高糖通过上调E2F1的表达促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨高糖条件下肝癌Huh-7细胞株的E2启动结合因子1(E2F1)与上皮-间质转化(EMT)之间的关系.方法:将肝癌Huh-7细胞分别用高糖培养基(25mmol/L,高糖组)和低糖培养基(5.5 mmol/L,对照组)培养,在高糖环境下,培养沉默E2F1的Huh-7细胞记为HG+SIE组,未沉默E2F1的Huh-...     

BCORL1通过下调E-cadherin促进甲状腺癌细胞侵袭转移

目的:探讨甲状腺癌细胞中BCORL1对E-cadherin的调控及其对侵袭转移能力的影响。方法:采用Western Blot技术检测人甲状腺癌细胞TA-K、TPC-1和FTC-133中BCORL1及E-cadherin的表达;应用siRNA特异性干扰TA-K细胞中BCORL1的表达,Western Blot和qRT-PCR技术检测BCROL1和E-cadherin表达变化;Transwall侵袭和迁移小室检测BCORL1对TA-K细胞侵袭转移能力的影响。结果:BCORL1在TA-K细胞中的表达水平明显高于TPC-1和FTC-133,而E-cadherin表达水平则明显低于TPC-1和FTC-133;特异siRNA能显著下调BCORL1mRNA(t=14.025,P<0.000 1)和蛋白表达,导致E-cadherin mRNA(t=8.004,P<0.000 1)和蛋白表达升高;下调TA-K细胞中BCORL1表达能显著减弱细胞侵袭和迁移能力(t=5.942,P=0.000 3;t=7.115,P=0.000 1)。结论:人甲状腺癌细胞中BCORL1可能通过转录抑制调控E-cadherin表达,从而促进肿瘤侵袭转移。     

MiR-218通过调控Robo1抑制胃癌细胞的侵袭和转移

本研究首先用反复的Transwell迁移和侵袭实验分别筛选、获得了高转移潜能（MKN28-M,SGC7901-M）和低转移潜能（MKN28-NM,SGC7901-NM）的胃癌细胞亚系,并对其生物学特性进行了鉴定。     

FABP4通过上调GLUT1表达和有氧糖酵解促进肠癌细胞侵袭转移

目的：探讨脂肪酸转运蛋白4（fatty acid binding protein 4,FABP4）在肠癌细胞侵袭转移中的作用和机制。方法：通过ELISA和Western blot检测不同侵袭转移能力肠癌细胞中FABP4表达水平;采用Transwell实验检测肠癌细胞侵袭转移能力;使用siRNA技术干扰HT29细胞中葡萄糖转运蛋白1（glucose transporter 1,GLUT1）表达,检测肠癌细胞葡萄糖摄取、乳酸脱氢酶含量、乳酸生成水平。结果：在高转移性肠癌细胞系HTCC116、SW620、Lovo的培养基上清和细胞中,FABP4表达显著高于低转移性肠癌细胞系HT29、Colo?2、SW116。用hrFABP4处理的HT29,其侵袭能力增强;而用FABP4抑制剂BMS处理的HTC116,其侵袭能力被明显抑制。过表达hrFABP4促进肠癌细胞中GLUT1的表达和有氧糖酵解。下调GLUT1或抑制有氧糖酵解能够削弱hrFABP4引起的肠癌细胞侵袭和转移。结论：FABP4可促进肠癌细胞侵袭转移,其机制可能通过促进GLUT1表达,进而诱导有氧糖酵解。     

Ezrin调控肝癌细胞侵袭性伪足的形成促进肝细胞癌侵袭转移

目的 探讨Ezrin在肝癌细胞侵袭性伪足形成过程中的作用.方法 利用GEPIA数据库分析肝癌组织中Ezrin mRNA与伪足标志物Cortactin mRNA的表达相关性.将收集的105例肝细胞癌患者的组织标本制作成组织芯片,采用免疫组化检测Ezrin蛋白和伪足标志物Cortactin蛋白在肝癌组织中的表达,并分析二者...     

肾母细胞瘤过表达基因促进肝癌细胞的侵袭与转移

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV CCN3)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中的CCN3的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中CCN3的mRNA表达水平,Western blot检测肝癌及癌旁组织中CCN3蛋白的表达量;通过肝癌细胞过表达CCN3分析CCN3蛋白对肝癌细胞转移的作用;运用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验研究CCN3过表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响?结果:50对样本中有39对CCN3的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,Western blot提示肝癌组织中CCN3蛋白表达量高于癌旁组织?体外肝癌细胞的功能试验中,过表达CCN3能促进MHCC-97H?SMMC-7721细胞的侵袭与转移?结论:CCN3在肝癌组织中高表达,过表达CCN3能促进肝癌的侵袭与转移,CCN3发挥作用机制的研究能为肝细胞肝癌的治疗提供新的思路?     

NCOA5通过调控上皮间质转化促进卵巢癌细胞的侵袭转移能力

目的 研究核受体共激活因子5 (NCOA5)对卵巢癌细胞侵袭和转移能力的作用及分子机制。方法 常规培养卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和正常卵巢上皮细胞系IOSE80,Western blot检测各细胞中NCOA5蛋白的表达水平。选取高表达NCOA5的卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780,各分为si-NC组、si-NCOA5组,并分别转染NC siRNA和NCOA5 siRNA。Boyden实验检测各组细胞侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,Western blot检测各组细胞上皮间质转（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达水平。结果 Western blot结果显示NCOA5在卵巢癌细胞中的表达显著上调(P<0.05)。在SKOV-3和A2780细胞中干扰NCOA5的表达均显著抑制卵巢癌细胞侵袭和转移能力 (P<0.05),并促进EMT相关蛋白E-cadherin的表达,抑制细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达(P<0.05)。结论 NCOA5促进卵巢癌侵袭转移能力,具有作为卵巢癌新型预后生物标志物和治疗分子靶点的潜力。     

miRNA调控胃癌细胞侵袭和转移的研究进展

胃癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一,肿瘤发生的早期就容易发生淋巴转移和血液转移,肿瘤远处转移是胃癌患者主要死亡原因,但目前胃癌侵袭转移的分子机制尚未完全阐明。MicroRNA(miRNA)是一类内源性非编码小RNA,在转录后水平调控基因的表达。许多研究已经证实,miRNA在多种类型肿瘤中存在异常表达,miRNA通过与胃癌相关的调控基因或mRNA结合,使目的mRNA表达沉默或增强,导致胃癌细胞的侵袭和转移。本文就miRNA在胃癌细胞侵袭和转移中的作用机制的相关研究作一综述。     

营养剥夺通过诱导自噬促进肝癌细胞侵袭

目的 明确营养剥夺促进肝癌细胞侵袭的机制.方法 以Hank's平衡盐缓冲液对肝癌细胞系HepG2和BEL7402细胞进行营养剥夺培养,同时构建转染针对自噬基因Atg3的siRNA(siRNA-Atg3),观察营养剥夺在Atg3基因沉默前后对肝癌细胞自噬活性和侵袭能力的影响,分析自噬活性与侵袭能力之间的关系.结果 平衡盐缓冲液较对照完全培养液能明显诱导肝癌细胞HepG2和BEL7402内自噬体形成[(93±5)vs.(40±6)/高倍视野,P＜0.05;(83±4)vs.(36±4)/高倍视野,P＜0.05]及LC3蛋白的表型转换,抑制P62蛋白表达,同时显著增加HepG2和BEL7402细胞的侵袭数[(60 875±1 051)vs.(15 812士515),P＜0.05;(59 750±1 571)vs.(15 500+645),P＜0.05].转染siRNA-Atg3可沉默细胞Atg3表达并显著对抗营养剥夺诱导的LC3蛋白表型转换和P62蛋白表达下调,HepG2和BEL7402肝癌细胞的侵袭数较未转染细胞也明显减少[(17 438±427)vs.(59 875±520),P＜0.05;(17 250±408)vs.(59 500±540),P＜0.05].结论 自噬可能是营养剥夺条件下促进肝癌细胞侵袭性增加的主要机制.     

沉默CRAF基因表达对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的：探讨肝癌细胞中原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（CRAF）高表达对肝细胞癌（HCC）侵袭和转移的影响,并阐明其机制。方法：以CRAF高表达的SMMC-7721细胞作为研究对象,采用shRNA技术下调CRAF表达。将SMMC7721细胞分为对照组和沉默组（shCRAF#1转染组和shCRAF#2转染组）。细胞划痕法观察各组SMMC7721细胞创口愈合指数,Transwell实验检测各组SMMC-7721细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组SMMC7721细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平。结果：细胞划痕实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的创口愈合指数明显降低（P<0.05）。Transwell实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的穿膜细胞数降低（P<0.05）。Western blotting法检测,沉默组细胞中MMP-2和MMP-9表达水平明显低于对照组（P<0.05）。结论：下调CRAF可以通过抑制MMP-2和MMP-9表达抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和迁移。     

Musashi1正调控肝细胞癌细胞的生长并促进其增殖

目的 Musashi1（MSI1）属于RNA结合蛋白（RBP）家族,可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用,但它在肝细胞癌（HCC）中的功能还未被深入探究。本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制。方法 构建MSI1过表达或敲除细胞系。采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达。采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响,同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达。结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高。与对照细胞相比,HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长（7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14,P<0.01）,且处于G0/G1期的细胞比率也从（58.42±3.18）%降至（40.67±1.22）%,而S期细胞比率则从（28.51±1.93）%增加至（40.06±1.92）%（P<0.01）。与此同时,细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调。反之,敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑,更多细胞停滞于G0/G1期（G0/G1期细胞比率从（43.83±1.57）%增加至（62.84±1.22）%（P<0.01）,同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调。MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达,反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达。结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展,其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。     

基质金属蛋白酶含量及表达与肝细胞癌侵袭转移的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的血清含量及组织表达与原发性肝细胞癌侵袭转移的关系。方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）检测40例肝细胞癌患者及20例正常对照者血清中MMP-2和MMP-9的含量;应用免疫组织化学SP法,检测40例肝细胞癌、10例癌旁正常组织中MMP-2和MMP-9的表达及分布情况。结果：肝癌患者血清中MMP-2和MMP-9含量明显高于正常对照组（P<0.01）,淋巴结转移组患者血清MMP-2和MMP-9含量高于无淋巴结转移组（P<0.05),肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达显著高于癌旁正常组织,随着肿瘤分级的增高MMP-2和MMP-9表达显著增强,且与病理组织学分级、淋巴结转移有关（P<0.05）。结论：MMPs血清含量及组织表达与肝细胞癌侵袭转移有关,可以作为判断肝细胞癌预后的客 观指标。     

DHA可抑制黄曲霉素B1 诱导的肝癌细胞迁移及侵袭

目的分析二十二碳六烯酸（DHA）对黄曲霉素B1（AFB1）诱导的肝癌细胞侵袭能力影响。方法不同浓度的AFB1、DHA/ AFB1分别干预肝癌HepG2.2.15细胞,通过细胞划痕、迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,流式细胞仪分析细胞周 期比例,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果2 μmol/L AFB1与空白组相比,细胞划痕修复率增高,细胞穿膜细胞数目均 增多,G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显升高,S期细胞比例变化不明显;细胞多核仁,细胞内出现线粒体、高尔 基体增多等。DHA/AFB1与单独AFB1处理组的相比,细胞划痕修复率降低;细胞穿膜细胞数目均减少,G0/G1期细胞比例明显 升高,G2/M期细胞比例明显降低,S期细胞比例变化不明显;细胞单核仁,细胞内核质减少,细胞内线粒体减少,出现空泡化超微 结构。结论DHA可以明显抑制AFB1诱导增强的HepG2.2.15细胞迁移及侵袭能力。     

转录因子NFAT表达与大肠癌侵袭转移的关系

目的:研究活化T细胞核因子(NFAT)的表达与大肠癌侵袭及转移的关系。方法:以30例结直肠癌手术标本为研究对象,分别采用荧光实时定量PCR和免疫组织化学的方法检测肿瘤和切端组织中活化T细胞核因子基因的mRNA和蛋白表达水平,并结合相关临床病理资料进行统计学分析。结果:癌组织NFAT mRNA转录水平显著高于切端组织(P<0.01),NFAT mRNA转录水平与浸润深度、淋巴结转移情况和Dukes分期相关(P<0.05);癌组织NFAT蛋白表达水平显著高于远癌切端组织(P<0.01),NFAT蛋白表达水平与淋巴结转移情况(P<0.01)和Dukes分期显著相关(P<0.05);并且在肿瘤组织中NFAT mRNA和蛋白的表达水平呈正相关(P<0.01)。结论:NFAT在结直肠癌的恶性生物学行为中起重要作用,其高表达者肿瘤易于侵袭、转移,可作为判断肿瘤恶性程度、浸润转移的生物学指标;针对NFAT的干预有可能成为肿瘤治疗的重要手段之一。     

小干扰RNA沉默组织因子基因对肝癌侵袭转移能力的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人类肝癌细胞内组织因子(TF)基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响。方法 本实验以人类肝癌细胞系HepG2细胞株为实验对象,将携带有针对TF小干扰RNA( siRNA)序列的质粒pGPU6/GFP/Neo-TF siRNA,转染HepG2细胞株,以适当浓度的G418筛选获得阳性克隆,通过RT-PCR和蛋白质印迹法比较转染TF siRNA(+)质粒、转染TF siRNA( -)质粒以及未转染任何质粒的HepG2细胞内源性TF在基因及蛋白质表达水平的差异,进而应用Transwell体外侵袭实验检测三者的侵袭转移能力,探讨TF对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。结果 (1) RT-PCR结果 显示,转染TF siRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF表达水平低于转染TF siRNA（-）质粒和未转染质粒的表达水平。(2)蛋白质Western印迹法结果 显示,转染TFsiRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF蛋白表达水平低于转染TF siRNA( -)质粒和未转染质粒的表达水平。(3) Transwell体外侵袭实验结果 显示,转染TF siRNA(+)质粒的HepG2穿膜细胞数[(14±10)个]少于转染TF siRNA（-）质粒的HepG2穿膜细胞数[(128±18)个],经t检验比较,两组差异有统计学意义（P＜0.05）。这提示应用RNA干扰技术抑制肿瘤细胞TF表达可以使HepG2细胞侵袭转移能力显著下降。结论 TF与肝癌细胞的侵袭转移能力密切相关,应用RNA干扰技术抑制其表达可以明显降低细胞HepG2体外侵袭转移能力。     

miR-30c减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移

目的:观察miR-30c/snail在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达并探讨其在肝癌侵袭中的作用?方法:定量PCR检测肝癌及肝癌细胞系中miR-30c/snail的mRNA表达水平,通过免疫组织化学和Western blot分别检测肝癌及肝癌细胞系中snail的蛋白表达水平,并在肝癌细胞株中转染miR-30c模拟物或抑制物,分析其对肝癌细胞侵袭的作用?结果:与无脉管转移组相比,miR-30c在有脉管转移组的HCC组织中表达明显下调,同时在高转移肝癌细胞株MHCC-97H中也有相似的结果?转染miR-30c模拟物可减少snail的表达,并减少MHCC-97H细胞的侵袭性,然而,转染miR-30c抑制剂则增加snail的蛋白水平,增加HepG2细胞的侵袭力?结论:上调miR-30c的表达通过直接抑制snail,可减弱HCC的侵袭性?一种新的针对miR-30c的治疗策略可能有利于伴侵袭转移的HCC患者?