谷胱甘肽硫转移酶mu1基因启动子区异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症的关系研究

背景　许多证据表明与正常内膜相比,子宫内膜异位症（EMT）患者的在位内膜和异位内膜中存在许多差异甲基化基因,可能在疾病发生中发挥着重要作用。目的　探讨谷胱甘肽硫转移酶mu1（GSTM1）基因启动子区异常甲基化与EMT的关系。方法　选取2013年9月-2015年12月于河北医科大学第四医院妇科行腹腔镜手术治疗并经病理检查证实为卵巢EMT的患者65例,另选取同期在该院因宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级行全子宫切除术的患者（对照者）53例,术中无菌采集卵巢EMT患者的在位内膜和异位内膜以及对照者的子宫内膜（对照内膜）。采用焦磷酸测序和实时定量荧光聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测内膜组织GSTM1基因启动子区片段一（包含-116、-111、-104、-98 CpG位点）、片段二（包含-40、-23、-16 CpG位点）平均甲基化水平和mRNA表达水平,并分析二者之间的相关性。结果　在位内膜和异位内膜片段一平均甲基化水平低于对照内膜（H=2.588,P=0.046;H=6.496,P<0.001）,异位内膜片段一平均甲基化水平低于在位内膜（H=4.213,P<0.001）。异位内膜片段二平均甲基化水平低于在位内膜和对照内膜（H=7.693,P<0.001;H=8.257,P<0.001）,在位内膜与对照内膜片段二平均甲基化水平比较,差异无统计学意义（H=0.682,P=0.504）。在位内膜和异位内膜mRNA表达水平高于对照内膜（H=6.994,P=0.011;H=3.414,P<0.001）,异位内膜mRNA表达水平高于在位内膜（H=3.846,P<0.001）。GSTM1 mRNA表达水平与其启动子区片段一、片段二平均甲基化水平均呈负相关（rs=-0.61,P<0.001;rs=-0.52,P<0.001）。结论　卵巢EMT患者的在位内膜和异位内膜呈现GSTM1基因启动子区异常低甲基化和mRNA高表达,提示GSTM1启动子区异常甲基化可能在卵巢EMT的发生和发展中起重要作用。     

IL-12B基因启动子区异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症的发病风险相关性研究

目的探讨白细胞介素12B(interleukin-12B,IL-12B)基因启动子区甲基化状态及其mRNA在异位内膜和正常内膜组织中的表达水平,分析其在卵巢子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）中的作用。 方法应用焦磷酸测序和实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）技术分别检测50例卵巢EMs患者异位内膜组织和44例对照妇女正常内膜组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平和mRNA的表达情况。 结果与正常内膜组织相比,卵巢EMs患者异位内膜组织中IL-12B基因启动子区呈现明显的低甲基化状态(P＜0.001),而mRNA的表达水平则显著高于对照妇女正常内膜组织(P＜0.001)。相关性分析显示组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平与其mRNA表达水平呈明显负相关(r=-0.510,P＜0.001)。 结论IL-12B基因启动子区异常甲基化水平导致mRNA表达水平的改变可能在卵巢EMs的发生发展中起重要作用。     

自噬基因 LC3在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：研究自噬基因LC3在卵巢子宫内膜异位症患者中的表达情况,探讨其与卵巢子宫内膜异位症发生、发展的相关性及意义。方法用Real-time PCR方法,对正常子宫内膜组织以及卵巢子宫内膜异位症患者的在位内膜组织、异位内膜组织进行LC3 mRNA定量分析,探讨其与临床分期的关系。结果 LC3 mRNA在卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜组、异位内膜组和正常子宫内膜组中的表达存在显著差异（ P＜0.05）。异位内膜组表达显著低于正常内膜组,异位内膜组与在位内膜组相比表达明显下调（ P＜0.05） ,在位内膜组和正常内膜组间比较无明显差异（ P＞0.05）。 LC3 mRNA 在卵巢子宫内膜异位症不同临床分期中,异位内膜组Ⅲ～Ⅳ期LC3 mRNA表达显著低于Ⅰ～Ⅱ期（ P＜0.05）。在月经周期不同时相,正常内膜组增殖期的LC3 mRNA表达明显高于分泌期（ P＜0.05） ,卵巢子宫内膜异位症在位内膜组、异位内膜组增殖期与分泌期比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论自噬参与了卵巢子宫内膜异位症的发病,自噬活性的改变可能与子宫内膜异位症的发展及病损程度相关。     

同源异形盒A10基因启动子区甲基化及蛋白表达与子宫内膜异位症的关系

目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症（endometriosis,EM）患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10（homeobox-A10,HOXA10）基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与HOXA10基因异常甲基化和蛋白表达的关系及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和免疫组织化学法（SP法）检测36例EM患者中异位内膜组织（异位内膜组）、在位内膜组织（在位内膜组）及12例正常对照者子宫内膜组织（对照组）中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化状况和HOXA10蛋白表达情况。结果0）36例EM患者的异位、在位内膜组织中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化率分别为38．9％、25．0％;其甲基化均发生在临床Ⅲ、Ⅳ期;12例正常子宫内膜组织中HOXAIO基因均未发生甲基化;三组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。②EM患者在位、异位内膜HOXA10的表达下降,无明显的分泌中、晚期峰;异位内膜基质HOXA10的表达显著降低,低于对照组正常内膜表达,其差异有统计学意义（P〈0．05）。③异位内膜组织HOXA10的蛋白表达与HOXA10基因启动子甲基化呈负相关,相关系数rs=-0．368。结论EM患者异位内膜组织中存在HOXA10基因启动子区异常甲基化导致基因失活,在EM发生发展过程中起重要作用。     

垂体肿瘤转化基因和血管内皮细胞因子在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：检测PTTG及VEGF在子宫内膜异位症中异位内膜、在位内膜及对照组正常内膜的表达,并探讨其相关性。方法：选取52例子宫内膜异位症患者的异位内膜、44例在位内膜,27例正常子宫内膜组织为对照组。用逆转录聚合酶链式反应（ RT－PCR）及免疫组化（ SP ）方法测 PTTG、VEGF在三组中的表达情况。结果：P TTG mRNA在子宫内膜异位症中异位内膜组表达高于在位内膜组,在位内膜组表达高于正常子宫内膜组织（ P＜0．01,P＜0．01）。 PTTG蛋白表达在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组的阳性率分别为：90％、79％、22％,异位内膜组和在位内膜组表达均高于正常子宫内膜组织（ P＜0．01,P＜0．01）。 VEGF蛋白表达在异位内膜组、在位内膜组、正常内膜组的阳性率分别为：90％、84％、59％,异位内膜组和在位内膜组表达高于正常子宫内膜组织（ P＜0．01, P＜0．01）。等级相关分析PTTG表达与VEGF表达呈正相关关系。结论：子宫内膜异位症中异位内膜组、在位内膜组均有PTTG mRNA及PTTG蛋白表达;且异位内膜组表达均显著高于在位内膜组及正常组;异位内膜组和在位内膜组中VEGF表达高于正常子宫内膜组织;PTTG高度表达可上调VEGF高表达,PTTG与VEGF呈正相关表达,提示子宫内膜活性增强、侵袭力增高,可促进血管形成。     

抑癌基因ARHI 在子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者中差异表达的意义

摘要：目的研究子宫内膜异位症（endometriosis, EMs）组织中抑癌基因ARHI的mRNA和蛋白表达情况。方法利用
RT-PCR和Western Blot免疫印迹的方法,对EMs的异位内膜组织、在位内膜组织和非EMs在位内膜组织（正常内膜组织）
进行mRNA和蛋白表达的半定量分析。利用原位杂交和免疫组化技术对研究各组进行定性及定位分析。结果（1）
ARHI mRNA 和蛋白在各组中均有表达,异位内膜的表达高于在位内膜和正常内膜,差异显著（P<0.005）,在位内膜组与
正常对照组比较,ARHI的表达无明显差异（P>0.05）;（2）原位杂交阳性率分别为非EMs组97.3%,EMs异位内膜组100%,
EMs在位内膜组93.8%;（3）免疫组化阳性率分别为非EMs组93.2%,EMs异位内膜组100%,EMs在位内膜组92.3%;（4）
ARHI的DNA与蛋白表达一致;（5）5例恶变的异位内膜ARHI免疫组化检测,4例呈阴性,1例呈弱阳性表达。结论抑癌
基因ARHI在子宫内膜组织中均表达,且在异位内膜中呈表达上调,而在恶变的异位内膜中多呈阴性表达,提示ARHI基
因可能与子宫内膜异位症不孕及恶变相关。     

IGF—I及IGFBP-3与卵巢子宫内膜异位症相关关系的研究

目的：观察胰岛素样生长因子-I（IGF—I）及胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）在卵巢子宫内膜异位症患者原位及异位内膜的表达,探讨卵巢子宫内膜异位症的发生及侵袭机制。方法：取40例卵巢子宫内膜异位症患者异位内膜和25例异位症患者在位内膜标本作为病例组,另取20例正常妇女子宫内膜作为对照组．采用免疫组织化学方法检测IGF—I、IGFBP-3的分布及表达。结果：正常内膜及卵巢子宫内膜异位症的在位和异位内膜组织中均有IGF—I、IGFBP-3的表达,IGF—I在异位组和在位组子宫内膜腺上皮的表达显著高于正常组（P〈0．05）;IGFBP-3在正常组子宫内膜腺上皮的表达强于异位组和在位组（P〈0．05）。结论：IGF—I、IGFBP-3对卵巢子宫内膜异位症的异位内膜生长与维持起着一定作用。     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EM）中的作用。方法：应用RT—PCR方法检测33例子宫内膜异位症患者的33份卵巢子宫内膜异位囊肿及32份在位子宫内膜组织中VEGFmRNA的表达情况，并进行阳性率及半定量的比较。以26例非子宫内膜异位症患者的26份子宫内膜组织作为对照。结果：EM组卵巢子宫内膜异位囊肿VEGFmRNA表达与在位子宫内膜比较，水平较低（P〈0．05），但高于对照组（P〈0．05）；在位子宫内膜与对照组比较VEGFmRNA表达水平较高（P〈0．01）；在不同月经周期中，在位内膜组和对照组分泌期VEGFmRNA表达水平均高于增生期（P〈0．01），在位内膜组分泌期和增生期的VEGFmRNA表达水平均分别高于对照组（P〈0．01）。结论：EM患者的异位子宫内膜中VEGFmRNA的表达，可能与其血管化程度有关；VEGF对EM的发生发展具有重要意义。     

上皮性卵巢癌中CDH1基因突变/甲基化对上皮型钙黏附素表达的影响

目的 研究上皮性卵巢癌组织中CDH1基因突变和甲基化改变情况,分析对上皮型钙黏附素(E-cadherin)表达的影响.方法 应用色谱分析-测序和甲基化特异的聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)的方法分析80例七皮性卵巢癌组织和38例正常卵巢组织的CDH1基因突变和启动子区甲基化情况.采用免疫组织化学方法检测上述标本中E-cadherin表达的情况,并分析CDH1基因突变和启动子区甲基化情况对E-cadherin蛋白表达的影响.结果 80例卵巢癌组织中仅1例检测到外显子7错义突变;34例检出CDH1基因启动子区甲基化,有淋巴结转移组中甲基化频率明显高于无淋巴结转移组(74.3%vs17.8%,P<0.05);38例正常卵巢组织中未检测到CDH1突变和甲基化.卵巢癌组织中有CDH1基因启动子甲基化者E-cadherin表达明显低于无甲基化者(P<0.05).结论 CDH1基因突变在上皮性卵巢癌少见,CDH1基因启动子区甲基化可能是导致E-cadherin蛋白表达减低的主要因为.     

血管内皮生长因子及其激酶插入区受体在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其激酶插入区受体(kinase insert domain receptor,KDR)在卵巢子宫内膜异位症(ovarian endometriosis,OEM)在位内膜和卵巢异位内膜及其周围卵巢组织中的表达及在OEM发病机制中的作用。方法:应用免疫组织化学S-P法测定VEGF和KDR在51例Ⅱ~Ⅲ期OEM患者的44份卵巢子宫内膜异位囊肿及其邻近卵巢组织、20份子宫内膜组织及18份非子宫内膜异位症(非内异症)患者增生期子宫内膜组织中的表达,并对表达结果进行分析。结果:VEGF和KDR主要分布于子宫内膜及异位内膜的腺上皮细胞质中。VEGF和KDR在卵巢异位上皮的阳性率分别为63.6%、54.6%,而在异位上皮邻近卵巢组织的阳性率分别为6.8%、15.9%,VEGF和KDR在异位内膜的阳性率均高于卵巢异位内膜邻近卵巢组织(P=0.000 1和P=0.008 4),且两者在异位内膜的表达呈正相关关系(P=0.000)。VEGF和KDR在OEM子宫内膜中的阳性率分别为80.0%、75.0%,而在非内异症子宫内膜中的阳性率分别为16.7%、27.8%,VEGF和KDR在在位内膜中的阳性率同对照组子宫内膜上阳性率的差异均有统计学意义(P<0.01)。两者在OEM卵巢异位内膜和在位内膜上的阳性率相似,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:VEGF与KDR在卵巢异位内膜中的阳性率明显高于邻近卵巢组织,提示VEGF与受体KDR协同表达可能与OEM血管生成有密切关系。VEGF、KDR在OEM在位内膜的阳性率高于非内异症组子宫内膜,且两者在OEM卵巢异位内膜和在位内膜上的阳性率相似,支持在位内膜决定论学说。     

MMP-7、CD147在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义

目的探讨MMP-7、CD147与子宫内膜异位症（EMT）发病的相关性。方法本文应用免疫组化方法检测了33例正常子宫内膜（增生期13例,分泌期20例）,45例在位子宫内膜（增生期25例,分泌期20例）、45例巧囊异位内膜中MMP-7、CD147的表达情况。检测结果用美国Media Cybernetics公司的image pro—plus5．0专业图像分析软件进行定量分析,分析结果采用SPSS11．5软件进行秩和检验和等级秩相关Spearman分析。结果（1）MMP-7、CD147在巧囊异位内膜中的表达高于其在在位内膜及正常内膜中的表达,差异有显著性;在在位内膜中的表达高于在正常子宫内膜中的表达,差异有显著性;在在位内膜分泌期中的表达高于增生期,差异有显著性;而在正常子宫内膜分泌期与增生期中的表达无显著性差异。（2）MMP-7与CD147在巧克力囊肿中的表达呈正相关趋势,差异有显著性。结论MMP-7、CD147与EMT发病有关。     

CD24在子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的观察CD24在子宫内膜异位症（内异症）中的表达，并探讨其在内异症发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测48例内异症异位内膜组、48例内异症在位内膜组和30例正常内膜（对照组）标本及子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞、不同月经周期中CD24的表达情况。结果内异症异位内膜组、内异症在位内膜组CD24阳性表达率均显著高于对照组（P均〈0．05）。内异症异位内膜组、内异症在位内膜组子宫内膜腺上皮细胞中CD24阳性表达率均显著高于对照组（P均〈0．01）。内异症在位内膜组子宫内膜间质细胞中CD24阳性表达率显著高于对照组（P〈0．05）。内异症在位内膜组增生期、内异症异位内膜组增生期、对照组增生期、分泌期CD24阳性表达率均显著低于内异症在位内膜组分泌期（P均〈0．05）。结论CD24在内异症的发病中有一定的作用。     

环氧合酶-2在子宫内膜异位症子宫内膜组织中的表达

目的：研究环氧合酶-2（COX-2）在子宫内膜异位症（内异症）在位子宫内膜组织和异位子宫内膜组织中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测30例卵巢内异症在位内膜、10例卵巢巧克力囊肿壁异位内膜及27例正常子宫内膜中COX-2的分布和表达。结果：COX-2在3组子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞中均可见表达。COX-2在正常对照组内膜和卵巢内异症组在位内膜腺上皮细胞中的表达均是分泌期高于增生期（P<0.05)，而在间质细胞中的表达分泌期与增生期比较无统计学差异（P>0.05)。COX-2在卵巢内异症组在位和异位内膜中的表达均高于对照组（P<0.05），而内异症患者在位和异位内膜中COX-2的表达则无统计学意义（P>0.05）。结论：COX-2在卵巢内异症在位和异位内膜中表达增高，可能与卵巢内异症的病理异常有关。     

Bcl2、Bax在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义

目的研究Bcl2、Bax在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法对研究组39例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的在位子宫内膜及异位子宫内膜及对照组27例正常子宫内膜进行Bcl2、Bax检测。结果Bcl2、Bax在卵巢子宫内膜异位囊肿患者的异位内膜与在位子宫内膜中的表达差异有统计学意义（P〈0.05）;在异位内膜、在位内膜与正常内膜中的表达差异有统计学意义（P〈0.05）;Bcl2、Bax在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达呈负相关趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论Bcl2表达增强、Bax表达减弱可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

基质金属蛋白酶-2与低氧诱导因子-1α在子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的通过观察基质金属蛋白酶-2（MMP-2）与低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在子宫内膜异位症中的表达,探讨子宫内膜异位症的发病机制及MMP-2与HIF-1α的关系。方法应用免疫组化法检测子宫异位内膜（异位内膜组40例）、子宫在位内膜（在位内膜组40例）及正常内膜（正常内膜组20例）中MMP-2、HIF-1α蛋白的表达水平。结果 MMP-2、HIF-1α的阳性表达分别位于腺上皮细胞的细胞膜和细胞质及细胞核和细胞质,异位内膜组阳性表达高于在位内膜组与正常内膜组（P〈0.05）,在位内膜组阳性表达高于正常内膜组（P〈0.05）;MMP-2与HIF-1α表达强度的变化呈正相关（r=0.657,P〈0.05）。结论在子宫内膜异位症组织中MMP-2和HIF-1α的表达明显增高,且HIF-1α可能参与调控MMP-2的表达。     

TNFR1和TNFR2与子宫内膜异位症发病的研究

目的：从基因和蛋白水平探讨肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）和2（TNFR2）在子宫内膜异位症（简称内异症）发病中的作用。方法：采用原位杂交及免疫组化SABC法检测50例内异位症患者（内异症组）在位及异位子宫内膜TNFR1mRNA、TNFR2mRNA和TNFR2蛋白的表达,并与35例对照组在位内膜进行比较。结果: TNFR1mRNA、TNFR2mRNA在内异症组在位、异位内膜的光密度值分别高于对照组(P<0.05);TNFR2蛋白在内异症组在位、异位内膜及对照组间两两比较均无显著差异(P>0.05)。TNFR1mRNA、TNFR2mRNA和TNFR2蛋白在内异症组Ⅰ～Ⅱ和Ⅲ～Ⅳ期间均无明显差异（P>0.05）。三者在内异症组和对照组月经周期的增生期与分泌期亦无明显差异（P>0.05）;但TNFR1mRNA、TNFR2mRNA在内异症组增生期、分泌期光密度值分别高于对照组同期水平（P<0.05）;TNFR2蛋白在内异症组与对照组同期比较无明显差异（P>0.05）。结论：内异症在位内膜TNFR1表达降低可能在内异症的发病中其重要作用;TNFR2在内异症和对照组无差别的表达可能有利于内异症的发生。     

低剂量佐匹克隆延迟控释片治疗早醒性失眠的疗效研究

背景　失眠可分为入睡困难、睡眠维持障碍和早醒等,目前药物治疗失眠存在局限性,尚缺乏对不同类型失眠的针对性治疗,对失眠分型治疗的研究鲜见报道。目的　探讨低剂量佐匹克隆延迟控释片治疗早醒性失眠的疗效。方法　本研究时间为2016年10月—2018年1月。将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照1组、低剂量（2.5 mg/kg佐匹克隆）组、高剂量（5.0 mg/kg佐匹克隆）30 min组、高剂量60 min组,每组10只大鼠。采用戊巴比妥钠延长实验,观察并记录各组大鼠的睡眠潜伏期及睡眠时间,为佐匹克隆延迟控释片的制备奠定基础。将佐匹克隆与羧甲基淀粉钠、乳糖、5%聚维酮K30（PVPK30）、硬脂酸镁混匀后压片;将山嵛酸甘油酯、乳糖、5%PVPK30、硬脂酸镁混匀后得到包衣颗粒,将片芯置于包衣颗粒中央,压片制得佐匹克隆延迟控释片。将60只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照2组、佐匹克隆延迟控释片组（2.5 mg/kg佐匹克隆）、佐匹克隆溶液组（5.0 mg/kg佐匹克隆）,每组20只大鼠,观察并记录各组大鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间。结果　对照1组〔（126.3±18.6）min〕、低剂量组〔（175.3±18.1） min〕、 高剂量30 min组〔（151.8±19.2）min〕和高剂量60 min组〔（181.5±15.6） min〕睡眠时间比较,差异有统计学意义（F=19.651,P<0.01）;其中,低剂量组与高剂量30 min组、60 min组大鼠睡眠时间长于对照1组,高剂量30 min组大鼠睡眠时间短于低剂量组,高剂量60 min组大鼠睡眠时间长于高剂量30 min组（P<0.05）。佐匹克隆延迟控释片组〔（188.3±25.0） min〕、佐匹克隆溶液组〔（194.0±28.1） min〕与对照2组〔（130.2±25.6） min〕睡眠时间比较,差异有统计学意义（F=30.400,P<0.05）,佐匹克隆延迟控释片组、佐匹克隆溶液组睡眠时间长于对照2组（P<0.05）。结论　通过制备低剂量（2.5 mg/kg）佐匹克隆延迟控释片喂食实验大鼠,使之在大鼠入睡后释药,能达到高剂量（5.0 mg/kg）佐匹克隆睡前60 min灌胃延长大鼠睡眠时间的效果,显现了以低剂量佐匹克隆延迟控释片针对性治疗成人早醒性失眠的前景。     

子宫内膜异位症PTEN启动子甲基化研究

目的检测子宫内膜异位症(EMS)在异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜的PTEN启动子甲基化,探讨其与子宫内膜异位症发生发展的关系。方法收集共计45例子宫内膜异位症患者术后子宫内膜异位症在位、异位内膜标本作为病例组及35例正常子宫内膜标本作为对照组,应用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)测定PTEN启动子的甲基化,分析PTEN启动子的甲基化与EMS的相关性。结果与对照组比较,病例组PTEN启动子甲基化水平明显提高,甲基化率分别为24.4%(11/45)和0(0/45),差别具有统计学意义(χ2=9.99,P0.05)。结论 PTEN基因甲基化与子宫内膜异位症的发生发展密切相关。