细胞HPV16E6基因的PCR及荧光定量PCR检测

目的:了解新疆妇女人乳头瘤病毒16型(13PV16)的感染状况。方法:用PCR及荧光定量PCR(FQ—PCR)方法检测妇科门诊普通患宫颈脱落细胞及分泌物中人乳头瘤病毒16型E6基因(HPV16E6),以普通门诊患宫颈脱落细胞及分泌物DNA作为样本,以人乳头瘤病毒(HPV16E6)作为扩增的靶基因,同时以人β—actin基因片段作为细胞内参照,借助于两对引物,两个特异的荧光探针,用荧光定量PCR(FQ—PCR)方法对这两个片段进行扩增,得到单位细胞HPV16E6的相对含量;同时进行定性PCR检测。结果:宫颈脱落细胞标本159例中,β—actin阳性154例;HPV16E6阳性共12例,阳性率为7．8％。PCR与FQ—PCR结果基本一致,但FQ—PCR更敏感。结论:建立的FQ—PCR检测宫颈脱落细胞内：HPV16E6基因的方法,能反映单位细胞内病毒的复制情况,可用于性传播感染(STI)及宫颈癌的筛查。     

衡水地区宫颈病变筛查人群HPV感染基因型、阴道清洁度与宫颈病变程度的关系

目的 探讨衡水地区宫颈病变筛查人群人乳头瘤病毒（HPV）感染基因型、阴道清洁度与宫颈病变程度的相关性。方法 选择衡水地区宫颈病变筛查人群500例,采用PCR-反向点杂交法对宫颈HPV感染情况进行检测,通过基因芯片分型法确定HPV阳性感染基因型;HPV阳性感染者采用液基薄层细胞学方法检查宫颈细胞并进行TBS分级,无上皮内病变和恶性病变（NILM）记为宫颈正常,非典型鳞状细胞（ASCUS）、低级别鳞状上皮内病变（LSIL）、高级别鳞状上皮内病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）记为宫颈病变。通过Nugent评分法评估筛查人群阴道清洁度。结果 500例宫颈病变筛查人群中,HPV阳性47例,HPV阳性感染率为9.40%。47例HPV阳性者中,高危基因型前4位分别为HPV52、HPV58、HPV16、HPV18,感染率分别为21.28%、12.77%、10.64%、8.51%。低危基因型为HPV6、HPV11,感染率分别为6.38%、4.26%。500例接受宫颈筛查人群中,发现高危HPV基因型感染42例,其中宫颈细胞TBS分级NILM 19例、ASCUS 7例、LSIL 9例、HSIL 5例、S...     

HPV多重感染在宫颈病变中的流行分布及意义

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）多重感染与宫颈病变发生、发展关系。方法应用HPV基因芯片检测技术,对287例宫颈病变患者（CINⅠ130例、CINⅡ69例、CINⅢ48例、宫颈癌40例）的宫颈液基细胞残余标本进行HPV感染基因型检测,并与组织学检测结果比较。结果287例宫颈病变中HPV感染率为89．9％（258／287）,在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌多重感染率分别为48．6％、40．3％、31．1％、27．5％,CINI与CINⅢ及宫颈癌比较,P均〈0．05;HPV最常见亚型为HPV16、HPV58及HPV52;多重感染中以二重感染常见（51／105,48．6％）,偶有五重感染（3／105,2．9％）。40岁以下者HPV多重感染率高于40岁以上者。结论宫颈HPV多重感染率有随宫颈病变程度增加有降低趋势,宫颈病变严重程度可能与HPV基因型多寡无关,而与感染HPV亚型的致病能力密切相关;40岁以下者HPV多重感染发生率高。     

宫颈癌组织中HPV16型E6/E7序列突变分析

目的：分析泉州地区宫颈癌患者HPV16型E6/E7序列突变情况,探讨其与宫颈癌发生的相关性。方法：取35例HPV16阳性的宫颈癌组织标本,采用PCR法扩增E6、E7全长基因。PCR产物直接测序,并与野生型序列进行比对。分析E6、E7基因的变异情况。结果：E6、E7基因的突变率分别为91.4%和89.2%。E6基因中有10个位点为错义突变, 2个位点为无义突变。氨基酸突变频率最高的是D25E（77.1%）。E7基因中共发现5个突变位点,有2个位点为错义突变,3个位点为无义突变,突变频率最高是N29S和无义突变T846C（均为75.0%）。结论：HPV16 E6、E7基因中最常见突变位点D25E、N29S和T846C可能与宫颈癌的发生密切相关,可为研究针对中国人群的HPV疫苗提供一定的线索。     

人乳头瘤病毒感染对中老年妇女宫颈病变早期筛查的意义

目的通过人乳头瘤病毒(HPV)感染状况的检测,对中老年妇女宫颈病变患者进行早期筛查,为宫颈癌的防治提供理论依据。方法采用导流杂交技术对宫颈脱落细胞进行HPV感染状况检测,并对HPV阳性标本进行细胞病理学诊断分析。结果 2 260例宫颈脱落细胞中385例感染HPV,检测到6种高危型HPV(包括HPV16、18、58、52、31及33)和2种低危型HPV(包括HPV6及11),高危型以HPV16、18和58三型别感染为主,并且宫颈病变程度随HPV感染的阳性率增加而加重。结论高危型HPV感染可能是中老年妇女宫颈病变的主要病原因子。     

广西地区宫颈癌患者HPV感染情况分析

目的观察基因芯片技术对宫颈癌人类乳头状瘤病毒（HPV）分型检测的可行性,探讨广西地区宫颈癌患者HPV感染情况及其亚型分布规律。方法采用基因芯片技术对163例宫颈癌组织标本进行HPV分型检测。结果HPV总感染率为95．1％,其中鳞癌131例,HPV阳性率为98．5％;腺癌分别为32例和81．3％（P〈0．05）。鳞癌最常见的感染亚型是HPV16（78．6％）,其次是HPV18（11．5％）、HPV59（5．3％）、HPV58（3．1％）、HPV33（3．1％）、HPV31（3．1％）;腺癌最常见的亚型是HPV18（59．4％）,其次是HPV16（21．9％）、HPV52（6．3％）、HPV35（3．1％）。鳞癌患者单一感染106例（82．2％）,双重感染27例（17．8％）;腺癌患者分别为22例（84．6％）、4例（15．4％）;均未见三重及以上多重感染。结论基因芯片技术检测宫颈癌组织中HPV分型简便、高通量。广西地区宫颈癌中HPV感染率极高,其中鳞癌中以HPV16最常见,腺癌中以HPV18最常见。     

宫颈细胞 HPV E6／E7 mRNA 检测在宫颈病变诊断中的价值

目的：评价高危型人乳头状瘤病毒（ HPV） E6/E7 mRNA检测对宫颈病变的诊断价值。方法520例患者采用b-DNA技术检测HPV E6/E7 mRNA,并用宫颈液基细胞学（ TCT）行宫颈细胞学检查,对其中任何一项阳性者做阴道镜下宫颈活组织检查,以组织病理为金标准,计算HPV E6/E7 mRNA阳性对高级别宫颈上皮内瘤样病变（ CIN）、宫颈浸润癌诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,并与TCT检查进行比较。结果520例患者中HPV E6/E7 mRNA阳性158例, TCT异常222例。 TCT 异常者中HPV E6/E7 mRNA阳性率较TCT 正常者中HPV E6/E7 mRNA阳性率高（P＜0．05）。146例慢性宫颈炎、CINⅠ级患者与124例高级别CIN、宫颈浸润癌患者中HPV E6/E7 mRNA阳性率比较,P＜0．05。 HPV E6/E7 mRNA阳性对高级别CIN及宫颈浸润癌诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为74．19％、83．33％、58．23％、71．43％,TCT 检查分别为81．53％、69．44％、81．45％、92．28％,两者特异度及阳性预测值比较, P均＜0．05。结论在宫颈癌筛查中检测高危型HPV E6/E7 mRNA对预测高级别CIN,尤其对评估癌症风险有重要的临床价值。     

十堰地区妇女宫颈人乳头瘤病毒感染及基因亚型分布情况调查分析

目的:对十堰地区妇女宫颈(HPV)亚型进行筛查,以探讨其分布规律。方法:采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术,对1 116例妇科就诊患者的宫颈刷片标本进行了21种HPV基因分型检测。结果:1 116例样本中,HPV感染者283例,总感染率25.36%,高危型HPV感染率14.52%,低危型HPV感染率2.96%,高危型及低危型混合感染阳性率7.89%;单一基因型别195例,占阳性患者的68.91%;双重混合感染59例,占阳性患者的20.85%;三重以上混合感染者29例,占阳性患者的10.25%。HPV感染阳性率居前5位的高危亚型依次是HPV16型50例(4.48%)、HPV52型47例(4.21%)、HPV53型28例(2.51%)、HPV58型17例(1.52%)及HPV39型15例(1.34%),常见的低危型是HPV6(1.26%)和HPV42(1.26%)。结论:十堰地区妇女HPV感染率较高,且以高危型HPV感染为主,感染型别既符合亚洲及中国地区人群的分布规律,又有独特的区域分布特点,并且多重感染率高,值得重视。     

山西省HBV基因型及亚型分布调查

目的了解山西省乙型肝炎病毒(HBV)的基因型及亚型分布情况。方法对136例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者血清采用PCR-PFLP结合基因型特异性引物-PCR法进行HBV基因型及亚型检测。结果 136例HBV感染者的血清标本经PCR-PFLP分析,B基因型18例,均为Ba亚型,占13.2%;C基因型113例,占83.1%,除4例未分型外均为Ce亚型;D基因型5例,占3.7%。经型特异性引物-PCR分析,18例HBV B基因型中有4例为B/C基因型混合感染;5例经PCR-PFLP确定的D基因型病毒经型特异性引物法分析有2例扩增出E基因型条带。C、B基因型病毒感染者的平均年龄分别为(39.5±13.1)岁和(30.5±14.1)岁,差异有统计学意义(P<0.05);与B基因型相比,C基因型病毒感染者的HBeAg阴转率减慢。结论山西省HBV基因型主要为C(Ce),有少量的B(Ba)和D基因型,且存在B/C混合基因型,且可能存在D和E基因型病毒的重组体;与B基因型比较,感染C基因型病毒更难被机体清除,疾病更易慢性化。     

Identification of High-Risk Human Papillomavirus DNA,p16, and E6/E7 Oncoproteins in Laryngeal and Hypopharyngeal Squamous Cell Carcinomas

Human papillomavirus (HPV) was proven to play a significant role in cancer development in the oropharynx. However, its role in the development of laryngeal (LSCC) and hypopharyngeal squamous cell carcinoma (HPSCC) remains to be clarified. High-risk HPV (HR-HPV) viral proteins E6 and E7 are considered to be pertinent to HPV-related carcinogenesis. Hence, our aim was to estimate LSCC and HPSCC for HR-HPV DNA, p16, and E6/E7 oncoprotein status by using molecular virology and immunohistochemistry methods. The prevalence of HPV16 infection was 22/41 (53.7%) and 20/31 (64.5%) for LSCC and HPSCC, accordingly. The majority of HPV16+ tumor samples were stage III or IV. In most samples, the presence of either HPV16 E6 or HPV16 E7 viral protein in dysplastic or tumor cells was confirmed using immunohistochemistry. Our results suggest a high prevalence of HPV16 as a primary HR-HPV type in LSCC and HPSCC. The lack of HPV E6/E7 oncoproteins in some tumor samples may suggest either the absence of viral integration or the presence of other mechanisms of tumorigenesis. The utilization of p16 IHC as a surrogate marker of HR-HPV infection is impractical in LSCC and HPSCC.     

广州地区2012年1、2型登革病毒基因型特征研究

目的 测定广州市2012年1、2型登革病毒(DENV 1、DENV 2)的E基因序列,探讨其来源及基因型。方法 收集广州市2012年478例登革热患者急性期血清478份,用C6/36细胞培养分离登革病毒,RT-PCR法扩增全长E基因,测定序列并绘制系统发育树,结合流行病学资料进行分子流行病学分析。结果 478例患者标本中分离到DENV 1 6株,DENV 22株,测序获得E基因序列,E基因长度均为1 485 bp,编码495个氨基酸,DENV 1碱基同源性为97.4%~99.9％,推导的氨基酸同源性为99.2%~100.0％,其同源性与2011、2006和2004年份的国内DENV 1流行株接近。DENV 2碱基同源性为91.3%,推导的氨基酸同源性为97.8%,其同源性与我国DENV 2流行株相对较远。进化分析发现,DENV 1均属于同一亚型,即亚洲型,DENV 2属于两个亚型,即马来西亚/印度次大陆和东南亚型。结论 推测广州市2012年DENV 1和DENV 2均为输入性,DENV 1可能由柬埔寨和广东佛山输入,DENV 2可能由孟加拉国和缅甸输入。     

1730例女性健康体检者高危型和低危型人乳头瘤病毒感染情况调查

目的通过对1730例健康体检女性的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染情况进行分析,推测广州地区女性HPV感染状况。方法采用HPV核酸分型流式荧光杂交法,对来我院体检的1730例健康女性宫颈分泌物进行17种高危型HPV和10种低危型HPV核酸检测,并对不同年龄组的感染情况进行比较,总结该人群不同HPV型别及亚型感染率。结果高危型HPV感染率10.17%(176/1730),低危型HPV感染率为5.90%(102/1730)。各年龄段高危型HPV感染率最高的为60岁年龄段,其次为30岁年龄段。HPV感染模式最常见为高危型单一,最少见的感染模式为低危型多重合并高危型单一。高危型HPV感染率前8位依次为HPV53型、58型、52型、39型、16型、18型、51型、56型,低危型HPV感染率前4位依次为HPV43型、61型、81型、42型。结论广州地区女性HPV感染率较高,并且以高危型HPV感染为主。定期进行HPV筛查,有利于预防和早期发现宫颈病变。     

贵州地区宫颈上皮内瘤变和宫颈浸润癌患者HPV感染状态及其亚型分布

目的观察贵州地区宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈浸润癌患者人乳头状瘤病毒（HPV）的感染状态及其亚型分布。方法采用导流杂交技术对30例CIN（CIN组）、33例宫颈浸润癌患者（宫颈癌组）、60例自愿接受宫颈HPV感染筛查的妇女（对照组）进行HPV分型检测,所有受检者均来自贵州地区。结果 CIN组HPV阳性13例（43.33%）,宫颈癌组19例（57.58%）,对照组5例（8.33%）。CIN组、宫颈癌组与对照组比较,P均〈0.01。CIN组共检出7种亚型HPV,均为高危型（HR-HPV）,无多型HPV感染（M-HPV）。其中HPV16 7例,HPV31、52各2例,HPV18、33、53、58各1例。宫颈癌组检出5种亚型,亦均为HR-HPV,M-HPV3例。其中HPV16 11例,HPV534例,HPV58 3例,HPV18、59各1例。对照组检出7种亚型,HR-HPV中的HPV16、18、31、39、53、58和低危型HPV的HPV6各1例;M-HPV 1例。CIN组、宫颈癌组HPV16感染率明显高于对照组,P均〈0.05。HR-HPV感染与CIN（OR=8.412,95%CI为2.62~26.99）和宫颈浸润癌（OR=14.929,95%CI为4.74~46.98）紧密相关,且主要与HPV16感染有关（CIN：OR=17.957,95%CI为2.09~154.15;宫颈浸润癌：OR=29.500,95%CI为3.60~242.07）,P均〈0.05。结论贵州地区CIN和宫颈浸润癌与HR-HPV感染密切相关,HPV16为主要感染亚型。