miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

miR-214通过靶向调控E2F3抑制肝癌细胞的增殖

目的探讨miR-214通过靶向调控E2F转录因子3(E2F3)抑制肝癌细胞的增殖。方法 RT-PCR法检测细胞株SMMC-7721、Hep G2、SK-Hep-1和Huh 7中miR-214的表达量,并利用脂质体转染miR-214 NC及miR-214 mimics。采用MTT法检测miR-214对肝癌细胞活力的影响;Hoechst染色试剂盒检测miR-214对细胞凋亡的影响,流式细胞术检测miR-214对细胞周期的影响;Western blot及RT-PCR法检测miR-214对肝癌细胞中E2F3蛋白及mRNA表达量的影响,并通过荧光素酶报告基因进行验证。结果 SMMC-7721、SK-Hep-1、Huh 7及Hep G2中miR-214的表达量分别为(0.83±0.08)、(0.32±0.03)、(0.33±0.03)、(0.08±0.01),其中Hep G2中miR-214表达量最低,因此选用Hep G2作为后续实验细胞株。Hep G2细胞转染miR-214 NC及miR-214 mimics、miR-214mimics组中miR-214表达量(0.65±0.06)明显高于miR-214 NC组(0.14±0.01),miR-214 mimics组细胞活力(0.35±0.03)明显低于miR-214 NC组(0.69±0.06),miR-214 mimics组细胞凋亡率(36.37±3.43)%明显高于miR-214 NC组(3.74±0.34)%,miR-214 mimics组G1期明(57.79±5.78)显长于miR-214 NC组(45.319±4.53),miR-214 mimics组中E2F3蛋白[(0.23±0.02)、(0.24±0.02)]及mRNA表达量明显低于miR-214 NC组[(0.98±0.09)、(0.99±0.10)],差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 miR-214过表达能通过下调E2F3表达抑制肝癌细胞的增殖。     

miR-200C-3p靶向调控ZEB2抑制前列腺癌细胞增殖和迁移的实验研究

  目的  前列腺癌的进展与多种因素有关,本研究旨在探索miR-200C-3p对前列腺癌细胞系的影响,并分析miR-200C-3p与ZEB2的潜在机制。  方法  通过qRT-PCR检测miR-200C-3p在前列腺癌细胞系PC-3、DU145、前列腺上皮细胞RWPE-1的表达量。DU145转染miR-200C-3p后,通过CCK-8、划痕修复实验以及Transwell实验探究增殖与迁移能力。沉默ZEB2后分析DU145增殖和迁移能力的变化,采用双荧光素酶报告法蛋白免疫印迹实验测定miR-200C-3p与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)的潜在关系。  结果  qRT-PCR结果显示RWPE-1中miR-200C-3p表达量是DU145的2.5倍左右。DU145转染miR-200C-3p mimics后CCK-8实验组的增殖能力明显弱于对照组,划痕修复实验实验组[(20.33±1.45)%]与对照组[(46.67±2.40)%]相比愈合能力明显减弱(P < 0.001),Transwell实验结果表明实验组(114.30±5.21)与对照组(212.00±6.49)相比迁移能力显著下降(P < 0.001)。沉默ZEB2可抑制DU145细胞的增殖和迁移能力(P < 0.05),双荧光素酶报告和蛋白免疫印迹实验证实miR-200C-3p在DU145中过表达降低了ZEB2的蛋白表达(P < 0.05)。  结论  miR-200C-3p通过介导ZEB2抑制DU145的增殖和迁移。      

肺浸润性腺癌组织中miR-153-3p和PRDM2的表达

目的 观察肺浸润性腺癌组织中微小RNA-153-3p(microRNA-153-3p,miR-153-3p)和正性调控域锌指蛋白(positive regulatory domain zinc finger protein,PRDM2)的表达,分析其关联性及临床意义.方法 选择56例肺浸润性腺癌患者作为研究对象,留取术后肿瘤组织作为观察组,留取正常肺组织作为作为对照组.应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组中miR-153-3p的表达,应用免疫组化法检测肺浸润性腺癌组织中PRDM2的表达.结果 肺浸润性腺癌中miR-153-3p的表达明显低于对照组(P<0.05),MiR-153-3p在不同肿瘤最大径、肺膜累犯分组的表达中差别有统计学意义(P<0.05).MiR-153-3p的表达与预后有关(P<0.05).肺浸润性腺癌中miR-153-3p与PRDM2具有负相关性(r=-0.69,P=0.013).结论 MiR-153-3p在肺浸润性腺癌中的表达下降,其与病变的形成和进展有关.MiR-153-3p与PRDM2可能具有协同负向作用.     

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法 运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果 miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低（P<0.05）,而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义（P<0.05）;双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB1 3′UTR表达载体的荧光素酶活性,CR...     

miR-495-3p调控BUB1表达对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探究miR-495-3p调控BUB1表达水平对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法：qRT-PCR法测定人肝内正常胆管上皮细胞（HIBEpiC）、胆管癌细胞RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1中miR-495-3p和BUB1mRNA表达水平;将SNU-869细胞分为空白对照组、阴性对照组、miR-495-3pmimics组、miR-495-3p mimics+pcDNA组、miR-495-3p+pc-BUB1组,比较各组SNU-869细胞增殖、迁移和侵袭能力情况、miR-495-3p及BUB1 mRNA表达水平以及BUB1、ki-67、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况。结果：与HIBEpiC细胞相比,RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1细胞中miR-495-3p表达水平降低（P<0.05）,BUB1表达水平升高（P<0.05）。与空白对照组相比,miR-495-3p mimics组SNU-869细胞中miR-495-3p表达升高（P<0.05）,增殖能力、侵袭细胞数、迁移细胞数、ki-67、MMP-2、BUB1表达降低（P&l...     

miR-378-3p靶向调控EZH2表达对血管瘤内皮细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:研究miR-378-3p靶向调控果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)表达影响血管瘤内皮细胞侵袭和迁移能力的机制.方法:分离培养人血管瘤内皮细胞,分成空白对照组、miR-NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-378-3p组(转染miR-378-3p模拟物)3组,或miR-378-3p+pcDNA3.1组(共...     

circFOXK2靶向miR-409-3p调控肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达。体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系。转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞。细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析。蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P<0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P<0.05)。circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p。敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05),N-cadherin水平降低(P<0.05),而E-...     

lncRNA TTN-AS1通过靶向miR-204-3p调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化

目的：探讨长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA 1（lncRNA TTN-AS1）是否可通过靶向微小RNA-204-3p（miR-204-3p）调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）。方法：采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,分别将si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、si-TTN-AS1与anti-miR-NC、si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p转染至AGS细胞;采用qRTPCR法检测AGS细胞中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;采用Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测TTN-AS1、miR-204-3p的靶向关系。结果：胃癌组织中TTN-AS1的表达水平比癌旁组织增加约2.90倍（P ＜0.05）,miR-204-3p的表达水平比癌旁组织减少约0.57倍（P ＜0.05）;转染si-TTN-AS1或转染miR-204-3p mimics可明显减少迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实TTN-AS1可靶向结合miR-204-3p;共转染si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p可明显增加迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）。结论：抑制TTN-AS1表达可通过上调miR-204-3p的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。     

过表达miR-140-5p促进前列腺癌细胞凋亡抑制其增殖

［摘要］ 目的研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的表达情况,探讨 miR-140-5p在前列腺癌细胞中的生物学功能。 方法RT-qPCR方法检测前列腺癌细胞株PC3细胞及DU145细胞中miR-140-5p表达;PC3细胞中转染miR-140-5p模拟物或抑制物,CCK-8及AnnexinV/PI双染流式细胞学检测细胞活力及细胞凋亡。TCGA数据库分析高表达miR-140-5p与前列腺癌患者总生存率的关系。 结果miR-140-5p在DU145及PC3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,miR-140-5p在PC3细胞中的表达明显低于DU145细胞（P＜0.05）。转染miR-140-5p模拟物的 PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显高于阴性对照组（P＜0.05）。miR-140-5p的模拟物转染PC3细胞48 h,过表达组细胞增殖率低于阴性对照组,凋亡率高于阴性对照组（P＜0.05）。转染miR-140-5p抑制物的PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显低于阴性对照组（P＜0.05）。敲低miR-140-5p表达组细胞增殖率明显高于阴性对照组,凋亡率明显低于阴性对照组（P＜0.05）。低表达miR-140-5p组患者总生存率低于高表达miR-140-5p组患者（P＜0.05）。 结论miR-140-5p在前列腺癌细胞株低表达,低表达miR-140-5p前列腺癌患者预后不良;过表达miR-140-5p可促进前列腺癌细胞凋亡,抑制其增殖。     

黄芩苷通过调控LncRNA-MALAT1/miR-361-3p/TGF-β轴治疗低氧性肺动脉高压

目的：探讨黄芩苷（Baicalin）对低氧性肺动脉高压的治疗作用及其潜在机制。方法：选取18 只C57BL/6 雄性小鼠随机分为常氧组、低氧组及低氧+黄芩苷组,每组各6 只。21 d后采用导管法检测小鼠右心室收缩压（RVSP）及平均颈动脉压力（mCAP）,行苏木素-伊红（HE）染色观察肺动脉血管重塑程度,采用免疫组化染色检测TGF-β通路蛋白表达。常氧/低氧条件下培养小鼠肺动脉平滑肌细胞（MPASMCs）48 h,采用CCK-8法测MPASMCs细胞活力,Transwell和Wound healing检测MPASMCs细胞迁移能力,蛋白质印迹（Western blot）法检测TGF-β通路蛋白表达差异,生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测验证LncRNA-MALAT1/miR-361-3p/TGF-β轴的调控关系。结果：与低氧组比,黄芩苷干预组MPASMCs的增殖和迁移能力显著下降（P ＜0.05）,小鼠的RVSP明显下降（P ＜0.05）,肺血管重塑改善。与常氧组比,低氧组中TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、p-smad2、p-smad3表达显著升高,而黄芩苷干预后TGF-β信号通路显著抑制（P ＜0.05）。结论：黄芩苷可能通过调控LncRNA-MALAT1/miR-361-3p轴调控TGF-β表达,改善低氧MPASMCs异常增殖、低氧性肺动脉高压小鼠肺血管结构重塑,进而降低肺动脉压力。     

尿液中miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p检测在前列腺癌中的诊断及临床意义

目的:建立尿液miRNA检测板,作为诊断前列腺癌（PC）的无创性生物标志物。方法:采用miRNAs芯片分析对照1组（6名）及PC1组（18例）中miRNAs表达,并进一步利用qRT-PCR对20名对照2组及59例PC2组（GS2 6组22例,GS2 7组19例,GS28组18例）尿液、血清标本进行差异基因的进一步验证。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析组合诊断模型的准确真实性。结果:获得在PC1组中20个miRNAs差异表达谱,与对照1组相比,miRNA-24-3p及miRNA-222-3p显著表达下调（T=5.79、4.59,均P＜0.05）,用于PC诊断检测。在扩大样本量的PC患者尿液及血清样本中,根据GS分组的GS26、GS27及GS28组中,与对照2组相比,miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p表达水平也都显著下调（t=3.89,P＜0.05）,ROC分析联合诊断模型具有较高的准确度（曲线下面积为0.93,OR=1.37,95% CI:0.92~1.76,P＝0.02）。结论:在尿液、血清样本中建立了miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p组合模型,可作为诊断PC的无创性生物标志物。     

MiR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及其机制

目的探讨miR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及机制。方法选取2016年1月至2017年7月宣城市中心医院保存的乳腺癌组织和相应的正常乳腺组织(距肿瘤边缘> 5 cm)标本各50例,培养乳腺癌MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF-10A,采用反转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织、正常乳腺组织、MCF-7细胞及MCF-10A细胞中miR-152-3p及PIK3CA mRNA表达。培养MCF-7细胞,待细胞融合度达30%～50%时将细胞分为空白组、阴性对照组、miR-152-3p mimic组、miR-152-3p inhibitor组、si-PIK3CA组和miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组,空白组细胞不转染任何序列,阴性对照组细胞转染miR-152-3p阴性对照质粒,miR-152-3p mimic组细胞转染miR-152-3p mimic质粒,miR-152-3p inhibitor组细胞转染miR-152-3p inhibitor质粒,si-PIK3CA组细胞转染si-PIK3CA质粒,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组细胞共转染miR-152-3p inhibitor质粒和si-PIK3CA,转然后继续培养24～48 h;采用Western blot法检测各组MCF-7细胞中PIK3CA、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38和E-cadherin蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测各组MCF-7细胞增殖活性,划痕实验检测各组MCF-7细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测各组MCF-7细胞侵袭能力。结果乳腺癌组织中miR-152-3p相对表达量显著低于正常乳腺组织,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于正常乳腺组织(P <0. 05)。MCF-7细胞中miR-152-3p相对表达量显著低于MCF-10A细胞,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于MCF-10A细胞(P <0. 05)。与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0. 05)。细胞增殖能力实验结果显示,48、72、96 h时,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞增殖能力显著低于空白组和阴性对照组,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞增殖能力显著高于空白组和阴性对照组(P <0. 05); 48、72、96 h时,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,空白组与阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05);与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著增强(P <0. 05); miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 miR-152-3p在乳腺癌组织中低表达,miR-152-3p可能参与了乳腺癌的发生与发展,miR-152-3p可能通过抑制PIK3CA表达而抑制MAPK信号通路的激活,进而抑制乳腺癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。     

肺癌患者血浆miR-197-3p和miR-361-3p表达的诊断评价

目的:评价血浆miR-197-3p和miR-361-3p用于肺癌诊断的价值。方法:采用实时定量PCR法检测57例肺癌患者和53例良性肺病患者血浆中miR-197-3p和miR-361-3p的表达水平。建立这两个血浆miRs的受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断肺癌的效果,并与血清癌胚抗原和细胞角蛋白19(Cyfra21-1)诊断效果进行比较。结果:miR-197-3p和miR-361-3p在肺癌患者血浆中的表达水平明显高于良性肺病患者(均P<0.001)。两指标诊断肺癌的ROC曲线下面积分别为0.908和0.869(均P<0.001)。血浆miR-197-3p表达与肺癌的病理组织学类型显著相关(P=0.011);而血浆miR-361-3p表达与肺癌的分化程度及临床分期相关(P=0.005和P=0.015)。血浆miR-197-3p和miR-361-3p测定诊断肺癌的敏感性(78.9%和71.9%)和准确性(81.8%和80%)高于血清癌胚抗原(42.6%和60%)和Cyfra21-1(25%和58.9%),两种miR的联合检测可较大程度提高诊断的敏感性(89.5%)和准确性(85.5%),但特异性略有下降。结论:血浆miR-197-3p和miR-361-3p可作为诊断肺癌的肿瘤标志物,诊断效果优于血清癌胚抗原和Cyfra21-1。     

E2F3蛋白在前列腺癌中的表达及意义

目的:探讨E2F3蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化EliVisionTM plus二步法,检测49例前列腺癌(PCa),20例良性前列腺增生(BPH)及10例肾移植正常前列腺(NP)组织中E2F3蛋白的表达,分析E2F3蛋白在前列腺癌组织中的表达及血清PSA和预后的关系.结果:PCa中E2F3的水平明显高于BPH(P＜0.05)及NP(P＜0.05),且与PCa病理分级临床分期和血清PSA及预后有密切的联系.结论:E2F3可作为前列腺癌新的标志物.检测E2F3有助于判定前列腺癌恶性程度及预后.     

miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度

目的：探讨在阿尔茨海默病（Alzheimer’s diseases,AD）细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响。方法：体外培养野生型N2a（N2a/WT）和N2a/APPswe细胞,real-time PCR及Western blot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）mRNA及蛋白的表达。双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系。N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物（mimics）,real-time PCR、Western blot分别检测Caveolin-1 mRNA和蛋白的表达。N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物（mimics）、pcDNA-Caveolin-1、Caveolin-1-siRNA,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,测定细胞内游离钙离子浓度。结果：与WT组相比,APPswe组APP mRNA和蛋白水平表达都明显升高（分别为P=0.000,P=0.000）,miR-124-3p表达明显降低（P=0.000）。双荧光素酶报告实验表明,和与突变型载体（pGL3-Caveolin-1 3’UTR MUT）共转染组相比,与野生型载体（pGL3-Caveolin-1 3’UTR WT）共转染组的相对荧光素酶活性和明显减弱（P=0.004）;转染miR-124-3p mimics后,与空载体组比较,miR-124-3p mimcs转染组的Caveolin-1 mRNA和蛋白的表达明显下调（分别为P=0.000,P=0.000）;分别转染miR-124-3p mimics、Caveolin-1-siRNA后,与空载体组比较,细胞凋亡率降低（分别为P=0.000,P=0.000）,游离钙离子浓度降低（分别为P=0.000,P=0.000）;转染pcDNA-Caveolin-1后,得到与上述相反的结果（分别为P=0.000,P=0.000）。结论：miR-124-3p可以通过靶向下调Caveolin-1的表达,抑制AD细胞凋亡,降低细胞中游离钙离子浓度,从而发挥神经保护作用,为AD的防治提供新的思路和靶点。     

miR-449a/b负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖

摘要：目的 探讨miR-449a/b在胃癌发生中的可能作用机制。方法 采用qRT-PCR方法检测了miR-449a/b和E2F1基因在胃癌细胞BGC-823和胃粘膜细胞GES-1表达情况;采用瞬时转染技术将miR-449a/b模拟物(mimic)以及mimic阴性对照分别转入胃癌细胞BGC-823中,qRT-PCR验证转染成功后,通过CCK-8法检测胃癌细胞的增殖能力,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡的变化,细胞划痕实验检测胃癌细胞的迁移能力,Western blot方法检测miR-449a/b上调后其靶基因蛋白的表达水平;并通过转染E2F1过表达质粒和空质粒对照入胃癌细胞BGC-823,Western blot确定转染效率后,分别用qRT-PCR和数字PCR检测miR-449a/b的表达水平。结果 相比于正常胃粘膜细胞株GES-1,miR-449a/b在胃癌细胞株BGC-823中表达均下调（P<0.01）;过表达miR-449a/b可抑制胃癌细胞BGC-823增殖和迁移,并促进其凋亡（P<0.05）;过表达的E2F1可上调miR-449a/b的表达（P<0.001）,而上调miR-449a/b的表达,其直接靶基因CDK4、CDK6表达下调,并可通过CDKs-pRb-E2F1信号通路,间接下调E2F1蛋白的表达（P<0.01）。结论 miR-449a/b的低表达和E2F1的高表达均参与了胃癌的发生、发展,并且miR-449a/b能负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖。     

Exosomal miR-485-3p derived from pancreatic ductal epithelial cells inhibits pancreatic cancer metastasis through targeting PAK1

Background:Cell competition is an important feature in pancreatic cancer (PC) progression, but the underlying mechanism remains elusive. This study aims to explore the role of exosomes derived from normal pancreatic ductal epithelial cells involved in PC progression.Methods:PC cells and pancreatic stellate cells (PSCs) were treated with exosomes isolated from pancreatic ductal epithelial cells. Cell proliferation was assessed by CCK8 assays. Cell migration and invasion were assessed by Transwell assays. PC and matched adjacent non-tumor tissue specimens were obtained from 46 patients pathologically diagnosed with PC at Peking University First Hospital from 2013 to 2017. Tissue miR-485-3p and p21-activated kinase-1 (PAK1) expression was examined by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), and the relationship of the two was analyzed using Pearman''s product-moment correlation. The clinical significance of miR-485-3p was analyzed using the Chi-square test, Wilcoxon rank-sum test, and Fisher exact probability, respectively. The binding of miR-485-3p to PAK1 5′-untranslated region (5′-UTR) was examined by luciferase assay. PC cells were xenografted into nude mice as a PC metastasis model.Results:Exosomes from pancreatic ductal epithelial cells suppressed PC cell migration and invasion as well as the secretion and migration of PSCs. MiR-485-3p was enriched in the exosomes of pancreatic ductal epithelial cells but deficient in those of PC cells and PSCs, in accordance with the lower level in PSCs and PC cells than that in pancreatic ductal cells. And the mature miR-485-3p could be delivered into these cells by the exosomes secreted by normal pancreatic duct cells, to inhibit PC cell migration and invasion. Clinical data analysis showed that miR-485-3p was significantly decreased in PC tissues (P < 0.05) and was negatively associated with lymphovascular invasion (P = 0.044). As a direct target of miR-485-3p, PAK1 was found to exert an inhibitory effect on PC cells, and there was a significantly negative correlation between the expression levels of miR-485-3p and PAK1 (r = −0.6525, P < 0.0001) in PC tissues. Moreover, miR-485-3p could suppress PC metastasis in vivo by targeting p21-activated kinase-1.Conclusions:Exosomal miR-485-3p delivered by normal pancreatic ductal epithelial cells into PC cells inhibits PC metastasis by directly targeting PAK1. The restoration of miR-485-3p by exosomes or some other vehicle might be a novel approach for PC treatment.