杭州和湖州鲍曼不动杆菌β内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解浙江省杭州和湖州自临床分离的鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶(β-lactamases,BLA)基因及氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifying enzymes,AMEs)基因存在状况.方法在2000年7月～2004年2月间从省立同德医院和解放军第98医院各分离20株鲍曼不动杆菌,采用微量稀释法测定其对13种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析BLA基因(TEM和SHV)及AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)- Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅰ]类型.结果两地分离株多重耐药严重,但对亚胺培南和美洛培南均无耐药.杭州分离株中TEM、SHV、aac(3)-Ⅰ、aac(3)- Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅰ基因阳性率分别为45.0%、0.0%、55.0%、15.0%、35.0%和60.0%,湖州分离株分别为100.0%、30.0%、50.0%、10.0%、55.0%和65.0%.序列分析确认为TEM-1亚型广谱BLA和SHV-12亚型超广谱β内酰胺酶基因.其中98医院HZ40株的TEM-1序列及HZO2株的SHV-12序列均已登录GenBank(GenBank注册号分别为:AY263331和AY259163).结论浙江湖州临床分离的鲍曼不动杆菌中TEM、SHV基因阳性率均高于杭州分离株(Ρ分别＜0.01和＜0.05),但4种AMEs基因阳性率差别不大(Ρ均＞0.05).在鲍曼不动杆菌中发现SHV-12 及TEM-1基因分别为国际及国内首次报道.     

多重耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因检测分析

目的为了解多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶（BLA）基因、氨基糖苷类修饰酶（AMFs）基因、消毒剂与磺胺类耐药基因（qacE△1-sul1）和1类整合子酶基因（intl1）存在情况。方法对2005年1—6月份临床分离的31株多重耐药菌株（耐哌拉西林、第三代头孢菌素、环丙沙星和阿米卡星），应用聚合酶链反应及序列分析方法分析其BLA、AMEs、qacE△1．sull和intl1基因类型。结果31株多重耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素B敏感，有3株（9．7％）对受试的其他18种抗菌药物均耐药。19株（61．3％）检出了β-内酰胺酶基因，其中TEM、PER、DHA阳性率分别为61．3％、19．4％、3．2％，未检出SHV、OXA-23、OXA-24、GES、IMP和VIM等基因。25株（80．6％）检出氨基糖苷类修饰酶基因，其中aac（3）-I、aac（6’）-I、ant（3”）-I、ant（2”）-I、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ阳性率分别为67．7％、45．2％、29．0％、22．6％、9．7％、3．2％。qacE△A1-sul1、intl1阳性率分别为80．6％、58．1％。分离株常见的基因组合是TEM＋qacE△1-sul1＋intl1和TEM＋PER＋qacE△1-sull＋intl1，分别占25．8％和19．4％。分离株AMEs的常见的基因组合是aac（3）-I＋aac（6’）-I和nnc（3）-I＋aac（6’）-I＋ant（2”）-I，分别占19．4％和12．9％。结论临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌TEM、nnc（3）-I、nnc（6’）-I、ant（3”）-I、ant（2”）-I、qacE△1-sul1和intl1基因携带率高。     

多耐药鲍氏不动杆菌对替加环素的耐药分析

目的探讨替加环素对多耐药鲍氏不动杆菌的体外抗菌活性。方法从2009年4月至2010年3月中山大学附属第三医院住院患者中分离41株多耐药鲍氏不动杆菌（multidrug-resistant Acineto bacterbaumannii,MDR-AB）,采用SIEMENS公司MicroScan Walk Away40全自动微生物鉴定仪鉴定菌株,用K-B法测定鲍氏不动杆菌对12种抗菌药物的敏感性。结果鲍氏不动杆菌主要分离自痰标本,占80.5%;病区主要分布在ICU（37%）和神经外科（22%）。除亚胺培南外,其余11种抗菌药物的非敏感率均大于80%。替加环素的非敏感率为80.4%,敏感率为19.5%;亚胺培南的敏感率最高,为36.6%,非敏感率为63.4%。结论多耐药鲍氏不动杆菌对替加环素的非敏感率很高,可能与外排泵系统有关。替加环素对MDR-ABA感染的治疗效果不容乐观。     

PCR检测氨基糖苷类修饰酶基因

耐氨基糖苷类药物的重要原因为细菌产氨基糖苷类修饰酶 (AMEs)。根据AMEs的修饰活性可分 3类 ,即乙酰转移酶 (aac基因编码 )、磷酸转移酶 (aph基因编码 )和核苷转移酶 (ant基因编码 )。目前从美国GenBank核酸库已能检索到AMEs 30余个基因型 ,但在革兰阴性菌中以aac(3) Ⅰ、aac(3) Ⅱ、aac(6′) Ⅰ、aac (6′) Ⅱ、ant (3″) Ⅰ、ant(2″) Ⅰ等基因型为常见 ,革兰阳性菌中以aac(6′) aph(2″)、aph(3′) Ⅲ、ant(4′ ,4″)、ant (6 ) Ⅰ等基因型为常见。本文报告PCR法检测上述 1 0种AMEs基因。革兰阴性菌 1 3株 ,其中铜绿假…     

20株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的明确临床分离的20株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析氨基糖苷类修饰酶基因型。结果该20株菌呈现多重耐药，对亚胺培南和美罗培南均敏感，对阿莫西林、阿莫西林／克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药，对头孢吡肟及4种氨基糖苷类抗生素阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为25．0％、60．0％、85．0％、90．0％和90．0％，其余9种的耐药率在80．0％～95．0％之间。19株(95．0％)检出氨基糖苷类修饰酶基因；aac(6′)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ基因的阳性率分别为80．0％、50．0％、40．0％、5．0％和5．0％；而aog2(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ和aac(6′)-Ⅱ基因均阴性。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因携带率很高。     

医院泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素的耐药机制

目的 探讨医院泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素的耐药机制.方法 应用PCR方法对2010年12月至2012年3月期间本院从临床痰标本中分离的36株泛耐药鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶IMP、OXA23基因和整合子基因检测;提取细菌膜蛋白行SDS-PAGE电泳分析其组成.结果 36株泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶OXA23基因扩增均为阳性;14株碳青霉烯酶IMP基因扩增阳性,22株阴性.12株整合子PCR产物约1200 bp,10株约3000 bp,14株整合子PCR产物约3500 bp.与碳青霉烯抗生素敏感鲍曼不动杆菌膜蛋白比较,22株泛耐药鲍曼不动杆菌存在相对分子质量为25 000、36 000的膜蛋白缺失.结论 医院泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯抗生素机制与产IMP、OXA23碳青霉烯酶及膜蛋白缺失有关.     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药性及其修饰酶基因的研究

铜绿假单胞菌是院内感染最常见的细菌之一,因其外膜通透性极低的特异性,表现出对多种抗生素的天然耐药.以往的研究多侧重于对β-内酰胺类和喹诺酮类抗生素的耐药机制,而临床工作中发现,铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素耐药现象亦非常严重.细菌对氨基糖苷类抗生素耐药主要是由于细菌产生的氨基糖苷类修饰酶（aminoglycosides-modifying enzymes,AME）对进入细胞内的药物分子进行修饰使之失去生物活性而耐药.AME基因型的分布带有明显的地区性和菌株差异,且不同基因型的细菌耐药和流行特征也不同.我们对2003年6月-2004年3月的26株铜绿假单胞菌进行AME基因型分布研究.     

一组泛耐药鲍曼不动杆菌中发现拓普异构酶Ⅳ编码基因新的变异型

目的 调查一组泛耐药鲍曼不动杆菌中喹诺酮类耐药相关基因的存在与变化状况.方法 收集南通大学附属医院2011年1月-2011年4月患者标本中分离的泛耐药鲍曼不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析喹诺酮类药物作用靶位基因gyrA与parC,以及可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因[ qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac( 6')-Ⅰ b-cr].结果 本组20株鲍曼不动杆菌均检出gyrA基因第83位密码子TCA→TTA有义突变(氨基酸序列Ser→Leu).parC基因第80位密码子TCG→TTG有义突变(氨基酸序列Ser→Leu),并同时存在3个同义突变(第40位密码子CCC→CCT同义突变;第41位密码子GTA→GTT同义突变;第44位密码子CGT→CGC 同义突变),且本组parC基因序列为新的变异型.可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6’)-Ⅰ b-cr均没有检出.结论 本组鲍曼不动杆菌耐喹诺酮类药物可认为主要与喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变相关,发现parC基因新的变异型国内未见报道.     

颅内泛耐药鲍曼不动杆菌感染死亡一例报告

回顾性分析1例颅内炎性假瘤侵袭,致血管破裂出血后期并发颅内泛耐药鲍曼不动杆菌感染患者救治失败的治疗过程和经验教训,从而提示临床医师,对于颅内及开颅术后泛耐药鲍曼不动杆菌院内感染患者,合理选择抗生素,及时调整联合救治方案是控制感染、抢救病人生命的关键。     

阴沟肠杆菌中发现氨基糖苷类-氟喹诺酮类修饰酶基因aac(6′)-Ib-cr

对本院临床分离的阴沟肠杆菌进行耐药机制研究时，发现一株携带aac（6＇）-Ib-cr基因，该基因产物不仅对氨基糖苷类抗生素有修饰作用，对氟喹诺酮类也有修饰作用。     

2016~2018年鲍曼不动杆菌临床分离株的 分布特征及耐药性变迁

目的 了解鲍曼不动杆菌在我院的分布特征及耐药性变迁,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法 采用珠海迪尔DL-96Ⅱ微生物分析仪进行细菌鉴定与药敏试验,对我院2016年1月~2018年12月临床各类标本中分离出的鲍曼不动杆菌的分布特征及耐药情况进行分析。结果 分离出551株鲍曼不动杆菌,年分离率相对稳定,但多重耐药鲍曼不动杆菌构成比上升明显,从67.28%上升到了82.21%。鲍曼不动杆菌主要分离自痰及咽拭子标本,占67.69%;感染主要发生在ICU病房、呼吸科和神经内科,其次为内分泌科和老干科。临床常用13种抗菌药物的耐药率与2016年比较,多种抗菌药物耐药率上升显著;2018年与2017年比较,耐药情况控制较好,其中米诺环素和多粘菌素B耐药率最低,分别为14.90%和16.35%;其余耐药率均大于55%。结论 鲍曼不动杆菌在我院耐药情况比较严重,对多种抗菌药物耐药率都达到了较高水平,临床应根据药敏结果和临床实际合理选用抗菌药物。     

鲍曼不动杆菌多重耐药性与主动外排机制的相关性研究

目的 了解多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统及双组分调节系统编码基因的携带情况,并观察外排泵抑制剂对多重耐药鲍曼不动杆菌耐药水平的影响程度,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药性与胞膜主动外排系统的关系.方法 PCR方法 扩增外排泵编码基因adeB及双组分调节系统编码基因adeR和adeS.采用琼脂稀释法测定50株多重耐药鲍曼不动杆菌对环丙沙星、阿米卡星、头孢噻肟和亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC),并观察在含25μg/ml利血平条件下MIC值的变化程度.结果 50株多重耐药鲍曼不动杆菌adeB、adeR及adeS基因的携带率分别为94%、96%及92%.以环丙沙星、头孢噻肟、阿米卡星和亚胺培南作为底物,分别有49、50、50和46株菌在含25μg/ml利血平的条件下MIC值降低4倍或4倍以上,呈现明显的外排作用.结论 主动外排机制是本地区鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一.     

鲍曼不动杆菌临床株的外排泵研究

目的 探讨鲍曼不动杆菌临床株外排泵AdeABC、AdeIJK、AdeFGH、AbeM、AbeS、CraA、MdtL的表达与耐药的关系.方法 收集多重耐药鲍曼不动杆菌临床株32株和敏感株10株,PCR扩增泵基因;选取主要克隆型的21株多重耐药株和10株敏感株,实时荧光定量RT-PCR方法检测泵基因adeB、adeJ、adeG、abeM、abeS、craA、mdtL的mRNA相对表达水平,PCR扩增泵调控基因adeRS、adeL并测序分析.结果 32株多重耐药鲍曼不动杆菌临床株中携带泵结构基因片段adeB100％、adeJ 100％、adeG 100％、abeM 96.88％、abeS 100％、craA 100％、mdtL 93.75％,10株敏感株均存在7种泵结构基因片段;主要克隆型的21株多重耐药株和10株敏感株adeB、abeM、mdtL的mRNA相对表达水平的差异有统计学意义( P＜0.001,P=0.001,P=0.013),选取多重耐药株AbR3和AbR11检测外排泵AdeABC调控基因adeRS序列出现氨基酸替代及缺失,而外排泵AdeFGH调控基因adeL序列无基因突变.结论 鲍曼不动杆菌临床株外排泵AdeABC、AbeM、MdtL的表达可能与耐药性有关.     

鲍曼不动杆菌的单药治疗及其联合使用的研究

鲍曼不动杆菌的环境适应能力及耐药能力强,可引发一系列感染,给临床治疗带来了巨大的挑战。随着各种广谱抗生素,特别是碳青霉烯类的广泛应用,使其耐药性不断增强。鉴于新型药物的的缺乏,临床常用药物联合治疗,目前联合治疗似已显现了更高的杀菌活性,但具体的效果还有待进一步证实。针对鲍曼不动杆菌的用药治疗进行综述,从而为防治相关感染提供理论基础。     

鲍曼不动杆菌临床分布及耐药性分析

目的 了解鲍曼不动杆菌的感染情况及其耐药性,为医院控制感染及临床合理应用抗生素提供科学依据。方法 回顾性分析2013年1月~2014年12月我院临床分离的154株鲍曼不动杆菌的药敏试验数据和各科分布情况。结果 在分离出的154株鲍曼不动杆菌中,重症监护病房（PICU）最多,为48株（31.17%）,其中以痰液分离最多,为116株（75.32%）,多重耐药菌分离率为7.14%,耐碳青霉烯类菌分离率为2.66%。结论 鲍曼不动杆菌极易对抗菌药产生耐药,应加强医院耐药菌株的监测,指导临床合理使用抗生素,以便采取有效的防范措施,最大限度减少鲍曼不动杆菌感染。     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药分析及基因型研究

目的分析20株鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素的耐药性及对碳青霉烯酶基因的研究。方法用API鉴定条进行细菌鉴定及K-B法进行药敏试验,用碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增和基因型的测序分析,并通过网上Genbank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对左旋氧氟沙星、丁胺卡那霉素、多粘菌素B的耐药率分别为50%、25%、4%。其它抗生素的耐药率均在90%以上。携带D类碳青霉烯酶OXA-23基因有17株（85%）,携带OXA-51基因有15株（75%）,OXA-24、OXA-58基因引物PCR扩增为阴性,随机各抽取3株OXA-23基因阳性株进行测序后通过在网上Genbank比对发现与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-51标准株98%同源。结论本院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌对多粘菌素B的耐药率最低,其次是丁胺卡那霉素,以携带OXA-23型碳青霉烯酶基因为主,应引起临床高度重视,防止在院内广泛传播。     

60株鲍曼不动杆菌耐药基因携带情况分析

目的研究临床分离的60株鲍曼不动杆菌耐药谱及Ⅰ型整合子和β-内酰胺酶等基因携带情况。方法用微量肉汤稀释法测定16种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;PCR检测β-内酰胺酶、Ⅰ型整合子和外排泵基因,对阳性基因进行序列分析。结果60株菌中,多重耐药株53株,占88.3%;6株携带OXA-23基因,均对包括碳青霉烯在内的5类以上抗菌药耐药,并具有高耐药特性;38株携带PER-1基因,对头孢菌素类耐药率显著高于PER-1基因阴性菌株(P<0.01);45株检出Ⅰ型整合子结构基因,多重耐药率明显高于Ⅰ型整合子阴性菌株(P<0.01);Ⅰ型整合子和PER-1基因同时阳性25株,与7株两者同为阴性菌株相比,多重耐药率增高(P<0.01),但耐药程度无显著差别。结论Ⅰ型整合子基因及β-内酰胺酶类基因的作用是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因;OXA-23基因阳性菌株多为泛耐药和高耐药株,有必要采取有效措施控制其传播。     

Efflux pump inhibitory activity of biologically synthesized silver nanoparticles against multidrug-resistant Acinetobacter baumannii clinical isolates

This study was carried out to investigate the possible efflux pump inhibitory activity of biologically synthesized silver nanoparticles (AgNPs) against multidrug-resistant (MDR) Acinetobacter baumannii isolates. In this study, the physicochemical characteristics of synthesized AgNPs were investigated using scanning electron microscopy (SEM), transmission electron microscopy (TEM), X-ray diffraction (XRD), and Fourier transform infrared spectrophotometer (FTIR) methods. Subsequently, MDR A. baumannii isolates were recovered from clinical samples and the phenotypic cartwheel efflux assay and polymerase chain reaction (PCR) were used to elucidate the possible presence of efflux pump in MDR strains. After treatment of MDR strains with sub-minimum inhibitory concentration (MIC) concentration of AgNPs, the expression level of efflux pump genes was evaluated using a quantitative real-time PCR technique. The synthesized AgNPs had a spherical nanostructure, with mean size 38.89 nm, according to SEM and TEM data. XRD and FTIR results confirmed the synthesis of AgNPs. The results of PCR revealed that among 50 strains, 12 A. baumannii strains had efflux pump genes and the expression level of AdeA, AdeC, AdeS, AdeR, AdeI, AdeJ, and AdeK efflux pump genes was downregulated significantly after the treatment with AgNPs. In addition, the inhibitory effect of AgNPs on efflux pumps can be detected when the MIC of ethidium bromide (EtBr) with AgNPs is lower than that of EtBr alone. According to the results, the biologically synthesized AgNPs exhibit efflux pumps inhibitory activity, which may be one of the possible mechanisms of their antibacterial activity against MDR A. baumannii strains.     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药分子机制及质粒谱分析

目的了解我院临床分离的66株多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）的耐药性和整合子（qacE△1-sull）、转座子（tnpU）存在状况,并对菌株质粒谱进行分析。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,并对该细菌进行总DNA的提取。用聚合酶链反应（PCR）检测qacE△1-sull及tnpU,提取质粒进行同源性分析。结果 66株鲍曼不动杆菌中整合子qacE△1-sull基因阳性率为31.8%,转座子tnpU基因阳性率为30.3%。携带遗传标记的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%;有19株对亚胺培南耐药,其中整合子阳性率63.2%,转座子阳性率36.8%。检出质粒的46株（70%）临床分离菌出现1～3条大质粒带,大小在1～20kb间,其中出现1条带的有33株、2条带8株、3条带5株,有12株菌提取到大小相同的质粒。结论多重耐药鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的耐药现象严重;整合子、转座子遗传标记的携带率高,可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌armA基因的分布与耐药性的研究

目的 调查我院鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化基因armA的分布以及与鲍曼不动杆菌耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用.方法 收集72株鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,后采用PCR筛选鲍曼不动杆菌的16S rRNA甲基化基因armA,并利用随机扩增多态性DNA法(RAPD)技术进行基因分型.统计各鲍曼不动杆菌菌株对多种氨基糖苷类药物的药敏结果,并分析基因型与耐药性的关系.结果 根据PCR产物片段大小,72株鲍曼不动杆菌共有armA基因阳性菌株20株(27.8%).含有armA基因型鲍曼不动杆菌菌株对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率均为90%;随机扩增多态性DNA法显示20株armA基因阳性的鲍曼不动杆菌主要分为7型,A型为优势克隆株.结论 产16S rRNA甲基化基因armA的鲍曼不动杆菌菌株可对多种氨基糖苷类抗生素高水平耐药.同一克隆菌株在病房内和病房间的传播为我院armA基因传播的主要方式.