干扰E2F3基因对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的探究干扰转录因子E2F3基因表达对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法转染siRNA干扰前列腺癌Du145细胞中E2F3基因表达,实验分为对照组、Du145 NC组(转染siRNA-NC)、Du145-siRNA组(转染siRNA-E2F3)。Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹法(western blot)检测细胞中E2F3、钙黏蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达量。结果转染siRNA-E2F3后,Du145细胞中E2F3蛋白的表达量显著低于对照组(P0.01);Du145-siRNA组细胞的侵袭数目、划痕愈合率显著低于对照组(P0.01);Du145-siRNA组细胞中E-cadherin蛋白表达上调(P0.01),MMP-9蛋白表达下调(P0.01)。结论干扰E2F3可降低前列腺癌Du145细胞的迁移和侵袭能力,该作用可能通过调控Ecadherin和MMP-9蛋白表达实现的。     

干扰LINC00308促进miR-634对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

【摘要】 目的 研究干扰长链非编码RNA（lncRNA）LINC00308是否通过促进微小RNA（miRNA） 634影响前列腺癌细胞的增殖与凋亡。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测前列腺癌组织中LINC00308的表达。利用LINC00308小干扰RNA（si LINC00308）转染前列腺癌细胞PC 3M和DU145，构建干扰LINC00308的细胞，采用qRT PCR检测LINC00308和miR 634的表达水平，流式细胞术评估细胞的周期与凋亡，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞核相关抗原Ki67（Ki67）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）蛋白的表达。starBase在线工具预测结合双荧光素酶报告实验分析LINC00308对miR 634的靶向调控。在PC 3M和DU145细胞中转染miR 634 mimic，利用上述方法检测miR 634在细胞增殖凋亡中的作用。 结果 前列腺癌组织中的LINC00308表达水平明显高于癌旁组织（P＜005）。干扰LINC00308显著提高PC 3M和DU145细胞的miR 634的表达水平、G0 G1期细胞比例、细胞凋亡率和Caspase3蛋白水平，明显降低S期细胞比例、Ki67蛋白水平（P＜005）。LINC00308靶向调控miR 634的表达。转染miR 634 mimic显著增加PC 3M和DU145细胞的G0 G1期细胞比例、凋亡率和Caspase3蛋白水平，明显减少S期细胞比例和Ki67蛋白水平（P＜005）。 结论 干扰LINC00308可以促进miR 634的表达，阻滞前列腺癌细胞周期，并诱导细胞凋亡。     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

lncRNA DLEU2通过调节miR-410-3p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移、侵袭的影响

目的 研究长链非编码RNA（lncRNA）DLEU2对微小RNA（miR） 410 3p的调控作用及对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测类风湿性关节炎患者滑膜组织中DLEU2和miR 410 3p的表达。LncBase Predicted v.2预测和双荧光素酶报告实验分析DLEU2和miR 410 3p的靶向关系。在RA滑膜成纤维细胞MH7A中转染si DLEU2或miR 410 3p,或共转染si DLEU2和anti miR 410 3p。噻唑蓝（MTT）、Transwell、Western blot检测RA滑膜成纤维细胞MH7A的增殖、迁移、侵袭及细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶（MMP） 2、MMP 9蛋白表达。结果 RA患者滑膜组织中DLEU2表达量明显增加,miR 410 3p表达量显著减少（P＜0.05）。lncRNA DLEU2靶向调控miR 410 3p的表达。抑制DLEU2表达或miR 410 3p过表达明显降低RA滑膜成纤维细胞MH7A 24 h、48 h、72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP 2、MMP 9蛋白表达量,而显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。干扰miR 410 3p表达逆转了抑制DLEU2表达对RA滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论 lncRNA DLEU2在类风湿关节炎滑膜组织中表达上调,抑制其表达通过靶向miR 410 3p抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移侵袭。     

miR-155-5p mimic靶向HIF-1α对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制

【摘要】 目的 探讨miR-155-5p mimic靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制。 方法 取对数期生长的A549细胞,将未经转染的细胞设为Control组,miR-155 mimic及HIF-1α分别转染至A549细胞,设为miR 155 mimic组和HIF-1α组;再将两者共同转染于A549细胞,设为mimic+HIF-1α组。采用荧光素酶报告基因检测miR 375与SLC7A11的靶向关系,利用RT PCR检测各组细胞miR 155-5p及HIF-1α mRNA表达水平,Edu染色检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中各蛋白表达。结果 HIF-1α是miR 155-5p-mimic的靶向基因。与Control组相比,miR-155-mimic组HIF-1α-mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均升高（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。与Control组相比,miR-155-mimic组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）,HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量升高,E cadherin蛋白表达量降低（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）。结论 miR-155-5p可通过靶向抑制HIF-1α表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化及VEGF/P38通路相关。     

利多卡因调控miR 15a 5p对肝癌细胞生物学功能的影响及其机制

【摘要】目的 探讨利多卡因对肝癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制。 方法 使用不同浓度利多卡因作用于肝癌细胞HepG2,正常培养的HepG2细胞为对照组。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病 2（Bcl 2）、Bcl 2相关X蛋白（Bax）、E 钙黏蛋白（E cadherin）、基质金属蛋白酶 2（MMP 2）蛋白表〖JP2〗达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,qPCR检测细胞中miR 15a 5p表达。在细胞中转染miR 15a 5p、anti miR 15a 5p〖JP〗及各自阴性对照的转染并使用01 mmol/L利多卡因处理细胞,观察其对HepG2细胞凋亡、迁移、侵袭的影响。 结果 与对照组相比,001、01和1 mmol/L利多卡因增加细胞凋亡率和Bax蛋白表达量（P＜005）,降低Bcl 2蛋白水平（P＜005）。01 mmol/L利多卡因明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP 2蛋白表达量（P＜005）,升高E cadherin蛋白水平和miR 15a 5p表达量（P＜005）。过表达miR 15a 5p增加细胞凋亡率、Bax和E cadherin蛋白表达量（P＜005）,减少迁移细胞数、侵袭细胞数、Bcl 2和MMP 2蛋白表达量（P＜005）。 结论 利多卡因通过调控miR 15a 5p表达抑制肝癌细胞迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

miR-181靶向TIMP3调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的实验研究

目的研究miR-181靶向金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的作用。方法培养胆囊癌GBC-SD细胞,转染miR-181 mimic、阴性对照(NC)mimic、TIMP3 siRNA、NC siRNA、表达TIMP3的重组质粒、空白质粒,荧光定量PCR检测miR-181的表达量,Western blot检测TIMP3的表达量,Transwell检测细胞迁移和侵袭活力,生物信息学分析及荧光素酶报告基因实验验证miR-181靶向TIMP3;皮下注射转染miR-181 mimic或NC mimic的GBC-SD细胞后建立荷瘤鼠模型,检测移植瘤质量及miR-181、TIMP3表达量。结果细胞实验显示:转染miR-181 mimic促进细胞迁移及侵袭、抑制细胞中TIMP3的表达及双荧光素酶报告基因的荧光素酶活力;转染TIMP3 siRNA促进细胞迁移及侵袭;转染表达TIMP3的重组质粒后,miR-181 mimic促进细胞迁移、侵袭的作用减弱。动物实验显示:转染miR-181 mimic使移植瘤的质量减轻、移植瘤中TIMP3的表达增加。结论 miR-181具有促进胆囊...     

尿酸通过下调lncRNA MIR22HG的表达促进前列腺癌细胞增殖及迁移

目的: 探讨尿酸（uric acid, UA）是否通过lncRNA MIR22HG调控前列腺癌细胞的增殖和迁移。方法: 选用前列腺癌DU145细胞,将其分为对照组和尿酸处理组（400 μmol/L）,转染si MIR22HG或si-NC组,转染pcDNA -MIR22HG或pcDNA组,以及UA+pcDNA-MIR22HG或UA+pcDNA组。应用qRT-PCR法检测DU145细胞中MIR22HG的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和P21的表达,Transwell测定细胞迁移能力。结果: 与对照组比较,400 μmol/L尿酸处理后,DU145细胞的MIR22HG表达显著下降（P＜0.01）,同时前列腺癌DU145细胞活力及迁移能力均显著增强（P均＜0.01）,Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平亦显著升高（P均＜0.01）,P21蛋白表达水平显著下降（P＜0.01）。与相应对照组相比,下调MIR22HG能够显著促进前列腺癌DU145细胞增殖、迁移（P均＜0.01）,而上调MIR22HG可以抑制其增殖、迁移（P＜0.01）。同时,过表达MIR22HG能够逆转尿酸对DU145细胞增殖和迁移能力的促进作用（P均＜0.01）。结论:尿酸通过下调MIR22HG的表达促进前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移。     

上调miR-378a-3p对血管瘤内皮细胞生长和侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-378a-3p（miR-378a-3p）对血管瘤内皮细胞（HemECs）增殖、侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法 HemECs细胞随机分为对照组、miR-NC组及miR-378a-3p组;对照组为常规培养HemECs细胞,miR NC组和miR-378a-3p组HemECs细胞分别在脂质体（Lipofectamine RNAIMAX）的介导下转染阴性对照以及miR-378a-3p模拟物。荧光定量PCR（qPCR）检测miR-378a-3p的表达量,细胞计数（CCK 8）检测各组细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移;在线数据库TargetScan预测以及双荧光素酶报告基因验证miR-378a-3p与驱动蛋白超家族2A（KIF2A）的靶向关系。 〖HTH〗结果〓〖HTK〗与对照组相比,miR-378a-3p模拟物能明显上调HemECs细胞中miR-378a-3p的表达量（P＜0.05）;上调miR-378a-3p的表达量抑制HemECs细胞增殖,降低其侵袭、迁移的能力（P＜0.05）;KIF2A是miR-378a-3p下游靶基因之一。结论 miR-378a-3p可能通过靶向KIF2A抑制HemECs细胞的增殖、侵袭及迁移。     

沉默RALA基因表达对前列腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡的影响

目的：利用小干扰RNA(siRNA)靶向RALA基因,使其表达受抑制后探讨对前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其可能的机制。方法：采用RT-PCR检测前列腺癌DU145、PC-3和LNCap细胞中RALA mRNA的表达水平。通过LipofectamineTM 2000将RALA-siRNA转染体位培养的DU145细胞株,采用MTT法检测RALA-siRNA对DU145细胞株增殖的影响;Transwell实验检测RALA-siRNA对DU145细胞株迁移能力的影响;流式细胞术检测RALA-siRNA对DU145细胞株凋亡影响。应用RTPCR及Western blot方法检测沉默RALA基因后DU145细胞株中RALA的表达水平。结果：RT-PCR检测结果提示DU145细胞株中RALA mRNA的表达水平高于PC-3、LNCap细胞株,其相对表达水平分别为（0.83±0.02）、（0.37±0.07）和（0.41±0.01）,差异均有统计学意义（P<0.05）。MTT检测结果显示,转染RALA-siRNA后DU145细胞株的增殖明显受抑制,与空白对照组及阴性对照组比较差异有统计学...     

miR-4306通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭

目的: 研究miR-4306在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法: 选取人成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞Saos-2、MNNG/HOS CI #5,采用qRT-PCR检测miR-4306表达水平。将miR-4306 mimics和阴性对照分别转染至骨肉瘤细胞Saos-2和MNNG/HOS CI #5,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭,蛋白质免疫印迹检测细胞内上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）标志蛋白表达水平。通过在线靶基因预测网站Targetscan、Starbase预测miR-4306靶基因可能为富含AT序列特异性结合蛋白2（special AT rich sequence binding protein 2, SATB2）,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR 4306 mimics、LV SATB2共转染至骨肉瘤细胞中,检测细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT标志蛋白表达水平变化。结果: 与人成骨细胞hFOB 1.19比较,骨肉瘤细胞Saos 2、MNNG/HOS CI #5中miR-4306表达明显降低（P均＜0.01）。转染miR-4306 mimics后,骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,N-钙黏蛋白、血管内皮生长因子表达水平显著降低,E 钙黏蛋白表达水平显著升高（P＜0.05或＜0.01）。SATB2是miR-4306下游的直接靶标;与miR-4306 mimics+LV-NC组比较,miR-4306 mimics+LV-SATB2组部分逆转miR-4306对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的影响。结论: miR-4306在骨肉瘤细胞中呈低表达,其可通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。     

MTBP调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的研究鼠双微体2 癌基因结合蛋白（MTBP）对人前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用 Western blot检测MTBP在22RV1、DU145及Lncap三种不同前列腺癌细胞中的表达水平。采用siRNA及MTBP质粒分别转染 细胞,转染48 h后,用Western blot检测MTBP蛋白的表达量,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂 直迁移及侵袭能力。用Western blot 检测细胞上皮间质转化（EMT）标志分子E-cadherin蛋白表达量的变化。结果在前列腺癌 细胞中,MTBP在转移性前列腺癌细胞DU145中表达最高,Lncap细胞次之,局限性前列腺癌细胞22RV1中最低,MTBP的表达 水平与前列腺癌细胞的转移侵袭能力呈正相关。siRNA干扰及MTBP质粒转染细胞分别能显著降低或提高前列腺癌细胞中 MTBP的蛋白表达水平。划痕实验结果显示抑制MTBP的表达后,前列腺癌细胞的迁移能力降低,而MTBP过表达能显著促进 前列腺癌细胞的迁移（P<0.01）。Transwell实验发现抑制MTBP的表达可降低前列腺癌细胞的迁移侵袭能力,而MTBP过表达 后,能显著促进前列腺癌细胞的迁移侵袭能力（P<0.01）;Western blot 结果显示抑制MTBP的表达可使前列腺癌细胞的Ecadherin 蛋白表达水平升高,而MTBP过表达的前列腺癌细胞中E-cadherin蛋白表达水平降低。结论MTBP可促进前列腺癌 细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与诱导EMT有关。     

lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。方法选择人结肠癌细胞HCT116,并将细胞分为6组,培养48 h后进行后续实验;采用qRT-PCR法检测各组细胞TUG1与miRNA-145的表达水平;采用MTT检测各组细胞的增殖情况;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因实验验证TUG1与miRNA-145的靶向关系。结果与人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460相比,结肠癌细胞株HCT116中TUG1相对表达水平明显升高,miRNA-145相对表达水平明显降低（P < 0.01）;miRNA-145与TUG1 3'-UTR存在结合位点。与TUG1 siRNA阴性对照组相比,TUG1 siRNA组HCT116细胞中TUG1表达水平明显降低（P < 0.01）,HCT116细胞增殖活性降低（P < 0.05）,细胞划痕相对宽度明显增加,细胞侵袭数目明显减少（P < 0.05）;与miRNA NC组相比,miRNA-145 mimic组HCT116细胞中miRNA-145表达水平明显升高,HCT116细胞增殖活性降低（P < 0.05）,细胞划痕相对宽度明显增加,细胞侵袭数目明显减少（P < 0.01）;与TUG1 siRNA阴性对照组相比,TUG1 siRNA组HCT116细胞中miRNA-145表达水平升高（P < 0.05）;与si-TUG1+miRNA NC组相比,TUG1 siRNA+miRNA-145 inhibitor组HCT116细胞中miRNA-145表达水平降低（P < 0.05）,HCT116细胞增殖活性增强,细胞划痕相对宽度减小,细胞侵袭数目增加（P < 0.05）。结论结肠癌HCT116细胞中TUG1表达上调,miRNA-145表达下调,干扰TUG1表达可通过靶向上调miRNA-145的表达,抑制结肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-200C-3p靶向调控ZEB2抑制前列腺癌细胞增殖和迁移的实验研究

  目的  前列腺癌的进展与多种因素有关,本研究旨在探索miR-200C-3p对前列腺癌细胞系的影响,并分析miR-200C-3p与ZEB2的潜在机制。  方法  通过qRT-PCR检测miR-200C-3p在前列腺癌细胞系PC-3、DU145、前列腺上皮细胞RWPE-1的表达量。DU145转染miR-200C-3p后,通过CCK-8、划痕修复实验以及Transwell实验探究增殖与迁移能力。沉默ZEB2后分析DU145增殖和迁移能力的变化,采用双荧光素酶报告法蛋白免疫印迹实验测定miR-200C-3p与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)的潜在关系。  结果  qRT-PCR结果显示RWPE-1中miR-200C-3p表达量是DU145的2.5倍左右。DU145转染miR-200C-3p mimics后CCK-8实验组的增殖能力明显弱于对照组,划痕修复实验实验组[(20.33±1.45)%]与对照组[(46.67±2.40)%]相比愈合能力明显减弱(P < 0.001),Transwell实验结果表明实验组(114.30±5.21)与对照组(212.00±6.49)相比迁移能力显著下降(P < 0.001)。沉默ZEB2可抑制DU145细胞的增殖和迁移能力(P < 0.05),双荧光素酶报告和蛋白免疫印迹实验证实miR-200C-3p在DU145中过表达降低了ZEB2的蛋白表达(P < 0.05)。  结论  miR-200C-3p通过介导ZEB2抑制DU145的增殖和迁移。      

eIF3b在三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的：探讨真核细胞翻译起始因子3的亚基b(eIF3b)基因在三阴性乳腺癌（TNBC）增殖和侵袭中的作用。方法：采用免疫组化法检测50例TNBC组织中eIF3b蛋白的表达;应用实时定量聚合酶链反应（RT-q PCR）、细胞计数试剂盒8(CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕实验、细胞侵袭实验,以及蛋白质印迹（Western blot）法分别检测RNA干扰（RNAi）前后MDA-MB-231细胞株eIF3b mRNA表达、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭能力的变化,以及β-Catenin、C-myc蛋白的表达。结果：50例TNBC中eIF3b高表达率为74%,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）,与Ki-67表达、淋巴结转移有关（P<0.05）,而与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05）。RNAi后MDA-MB-231细胞株的eIF3b mRNA水平显著下降（P<0.05）,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P<0.05）,Western blot结果显示β-Catenin蛋白和C-myc蛋白表达水平显著低于对照组（P<0.05）。结论：e...     

沉默信息调节因子1小干扰RNA抑制前列腺癌细胞DU145的迁移

目的 观察沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌DU145细胞迁移和基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9表达变化的影响.方法 体外培养DU145细胞,实验分Scramble siRNA组和SIRT1siRNA组;利用脂质体介导转染技术转染前列腺癌DU145细胞,Western blot方法检测DU145细胞中SIRT1的干涉效能;划痕实验、平板克隆实验和Transwell迁移实验研究SIRT1对其体外迁移运动能力的影响;Western blot方法检测DU145细胞中MMP2和MMP9的蛋白表达.结果 与Scramble siRNA组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1的蛋白表达水平降低,明显抑制DU 145细胞的迁移,降低MMP2和MMP9蛋白.结论 下调SIRT1的表达可以抑制前列腺癌细胞DU145的迁移,其机制可能与改变基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9的表达相关.     

微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌细胞生长的影响

摘要 目的 研究微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌生长的影响。方法 利用PWR1E,RWPE1和DU145细胞株,通过蛋白质印迹分析、siRNA实验和MTT实验,检测微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸微管蛋白的含量,并观察细胞的生长情况。结果 在硝基化酪氨酸的作用下,DU145细胞的硝基化酪氨酸微管蛋白含量低于PWR1E和RWPE1细胞（P＜0.05）;和对照组相比,PWR1E和RWPE1实验组细胞生长受到抑制（P＜0.05）,而DU145细胞生长无明显改变（P＞0.05）;在有效沉默TTLL12后,实验组的硝基化酪氨酸微管蛋白含量高于对照组（P＜0.05）;实验组在硝基化酪氨酸作用下,细胞生长受到抑制,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）,而对照组内两组细胞生长改变较小,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 TTLL12可使前列腺癌细胞逃避硝基化酪氨酸的打击,从而使前列腺癌细胞逃脱机体监控作用,获得异常增殖机会,而对这一调控机制的进一步研究,将有助于控制肿瘤细胞的生长。     

FGF8b调控前列腺癌细胞上皮间质转化的分子机制

目的:探讨成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor 8b,FGF8b)促进前列腺癌DU145细胞上皮间质转化的分子机制。方法:先选取3组细胞,分别为空白对照组(DU145细胞)、阴性对照组[(DU145细胞转染空白质粒(简称pcDNA3.1/DU145)]和实验组[DU145细胞转染FGF8b(简称FGF8b/DU145)]。采用Western印迹检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路活性,然后将FGF8b/DU145细胞及DU145细胞在PD98059(ERK激酶抑制剂)作用下分为4组:A组为2%胎牛血清(FBS)处理的FGF8b/DU145细胞;B组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的FGF8b/DU145细胞;C组为2%FBS处理的DU145细胞;D组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的DU145细胞,培养观察细胞形态学的变化,最后Western印迹和Transwell小室检测各组细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的变化以及细胞的迁移能力改变。结果:实验组ERK1/2活性明显高于空白对照组和阴性对照组。给予PD98059后,B组与未给予PD98059组的A组相比,上皮细胞标志物上皮钙黏素蛋白表达量明显上调(P<0.05);间质标志物波形蛋白表达量明显下调(P<0.05)。细胞迁移试验结果提示:在给予PD98059后,B组FGF8b/DU145细胞的迁移能力与A组相比明显减弱。结论:FGF8b调控前列腺癌细胞DU145发生上皮-间质转化,可能由ERK激酶通路介导,MAPK激酶1作为该信号通路的关键因子之一,可能是干预前列腺侵袭转移的有效靶点。