温阳利水方含药血清对脾肾阳虚IMN患者血清致小鼠足细胞凋亡的作用

目的 探讨温阳利水方含药血清对特发性膜性肾病(IMN)脾肾阳虚证足细胞凋亡的作用.方法 CCK-8检测不同浓度脾肾阳虚型IMN患者血清对体外培养小鼠永生化足细胞增殖能力的影响,构建脾肾阳虚型IMN血清损伤足细胞体外模型.SPF级大鼠予不同浓度温阳利水方水提物灌胃,腹主动脉取血,分离血清并灭菌后备用.设正常对照组、模型组、低、中、高浓度含药血清组,温阳利水方含药血清与脾肾阳虚型IMN血清损伤足细胞共孵育48 h,qRT-PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2 mRNA相对表达量.结果 10%脾肾阳虚型IMN患者血清造成足细胞损伤模型,加入不同浓度温阳利水方含药血清共孵育48 h后,Caspase-3 mRNA相对表达量,与正常对照组比较,模型组增多,但差异无统计学意义;含药血清组Caspase-3 mRNA相对表达量无明显增减.Bcl-2 mRNA相对表达量,与模型组比较,低、中、高浓度含药血清组Bcl-2 mRNA相对表达量均增加,组间比较,模型组与中、高浓度含药血清组差异均有统计学意义(P<0.01);含药血清组间比较,中、高浓度组Bcl-2 mRNA相对表达量均较低浓度组增加,且差异均有统计学意义(P<0.01);中、高浓度组间,Bcl-2 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.01).结论 对脾肾阳虚型IMN患者血清损伤足细胞,温阳利水方含药血清共孵育48 h,可能通过上调Bcl-2的水平,发挥抗凋亡效应.     

温阳利水方对阳离子化牛血清白蛋白致膜性肾病大鼠足细胞的保护作用

【目的】探讨温阳利水方对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)致膜性肾病(MN)模型大鼠的治疗作用及对足细胞的保护作用机制。【方法】应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)筛选温阳利水方水提物灌胃浓度和时间。将SD大鼠分为4组,分别为对照组、模型组、温阳利水方组、贝那普利组,每组6只。模型组、温阳利水方组、贝那普利组大鼠以C-BSA尾静脉注射法构建MN模型,对照组大鼠则给予等量生理盐水尾静脉注射。造模结束后,对照组和模型组给予双蒸水灌胃,温阳利水方组给予16.50 g·kg~(-1)·d~(-1)温阳利水方水提物灌胃,贝那普利组给予10.00 mg·kg~(-1)·d~(-1)贝那普利混悬液灌胃,连续4周。给药结束后,观察大鼠的一般情况,检测血生化指标、24 h尿蛋白定量(UTP),对肾组织分别行苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)、过碘酸六胺银(PASM)染色光镜检查和电镜检查,实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测肾皮质nephrin mRNA表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液nephrin蛋白含量。【结果】与对照组比较,模型组大鼠血肌酐、球蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、UTP水平明显升高,白蛋白水平明显下降(均P 0.05)。灌胃4周,温阳利水方组和贝那普利组水肿减轻,UTP水平下降(P 0.05),肾小球基底膜增厚减轻,蛋白管型减少,肾间质炎症细胞浸润减轻,肾皮质nephrin mRNA表达水平下降,尿nephrin蛋白含量减少。【结论】温阳利水方可改善MN大鼠水肿、降低尿蛋白、减轻肾组织病理损害,其机制可能是通过降低肾皮质nephrin m RNA异常表达、减少尿nephrin蛋白排泄,稳定足突结构发挥了足细胞保护作用。     

全血培养对体外培养PBMC细胞凋亡的影响

目的:了解不同的体外培养方法对健康青年人外周血单个核细胞(PBMC)凋亡的影响.方法:通过用RPMI-1640培养基和RPMI-1640中混入不同比例全血(1:10,1:5)的培养基来培养PBMC,用流式细胞术(FCM)观察24h细胞凋亡发生的情况;并同时用ELISA法观察细胞培养上清中TNF的水平.结果:三种培养基培养24h后PBMC的凋亡率分别为(12.04±4.38)%,(7.21±2.16)%和(2.38±0.68)%,含全血的两组与RPMI-1640组差异显著(P＜0.05,P＜0.01);三种培养基培养PBMC24h后细胞上清液TNF分别为(2.89±1.43),(5.15±1.84)和(6.52±3.06)(ng/ml),两全血培养基组与RPMI-1640组差异显著(P＜0.01),而两全血培养基组间差异无显著性(P＞0.05).结论:混入全血的培养基对培养PBMC细胞凋亡的影响小于单纯RPMI-1640培养基.     

温阳利水汤治疗肾病综合征脾肾阳虚证60例

目的:观察温阳利水汤治疗肾病综合征脾肾阳虚证的临床疗效.方法:采用随机单盲法观查确诊温阳利水汤治疗肾病综合征脾肾阳虚证的病例60例,温阳利水汤(治疗组)及真武汤(对照组)各30例,观察两组药物的疗效.结果:治疗组总有效率86.7%,对照组总有效率70%,两组总有效率比较具有显著差异性(P＜0.05),治疗组优于对照组.结论:温阳利水汤是治疗温阳利水汤治疗肾病综合征脾肾阳虚证安全有效的中药汤剂.     

益元生血方对免疫性血小板减少症患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的:观察益元生血方提取物对免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者T淋巴细胞亚群的影响。方法:(1)纳入ITP患者10例和健康志愿者10例,抽取受试者外周血制备淋巴细胞悬液,以10%、5%、2.5%、1.25%、0.625%浓度的益元生血方水提物干预ITP患者淋巴细胞悬液,培养时间分别为24 h、36 h、48 h、72 h,检测不同浓度、不同时间益元生血方水提物培养的ITP患者T淋巴细胞增殖的活性,以确定益元生血方水提物作用的最佳药物浓度和最佳培养时间。(2)根据试验需求,结合上述试验结果,设正常对照组、ITP未干预组和ITP干预组,正常对照组为健康志愿者淋巴细胞混悬液+完全RPMI-1640培养液,ITP未干预组为ITP患者淋巴细胞混悬液+完全RPMI-1640培养液,ITP干预组为ITP患者淋巴细胞混悬液+"最佳药物浓度"益元生血方灭菌提取物,培养时间为"最佳培养时间"。采用流式细胞术检测各组CD4~+、CD8~+、IFN-γ、IL-4、IL-17、CD4~+CD25~+T淋巴细胞亚群表达。结果:(1)当培养时间为36 h,益元生血方水提物药物浓度为5%时,T淋巴细胞增殖活性最佳。(2)与正常对照组比较,ITP未干预组CD4~+、CD4~+CD25~+、IL-4 T淋巴细胞表达及CD4~+/CD8~+比值均降低(P0.05),CD8~+、IFN-γ、IL-17 T淋巴细胞表达及IL-17/CD4~+CD25~+、IFN-γ/IL-4比值均显著升高(P0.05);与ITP未干预组比较,ITP干预组CD4~+、CD4~+CD25~+、IL-4 T淋巴细胞表达及CD4~+/CD8~+比值均升高(P0.05),CD8~+、IFN-γ、IL-17 T淋巴细胞表达及IL-17/CD4~+CD25~+、IFN-γ/IL-4比值均显著降低(P0.05)。结论:益元生血方可通过调节ITP患者T淋巴细胞亚群分化调节免疫,从而发挥治疗作用。     

NF-κB对冠心病患者外周血单核细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨核因子-κB（NF-κB）对冠心病患者外周血单核细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）mRNA表达的影响。方法分离收集冠心病患者外周血单核细胞,分为3组:对照组在不含血清的RPMI-1640中孵育24h;ox-LDL组在不含血清的RPMI-1640中加ox-LDL（40μg/ml）孵育24h;PDTC（NF-κB抑制剂）组:先加PDTC(10^-5mol/L)培育1h之后加ox-LDL（40μg/ml）继续孵育24h,之后收集单核细胞及细胞上清液,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的基因LOX-l,并采用ELISA法测定上清液中sLOX-1蛋白浓度。结果与对照组比较,ox-LDL组单核细胞LOX-1 mRNA表达增加（0.304±0.047vs0.813±0.131,P<0.05）,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量（ng/ml）增加（7.277±1.979 vs 16.517±2.064,P<0.05）;PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达及细胞上清液中sLOX-1蛋白含量均增高（分别为0.502±0.140和11.997±1.757,P<0.05）。与ox-LDL组相比,PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达减少,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量显著减少（P<0.05）。结论 ox-LDL可诱导人单核细胞LOX-1表达增加,NF-κB也参与了ox-LDL对LOX-1表达并有促进作用。     

温阳利水汤联合环磷酰胺及醋酸泼尼松片治疗脾肾阳虚型原发性肾病综合征

目的探讨温阳利水汤联合环磷酰胺及醋酸泼尼松片治疗脾肾阳虚型原发性肾病综合征(PNS)患者的临床效果。方法选取2016年2月至2018年4月淮阳县人民医院治疗的62例脾肾阳虚型PNS患者,采用随机数表法分为对照组和观察组,各31例。对照组接受环磷酰胺联合醋酸泼尼松片治疗,观察组在对照组基础上联合温阳利水汤治疗。对比两组治疗总有效率,治疗前后甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、白蛋白(Alb)、24 h尿蛋白定量水平。结果观察组治疗总有效率为90.32%(28/31),高于对照组的67.74%(21/31),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组TG、TC、24 h尿蛋白定量水平较对照组下降,Alb水平较对照组升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论温阳利水汤联合环磷酰胺及醋酸泼尼松片治疗脾肾阳虚型PNS患者效果显著,可调节血脂,改善肾功能。     

氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸抗辐射损伤作用及其机制

目的探讨氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的抗辐射损伤作用及其机制。方法将培养的人正常肝细胞株L02细胞分为3组:对照组、照射组和照射+NAD+组。对照组细胞不予照射,直接加入不含NAD+的RPMI-1640培养基培养;照射组细胞照射后加入不含NAD+的RPMI-1640培养基培养;照射+NAD+组细胞照射后加入含有NAD+(终浓度1 g.L-1)的RPMI-1640培养基培养。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NAD+对受照射L02细胞生长活性的影响;应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白p53、bax、bcl-2阳性表达率和各周期细胞含量;采用Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性。结果细胞受照射后加入NAD+能够对抗X射线照射对L02细胞的生长抑制作用,细胞生长活性较照射组细胞活性显著提高;L02细胞在受照射后p53、bax蛋白表达增加,bcl-2表达下调,Caspase-3活性增加,而且细胞周期表现为G1期阻滞;受照射后加入NAD+,则p53、bax蛋白表达下调,bcl-2表达增加,Caspase-3活性下降,G2/M期细胞比例明显增加。结论 NAD+可对抗L02细胞的X线辐射损伤,其作用机制可能通过下调p53、bax与上调bcl-2表达以及抑制Caspase-3活性,抑制受照射细胞凋亡。     

HMGB1调控重症急性胰腺炎脾淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠脾淋巴细胞中的表达及其对SAP小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。方法 成年雄性SPF级BALB/C小鼠30只,随机分为对照组、SAP组、SAP+Ab组,每组10只。实验前BALB/C小鼠禁食12h,自由饮水。SAP组采用腹腔注射雨蛙素和脂多糖诱导,SAP+Ab组于SAP造模成功后立即腹腔注射抗-HMGB1抗体。各组造模后12h取材,胰腺组织HE染色并对胰腺损伤进行评分,ELISA检测小鼠血清HMGB1和Caspase-3表达水平,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞凋亡率,RT-PCR检测脾淋巴细胞HMGB1、Caspase-3mRNA的表达情况。结果 与对照组比较,SAP组和SAP+Ab组胰腺损伤评分增加,血清中HMGB1和Caspase-3含量升高(P <0.05),脾淋巴细胞凋亡率增高(P <0.05),脾淋巴细胞HMGB1mRNA和Caspase-3mRNA表达升高(P <0.05)。与SAP组比较,SAP+Ab组胰腺的损伤评分降低,血清中HMGB1和Caspase-3含量降低(P <0.05),脾淋巴细胞凋亡率降低(P <0.05),脾淋巴细胞HMGB1mRNA、Caspase-3mRNA表达降低(P <0.05)。SAP组脾淋巴细胞HMGB1mRNA、血清HMGB1水平与脾淋巴细胞凋亡率、脾淋巴细胞Caspase-3mRNA、血清Caspase-3水平呈正相关(P <0.05)。结论 HMGB1与SAP脾淋巴细胞凋亡密切相关,可作为治疗SAP的一个潜在靶点。     

12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达

目的 研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2) 表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系.方法 胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24 h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24 h加入干预药物.P21...     

三氧化二砷联合佛波酯抑制急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1增殖的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2_O_3)联合佛波酯(PMA)对急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1增殖的影响。方法:培养急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1并随机分为对照组(不含药物和血清的RPMI1640培养基处理)、As2_O_3组(含有20μmol/L As2_O_3的无血清RPMI1640培养基处理)、PMA组(含有160nmol/L PMA的无血清RPMI1640培养基处理)、As2_O_3+PMA组(含有20μmol/L As2_O_3和160nmol/LPMA的无血清RPMI1640培养基处理)。处理后测定细胞的增殖活力、细胞周期的比例以及相关基因的蛋白表达量。结果:干预后12、24、48h时,As2_O_3组、PMA组、As2_O_3+PMA组的细胞增殖活力均显著低于对照组,As2_O_3+PMA组的细胞增殖活力均显著As2_O_3组、PMA组;干预后48h时,As2_O_3组、PMA组、As2_O_3+PMA组中G1期、S期的比例以及CDK1、CyclinB1的表达量均显著低于对照组,G2期的比例以及Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-Chk1、p-Cdc25C9的表达量均显著高于对照组;As2_O_3+PMA组中G1期、S期的比例以及CDK1、CyclinB1的表达量均显著低于As2_O_3组、PMA组,G2期的比例以及Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-Chk1、p-Cdc25C的表达量均显著高于As2_O_3组、PMA组。结论:As2_O_3联合PMA能够通过诱导细胞凋亡、阻碍细胞周期的方式抑制急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1的增殖。     

微量元素对培养细胞的保护作用

采用109细胞株,用RPMI1640+15%小牛血清介质培养,接种2～3d,镜检证明生长良好,分为三组(每组三瓶),分别用三种培养介质:①RPMI 1640+15%小牛血清(常规);②无血清,纯RPMI 1640介质);③无血清的RPMI 1640加入微量元素,按MAB 87/s配方中的添加剂s/s 87/sE法[CuSO_4 5 mg;MnSO_4 1.6 mg;ZnSO_4 3.0 mg;(NH_4)_6Mo_7O_(24)·4H_2O 25 mg;CoCl_2·6H_2O 22 mg;FeSO_4 4.5mg加水成100ml。99ml的RPMI介质加1     

基于TLR3补肾健脾方水提物抑制乙肝病毒复制机制研究

目的：通过pHBV1.3-pCR2.1质粒转染HepG2细胞探讨补肾健脾方水提物抑制乙肝病毒的免疫机制。方法：250μg/ml、500μg/ml补肾健脾方水提物干预pHBV1.3-pCR2.1质粒转染HepG2细胞,ELISA法检测细胞上清HBsAg、HBeAg含量;500μg/ml补肾健脾方水提物干预pHBV1.3-pCR2.1质粒转染HepG2细胞,Westen blot法检测Toll样受体3(TLR3)、p-IRF3蛋白表达,qRT-PCR法检测细胞内IFN-β mRNA表达;补肾健脾方干预HepG2细胞,pHBV1.3-pCR2.1质粒转染HepG2细胞,TLR13 siRNA下调TLR3表达,Westen blot法检测TLR3、p-IRF3蛋白表达,qRT-PCR法检测细胞内IFN-β mRNA表达。结果：500μg/ml补肾健脾方与空白对照组、250μg/ml补肾健脾方比较,HBsAg均明显下降（P<0.05,P<0.01）;500μg/ml补肾健脾方与空白对照组、250μg/ml补肾健脾方比较,HBeAg均明显下降（P<0.05,P<0.01）;...     

针对CTGF的siRNA对高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin减少的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin表达减少中的作用,及针对CTGF基因的siRNA对其影响.方法 将体外培养的小鼠足细胞分为6组:(1)正常对照组,1640培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,1640培养基合D-葡萄糖lg/L,甘露醇3.5 g,L;(3)高糖组,1640培养基含D.葡萄糖4.5 g,L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于舍D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于含D-葡萄糖4.5g/L中的1640培养基中培养.应用Reahime PCR检测nephrin、podocin、CTGFmRNA水平,Western blot检测CTGF,nephrin、podocin蛋白表达水平.结果 高糖可诱导CTGF mRNA及蛋白表达增加,下调足细胞的nephrin、podocin mRNA及蛋白水平,而通过特异性siRNA抑制CTGFmRNA表达后,CTGF表达减少,同时伴有细胞nephrin、podocin表达升高.结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,高糖可通过CTGF诱导nephrin,podocin表达减少.针对CTGF的siRNA能明显改善这种损伤,为DN发病机制的研究提供新的实验依据.     

Losartan下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β受体的表达

目的 观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂losartan对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β受体表达的影响.方法 取4～8代系膜细胞进行实验.系膜细胞转种在50mL塑料培养瓶和置有消毒盖玻片的24孔培养板中培养.系膜细胞长至亚融合状态时,换成无血清RPMI～1640培养基培养24 h,使细胞同步于静止期,然后分为4组:低糖(LG)组:加10%FBS RPMI-1640培养液(葡萄糖浓度为5.6 mmol/L);低糖+D-甘露醇(LG+M)组:加D-甘露醇(D-Mannitol)24.4 mmol/L和10%FBS RPMI-1640培养液(葡萄糖浓度为5.6 mmol/L);高耱(HG)组:加10%FBS RPMI-1640高糖培养液(葡萄糖浓度为30 mmol/L);高糖+losar-tan(HG+L)组:加losartan 10-5mol/L和10%FBS RPMI-1640高糖培养液(葡萄糖浓度为30mmol/L).各组系膜细胞继续培养72 h.每3瓶细胞作为1组,用半定量RT-PCR检测各组系膜细胞转化生长因子β1型受体(TβRI)、转化生长因子βⅡ型受体(TBRⅡ)和纤维连接蛋白(FN)MRNA的表达.24孔培养板中每4孔作为1组,用免疫组织化学检测各组系膜细胞Tβ RⅠ、Tβ RⅡ和FN蛋白表达.结果 HG组TβRⅠ、TβRⅡ和FN mRNA表达以及TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达显著高于LG组和LG+M组(P<0.05).加入losartan后,HG+L组Tβ RⅠ、Tβ RⅡ和FN mRNA表达显著降低,T β RⅠ、Tβ RⅡ蛋白表达也显著降低(P<0.05).与LG组比较,LG+M组Tβ RⅠ、TβRⅡ和FN mRNA表达以及TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达差异均无显著性(P>0.05).结论 高糖上调肾小球系膜细胞TGF-β受体和FN的表达,其作用与渗透压无关.血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂losartan能逆转高糖的上述作用.从而产生肾保护作用.     

温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞CD2AP、Coractin、Arp2/3表达的影响

目的观察温阳活血利水法对足细胞CD2AP、Coractin、Arp2/3表达的影响,以探讨其疗效的作用机制。方法用阿霉素(ADR)诱导一种类似人类微小病变肾病模型,1周后分别用温阳活血方和强的松治疗,持续4周。并设空白对照组(正常组)、病理对照组(造模组)。观察实验大鼠的一般情况;检测大鼠24h尿蛋白定量;检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯的水平;采用免疫荧光染色测定大鼠肾小球CD2AP、Coractin、Arp2/3表达;光学显微镜观察肾组织形态学变化;电镜下观察足细胞足突的变化。结果模型组24h尿蛋白定量明显升高(P0.01),血清总蛋白、白蛋白明显降低(P0.01),血清脂质水平升高(P0.01),CD2AP、Coractin、Arp2/3蛋白表达明显减少,足突融合明显。两个治疗组均能降低24h尿蛋白定量,升高血清总蛋白、白蛋白水平(P0.01)。温阳活血利水方能降低血清脂质水平(P0.01)。两个治疗组均能改善肾组织中CD2AP、Coractin、Arp2/3复合体蛋白的表达的减少,改善其肾组织的病理改变。结论温阳活血利水法能使阿霉素肾病综合征CD2AP、Coractin、Arp2/3表达下降,从而有助于稳定actin骨架,改善足细胞融合与蛋白尿。     

千里光提取物体外抗阴道毛滴虫的效果观察

目的研究千里光提取物对体外培养的阴道毛滴虫的杀虫效果。结论体外培养阴道毛滴虫,选择千里光提取物进行体外抗阴道毛滴虫实验,千里光药液浓度经稀释后分别为4,2,1,0.5,0.25mg/ml。同时以甲硝唑为阳性对照,乙醇及RPMI-1640为阴性对照。结果体外实验表明千里光在24h时杀灭阴道毛滴虫的最低有效浓度为2mg/ml,其杀虫效果与甲硝唑近似;阴道毛滴虫在RPMI-1640培养液中生长良好,增值3倍。结论千里光提取物在体外具有杀灭和抑制阴道毛滴虫生长的作用。     

PERK在重症急性胰腺炎大鼠淋巴细胞中的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠淋巴细胞蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)表达水平的变化及其与凋亡的相关性。方法成年雄性SPF级SD大鼠20只,随机分为假手术组(SO组)、SAP组,每组10只。SAP组大鼠采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法建立SAP模型,SO组大鼠仅翻动胰腺后关腹。术后18h取材,HE染色观察胰腺组织病理损伤程度并进行评分,qPCR检测脾脏淋巴细胞PERK mRNA、Caspase-3mRNA的表达情况,ELISA法检测血清中Caspase-3含量。结果与SO组比较,SAP组脾脏淋巴细胞PERK mRNA、Caspase-3mRNA表达明显升高(P<0.05),血清中Caspase-3含量升高(P<0.05),脾淋巴细胞PERK mRNA水平与脾淋巴细胞Caspase-3 mRNA、血清Caspase-3水平呈正相关(P<0.05)。结论 PERK表达升高与SAP淋巴细胞凋亡有关,可作为SAP治疗的靶点。     

补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用及其机制研究

目的 探讨补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用,对肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌、Survivin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3 mRNA表达的影响。方法 将补肾疏肝方制成低剂量（1.25 g/ml）、中剂量（2.50 g/ml）和高剂量（3.75 g/ml）药液。以随机数字表法将大鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、顺铂（DDP）组、联合组（中剂量药液联合DDP）,每组10只。对照组于第1～5天给予0.9%氯化钠溶液4 ml/d灌胃;低剂量组、中剂量组、高剂量组于第1～5天给予相应剂量药液4 ml/d灌胃;DDP组分别于第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20%）;联合组于第1～5天给予中剂量灌胃药液灌胃4 ml/d及第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20%）。末次给药2 h后采血,分离血清。A549细胞分别加入各组血清,培养72 h,倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。A549细胞分别加入各组血清,培养24、48、72 h后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α水平。A549细胞与各组血清共培养72 h后,采用荧光定量PCR检测Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA的相对表达量。结果 各组血清作用于A549细胞72 h后,凋亡细胞核固缩,且随药液浓度增加凋亡细胞增多。各组血清作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中,低剂量组、中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F=13.238,P＜0.05）。其中,高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。各组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（F=10.814,P＜0.05）。其中,中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 补肾疏肝方可促进肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin基因表达、促进TNF-α分泌和Caspase-3基因表达有关。     

异功散调节巨噬细胞铁代谢的机制研究

目的:研究异功散调节慢性病贫血(ACD)铁代谢的作用机制。方法:①体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,分为空白组和异功散干预组(0.01、0.1、1、1.25、2、2.5、3.75 mg/ml),各组给予相应浓度干预,孵育24 h、48 h和72 h后CCK8检测细胞活性,筛选有效浓度。②取RAW 264.7细胞分为空白组、脂多糖(LPS)组、异功散低剂量(0.1 mg/ml)组、异功散高剂量(1.0 mg/ml)组、LPS+异功散低剂量(0.1 mg/ml)组和LPS+异功散高剂量(1.0 mg/ml)组。预先配置含不同浓度异功散的DMEM培养基,对应加入各药物干预组。预处理1 h后再加入0.1μg/ml LPS刺激。细胞培养24 h、48 h后,比色法检测细胞内外铁含量,PCR检测细胞HAMP和膜铁转运蛋白(FPN)的基因表达水平,Western blot检测细胞信号转导转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平。③取人肝癌HepG2细胞,在上述分组基础上增加抑制剂+LPS组、LPS+抑制剂+异功散低剂量(0.1 mg/ml)组和LPS+抑制剂+异功散高剂量(1.0 mg/ml)组。预先配置含不同浓度异功散的DMEM培养基,对应加入各药物干预组。预处理1 h后,各抑制剂干预组加入STAT3阻断剂(10μmol)处理10 min,再加入0.1μg/ml LPS刺激。细胞培养48 h后,PCR检测细胞HAMP基因表达水平。结果:①0.01～3.75 mg/ml异功散干预RAW 264.7细胞48 h内无细胞毒性作用,且能促进细胞增殖。选取0.1 mg/ml和1.0 mg/ml为有效浓度。②无LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,异功散低、高剂量组的细胞外铁含量较空白组显著降低(P0.05),但细胞内铁含量无明显变化。LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,LPS组细胞外铁含量较空白组显著降低(P0.05),而细胞内铁含量明显升高(P0.05);与LPS组比较,LPS+异功散低剂量组细胞外铁含量无明显变化,细胞内铁含量降低(P0.05),LPS+异功散高剂量组细胞外铁含量升高(P0.05),细胞内含量铁降低(P0.05)。③无LPS刺激状态下,与空白组相比,异功散低、高剂量组细胞培养24 h、48 h后HAMP mRNA表达无明显变化,异功散高剂量组细胞培养48 h后FPN mRNA表达量显著升高(P0.01),且高剂量组细胞FPN mRNA表达水平较低剂量组显著升高(P0.01)。LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,与空白组相比,LPS组细胞HAMP mRNA表达显著增多(P0.05),FPN mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01);与LPS组相比,LPS+异功散高剂量组细胞HAMP mRNA表达显著降低(P0.05),FPN mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01);且LPS+异功散高剂量组细胞FPN mRNA表达水平较LPS+异功散低剂量组显著升高(P0.05,P0.01)。④无LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,与空白组相比,异功散低、高剂量组细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达无明显变化。LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,与空白组相比,LPS组细胞STAT3蛋白表达无明显变化,p-STAT3蛋白表达有上调趋势;与LPS组相比,LPS+异功散低剂量组和LPS+异功散高剂量组细胞p-STAT3蛋白表达有降低趋势,STAT3蛋白表达无明显变化。⑤LPS刺激状态下,细胞培养48 h后,与LPS组相比,LPS+抑制剂组细胞HAMP mRNA表达显著降低(P0.01);与LPS+抑制剂组比较,LPS+抑制剂+异功散高剂量组细胞HAMP mRNA表达显著下调(P0.05)。结论:异功散可通过降低STAT3磷酸化水平,抑制HAMP mRNA过表达,上调FPN mRNA水平,从而促进巨噬细胞内铁的外流,改善LPS诱导的RAW 264.7细胞铁代谢异常,且异功散与STAT3阻断剂在调控HAMP表达方面具有协同作用。