2016年盐城市手足口病病原学特征及EV71和CVA16型肠道病毒VP1基因特征

目的了解2016年盐城市手足口病肠道病毒病原谱分布特征,并对鉴定为EV71、CVA16型肠道病毒VP1基因进行分子进化特征分析。方法收集疑似手足口病咽肛拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测通用、EV71和CVA16型肠道病毒核酸,以RT-PCR法扩增其VP1基因全长编码区并进行序列分析,采用MegAlign、mafft、MEGA等软件进行核苷酸及氨基酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2016年盐城市共收集疑似手足口病标本504份,检出肠道病毒核酸阳性165份,阳性率32.74%,EV71型、CVA16型、其他型别分别占4.37%、6.94%、21.43%。对EV71、CVA16型肠道病毒遗传进化树分析显示,盐城地区EV71和CVA16代表株分别属于C4a、B1b基因亚群进化分支,未发生基因亚群的转换,在各自进化分支中形成3条传播主链,远离各自原型株。结论 2016年盐城市手足病病原谱为多种基因型的肠道病毒共同流行。其他肠道病毒为优势病原体,EV71和CVA16仍占有一定比例。     

2010 - 2016年昆明市肠道病毒71型流行特征及VP1基因特征分析

目的 分析昆明市2010 - 2016年肠道病毒71型（Enterovirus A71,EV - A71）的流行特征和VP1编码区基因特征。方法 采用描述流行病学方法,对本市手足口病（Hand,Foot,and Mouth Disease,HFMD）资料进行统计分析;对EV - A71阳性株的VP1编码区进行逆转录 - 聚合酶链反应,并对扩增产物进行核苷酸序列测定,使用Mega6.0软件分析VP1区基因亲缘关系。结果 2010 - 2016年昆明市每年均有EV - A71报告,发病有明显季节特征,高峰期在4 - 6月,5月达最高峰。全市各区县均有EV - A71病例报告,主城区发病数远高于郊县。0～5岁儿童是感染EV - A71的高危人群,发病高峰为0～3岁。EV - A71感染病例中男性远多于女性。58株EV - A71均为C4基因型的C4a亚型,分为2个传播链,传播链2包含了7年间绝大多数毒株。结论 昆明市2010 - 2016年HFMD主要病原是EV - A71,其亦是引起HFMD重症的主要原因。昆明市EV - A71毒株全部是C4a亚型,可针对二季度、0～3岁男性儿童及主城区等关键要素合理配置防控资源,做好EV - A71防控工作。     

2013年克拉玛依市手足口病EV71型VP1基因特征分析

目的掌握2013年克拉玛依市手足口病EV71 VP1基因特征。方法 real-time PCR方法筛选手足口病患者中EV71阳性病例,RT-PCR方法扩增VP1基因片段,结合已知亚型利用Mega软件分析测序结果。结果 59例样本中由肠道病毒引起53例,阳性率为89.8%,其中EV71 36例(67.9%)、CA16 10例(18.9%)、非EV71非CA16的其他肠道病毒7例(13.2%)。男性、女性中各病原阳性率差异无统计学意义(χ2=3.1504,P=0.207)。12株测序毒株全部为C4亚型,与C4亚型相比较基因距离为0.031~0.046,部分氨基酸序列存在变异,12例EV71至少可以划分为2个传播链,lineage 2较lineage 1序列差异较大。结论各病原对于不同性别人群侵袭力无差异,2013年克拉玛依市手足口病主要病原为EV71。克拉玛依市EV71全部是C4亚型,属于中国大陆广泛流行的基因亚型;lineage 1为2013年克拉玛依市流行的优势分支,分支内同源性较大。lineage 1将来是否继续成为克拉玛依市流行分支,需要对EV71进行连续性监测。     

2009年河南肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的了解河南省2009年肠道病毒71型（EV71）流行株VP1基因特征。方法采用RT-PCR方法从手足口病患者粪便、咽拭子样品中扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建序列遗传发育树。结果 262份样品中,VP1基因RT-PCR扩增鉴定结果显示111份样品阳性,选取其中20份样品进行VP1基因全序列测定,结果显示其与C4亚型代表株核苷酸同源性为90.8%～93.6%,氨基酸同源性为94.0%～99.3%。结论河南省手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型。     

2013—2019年柳州市手足口病病原学监测结果及肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 分析2013—2019年柳州市手足口病病原学监测结果,掌握该地区手足口病的病原组成以及肠道病毒71型（EV71）的分子流行病学特征,为当地手足口病的防控提供科学依据。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RTPCR）对收集的手足口病病例标本进行病原学检测。对重症或死亡病例的病原进行分型检测,选取2017年的5例EV71阳性手足口病重症或死亡病例标本进行VP1基因序列测定和特征分析。结果 2013—2019年柳州市共检测6 038例手足口病病例标本,肠道病毒通用型阳性标本4 210例（69.73%）,其中EV71阳性659例（15.65%）、柯萨奇病毒A16型（Cox A16）阳性1 159例（27.53%）、其他肠道病毒阳性2 392例（56.82%）。2013年、2015年、2017年、2019年以其他肠道病毒为主（阳性率均>50.00%）,2014年以EV71和其他肠道病毒为主,2016年、2018年以Cox A16和其他肠道病毒为主。2014—2019年重症或死亡病例的病原学分型显示,重症或死亡病例的主要病原是EV71、Cox A16、柯萨奇病毒A6型（Cox A6）...     

贵阳市2013—2015年手足口病患儿EV71病毒VP1、VP4基因特征分析

目的 分析贵州省贵阳市2013—2015年手足口病患儿肠道病毒 71 型(EV71)VP1和VP4基因特征,为手足口病疫苗的选用和临床诊治提供参考依据。方法 采集2013年8月—2015年4月在贵阳市第五人民医院就诊的120例手足口病轻症患儿鼻咽拭子和(或)粪便标本进行EV71病毒 VP1和VP4 全序列的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增和测序,并与美国国立生物技术信息中心公布的 EV71 A、B、C基因型代表株进行系统进化分析,根据进化分析结果对此2个片段随机抽取20例与其他地区相同基因型进行氨基酸位点变异分析。结果 所有样本病毒株均为C4基因亚型,与2008年北京、上海、安徽以及2011年深圳分离株成簇,20例EV71病毒株在VP1和VP4氨基酸位点变异与以上城市流行毒株相比,其中12例样本EV7的VP1片段氨基酸序列293位丙氨酸(A)变异为丝氨酸(S),其余位点均只有1例样本发生A26T、N31D、N282S突变,而VP4片段只有1个样本发生K52R突变。结论 贵阳市2013—2015年手足口病患儿的EV71流行株均属C基因型的C4亚型,VP1片段常见A293S、A26T、N31D 和N282S突变,VP4片段偶有K52R突变。     

河南省2010年肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的对河南省2010年手足口病监测标本进行病原分离及VP1基因测序,了解分离病毒的基因特征及分子流行病学特点。方法将2010年收集的手足口病患者粪便标本和肛拭子标本840份进行病毒分离鉴定并对34株病毒分离株测定肠道病毒71型VP1全序,利用生物信息学软件对序列分析,构建序列系统进化树。结果测序获得34株来自河南省11个地市的VP1全长序列,分离株间的VP1区核苷酸相似性为96.3%～100%,系统进化分析显示属于C4基因型的C4a亚群,所有分离株均处于同一进化分支,轻重症间无明显差别。在2003~2009年的河南省和其他7省亦发现有C4a亚群存在。结论 2010年河南EV71分离株为C4基因型的C4a亚群,河南省2008年以来的分离株与2004年以来的中国大陆优势株流行趋势完全一致。     

2008年余姚市肠道病毒71型检测与VP1基因特征分析

目的研究2008年余姚手足口病主要病原肠道病毒71型(EV71)毒株的分子生物学特征。方法收集手足口病患者粪便样品,用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EV71,选择5个代表性样品进行VP1基因的扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用DNAstar软件进行比对分析。结果 52例手足口病患者大便样品中检测到EV71阳性,阳性率为69.3%。5个代表株与A、B和C基因型标准株VP1基因核苷酸同源性分别为81.9%~82.2%、83.7%~84.3%和94.9%~95.3%,5个毒株之间的核苷酸同源性波动于96.2%~99.9%。在基因系统发生树上,这5个毒株均属于C基因型。结论本研究表明引起2008年余姚手足口病的主要病原是EV71毒株,它属于C基因型。     

长沙市2010年手足口病EV71型VP1区基因序列分析

目的了解2010年长沙市手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）重症和普通病例肠道病毒71型（human Enterovirus 71,EV71）VP1区基因特征。方法收集12例HFMD重症和普通病例的咽拭子或肛拭子标本进行VP1区基因RT-PCR扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用sequin软件提交至GenBank,Lasergene和Mega5软件对测序结果进行氨基酸比对分析和构建进化树。结果 12株EV71 VP1区基因序列在进化树上与C基因型中的C4a亚型代表株属同一分支,在核苷酸同源性分析中,12株EV71与C4a亚型代表株（3254-TAI-98）的同源性达到92.6%-93.3%,高于与A、B、C1、C2、C3、CVA16型或亚型代表株的同源性（分别为79.9%-80.7%、83.1%-84.0%、87.9%-88.7%、89.1%-89.8%8、7.8%-88.2%和57.3%-58.4%）;12株EV71病毒VP1之间的核苷酸有高度的同源性：同源性为98.1%-100.0%,高于与C4亚型代表株的同源性（92.6%-93.3%和91.8%-92.7%）。2010年分离自长沙的重症和普通病例与2008年分离自北京、深圳和阜阳的EV71病毒VP1基因序列之间的氨基酸变异位点少。结论 2010年长沙市流行的EV71型病毒属于C基因型中的C4亚型;12例HFMD重症和普通病例的EV71 VP1区基因序列差异较小;不同时间、不同地区和不同病例来源的EV71 VP1区氨基酸变异位点无关联。     

2016-2017年盐城市手足口病CVA9型肠道病毒VP1基因分子进化特征

目的研究2016—2017年盐城市手足口病病原CVA9型肠道病毒VP1基因分子进化特征。方法对2016—2017年盐城市疑似手足口病例标本进行病原体分子分型分析;以RT-PCR法扩增CVA9型肠道病毒VP1基因全长编码区并测序,采用生物信息学软件进行核苷酸及氨基酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果2016—2017年盐城市共检测1 002例疑似病例标本,肠道病毒核酸阳性率38.32%,主要型别为EV71型112例(占29.17%),CVA16型94例(占24.48%),其他肠道病毒共178例(占46.35%)。检出2株CVA9型,其核苷酸、氨基酸同源性分别为94.7%、99.3%,与原型株Griggs(D00627)核苷酸、氨基酸同源性分别为80.4%～81.3%、92.7%;与引起其他症状各代表株(包括无症状健康儿童携带者)的核苷酸、氨基酸同源性为81.1%～97.2%、94.0%～99.3%。遗传进化树分析显示2毒株在C4分支中构成2条明显的传播链:CVA9/JS-yancheng/122/2016位于单独的小分支,CVA9/JS-yancheng/419/2016与2016年无症状健康儿童携带者四川株(LC361283)聚集成簇构成另一传播链。共检测31例重症病例,13例肠道病毒通用核酸阳性,阳性率41.93%,其中EV71型11例、CVA型2例。结论 2016—2017年盐城市引起手足口病的CVA9病毒属于散在流行,非手足口病流行的主要基因型别,与国内部分省市引起手足口病的毒株共进化共循环,与引起其他症状类型的CVA9毒株存在差异。     

北京地区2006-2008年肠道病毒71型VP1区基因特征分析

目的 了解2006-2008年北京地区分离的不同来源肠道病毒71型(EV71)VP1区基因特征.方法 从手足口病例、急性弛缓性麻痹病例和健康儿童的粪便、咽拭子和疱疹液标本中分离EV71病毒株,选取其中9株EV71分离株,采用RT-PCR扩增VPl区全长基因片段并进行序列测定、系统发生树构建、核苷酸同源性及组内和组间进化距离分析.结果 9株EV71在系统发生树上与C基因型中的C4亚型代表株属同一分支;在核苷酸同源性分析中,9株分离株与C4亚型代表株的同源性达到92.1%～93.9%,明显高于与C1、C2、C3亚型代表株的同源性(分别为88.8%～89.5%、89.4%～90.0%和88.4%～89.3%);三种不同来源的分离株病毒之间具有较高的同源性(95.9%～100.0%),但与1998年分离的C4亚型代表株的同源性却较低(分别为93.3%～93.9%和92.1%～92.9%).在进化距离的分析上,C4亚型内各组间距离较大,尤其是亚型代表株与分离株之间距离最大(D=0.052～0.071).结论 2006-2008年北京地区流行的EV71仍然是C4亚型,在同一时间不同地区、不同来源、不同疾病状态卞分离的EV71在VP1区全长基因序列上无明显差别;但是随着时间推移,核苷酸变异的不断积累,出现新亚型的概率也在不断增加,因此有必要加强分离株的监测以掌握EV71的变异趋势.     

北京市西城区手足口病患儿肠道病毒71型VP1区基因进化分析

目的了解北京市西城区2015年手足口病（HFMD）患儿肠道病毒71型（EV 71）分离株VP1区基因特征,分析其变异情况。方法收集北京市西城区2015年HFMD病原学检测分型鉴定为EV 71的阳性标本,对部分标本进行病毒分离、培养,并通过实时荧光PCR鉴定阳性培养物。EV 71阳性培养物提取病毒核酸,对其VP1区全长序列进行PCR扩增和测序。从Genbank中选取EV 71不同基因型别参考序列,利用生物信息学软件进行同源性和系统进化分析。结果共分离到6株EV 71（Genbank登录号为KU376383-KU376388）,其VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.00%~99.00%和98.00%~100.00%,与参考序列VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.00%~97.00%和93.00%~100.00%。进化分析显示,6株EV 71均为C4a基因亚型。结论 2015年北京市西城区EV 71流行株属于C4a亚型,未出现明显变异。     

安徽省肠道病毒71型VP1区基因分析

目的阐述引起安徽省2008年手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）流行的肠道病毒71型（enterovirus71,EV71）基因特征。方法采集HFMD暴发初期患者标本,进行病毒分离、培养,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定上述培养物。扩增病毒株及核酸样本的VP1编码区全基因,并进行序列测定和分析。结果暴发初期分离出3份病毒株,经中和试验及RT-PCR证实为EV71。根据VP1全基因序列与EV71基因型、亚型参考株构建亲缘性关系树,17份测序结果与C4亚型聚为一簇,与A、B、C1、C2、C3、C4基因型别（亚型）的核苷酸的同源性分别为：82.0%-83.0%、84.3%-85.4%、89.7%-91.1%、89.1%-90.7%、88.3%-89.8%、93.0%-94.6%;氨基酸的同源性分别为：93.9%-95.2%、96.6%-97.6%、97.9%-98.6%、98.6%-99.3%、98.3%-98.9%、98.6%-99.6%;簇内比较显示,1株2006年的EV71毒株与另16份2008年样本在C4亚型内又分属两个亚簇,核苷酸、氨基酸的同源性分别为：96.2%-96.9%、98.3%-99.3%。结论引起安徽省2008年HFMD的EV71为C4亚型,与2006年分离的1份毒株有差异,提示安徽省存在C4亚型的不同分支。     

肠道病毒71型广西株的种系进化分析

目的 通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)VP1节段核苷酸序列,进行EV71广西株种系进化分析.方法 采集病例的心包液、疱疹液和呼吸道分泌物,用RT-PCR进行鉴定和扩增VPl区序列,并对VPl区全基因序列进行测定,同源性分析和构建系统发生树.结果 将病例的心包液、疱疹液和呼吸道分泌物同时扩增到特异片段,测序证实为EV71.广西株与安徽阜阳的分离株同源性最高,大于99%,没有发生核苷酸插入和缺失;在系统发生树上,广西株处于C基因型C4亚型分支上.结论 肠道病毒71型广西株VPl区基因全长891bp,属于EV71 C基因型C4亚型.应加强广西EV71分子流行病学监测,阐明广西EV71流行株的基因型别和基因特征.     

2009年龙岩市人肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 分析2009年龙岩市流行的人肠道病毒71(EV 71)分离株的分子生物学特征.方法 从手足口病例的153份咽拭标本中分离EV 71病毒株,选取其中3株,用RT-PCR扩增VPl基因片段,并进行测序和病毒种系进化等分析.结果 3株EV 71均为C4基因亚型,与其他省份C4亚型分离株的同源性为94.8%-99.0%;...     

我国部分省市手足口病EV71 VP1基因特征分析

摘要:目的　分析我国部分省市手足口病EV71 VP1基因特征。方法　对从NCBI 上获得我国部分省市和本实验室来源的VP1 基因序列99株进行分析,采用MEGA软件构建系统进化树,计算相同或不同基因型及基因亚型毒株的核苷酸与氨基酸的相似性。结果　研究序列中C4亚型占96.0%,A亚型（3.0%）和B5亚型（1.0%）较少;A亚型毒株氨基酸变异为非同义突变;部分毒株发生氨基酸突变位点与病毒致病力相关;南方株相对北方株基因序列变异较大,东部株相对中部和西部株基因序列变异较大。结论　我国EV71以C4亚型为主;南方株较北方株、东部株较中西部株基因序列变异较大可能与我国气候、交通和人口流动有关;我国A亚型毒株非同义突变及2011年分离自浙江的KF358275突变位点增多是否会引起新的流行需加强后续监测。