蚌埠市2018年水产品致病性弧菌污染情况检测结果分析

目的 了解蚌埠市水产品中致病性弧菌的污染情况、副溶血弧菌毒力基因携带情况,为食源性疾病防控提供依据.方法 采集蚌埠市农贸市场、超市、饭店水产品样品,依据《2018年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》对水产品中的副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、河弧菌进行分离培养鉴定;采用荧光PCR方法检测副溶血弧菌不耐热溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、耐热相关溶血素(TRH)和TOXR基因.结果 共采集水产品2 00份,检出致病性弧菌93株,阳性数为80份,阳性率为40.0％,其中副溶血弧菌检出率22.5％、霍乱弧菌检出率3.5％、创伤弧菌检出率0.5％、溶藻弧菌检出率17.0％、河弧菌检出率3.0％;全部副溶血弧菌毒力基因均为阴性.结论 5种致病性弧菌在蚌埠市水产品中均有不同程度的污染,其中以副溶血弧菌和溶藻弧菌最为严重.     

055 副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌，可引起急性胃肠炎和原发性败血症。副溶血性弧菌能够产生3类溶血素，包括不耐热溶血素（TLH）、耐热直接溶血素（TDH）和TDH相关溶血素（TRH）。TLH、TDH和TRH分别由tlh、tdh和trh基因编码。副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交，复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势。     

055副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌,可引起急性胃肠炎和原发性败血症.副溶血性弧菌能够产生3类溶血素,包括不耐热溶血素(TLH)、耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH).TLH、TDH和TRH分别由tlh、tdh和trh基因编码.副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交,复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势.     

副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌,可引起急性胃肠炎和原发性败血症。副溶血性弧菌能够产生3类溶血素,包括不耐热溶血素(TLH)、耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH)。TLH、TDH和TRH分别由tlht、dh和trh基因编码。副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交,复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势。     

不同来源副溶血性弧菌血清群和毒力基因及其耐药性

目的了解副溶血性弧菌水产品分离株和食物中毒患者分离株的血清群、毒力基因及其耐药性,为预防控制溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。方法对副溶血性弧菌分离株利用血清凝聚试验进行分群,应用聚合酶链式反应(PCR)方法检测耐热直接溶血素(TDH)和耐热直接溶血素相关毒素(TRH)毒力基因,采用纸片扩散法进行药敏试验。结果 35株水产品分离株分布于O4、O3、O2、O11、O5、O1共6个血清群,无优势菌群,TDH与TRH毒力基因均阴性。22株食品中毒分离株分布于O3、O4、O1共3个血清群,以O3群为主,占81.8%,TDH阳性率77.3%,TRH阳性率13.6%。药敏试验结果显示副溶血性弧菌对青霉素类、头孢类、磺胺类抗生素部分耐药或完全耐药,对其他类抗生素敏感。结论副溶血性弧菌水产品分离株与食物中毒分离株的血清群、毒力基因存在较大的差异,所分离菌株对多种常用药物敏感性高。     

2021年河北省沧州市水产品中致病性弧菌污染状况分析

目的 了解致病性弧菌在沧州市水产品中的污染状况，为食源性疾病防控和食物中毒监测提供数据支持。方法 采用随机抽样的方法采集2021年沧州市水产品样品，按照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中监测方法，对副溶血性弧菌等4种致病性弧菌进行检测，对霍乱弧菌和副溶血性弧菌进行基因检测，确定其毒力基因，并对霍乱弧菌进行血清分型。结果 220份水产品中74份检出致病性弧菌，检出率为33.64%。其中副溶血性弧菌检出率为22.73%，溶藻弧菌检出率为7.27%，霍乱弧菌检出率为2.73%，创伤弧菌检出率为0.91%。分离出的50株副溶血性弧菌均携带tlh基因型，未携带tdh和trh基因；6株霍乱弧菌都为非O1/O139群霍乱弧菌，ctx毒力基因为阴性。结论 2021年沧州市部分水产品中存在致病性弧菌污染，以副溶血性弧菌和溶藻弧菌为主。市场监管部门应加强对各类水产品的监管力度，降低致病性弧菌引发的食源性疾病风险。     

义乌市市售水产品副溶血性弧菌污染状况调查

目的了解义乌市2011—2013年市售水产品副溶血性弧菌污染状况。方法采集义乌市具有代表性的农贸市场、大型超市和餐饮单位的561份常见水产品进行副溶血性弧菌分离培养,采用血清凝集试验进行血清分群;应用PCR方法检测直接耐热溶血素(TDH)的基因tdh和耐热直接相关溶血素(TRH)的基因trh。结果561份水产品中检出副溶血性弧菌281株,阳性检出率50.09%;其中贝类阳性检出率最高为76.85%,其次是蟹类和虾类,分别为65.71%和64.63%。281株副溶血性弧菌分成9个血清群,流行优势血清群为O1、O5和O2,分别占21.71%、18.15%和14.59%。281株副溶血性弧菌tdh基因阳性率为3.20%,trh毒力基因全部阴性。结论义乌市市售水产品中副溶血性弧菌污染较为严重,应加强食品安全管理。     

杭州市上城区2005～2007年食物中毒事件病原体分析

目的：研究调查分析杭州市上城区2005年-2007年食物中毒事件的病原体动向，重点对副溶血性弧菌菌株进行血清分型，即不同血清型的耐热溶血素基因分析，为防止食物中毒事件的发生提供可靠的依据。方法：对采集自2005年-2007年上城区发生食物中毒事件中的食品、患者粪便、患者肛拭、呕吐物、厨师手涂抹样、食品操作间涂抹样等，进行微生物学检验、副溶血性弧菌血清分型，应用PCR技术对其中45株副溶血性弧菌进行耐热直接溶血素基因（TDH）和耐热直接溶血素相关基因（TRH）的检验。结果：2005-2007年共发生27起食物中毒，由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件发生16起（59.26%）。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件发生7起（25.93%）。有4起食物中毒事件由2种及2种以上致病菌引起，其中2起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌和变形杆菌混合感染引起食物中毒；1起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌混合感染引发食物中毒；1起由副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌混合引发食物中毒。1位凉菜制作厨师同时带有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌等三种致病菌引发食物中毒。对88株副溶血性弧菌进行血清分型，单独1种血清型副溶血性弧菌食物中毒事件发生14起（70%），由2种或2种以上混合血清型副溶血性弧菌引发食物中毒事件6起（30%）。26起由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件中，88株副溶血性弧菌进行血清分型：检出01型23株（26.14%），检出02型1株（1.14%），检出03型37株（42.05%），检出04型25株（28.41%），检出05型1株（1.14%），检出010型1株（1.14%）。45株不同血清型的副溶血性弧菌，应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因和耐热直接溶血素相关基因（TDH和TRH）的检测分析。结果表明：O1型的16株菌中有15株TDH阳性，1株TDH阴性；O3型的9株菌全部TDH阳性；O4型的20株菌中，17株TDH阳性，3株TDH阴性。45株菌的TRH1和TRH2全部阴性。结论：加强对食品卫生饮食行业的监督管理，提高对食物中毒病原体快速准确检测，以控制减少食物中毒的发生。     

上海市金山区腹泻患者中分离的副溶血弧菌病原学特征研究

[目的]了解2016—2018年上海市金山区副溶血弧菌的分布和流行特征.[方法]对218株分离自腹泻患者的副溶血弧菌进行血清型分析及不耐热性溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、TDH类似溶血毒(TRH)毒力基因测定和药敏试验并进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.[结果]218株副溶血弧菌可分为8个血清群,21...     

MPCR检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究

目的建立一种快速、敏感的方法,用于检测食品中O1群(EVC)、O139群霍乱弧菌和副溶血性弧菌。方法针对霍乱弧菌O139特异基因(T139)、肠毒素A亚单位基因(ctxA)、毒力协调A亚单位基因(tcpA),副溶血性弧菌热稳定性直接溶血素基因(tdh)为靶序列,建立MPCR检测方法,相应扩增片段依次为417bp、564bp、471bp和202bp。结果用该方法对EVC、O139VC、副溶血性弧菌的标准菌株和野生株,扩增片段出现极好的特异性,而35株非O1非O139群霍乱弧菌、沙门氏菌等未见扩增带。人工污染的罗非鱼、牡蛎、鱼肠和鳃混合物的检出限EVC为22cfug、O139为50cfug、副溶血性弧菌为65cfug,整个实验过程8～10h完成。结论实验结果表明MPCR是敏感、省时、省力的检测方法。     

温州口岸外环境水体中致病性弧菌的监测

〔目的〕了解温州口岸外环境水体中致病性弧菌的分布情况,为预测霍乱疫情以及制定防治策略和措施提供科学依据。〔方法〕收集口岸内有代表性的外环境水样(包括淡水、沿海水域、下水道排放口和集中式供水网点),进行弧菌科的分离鉴定,并对调查资料进行统计分析。〔结果〕(1)96份样品中55份检出了弧菌科,总检出率为57.3%。检出弧菌共分2属7种85株,其中弧菌属68株(80%);气单胞菌属17株(20%);优势菌为溶藻弧菌、河流弧菌和创伤弧菌。(2)4类外环境水样中弧菌检出率由高到低顺序为:淡水、海域水、下水道排放口、集中式供水网点,其中集中式供水网点无致病性弧菌检出。淡水、海域水、下水道排放口3类水的检出率和构成比之间差异无显著性(P检出率=0.37,P构成比=0.99);(3)6个月中,共检出2株非O1、非O139群霍乱弧菌。〔结论〕在温州口岸外环境水体中未检出所监测的O1群O139群霍乱弧菌,但检出了非O1/非O139群霍乱弧菌。     

成都市91株副溶血性弧菌血清型、 耐药性及毒力基因检测

摘要:目的　了解成都市副溶血性弧菌食物中毒疫情分离菌株和生鲜冻水产品分离菌株血清型分布、耐药性及毒力基因携带状况,为成都市副溶血弧菌疾病防治提供科学依据。方法　对检出的91株副溶血性弧菌采用血清凝结实验血清分型;采用E-test药敏试验进行耐药性检测;用荧光PCR检测菌株的tdh、trh、tlh毒力基因。结果　91株菌分属于8个群26个血清型,主要为O1群（36.26%）,其次是O4群（23.07%）和O2群（16.48%）;46株疫情患者肛拭分离株O4群（48.71%）、O1群（35.89%）为主;22株鲜冻海产品分离株O1群（45.45%）为主;18株生鲜淡水产品分离株O2群（55.55%）为主。91株副溶血性弧菌均检出tlh,检出tdh基因均为食物中毒患者肛拭菌株,仅有1株食物中毒患者肛拭菌株检出trh基因。E-test实验结果显示,除青霉素和氨苄西林外的其他12种试验抗生素均敏感。结论　成都市引起食物中毒疫情的副溶血性弧菌主要为携带tdh基因的O4、O1群菌株。     

2014-2016年荆门市淡水鱼中致病性弧菌污染状况调查

目的 了解荆门市淡水鱼类在养殖、销售、餐饮环节中霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌等4种致病性弧菌的污染状况,为更好预防和控制食源性疾病提供科学依据。方法 2014-2016年夏季在荆门市淡水鱼养殖场、销售市场、宾馆饭店采集淡水鱼343份、养殖水体42份、销售及餐饮存养水体36份,参照《国家食品污染和有害因素风险工作手册》进行4种致病性弧菌的检测。结果 荆门市淡水鱼中4种致病性弧菌检出率为62.39%(214/343),淡水鱼养殖水体检出率为30.95%(13/42),销售及餐饮水体检出率为22.22%(8/36)。在淡水鱼所检出的致病性弧菌中,副溶血性弧菌检出率最高,为46.36%(159/343);其次为溶藻弧菌检出率为11.37%(39/343);霍乱弧菌检出率为7.29%(25/343);创伤弧菌检出率为7.00%(24/343)。淡水鱼和相应水体中检出的38株霍乱弧菌中36株为非O1/0139群霍乱弧菌,2株为O139群霍乱弧菌。结论 荆门市淡水鱼中4种致病性弧菌污染较为普遍,食品安全监管部门应加强对淡水鱼餐饮环节、养殖及销售过程的监管力度,减少致病性弧菌所引起疾病的发生。     

淄博市300份市售动物性水产品中主要致病性弧菌毒力基因检测

目的 评估淄博市水产品的致病性弧菌污染水平,为加强该市食源性疾病的监测和防控提供依据。方法 对该市300份市售动物性水产品中的霍乱弧菌、副溶血性弧菌、河弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌进行污染分析,并对霍乱弧菌和副溶血性弧菌进行血清学分型和毒力基因检测。结果 300份被检样品中,致病性弧菌的总体检出率为31.00%,海水产品总检出率（33.72%）高于淡水产品（27.34%）,螺类的检出率最高（61.90%）。其中副溶血性弧菌的检出率最高,为25.33%,且均携带tlh毒力基因,只有2株携带tdh毒力基因;血清学分布以O2∶K-为主,未见以O3∶K6为表型的大流行株。结论 淄博市市售水产品的致病性弧菌存在较高的污染率,尤以副溶血性弧菌污染为主,应加强市售环节的监督和监管。     

多重PCR检测霍乱弧菌的毒素相关基因

目的 探索建立一种快速、敏感地检测霍乱弧菌O1群、O139群、非O1／非O139群的毒素相关基因的方法。方法 针对霍乱弧菌霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(oce)、霍乱弧菌毒素共调菌毛A基因(tcpA)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)分别设计引物，建立多基因PCR方法；通过一次扩增反应之产物经琼脂糖凝胶电泳，可检测出菌株的毒素相关基因的携带情况。结果 阳性对照菌株：MO45(霍乱弧菌O139群)检出5种毒素相关基因，结果符合设计要求；其他不同来源的霍乱弧菌(O1群、O139群、非O1／非O139群)检出1—5种不等的毒素相关基因；根据毒素相关基因携带情况，可将菌株分为5个基因型，并可区分为产毒株和非产毒株；多重PCR敏感度可达10^2cfu／ml。结论 该方法快速、特异、敏感，具有较大的应用价值。     

多重荧光定量PCR同时检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的方法研究

目的:利用多重荧光定量PCR技术检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌。方法:以溶藻弧菌等17种相关试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:与传统的检测方法相比,该方法有很好的特异性且灵敏度高,检测时间短并可节省人力,具有快速方便等优点。结论:适用于样品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的快速检测。检测限分别为:霍乱弧菌为280 cfu/ml;副溶血性弧菌为:100 cfu/ml;创伤弧菌为:450 cfu/ml。     

可疑霍乱弧菌的实验鉴定

目的:对4株可疑霍乱弧菌进行种属鉴定。方法:对可疑菌落在传统血清学和系统生化鉴定的基础上进行细菌的分子鉴定:应用16S rDNA的序列分析进行细菌种属鉴定和实时荧光PCR检测O1、O139群霍乱弧菌。结果:16 s rDNA基因序列分析显示041和067为麦氏弧菌,059和074为霍乱弧菌;荧光定量PCR检测结果说明4株菌都不是O1和O139霍乱弧菌。结论:结合血清凝集和系统生化实验,可以确定041和067为麦氏弧菌,059和074为非O1/非O139霍乱弧菌。对于可疑和难鉴别的霍乱弧菌,不能单纯依靠血清学和表型鉴定方法,需要分子诊断方法,尤其是16SrDNA的序列分析,可以从分子水平为弧菌科细菌的种属鉴定提供更为直接的证据。     

2014年成都市动物性水产品及外环境中4种弧菌的 污染情况分析

摘要:目的　了解成都市动物性水产品及其外环境中部分弧菌（创伤弧菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌）在养殖、销售、加工等各个环节中的分布和可能污染源,为风险评估提供可靠的基础数据。方法　选择有代表性的3个养殖场、3个销售场所和3家餐饮店,分别采集鲜活/非鲜活淡水鱼/海水鱼及鲜活鱼类的水体/水底沉积物,检测创伤弧菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌和溶藻弧菌。结果　成都市动物性水产品及其外环境中4种弧菌的总体检出率为38.8%,创伤弧菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌的检出率分别为17.5%、29.1%、1.9%、5.8%;养殖场所、销售场所、餐饮环节中弧菌的检出率分别为14.7%、45.5%、55.6%;弧菌在鱼肠/鳃中的检出率（94.7%）高于在鱼肉中的检出率（32.5%）,差异有统计学意义（χ2＝20.01,P＜0.001）;弧菌在非鲜活淡水鱼中的检出率（75.0%）高于鲜活淡水鱼（26.9%）,差异有统计学意义（P＝0.033）;淡水水体和海水水体的平均盐度分别为0.19%、17.7%,平均钠含量分别为19.0 mg/L、3138.3 mg/L;弧菌阳性样品与阴性样品在温度、平均盐度和钠含量上的差异无统计学意义（t温度＝0.000,t盐度＝0.585,t钠＝0.540,P＞0.05）。结论　成都市动物性水产品及外环境中弧菌的检出率较高,发生食物中毒的风险较高,需要采取一系列措施以防止食物中毒的发生。     

疑似霍乱弧菌鉴定及分子分型检测

目的 对北京市某医院肠道门诊2株疑似霍乱弧菌进行鉴定,检测其主要毒力基因,并分析其基因型别特征.方法 利用细菌生化鉴定条(API 20 E)进行生化鉴定,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16 S rRNA基因;PCR检测其8个主要毒力基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其基因型别.结果 经鉴定,该2株疑似霍乱菌株均为非O1非139群霍乱弧菌,经16 SrRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%,均包含毒力基因hylA、ompW和toxR,PFGE结果显示2株菌具有完全不同的带型.结论 2株疑似霍乱弧菌为非O1非139群霍乱弧菌,其致病因素与(hylA)、(ompW)、(toxR)毒力基因有关,并且2株菌遗传关系较远.