雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体表达的研究

目的：研究雌性大鼠一生中成骨细胞内雌激素受体(ER)表达水平的变化规律。方法：采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞并进行鉴定,应用半定量Western blot对不同月龄雌性Wistar大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测。结果：ER表达在1、2月龄组呈低度表达,3月组ER开始呈现上升趋势,至8、9、10月组ER达到高峰,10月组以后表达呈现下降趋势。结论：ER表达在不同月龄大鼠呈规律性分布,雌激素受体的表达应与雌激素水平是相一致的。     

骨质疏松大鼠成骨细胞雌激素受体与颅骨IL-10表达的相关性研究

目的探讨骨质疏松sD大鼠颅骨中IL-10的表达与成骨细胞内雌激素受体表达的相关性。方法40只SD雌性大鼠用随机数字表法随机分为对照纽20只和去势（去卵巢）组20只（去势第5周组、第7周组各10只）,用双能X线吸收法测定各组骨密度,用免疫组织化学ABC法及图像分析技术观察各组颅骨组织中IL-10表达;用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠颅骨成骨细胞,并用钙一钴法碱性磷酸酶（ALP）染色法则型胶原免疫组化染色法观察、鉴定大鼠成骨细胞。应用半定量Western blot法检测各组SD大鼠成骨细胞内雌激素受体。结果去势组骨密度明显低于对照组（P〈0．01）;去势组骨小梁周边IL-10阳性成骨细胞数明显少于对照组（P〈O．01）,并且染色较对照组浅。ALP染色、Ⅰ型胶原免疫组化及形态学观察符合成骨细胞特征。去势组雌激素受体表达明显低于对照组,去势第7周低于去势第5周（P〈0．01）。结论雌激素受体的表达与成骨细胞IL-10表达水平成正相关。     

雌二醇通过上调M-CSF表达促进乳腺癌教化单核细胞

目的:研究雌二醇对MCF-7细胞教化单核细胞分化为肿瘤相关巨噬细胞的影响。方法:分别用10 nM雌二醇及10 nM雌二醇+1μM他莫昔芬处理雌激素受体阳性乳腺癌细胞株MCF-7,48 h后收集细胞培养上清,利用细胞因子芯片检测不同处理组单核细胞活化相关蛋白与空白对照组MCP-1及M-CSF的表达差异,利用细胞Transwell niche检测其对单核细胞活化功能的影响。结果:Bio-Rad细胞因子芯片检测发现空白对照组、雌二醇组及雌二醇+他莫昔芬组细胞上清中CSF1浓度分别为(1.83±0.18),(29.71±8.06)及(10.90±2.38)pg/m L,MCP-1分别为(31.33±2.40),(75.37±5.50)和(41.97±5.80)pg/m L,比较差异均有统计学意义(P0.05)。雌二醇处理组CD163的mRNA水平是对照组(76.83±12.80)倍,他莫昔芬加雌二醇组是对照组的(6.5±1.71)倍,比较差异有统计学意义(F=96,P0.01)。对照组、雌二醇处理组及他莫昔芬加雌二醇处理组每个高倍镜视野内U937细胞数目分别为(28±6)、(188±16)及(82±9)个,比较差异有统计学意义(F=160,P0.05)。结论:雌二醇通过上调激素依赖型乳腺癌细胞株MCF-7表达M-CSF从而增强其对单核细胞的教化,而他莫昔芬可部分阻断其发挥效应。     

何首乌水提液对老化模型大鼠脑组织内抗氧化酶表达的影响

目的 观察何首乌水提液对老化模型大鼠海马、皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)含量的影响.方法 采用氟派啶醇致大鼠获得性老化动物模型,用盐酸丁咔地尔腹腔注射作阳性对照,测定空白对照组、模型组、阳性对照组、何首乌大、小剂量组海马和皮质SOD、GSH-PX和MDA含量.结果 模型组SOD、GSH-PXH量较空白对照组均显著降低(P＜0.01),MDA含量均显著升高(P＜0.01);与阳性对照组比较,何首乌大、小剂量组可显著提高大鼠海马、皮质SOD、GSH-PX含量(P＜0.01),同时何首乌大剂量组MDA含量较阳性对照组显著降低(P＜0.01),何首乌小剂量组MDA含量较阳性对照组明显升高(P＜0.05).结论 何首乌是通过上调抗氧化酶SOD和GSH-PX、下调过氧化物MDA表达起到延缓衰老的作用.     

间歇性甲状旁腺激素刺激的大鼠成骨细胞中β-肌动蛋白和波形蛋白表达上调

目的:探讨间歇性甲状旁腺激素(PTH)应用促成骨的可能机制.方法:大鼠成骨细胞(ROBs)分为两组培养:①对照组,在每个培养周期(24 h)中均不加PTH;②PTH间歇刺激组,仅在前6 h的培养液中加PTH.收集第3周期24 h末的细胞,应用双向凝胶电泳方法比较两组细胞的总蛋白,选择2个在间歇刺激组表达明显上调的蛋白质点进行基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析.结果:初步确定这2个蛋白分别为β-肌动蛋白(β-actin)和波形蛋白(vimentin),它们均属于细胞骨架蛋白.结论:在PTH间歇刺激组表达上调的β-肌动蛋白和波形蛋白可能参与了间歇性PTH应用的促成骨过程.     

碘缺乏大鼠肾脏c-Jun表达上调

目的观察碘缺乏大鼠肾脏的损伤情况及核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)亚单位c-Jun在肾组织中的表达差异,探讨低碘地区肾脏损伤的可能发病机制。方法给予Wistar大鼠缺碘饲料,通过饮用含不同浓度碘的水分为重度缺碘组、轻度缺碘组和正常对照组,3组每日总碘摄入量分别约为1.24、5、10μg。测定甲状腺功能状态,利用H-E染色观察肾脏病理变化,利用RT-PCR、免疫组化方法分析肾脏组织中AP-1亚单位c-Jun在基因和蛋白水平表达的差异。结果重度缺碘组与轻度缺碘组、对照组比较TT3、TT4、FT3、FT4均明显下降(P<0.01),轻度缺碘组与对照组相比TT4、FT3明显下降(P<0.01),TT3、FT4稍有降低但差异无统计学意义。缺碘大鼠肾小球系膜区扩大,肾小球面积减小,随缺碘程度增加而加重。对照组大鼠肾组织可少量表达c-Jun,重度缺碘组与轻度缺碘组大鼠肾组织中c-Jun在基因及蛋白水平表达均增强,且重度缺碘组与轻度缺碘组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论碘缺乏大鼠甲状腺激素分泌减少,肾脏发生损伤,肾组织c-Jun表达上调。     

电针上调食源性肥胖大鼠下丘脑弓状核内CART的表达

目的:观察电针对食源性肥胖大鼠的中枢性作用中,能否上调其弓状核内CART的表达。方法:对DIO大鼠进行电针刺激,3次/周,共4周。用免疫组化法检测弓状核内CART的表达,ELISA法检测血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)的水平。结果:电针能减少DIO大鼠的体重和能量摄入,增加弓状核内CART的表达。束缚应激导致血浆ACTH水平升高,但是电针不会导致ACTH进一步增高。结论:电针能上调DIO大鼠CART的表达,进而引起摄食减少和体重减轻。这可能是电针治疗肥胖症的机制之一。     

肝移植大鼠肝内一氧化氮合酶的表达

目的 :探讨移植肝一氧化氮合酶的表达与急性排斥反应间关系及其细胞定位。方法 :应用近交系 BN至 Lew大鼠原位肝移植急性排斥反应及同基因 ( Lew- Lew)肝移植动物模型 ,用免疫组化法检测移植肝组织中诱导型一氧化氮合酶 ( i NOS)的表达。同时观察 i NOS抑制剂氨基胍和免疫抑制剂 FK5 0 6对肝移植术后急性排斥反应的影响。结果 :在急性排斥组 i NOS表达强阳性 ,与氨基胍组、FK5 0 6组及同基因对照组比较差异显著。结论 :在大鼠原位肝移植发生急性排斥反应时 i N-OS增高程度与排斥反应的强度有明显关系。氨基胍、FK5 0 6可以抑制 i NOS的表达。抑制 i NOS的表达可明显减轻移植肝组织的急性排斥反应     

不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律分析

目的探讨不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律,以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲线。方法以不同月龄雌性SD大鼠为标本,二次酶消化法收集成骨细胞并培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色、上清液碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(OCN)检测对成骨细胞进行鉴定。结果二次酶消化法获得的成骨细胞,形态呈多边形,碱性磷酸酶染色阳性细胞染色率80%,不同培养时间的成骨细胞和成纤维细胞上清液碱性磷酸酶和骨钙素含量相比较成骨组明显高于成纤维组。结论二次酶消化法可获得较多的成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特性,可作为成骨细胞相关研究的细胞来源。     

不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律分析

目的:建立一种灵敏度高,特异性强的成骨细胞内雌激素受体检测方法,探讨不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律,以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲线.方法:以不同月龄雌性SD大鼠为标本,二次酶消化法收集成骨细胞并培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色、上清液碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(OCN)检测对成骨细胞进行鉴定,应用流式细胞仪对不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测, 根据每个成骨细胞被激发后标记-FITC的雌激素受体(ER)抗体荧光强度来表达细胞内ER的含量.结果:二次酶消化法获得的成骨细胞,形态呈多边形,碱性磷酸酶染色阳性细胞染色率80%,不同培养时间的成骨细胞和成纤维细胞上清液碱性磷酸酶和骨钙素含量相比较成骨组明显高于成纤维组,统计学检验有显著意义(p<0.01),流式细胞仪检测结果显示: 1、2月龄组ER荧光强度低表达,3月组ER荧光强度虽然呈低表达但已经显示出上升趋势,4月组以后ER荧光强度表达逐渐升高,至8、9、10月ER荧光强度表达至高峰,11月组之后各组ER表达荧光强度呈下降趋势.结论:二次酶消化法可获得较多的成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特性,可作为成骨细胞相关研究的细胞来源.雌性SD大鼠成骨细胞内含有丰富的ER,其表达有赖于雌激素的存在.雌性SD大鼠成骨细胞内ER表达随月龄增加呈现出1、2、3月组ER低表达,4月组以后ER表达逐渐升高,至8、9、10月ER表达至高峰,11月组之后各组ER表达呈下降趋势的规律性变化.     

Oenanthe javanica extract increases immunoreactivities of antioxidant enzymes in the rat kidney

Background Oenanthe javanica is an aquatic perennial herb originated from East Asia.Nowadays,the effects of Oenanthe javanica have been proven in various disease models.Studies regarding the antioxidant effect of Oenanthe javanica in the kidney are still unclear.Methods This study was therefore performed to investigate the effect of the Oenanthe javanica extract （OJE） in the rat kidney using immunohistochemistry for antioxidant enzymes,copper,zinc-superoxide dismutase （SOD1）,manganese superoxide dismutase （SOD2）,catalase （CAT） and glutathione peroxidase （GPx）.Sprague-Dawley rats were randomly assigned to three groups：（1） normal diet fed-group （normal-group）,（2） diet containing ascorbic acid （AA）-fed group （AA-group） as a positive control,（3） diet containing OJE-fed group （OJE-group）.AA and OJE were supplied during 28 days.Results The side-effects were not observed in all the groups.Immunoreactivities of SOD1,SOD2,CAT and GPx were easily detected in the distal tubules of the kidney,and their immunoreactivities in the AA-and OJE-groups were increased to about 1.4-1.5 times and 2 times,respectively,compared with those in the normal-group.Conclusion OJE significantly increased expressions of SOD1 ＆ 2,CAT and GPx immunoreactivities in the distal tubules of the rat kidney,and this finding suggests that significant enhancements of endogenous enzymatic antioxidants by OJE treatment may be a legitimate strategy for decreasing oxidative stresses in the kidney.     

橙皮苷对小鼠抗氧化作用及抗氧化酶基因表达影响的研究

摘要：目的 探讨橙皮苷（HDN）对机体抗氧化作用的影响。方法 采用分光光度法、邻苯三酚自氧化法和Fe2 -邻二氮菲法检测HDN体外清除自由基、抑制线粒体肿胀和红细胞氧化溶血;体内实验小鼠灌服不同浓度HDN（0、80、160、320mg/kg）连续12天,ELISA和分光光度法检测小鼠组织中MDA含量,抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-PX）活力,RT-PCR技术分析抗氧化物酶mRNA表达水平。结果 与对照组比较,HDN组自由基（?OH、O2-?、DPPH?）清除率明显提高,小鼠红细胞体外氧化溶血和线粒体肿胀显著降低;小鼠组织及血清中MDA含量降低,抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX活力明显高于对照组,组织中抗氧化物酶mRNA表达上调。结论 结果表明HDN能够清除自由基,降低自由基引起的细胞氧化损伤,抑制过氧化物生成,上调抗氧化酶基因表达及提高酶活力,呈现良好的抗氧化作用。     

雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞生物学功能的影响及护骨素表达的调控

目的 比较雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞的生物学作用及对护骨素(OPG)表达的影响。方法 在新生SD大鼠头颅骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照及空白血清对照组;分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能;半定量RT-PCR测定成骨细胞中OPG基因的表达。结果 体外培养成骨细胞在加入不同剂量的雷洛昔芬后,细胞增殖率(A₅₇₀)、OPG蛋白表达与空白对照组相比均无明显差异(P>0.05);但碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节数明显升高,与空白对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01),且与雷洛昔芬浓度呈量效关系;雌二醇对成骨细胞的A₅₇₀值、ALP活性、矿化结节数量、OPG表达等的影响和对照组相比均有显著差异(P<0.01)。结论 雌二醇对体外成骨细胞生物学功能的影响非常显著,并可上调OPG蛋白表达及表达量;雷洛昔芬对体外成骨细胞分化矿化均有影响,但对增殖影响不显著;对OPG表达也无明显影响。此结果提示雷洛昔芬影响骨代谢可能不通过OPG代谢途径,它对体外成骨细胞的作用机制与雌二醇不完全相同。     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏抗氧化酶的影响

目的：探讨阿魏酸钠（SF）对糖尿病大鼠肾脏抗氧化酶的影响。方法：对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病大鼠灌胃给予SF110mg/kg/d，治疗8周，测定各组大鼠肾重/体重、血尿素氮(BUN)、血、尿肌酐、肌酐清除率(Ccr)、24h尿蛋白定量、血清果糖胺(FMN)、血清及肾脏超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）等。结果：糖尿病对照组大鼠肾重/体重、BUN、血肌酐（Scr）、Ccr、24h尿蛋白定量、血清FMN显著高于正常对照组，治疗组肾重/体重、BUN、Ccr、24h尿蛋白定量、血清FMN显著低于糖尿病组。糖尿病对照组大鼠肾脏和血清SOD、CAT活性显著低于正常对照组，MDA显著高于正常对照组，经SF治疗的糖尿病大鼠肾脏和血清SOD、CAT活性显著高于糖尿病对照组，MDA显著降低。结论：SF通过保护肾脏抗氧化酶，减轻氧化应激对糖尿病大鼠肾脏产生保护作用。     

新生小鼠胸腺的体外生长及酶表达

目的:观察器官培养条件下新生小鼠胸腺的生长状况.方法:对新生BALB/c小鼠胸腺分别进行1、3、5和7 d的体外培养,然后用常规组织学及酶组织化学方法对其进行染色和镜下观察.结果:从培养1 d组开始,胸腺的生长状况便可分为两个区:第1区为除贴附培养滤纸一侧以外的皮质部分,第2区为髓质及贴附培养滤纸一侧的皮质部分.第1区内细胞排列紧密,细胞呈良好的生长状态,有较多酶阳性反应较强的细胞;第2区内细胞排列较松散,部分细胞结构较差,基质细胞明显减少,酶阳性反应细胞较少.以上生长状况在培养3 d组、5 d组和7 d组更加明显,且 3组之间无明显差别.结论:[ HTSS 本器官培养条件下的胸腺生长状况具有区域性差别.     

雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞生物学功能的影响及护骨素表达的调控

OBJECTIVE: To study the effect of raloxifene and estradiol on the biological function and osteoprotegerin expression of osteoblasts in vitro. METHODS: Different doses of raloxifene and estradiol were added into the medium of the second generation osteoblasts from the shull of newborn SD rats. The proliferation, differentiation, mineralization and osteoprotegerin expression of the osteoblasts in different groups were observed. RESULTS: Raloxifene had no significant effects on stimulating the proliferation, the expression of osteoprotegerin and the formation of mineral nodes of the cultured osteoblasts (the trial vs the control, P>0.05). However, raloxifene can significantly improve the alkaline phosphatase activity of the cultured osteoblasts (the trial vs the control, P<0.05). Estradiol significantly increased the proliferation of osteoblasts, and differentiation, mineralization, expression of osteoprotegerin (P<0.01 vs the control). CONCLUSION: The effects of raloxifene and estradiol on the cultured osteoblasts are different, which implied their different mechanisms in inducing osteoporosis.     

促红细胞生成素对衰老大鼠脑组织中抗氧化酶活性的影响

目的研究促红细胞生成素(EPO)对衰老大鼠脑组织中抗氧化酶活性的影响。方法将大鼠随机分为3组:正常对照组、衰老模型组及重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预组,每组10只。行为学实验后处死大鼠,行尼氏染色在光镜下观察海马组织神经元内的尼氏体数量;同时检测脑组织中过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果④衰老组较对照组大鼠学习记忆能力下降(P<0.05),干预组较衰老组大鼠的学习记忆能力改善(P<0.05);④光镜下见衰老组大鼠神经元内尼氏体数量较对照组明显减少,干预组较衰老组明显增多,但少于对照组;④衰老组大鼠脑组织中的CAT、GSH-Px活性均较对照组显著降低(P<0.05),而干预组的CAT、GSH-Px活性较衰老模型组显著升高(P<0.05)。结论 EPO可增强衰老大鼠脑组织中抗氧化酶的活性,提高其抗氧化能力从而起到抗衰老作用。     

阿托伐他汀对骨髓来源的成骨细胞中OPG mRNA/RANKL mRNA水平的影响

目的:观察阿托伐他汀对体外培养骨髓基质细胞来源的成骨细胞中OPGmRNA/RANKLmRNA表达的影响。方法:小鼠骨髓基质细胞在成骨条件培养基中传代培养,加入不同浓度的阿托伐他汀。通过半定量RT鄄PCR的方法,比较不同浓度药物影响下OPGmRNA和RANKLmRNA表达的变化,评判阿托伐他汀对这两种蛋白表达的影响作用。结果:半定量RT鄄PCR的观察显示在传代培养7天时各组均有OPGmRNA的转录,随着药物浓度的增加,mRNA转录水平逐渐增加,10-6mol/L组和10-7mol/L组明显高于对照组(P<0.05)。RANKLmRNA水平随着药物浓度的增加呈现出下降的现象,10-6mol/L组和10-7mol/L组明显低于对照组。结论:在小鼠骨髓基质细胞来源的成骨细胞中,阿托伐他汀促进了成骨细胞OPG的表达,同时能抑制细胞RANKL的表达。     

人参皂苷Rg1对多柔比星肾病大鼠足细胞nephrin的影响

目的足细胞的损伤是蛋白尿发生的主要机制,如何修复受损的足细胞已成为研究热点。文中观察人参皂苷Rg1对足细胞病变模型———多柔比星肾病模型的疗效及其对足细胞病变的影响。方法采用单次尾静脉注射盐酸多柔比星建立多柔比星肾病模型。SD大鼠分为空白对照组、模型组、人参皂苷Rg1高剂量组和低剂量组,分别在注射后第7、14、28天收集尿液标本,并处死大鼠,留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白排泄量、血生化指标,行肾组织光镜和电镜观察肾小球病变和足突超微结果。采用定量学方法测定足突宽度。免疫组化观察足细胞裂孔膜分子nephrin表达和分布变化。结果人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组均能改善多柔比星肾病大鼠的肾病综合征状况。同时,人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组能明显改善足突融合,增加足细胞裂孔膜分子nephrin表达(P<0.05)。人参皂苷Rg1高剂量组在血生化、肾脏病理和足细胞nephrin的表达上比人参皂苷Rg1低剂量组的改善更加明显(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对多柔比星肾病模型有很好的保护作用,而且人参皂苷Rg1高剂量组比低剂量组治疗作用更明显。     

氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。