过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞通过分泌外泌体增强其抗凋亡能力的研究

目的　探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）是否通过分泌外泌体（Exosome）增强其细胞抗凋亡能力,进而提高心肌梗死后心功能。方法　2017年1—12月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠45只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs构建过表达GATA-4小鼠BMSCs并加入基因开启剂强力霉素（DOX）,而后采用ExoQuick-TC提取BMSCs分泌的Exosome,并检测Exosome纯度、电镜下观察其形态。体外实验：与过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为A组（体外）,与空载体BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为B组（体外）,与BMSCs分泌的Exosome共同培养的心肌细胞为C组（体外）,低氧（1%）无血清条件下培养的心肌细胞为D组（体外）,正常条件下单独培养的心肌细胞为E组（体外）,各组均培养48 h,后采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率,采用Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C表达水平。体内实验：选取12只小鼠建立心机梗死模型,造模成功48 h后经尾静脉注射80 000 μg的Exosome,其中A组（体内）注射过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome,B组（体内）注射空载体BMSCs分泌的Exosome,C组（体内）注射BMSCs分泌的Exosome,另取3只心肌梗死未处理小鼠作为D组（体内）,3只正常小鼠作为E组（体内）。于注射Exosome后48 h采用心脏超声仪（PHILIPS EPIQ 7C）评估各组小鼠心功能。完成心脏彩超后采用原位免疫组化法评估心肌梗死小鼠心脏凋亡细胞数量。结果　Exosome表达量为0.272 5,Exosome纯度为5.25×108个,电镜可见Exosome大小40~100 nm。A组（体外）细胞凋亡率低于B组（体外）、C组（体外）、D组（体外）,但高于E组（体外）（P<0.05）。A组（体外）Caspase 8、细胞色素C表达水平低于B组（体外）、C组（体外）、D组（体外）及E组（体外）（P<0.05）。A组（体内）小鼠射血分数（EF）、环比收缩（FS）前后差值高于B组（体内）、C组（体内）、D组（体内）及E组（体内）（P<0.05）。A组（体内）小鼠心肌细胞凋亡细胞数量高于E组（体内）,而低于B组（体内）、C组（体内）、D组（体内）（P<0.05）。结论　过表达GATA-4 BMSCs分泌的Exosome可以通过增强BMSCs抗凋亡能力,进而有效改善心肌梗死后小鼠的心功能。     

心肌细胞对骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响

目的：观察大鼠成体心肌细胞对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）定向分化的诱导作用。方法：应用Percoll’s密度梯度离心法分离培养大鼠MSCs，传2代后用流式细胞术检测其表面CD34,CD71和CD90的表达，然后用Lipofectamine2000介导pEGFP-N3转染标记MSCs。将GFP标记的MSCs与新鲜分离的成体大鼠心肌细胞分别按接触、非接触（MILLICELLTM-HA半透膜分层培养）及心肌细胞条件培养液培养。1周后应用免疫荧光检测MSCs α-actin，desmin和cTnT的表达。结果：接触培养组中可见表达GFP的MSCs细胞同时表达α-actin,desmin和cTnT，而分层培养组及条件培养组中均未见α-actin，desmin和cTnT的表达。结论：大鼠成体心肌细胞与MSCs接触培养，可能诱导MSCs分化为心肌细胞。     

骨髓间充质干细胞外泌体促进大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移

  目的  探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchyml stem cells, BMSCs）外泌体正常状态下对大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移的影响。  方法  提取大鼠BMSCs并进行鉴定,将其与脑微血管内皮细胞（bEnd.3细胞）通过Transwell小室共培养24 h（BMSCs共培养组）;提取BMSCs外泌体进行鉴定,荧光显微镜下定性观察细胞吞噬外泌体的行为,CCK8 法检测细胞活力选定最佳BMSCs外泌体工作浓度,将其与bEnd.3细胞共培养24 h（BMSCs外泌体共培养组）。另设bEnd.3细胞单独培养组。培养24 h后通过EDU和细胞划痕实验,分别检测以上3组bEnd.3细胞的增殖和迁移能力。  结果  第3代BMSCs表面CD90、CD29为阳性,CD45显示为阴性,可成骨、成脂,表明所提取的BMSCs纯度较高。透射电镜下BMSCs外泌体形态为类圆形,直径在100 nm左右;NTA分析发现BMSCs外泌体的直径分布范围为50～600 nm,其中粒径峰值为150 nm;免疫荧光显示内皮细胞能够吞噬BMSCs外泌体;CCK8显示20 μg/mL外泌体加入对细胞增殖影响达到最佳。EDU检测显示,相较于对照组,BMSCs共培养组、BMSCs外泌体共培养组均可促进bEnd.3细胞的增殖（P<0.05）,且促进增殖的能力相当（P>0.05）。细胞划痕实验示,BMSCs外泌体共培养组细胞的迁移率高于对照组（P<0.05）,但与BMSCs共培养组差异不明显（P>0.05）。  结论  BMSCs外泌体可代替BMSCs,有效促进脑微血管内皮细胞的增殖和迁移,并为卒中后的血管新生提供新的潜在治疗手段。     

过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞修复心肌损伤的效果研究

目的　探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）修复心肌损伤的机制。方法　于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1（SCA-1）表达率。通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4-BMSCs,并加入基因开启剂多西环素（DOX）,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测转染72 h后过表达GATA-4-BMSCs中GATA-4 mRNA表达水平,并以未转染为阴性对照组。建立小鼠心肌梗死模型,经尾静脉注射BMSCs（n=3）、空载体-BMSCs（n=3）、过表达GATA-4-BMSCs（n=3）500 μl,并将心肌梗死未处理组（n=3）及正常小鼠（n=3）同时给予喂食含有DOX的液体作为对照1组及对照2组。通过心脏彩超检测给予干预措施72 h后心功能改善情况。选取正常小鼠正常喂养（n=3）作为对照3组。采用小动物活体成像检测心脏区域荧光强度,番茄凝集素评估心肌梗死局部心肌血管数量,免疫组化检测心肌梗死局部C-kit阳性细胞数量。结果　小鼠BMSCs CD29表达率为98.0%,CD44表达率为100.0%,CD11b表达率为0.1%,SCA-1表达率为99.5%。过表达GATA-4-BMSCs组GATA-4 mRNA表达水平为（78.17±1.32）,高于阴性对照组的（0.57±0.34）（t=2.576,P<0.05）。各组小鼠射血分数（EF）、环比收缩（FS）变化值比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;其中过表达GATA-4-BMSCs组EF、FS改善幅度高于对照1组、对照2组、BMSCs组和空载体-BMSCs组（P<0.05）。各组小鼠心脏区域荧光强度、心肌血管数量、C-kit阳性细胞数量比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;其中过表达GATA-4-BMSCs组心脏区域荧光强度、C-kit阳性细胞数量多于对照1组、对照2组、对照3组、BMSCs组和空载体-BMSCs组（P<0.05）,心肌血管数量多于BMSCs组和空载体-BMSCs组。结论　过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强“归巢”效应、促进心肌梗死局部血管增生、有效动员C-kit阳性细胞修复心肌损伤。     

内皮祖细胞外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡

目的：探索内皮祖细胞外泌体（EPCs-Exo）对紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡的影响及其可能机制。方法：培养原代骨髓间充质干细胞（BMSCs）和内皮祖细胞（EPCs）并鉴定。提取BMSCs和EPCs培养液中的外泌体,使用透射电镜观察外泌体形态并检测CD63和CD9的表达鉴定外泌体。分别用BMSCs-Exo和EPCs-Exo干预经紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡模型,光镜下观察细胞形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9和细胞焦亡相关蛋白NLRP-3、IL-18、GSDMD-N的表达情况;电镜下观察细胞超微结构的变化。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1表达情况。结果：大鼠骨髓细胞中分离培养分化出BMSCs和EPCs,免疫荧光法证实BMSCs中CD90 和CD44阳性,EPCs中CD34 和VEGFR2阳性。相比于对照组,紫杉醇组细胞膜被破坏,细胞内线粒体间距离增加,细胞内纤维排列紊乱,细胞中NLRP-3、IL-18、GSDMD-N等细胞焦亡蛋白表达增加（P ＜0.05）;相比于紫杉醇组,紫杉醇+EPCs-Exo组内皮细胞中细胞膜较完整,细胞系损伤较轻,NLRP-3、IL-18、GSDMD-N表达减少（P ＜0.05）;紫杉醇组与紫杉醇+BMSCs-Exo组内皮细胞形态和焦亡蛋白的表达差异无统计学意义。芯片及RT-PCR结果显示相比于BMSCs-Exo,lncRNA FGD5-AS1在EPCs-Exo中表达增加（P ＜0.05）。结论：EPCs外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡。     

骨髓间充质干细胞在心肌细胞诱导下的分化研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）在不同心肌细胞微环境作用下,向心肌样细胞分化能力。方法将心肌细胞与BMSCs分为：接触性、非接触性、对照组联合培养;2周后检测各实验组细胞中,心肌特异性蛋白肌钙蛋白T（cTnT）表达情况。结果免疫细胞化学鉴定：1）接触性联合培养组细胞均表达cTnT;2）非接触性联合培养组细胞均表达cTnT;3）对照组细胞不表达cTnT。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的研究

目的观察体外不同诱导条件下大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在不同时间段分化为心肌样细胞的能力及表达心肌细胞特异性标志物的差别。方法分离培养SD大鼠BMSCs和SD乳鼠心肌细胞并鉴定,取第3代BMSCs分别进行5-氮胞苷(5-Aza)诱导、与心肌细胞共培养及单独培养,分别于第2、4、6、8、10周使用倒置显微镜观察细胞生长情况和形态变化,反转录-聚合酶链反应检测每组细胞心肌特异性基因肌钙蛋白I(cTnI)、缝隙连接蛋白43(Cx43)和心肌特异性转录因子4(GATA-4)的表达。结果对照组未见有搏动细胞,cTnI、Cx43和GATA-4基因表达阴性;5-氮胞苷诱导组于第2周时细胞呈梭形且排列方向趋于一致,未见有搏动细胞,cTnI、Cx43基因表达第8周达到高峰,GATA-4基因表达第4周达高峰;共培养组细胞多为梭形,呈肌性排列,可见搏动频率不一致的搏动细胞,cTnI、Cx43基因表达于第2⁸周表达逐渐增加,GATA-4基因表达第6周达高峰;相同时段内,共培养组的cTnI、Cx43和GATA-4基因表达高于5-氮胞苷诱导组(P<0.05)。结论 BMSCs经5-氮胞苷诱导或与心肌细胞共培养可转化为心肌样细胞并表达基因cTnI、Cx43和GATA-4,且共培养组BMSCs分化为心肌样细胞的能力比5-氮胞苷诱导组强,推测心肌微环境可促进BMSCs定向分化为心肌样细胞。     

加味丹参饮体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的探讨加味丹参饮体外诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)向心肌样细胞分化的实验研究。方法采用贴壁法获取大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原。MTT法检测加味丹参饮对BMSCs最大无毒浓度,用第3代细胞分组诱导:正常对照组,加味丹参饮组,5-氮胞苷组,加味丹参饮+5-氮胞苷组,应用western blot检测各组细胞结合蛋白(Desmin),α-肌球蛋白重链(α-MHC),心肌肌钙蛋白T(c Tn T)蛋白表达,RT-PCR法检测各组细胞GATA-4,缝隙连接蛋白43(CX43)及Nkx2-5 mRNA表达。结果大鼠BMSCs表面CD90阳性率高于95%,CD34及CD45阳性率低于5%。加味丹参饮对BMSCs最大无毒浓度为0.625 g/L。与正常对照组比较,加味丹参饮组,5-氮胞苷组,加味丹参饮+5-氮胞苷组中Desmin,α-MHC及c Tn T蛋白表达量上调,GATA-4,CX43及Nkx2-5 mRNA表达量上调,差异有统计学意义(P0.01)。与加味丹参饮组或5-氮胞苷组比较,加味丹参饮+5-氮胞苷组中Desmin,α-MHC及c Tn T蛋白表达量上调,GATA-4,CX43及Nkx2-5 mRNA表达量上调,差异有统计学意义(P0.01)。结论加味丹参饮能够诱导BMSCs向心肌样细胞转化,与5-氮胞苷联合给药具有协同作用。     

旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法

目的 建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）培养上清液中分离外泌体（exosome）的方法。 方法 收集BMSCs细胞培养上清,低速离心去除残余细胞,0.22 μm滤器过滤除去细胞碎片,采用旋转超滤技术提取外泌体。应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态,用蛋白质印迹法检测外泌体标记物CD63、CD9蛋白的表达,用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖活性的影响。 结果 使用旋转超滤技术成功分离出BMSCs分泌的外泌体,透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形,直径约100 nm,蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物CD63、CD9蛋白的表达。外泌体能够促进HUVECs增殖,并且其促细胞增殖作用随浓度增高而增强。 结论 旋转超滤技术是一种简单有效的提取外泌体的方法。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体对大鼠脊髓损伤的改善作用及对脊髓组织胞浆型磷脂酶A2、水通道蛋白4和水通道蛋白9的影响实验研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体对大鼠脊髓损伤(SCI)的改善作用及对脊髓组织胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)、水通道蛋白4(AQP4)和AQP9的影响。方法:培养BMSCs,提取外泌体并进行鉴定。选择成年雄性SD大鼠30只，分为假手术组、模型组和外泌体组，各10只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型，外泌体组经尾静脉注射外泌体，假手术组和模型组大鼠尾静脉注射等体积PBS缓冲液。各组大鼠每隔2 d注射1次，共注射3次。采用脊髓损伤行为学(BBB)评分评估干预前后各组大鼠四肢运动功能。采用HE染色观察脊髓组织结构。采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测脊髓组织PLA2、AQP4、AQP9 mRNA及蛋白表达。结果:BMSCs生长状态良好，外泌体表面标志蛋白CD63、Alix呈阳性表达。干预后3、7 d,外泌体组BBB评分高于模型组(均P<0.05)。假手术组脊髓组织无损伤坏死及出血，结构完整，灰质白质边界清晰，细胞排列有序，细胞核形态正常；模型...     

激活Notch信号的骨髓间充质干细胞移植促心肌梗死模型鼠血管新生研究

目的探讨干预Notch信号骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对心肌梗死（MI）大鼠心肌的治疗性血管新生作用及其机制。方法 60只Wistar大鼠经结扎冠状动脉前降支建立MI模型后,建模2周进行相应处理后,随机分为MI模型对照组（B组）、培养液移植对照组（C组）、激活Noth信号的BMSCs移植实验组（D组）、BMSCs移植对照组（E组）,每组15只;另选取10只为假手术对照组（A组）。4周后观察细胞生长及增殖情况,测定缺血心肌中血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白的表达及缺血区心肌毛细血管密度的改变。结果 BMSCs在梗死区中可增殖分化为内皮细胞,与A、B、C组相比,D组、E组缺血心肌中VEGF蛋白的表达增多及毛细血管密度均明显增高（P〈0.01）,且D组较E组更明显（P〈0.05）。结论激活Notch信号有促进心肌梗死区BMSCs向内皮细胞分化,并通过自分泌和旁分泌的方式增加缺血心肌VEGF的表达,由此促进缺血心肌中毛细血管新生。     

5-氮胞苷对大鼠脂肪间充质干细胞的诱导分化作用及相关蛋白的表达

目的 探讨5-氮胞苷(5-Aza)对大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的诱导分化作用及相关蛋白的表达。 方法 采取酶消化法和贴壁法分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠腹部皮下脂肪组织，采用抗单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、兔抗CD13、CD44、CD105、血管性血友病因子(vWF)多克隆抗体对培养细胞进行鉴定，排除造血干细胞及成纤维细胞，取第3代ADMSCs细胞，以每孔1×104个细胞接种于24孔培养板中，并将其随机分为正常组和诱导组，正常组细胞于常规培养基中加入无菌生理盐水培养，诱导组细胞于常规培养基中加入浓度为10 μmol/L的5-Aza进行诱导培养。比较2组细胞的形态结构、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及缝隙连接蛋白43(Connexin43)基因表达量及cTnT、cTnI、Connexin43蛋白的表达情况。 结果 诱导组ADMSCs细胞增殖缓慢，体积增大并逐渐变为棒状或宽梭形，形态呈心肌细胞特征；RT-qPCR结果显示，诱导组细胞cTnT、cTnI及Connexin43基因表达量增强；免疫组化结果显示，诱导组细胞细胞质明显可见棕黄色或棕褐色颗粒物质，而正常组细胞细胞质中棕黄色或棕褐色颗粒物质较少，且诱导组细胞cTnT、cTnI及Connexin43蛋白阳性表达评分明显高于正常组(P<0.05)。 结论 大鼠脂肪组织中含有多向分化潜能的间充质干细胞(MSCs)，5-Aza可以诱导大鼠ADMSCs向心肌细胞分化，ADMSCs有望成为治疗心肌梗死的种子细胞。      

脐血MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心肌的修复作用

目的:观察体内心肌缺血微环境诱导下人脐血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCBMSCs)向心肌样细胞的定向分化及对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠心功能、新生血管的影响。方法:收集健康产妇脐血细胞,采用密度梯度离心结合差速贴壁的方法分离MSCs;健康成年SD大鼠30只,制备成AMI大鼠模型后分为2组,移植组在心肌梗死周边区注射移植GFP标记的UCBMSCs;对照组在心肌梗死周边区注射等量生理盐水。术后4周行超声心动图检测及血流动力学检查,并取心脏组织行冰冻切片,免疫荧光染色检测UCBMSCs心肌特异性蛋白cTnT和Connexin43的表达;并进行抗Ⅷ因子抗体免疫组化染色,观察心肌毛细血管密度(myocardial capillary density,MCD)的变化。结果:与对照组相比,术后4周移植的UCBMSCs表达心肌特异性蛋白cT-nT和Connexin43,对照组无心肌特异蛋白表达;移植组LVEDD、LVESD明显减小,而LVEF、LVFS明显增加,血流动力学指标明显改善;免疫组化染色结果显示,移植组梗死周边区MCD较对照组明显增加,移植组为(4.16±0.2)个/HP(×400),对照组为(2.29±0.3)个/HP,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:UCBMSCs移植可在大鼠AMI部位存活,并向心肌样细胞分化;UCBMSCs移植后明显改善AMI大鼠心功能及心室重构,促进毛细血管新生。     

谷氨酸诱导骨髓间充质干细胞毒性损伤的作用

目的研究谷氨酸对骨髓间充质干细胞（BMSCs）毒性损伤的作用。方法原代培养大鼠BMSCs，流式细胞仪分析细胞表型，四甲基氮唑蓝（Mrrr）法检测分别经10、30、50mmol／L的谷氨酸作用24h后的BMSCs存活率，并用PI／Annexin—V双染法流式细胞仪计算各组凋亡细胞的比例。结果流式细胞仪分析细胞显示CD29、CD44、CD105表达阳性，CD45、CD14、CD34表达阴性，符合BM-SCs的特点。谷氨酸诱导组较多细胞呈凋亡改变，BMSCs的凋亡率较对照组升高（P〈0．05），且随着谷氨酸浓度的增加，细胞凋亡率也相应增加。结论谷氨酸可诱导BMSCs毒性损伤。     

小分子水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞心肌分化过程中早期分化基因表达的影响

目的：探讨小分子水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）心肌分化过程中早期分化基因Desmin和α-actin的表达影响。方法：流式细胞仪检测鉴定P9MSCs细胞表面标记物,分别应用10μmol／L5-aza（5．aza组）、小分子水凝胶＋5-aza（水凝胶组）对第9代MSCs进行联合诱导24h,诱导4周后,QRT-PCR和Western—blotting法检测Desmin、α—actinmRNA及蛋白的表达。结果：第9代MSCsCD44阳性表达、CD34阴性表达;诱导4周后,5-aza组细胞难以形成球状细胞团,细胞容易脱落,凋亡及死亡细胞较多;水凝胶组细胞死亡少,数量较诱导前增多。细胞之间的分支连接紧密,有聚集生长的趋势,形成球状细胞团块,个别细胞内形成类肌管状结构。5-aza组和水凝胶组心肌早期分化基因Desmin、α-actin均有阳性表达．水凝胶组mRNA及蛋白表达水平均较5-aza组明显增强（P〈0．05）。结论：小分子水凝胶可作为细胞的三维培养支架．有利于MSCs生长,具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。     

脑利钠肽对兔心肌梗死后缝隙连接蛋白重构及炎症因子的影响

目的探讨脑利钠肽对兔急性心肌梗死后梗死周边区缝隙连接蛋白43（Cx43）及炎症因子的影响。方法通过结扎冠状动脉前降支的方法制备兔心肌梗死模型,随机分为假手术组（Sham组）,心肌梗死组（MI组）,心肌梗死后人重组脑利钠肽（recombinan human brain natriuretic peptide）干预组（rh BNP组）。rh BNP组自术后即刻给予rh BNP 0.01μg/kg/min持续静脉泵入24 h;MI组、Sham组给予同等剂量的生理盐水静脉泵入。术后8周行电生理实验,并通过RT-PCR方法检测IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平;用免疫荧光结合激光共聚显微镜技术检测Cx43的分布及表达。结果 MI组心肌细胞有效不应期（ERP）明显延长,且室性心律失常诱发率明显高于Sham组;脑利钠肽干预后室性心律失常诱发率降低。MI组梗死灶周IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平均较Sham组相应部位均明显增高（P〈0.01）,rh BNP组较MI组IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平减低（P〈0.05）。Sham组的Cx43荧光斑分布较均匀,MI组Cx43的数量较Sham组明显减少,且分布紊乱,rh BNP组较MI组梗死灶周Cx43数量增加,不均一分布的程度减轻。结论脑利钠肽可能对心梗后心肌的急性炎症过程产生影响,部分逆转缺血对缝隙连接的损伤作用,抑制心肌梗死后室性心律失常的发生。     

骨形态发生蛋白-2、梗死心肌裂解液对骨髓间充质干细胞体外诱导分化作用的研究

目的探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、梗死心肌裂解液模拟的生物微环境诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化及在模拟的微环境中BMP-2对诱导的影响。方法 BMSCs分离与体外培养,构建大鼠心肌梗死模型制成梗死心肌裂解液;分4组:单纯DMEM培养组(A组)、梗死心肌裂解液组(B组)、梗死心肌裂解液加BMP-2阻断剂noggin组(C组)、BMP-2组(D组),通过倒置相差显微镜形态学观察、应用免疫细胞化学技术检测心肌特异性肌钙蛋白(cTnT)、心肌特异性肌球蛋白重链(MHC)的表达,并对诱导的心肌样细胞进行统计学分析。结果诱导3周后免疫细胞化学染色分析cTnT、MHC,A、C组呈阴性表达,B、D组呈阳性表达,B、D组与A、C组相比阳性细胞数增加(P<0.05)。结论 BMP-2、梗死心肌裂解液可诱导BMSCs分化为心肌样细胞;且BMP-2是梗死心肌裂解液诱导过程中重要的组成成分之一。     

超顺磁性纳米铁标记大鼠骨髓基质干细胞的实验研究

目的研究超顺磁性纳米铁粒子（superparamagnetic iron nanoparticle,SPIO）标记骨髓基质干细胞（bone mar-row stem cells,BMSCs）对其存活、增殖能力的影响,确定最佳标记浓度。方法分离、纯化4周龄SD大鼠的BM-SCs,分别用15、25、50 mg/L浓度的SPIO标记1×106个BMSCs分别作为实验组1、实验组2、实验组3,未做标记的BMSCs为对照组。用普鲁士蓝染色法和透射电镜鉴定SPIO-BMSCs的效率,台蓝染色法观察SPIO-BMSCs的存活,MTT比色法检测SPIO-BMSCs增殖活性。结果普鲁士蓝染色显示,随SPIO浓度的升高,标记的细胞染色程度逐渐加深。透射电镜检查显示细胞内含致密铁颗粒。实验组1的细胞增殖性与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）,实验组2和实验组3与对照组相比,死亡细胞增多,细胞增殖性受到明显抑制（P〈0.05）。结论培养基SPIO浓度在15 mg/L时,SPIO对BMSCs标记效率较高,且不影响其存活、增殖。