MYPT1通过RhoA/ROCK信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和迁移

目的 探讨实肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）在结直肠癌发生发展中的作用及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测结直肠癌细胞迁移能力,生物信息学软件筛选可与MYPT1相互作用的蛋白质,通过TCGA数据库分析MYPT1表达水平及与RAS同源基因家族成员A（RhoA）和锌离子相关的RhoA蛋白1（ROCK1）的相关性。根据实验方案进行分组,分为空白对照组、阴性对照组、MYPT1过表达组、RhoA过表达组、MYPT1过表达+RhoA空载组和MYPT1过表达+RhoA过表达组。结果 和癌旁正常组织及正常肠粘膜细胞相比,MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达（P＜0.05）。过表达MYPT1可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1负调控RhoA和ROCK1的表达（P＜0.05）。过表达RhoA促进结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1通过下调RhoA的表达抑制ROCK1表达（P＜0.05）。MYPT1通过负调控RhoA抑制细胞增殖和迁移（P＜0.05）。结论 MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达,其通过RhoA/ROCK信号通路调控结直肠癌细胞增殖和迁移。     

Mig-7通过MEK/ERK信号通路抑制胶质瘤U251侵袭及血管生成拟态

目的研究迁移诱导基因7（Mig-7）通过MEK/ERK信号通路抑制人脑胶质瘤细胞株U251体外血管生成拟态（VM）形成能 力和迁移、侵袭能力的影响。方法采用RNA干扰技术将特异性针对Mig-7基因的sh-Mig-7 转入人脑胶质瘤U251细胞中,并 观察感染效率;用携带有sh-Mig-7和阴性对照（sh-NC）的慢病毒感染U251 细胞后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中 Mig-7的表达水平;采用体外三维培养和Transwell小室侵袭实验观察Mig-7基因沉默对各组U251细胞VM 形成能力和侵袭能 力的影响。采用western-blot检测各组细胞中MEK/ERK的蛋白表达水平。结果携带有sh-Mig-7和sh-NC的慢病毒成功感染 U251细胞,并获得稳定低表达Mig-7基因的U251细胞株;与感染sh-NC慢病毒和未感染病毒的的细胞相比,sh-Mig-7感染组 U251细胞中Mig-7的表达水平以显著降低（P均<0.01）;与空白对照组和sh-NC感染组相比,sh-Mig-7 感染组U251细胞的侵袭 能力明显下降（P<0.01）,并且sh-Mig-7 感染组U251 细胞VM形成能力明显下降（P<0.05）。与空白对照组和sh-NC感染组相 比,sh-Mig-7感染组U251细胞的MEK、ERK蛋白的表达水平均显著降低（P<0.05）。结论沉默Mig -7 基因的表达,可能通过 MEK/ERK信号通路抑制U251 细胞的VM 形成及侵袭能力,提示Mig -7 基因在人脑胶质瘤细胞的VM 和侵袭中发挥重要 的作用。     

RhoA/ROCK信号通路与心血管系统疾病关系的研究进展

心血管疾病是中国人群死亡的主要原因,然而其发病机制尚不明确.研究发现,RhoA/ROCK信号通路与高血压、 冠心病、 心力衰竭、 心律失常等疾病的发生和发展密切相关.ROCK抑制剂也为心血管疾病的治疗提供新的思路,现就RhoA/ROCK信号通路在心血管疾病中研究做一综述.     

OSBPL2介导RhoA/ROCK2信号通路调控听觉细胞肌动蛋白细胞骨架

目的：探索氧化固醇结合蛋白样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)对听觉细胞肌动蛋白骨架形态和功能的影响及其相关分子机制。方法：采用OSBPL2基因敲除（Osbpl2-KO）HEI-OC1细胞探讨OSBPL2缺陷对听觉细胞肌动蛋白细胞骨架形态和功能的影响;扫描电镜观察Osbpl2-KO小鼠毛细胞静纤毛形态;Western blot实验检测HEI-OC1细胞和耳蜗内Rho/ROCK信号通路关键效应因子Rho激酶2(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 2,ROCK2)、Lim激酶1(LIM domain kinase 1,LIMK1)、肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白1(actin depolymerizing factor/cofilin 1,ADF/CFL-1)的表达水平。结果：Osbpl2-KO HEI-OC1细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白（F-actin）的分布明显减少,细胞外周微刺突和丝状伪足明显减少,细胞迁移能力明显减弱;扫描电镜下观察发现Osbpl2敲除导致小鼠耳蜗内...     

电针结合鳖甲煎丸对肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡及JNK信号通路的影响

目的:观察电针结合鳖甲煎丸对H22肝癌小鼠肿瘤抑制作用及JNK信号通路的影响。方法:建立H22肝癌小鼠模型,将100只肝癌小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、电针组、鳖甲煎丸组、针药联合组,小鼠治疗14 d后,取肿瘤组织称重,计算抑瘤率;采用Western blot方法检测肿瘤组织Bcl-2、Bax、JNK、p-JNK蛋白表达情况。结果:针药联合对H22小鼠肿瘤生长有明显抑制作用;Western blot结果表明针药联合能明显降低Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,促进JNK蛋白磷酸化。结论:针药联合可通过激活JNK信号通路,降低抑凋亡蛋白Bcl-2表达,提高促凋亡蛋白Bax表达,调整Bcl-2/Bax比值,进而发挥抑瘤作用。     

RhoA/ROCK信号通路对胚胎干细胞神经分化的影响

RhoA是RhoGTP酶家族成员之一,ROCK是RhoA的下游效应分子,ROCK影响细胞骨架及细胞核内的转录,这一系列反应构成RhoA/ROCK信号通路。胚胎干细胞是具有自我更新和分化为各种细胞的潜能的原始细胞,RhoA/ROCK信号通路在胚胎干细胞向神经分化中发挥重要作用。本文对Rho/ROCK对胚胎干细胞分化过程的影响进行论述,并对其今后的研究方向进行了展望、总结。     

内皮抑制素抑制RhoA/ROCK信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤实验研究

背景 急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种由多种诱因引发的急性肺部炎症性疾病,目前无有效防治手段。内皮抑制素(endostatin,ES)可特异性抑制血管内皮细胞的增殖和迁移,广泛应用于肿瘤治疗中,但其在急性肺损伤中的作用尚不明确。目的 探讨内皮抑制素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的影响及可能机制。方法 将36只雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为对照组、LPS组(模型组)、ES干预组A(LPS+1 mg/kg ES 6 h)、ES干预组B(LPS+1 mg/kg ES 12 h)、ES干预组C(LPS+5 mg/kg ES 6 h)、ES干预组D(LPS+5 mg/kg ES 12 h),每组6只。LPS组：将LPS溶液(15 mg/kg)通过肺部液体定量雾化器装置递送至小鼠肺,作用24 h,建立小鼠急性肺损伤模型;对照组：在相同时间点以同样的方式递送等体积0.9%氯化钠注射液,作用24 h;ES干预组：LPS刺激小鼠24 h后,腹腔注射不同剂量(1 mg/kg或5 mg/kg)的ES注射液,分别作用6 h...     

益肾化湿颗粒通过RhoA/ROCK1信号通路对糖尿病肾病炎症的影响

目的 探讨益肾化湿颗粒通过RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)1信号通路对糖尿病肾病炎症的影响。方法 SD大鼠分为对照组、糖尿病肾病组、干预组,构建糖尿病肾病模型,干预时间为4周。留取血清、尿液,检测24 h尿蛋白定量、血肌酐、血糖、核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。留取肾组织,光镜下观察肾组织病理改变,Western blot检测肾组织RhoA、ROCK1、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白的相对表达情况。结果 动物模型建立前,3组大鼠体重、血糖、血肌酐比较,差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预前,与对照组比较,糖尿病肾病组24 h尿蛋白定量、血肌酐、NF-κB、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05),而干预组与糖尿病肾病组以上指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预后,与糖尿病肾病组比较,干预组24 h尿蛋白定量、血肌酐、NF-κB、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。对照组肾组织的肾小球结构完整,糖尿病肾病组肾小球、肾小管提示中晚期改变,...     

RhoA/ROCK通路调控前列腺增生细胞上皮间质转化

目的:通过研究RhoA/ROCK通路对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的良性前列腺增生(BPH)上皮细胞发生的上皮-间质转化(EMT)的影响,提示BPH的可能发生机制,为治疗BPH提供新的靶点。方法:TGF-β处理BPH上皮细胞系(BPH-1),检测EMT相关分子和RhoA的mRNA表达。随后用ROCK抑制剂Y-27632和TGF-β共处理BPH-1,检测EMT相关分子和RhoA的mRNA和蛋白表达。结果:TGF-β诱导BPH-1细胞发生EMT,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低,神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达升高,同时BPH-1细胞RhoA的mRNA表达上调。Y-27632能够逆转TGF-β诱导的BPH-1细胞E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达改变,差异具有统计学意义。结论:EMT在BPH的发生过程中可能有着重要作用,而RhoA/ROCK通路参与了TGF-β诱导的EMT的调控。     

血根碱基于PI3K/AKT通路抑制结肠癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 研究血根碱在结肠癌细胞增殖和迁移中的作用及其机制。方法 使用不同剂量(2、4、8μmol/L)血根碱对结肠癌细胞系(HCT-8、SW-620)进行处理，利用光学显微镜观察结肠癌细胞形态变化；细胞计数试剂CCK-8及细胞克隆试验观察血根碱对结肠癌细胞生长的影响；细胞划痕实验测定血根碱对结肠癌细胞迁移的影响；蛋白质印迹法测定相关蛋白E-钙黏蛋白(Ecad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。建立HCT-8皮下瘤体模型，分别采用生理盐水和10 mg/kg的血根碱液进行腹腔内灌注，以探讨其对结肠癌的抑制作用。结果 CCK-8实验表明，血根碱对结肠癌细胞有明显杀伤作用[HCT-8和SW-620的IC₅₀分别是(3.40±0.03)μmol/L和(5.32±0.12)μmol/L]，而对正常结肠黏膜细胞具有较小的杀伤作用[IC₅₀为(14.98±1.34)μmol/L]。不同浓度(0、2、4、8μmol/L)的血根碱以剂...     

转染靶向RhoA基因小干扰RNA对高糖刺激下人肾小球系膜细胞RhoA/ROCK信号通路表达的影响

目的 观察小G蛋白(RhoA)小干扰RNA(Stealth RNAm siRNA)对高糖刺激下的人肾小球系膜细胞(HMC)炎症反应及纤维化的影响,探讨RhoA/ROCK信号通路在糖尿病肾病发生发展中的作用.方法 传代培养的HMC同步化后分组,LipofectaminerTM2000脂质体转染抑制RhoA表达的Stealth RNA或无关的siRNA,用荧光倒置显微镜观察各组转染效率,利用实时定量RT-PCR、ELISA技术检测RhoA、ROCK-I、纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况.结果 (1)RhoA-siRNA转染可抑制高糖刺激的HMC中P&oA、ROCK-I、CTGF mRNA的表达水平,各mRNA的表达较高糖组少26%-60%(均P<0.05).(2)RhoA-siRNA转染HMC后继续培养48 h,FN、CTGF和TNF-α仪的蛋白表达水平较高糖组明显少[FN:(1.99±0.04)mg/L比(4.31±0.13)ms/L,CTGF:(4.98-1-0.17)mg/L比(6.06±0.09)ms/L;TNF-α:(61.17±2.59)ns/L比(91.76±2.27)ng/L;均P<0.05],几乎使FN和CTGF下降到正常糖培养HMC的水平.结论 通过RNA干扰技术抑制RhoA的表达,可减少高糖刺激下HMC中FN、CTGF、TNF-α的积聚,降低细胞外基质的蓄积,减少肾小球的纤维化和炎症反应,为糖尿病肾病的防治提供新的干预靶点.

Abstract：

Objective To observe the effect of small interference RNA(Steahh RNAiTM siRNA)of RhoA on the inflammatory response and fibrosis in human mesangial cell(HMC)and explore the role of RhoA/ROCK signaling pathway in the process of diabetic nepropathy.Methods Synchronized HMC were divided into several groups.LipofectamineTM2000 was employed to transfect RhoA-siRNA and RhoA-negative siRNA into the above cells.RhoA-siRNA could inhibit the expression of RhoA.The expressions of RhoA,ROCK-I,fibronectin(FN),connective tissue growth factor(CTGF)and tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)were detected by real-time reverse transeription-polymerase chain reaction(RT.PCR)and ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay).Resuits (1)The expressions of RhoA,ROCK-I and CTGF mRNA were inhibited by RhoA siRNA transfection in high glucose-induced HMC.The expression of each mRNA was reduced 26%-60%as compared with the high glucose-induced group(P<0.05).(2)After RhoA siRNA transfection and culturing with high glucose for 48 h.FN, the secretions of CTGF and TNF-αsignificantly declined[FN:(1.99±0.04)mg/L vs(4.31±0.13)mg/L,CTGF:(4.98±0.17)ms/L vs(6.06±0.09)mg/L;TNF-α[:(61.17±2.59)ng/L vs(91.76±2.27)ng/L,all P<0.05].The levels of FN and CTGF almost decreased to those of normal glucose-induced HMC.Conclusions The levels of FN,CTGF and TNF-αin higsh glucose-induced HMC may be lowered by inhibiting RhoA through RNA interference and reducing the accumulation of extracellular matrix, glomerular fibrosis and inflammation.Thus it provides a new intervention target for the prevention of diabetic nephropathy.     

miR-34b-5p上调抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的侵袭及RhoA/ROCK信号通路

目的 研究miR-34b-5p过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤的生长和运动以及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法 选择弥漫大B细胞淋巴瘤系中SU-DHL-4细胞进行研究.建立空白对照组、空载体转染组、miR-34b-5p转染组,采用qRT-PCR检测miR-34b-5p的表达量,采用菌落形成实验、流式细胞术和Transw...     

Norcantharidin inhibits tumor growth and vasculogenic mimicry of human gallbladder carcinomas by suppression of the PI3-K/MMPs/Ln-5T2 signaling pathway

Background：Vasculogenic mimicry （VM） is a novel tumor blood supply in some highly aggressive malignant tumors. Recently,we reported VM existed in gallbladder carcinomas （GBCs） and the formation of the special passage through the activation of the PI3K/ MMPs/Ln-5γ2 signaling pathway. GBC is a highly aggressive malignant tumor with disappointing treatments and a poor prognosis. Norcantharidin （NCTD） has shown to have multiple antitumor activities against GBCs, etc; however the exact mechanism is not thoroughly elucidated. In this study, we firstly investigated the anti-VM activity of NCTD as a VM inhibitor for GBCs and its underlying mechanisms. Methods ： In vitro and in vivo experiments to determine the effects of NCTD on proliferation, invasion, migration, VM formation, hemodynamic and tumor growth of GBC-SD cells and xenografts were respectively done by proliferation, invasion,migration assays,HE staining and CD31-PAS double staining, optic/electron microscopy, tumor assay, and dynamic micro- MRA. Further, immunohistochemistry, immunofluorescence, Western blotting and RT-PCR were respectively used to examine expression of VM signaling-related markers PI3-K,MMP-2 ,MT1-MMP and Ln-5γ2 in GBC-SD cells and xenografts in vitro and in vivo. Results： After treatment with NCTD, proliferation, invasion, migration of GBC-SD cells were inhibited; GBC-SD ceils and xenografts were unable to form VM-like structures; tumor center-VM region of the xenografts exhibited a decreased signal in intensity; then cell or xenograft growth was inhibited. Whereas all of untreated GBC-SD cells and xenografts formed VM-like structures with the same conditions; the xenograft center-VM region exhibited a gradually increased signal; and facilitated cell or xenograft growth （Figure 1-6 ）. Furthermore, expression of MMP-2 and MT1-MMP products from sections/supemates of 3-D matrices and the xenografts, and expression of PI3-K, MMP-2, MM1-MMP and Ln-5γ2 proteins/mRNAs of the xenografts were all decreased in NCTD or TIMP-2 g     

BKca下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病大鼠阴茎勃起功能

目的：观察大电导钙激活钾通道（big conductance Ca2+-activated K+ channel,BKca）对糖尿病勃起功能障碍（diabetes mellitus-induced erectile dysfunction,DMED）大鼠阴茎海绵体平滑肌RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：实验大鼠分为空白对照组8只,DMED组8只,NS1619组（DMED治疗组）7只,NS1619组大鼠采用特异性BKca激活剂（NS1619）阴茎海绵体注入2周。观察各组勃起行为,并电刺激检测阴茎海绵体内压（intracavernous pressure,ICP）/平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）,取各组阴茎海绵体平滑肌检测肌张力,采用Western blot和定量PCR（real-time PCR）方法检测RhoA、ROCK1、ROCK2表达,反应RhoA/ROCK信号通路差异,同时检测MYPT-1表达反应肌球蛋白轻链磷酸酶（myosin light chain phosphatase,MLCP）磷酸化程度。结果：成功构建DMED大鼠模型,NS1619组大鼠与DMED组大鼠比较,勃起次数和ICP/MAP明显改善（P=0.025、0.024）,阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性提高（P=0.031、0.024）并且RhoA、ROCK2以及肌球蛋白磷酸酶靶向结合亚基（myosin phosphatase target subunit,MYPT）-1蛋白和mRNA表达水平下调（P=0.029、0.003、0.002）,但仍未达到正常对照组大鼠水平（P=0.018、0.040、0.003）,ROCK1表达无明显差异（P=0.533）。结论：DMED大鼠因RhoA/ROCK信号通路上调和MLCP磷酸化增强导致阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性降低以致勃起功能障碍发生,激活BKca可以通过下调RhoA/ROCK信号通路和抑制MLCP磷酸化,改善勃起功能。     

miR-210通过下调JAK-STAT信号通路抑制胆囊癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-210抑制胆囊癌细胞系GBC-SD增殖的机制是否与下调JAK-STAT通路有关。方法:Real-time PCR法检测10例胆囊癌与癌旁组织中miR-210、STAT3、STAT5的表达;采用Lipofectamine~(TM)2000将miR-210-mimic转染至胆囊癌GBC-SD细胞以及JAK-STAT信号通路特异性阻滞剂AG490处理GBC-SD细胞后,分别检测细胞内miR-210、STAT3、STAT5表达的变化,通过MTT实验、流式细胞仪检测miR-210对GBC-SD细胞增殖、细胞周期的影响。结果:胆囊癌组织中miR-210的表达低于癌旁组织,STAT3、STAT5的表达高于癌旁组织(P<0.05);miR-210转染、AG490处理后GBC-SD细胞内STAT3、STAT5的表达下降;miR-210将GBCSD细胞阻滞于G_0/G_1期并抑制细胞增殖。结论:miR-210下调GBC-SD细胞内STAT3、STAT5的表达,通过阻滞JAK-STAT信号通路从而抑制GBC-SD细胞增殖。